目的:探讨体外CD10^(+)干细胞与VSV病毒共培养分化后,能否从分化后细胞的基因组中扩增出成熟抗体IgG重链(VH)、轻链(VL)可变区基因片段。方法:37℃培养CD10^(+)干细胞至单层细胞,B细胞扩增培养基及添加的白介素因子、VSV病毒与CD10^(+)...目的:探讨体外CD10^(+)干细胞与VSV病毒共培养分化后,能否从分化后细胞的基因组中扩增出成熟抗体IgG重链(VH)、轻链(VL)可变区基因片段。方法:37℃培养CD10^(+)干细胞至单层细胞,B细胞扩增培养基及添加的白介素因子、VSV病毒与CD10^(+)干细胞共培养15 d,留存每天细胞上清测定IgM含量,以15 d细胞为样本抽提总RNA,反转录为cDNA,以其为模板,用单链抗体(ScFv)噬菌体抗体库构建引物扩增VH、VL。结果:利用含VSV病毒、IL-2、IL-4、IL-7、IL-10、IL-21、CD40L的B细胞扩增培养基成功将CD10^(+)干细胞分化为CD38、CD138阳性浆细胞,IgM含量随时间递减,诱导15 d后成功扩增出成熟抗体IgG的370 bp VH、320 bp VL可变区基因片段。结论:成功完成了基于CD10^(+)干细胞的人源抗体基因获取,可用于各类人畜共患病病毒噬菌体抗体库构建。展开更多
CD10又称共同型急性淋巴细胞白血病抗原,表达于上皮和非上皮组织,在粒细胞、未成熟的淋巴细胞及生发中心细胞阳性[1-2]。在病理诊断中,该抗体主要用于一些淋巴瘤和白血病的分型和诊断,如弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lym-pho...CD10又称共同型急性淋巴细胞白血病抗原,表达于上皮和非上皮组织,在粒细胞、未成熟的淋巴细胞及生发中心细胞阳性[1-2]。在病理诊断中,该抗体主要用于一些淋巴瘤和白血病的分型和诊断,如弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lym-phoma,DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)、Burkitt淋巴瘤、前驱B淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITL)及滤泡性T细胞淋巴瘤等。由此可见,CD10免疫组化检测在淋巴瘤类型鉴别诊断中非常重要,但作者在工作中发现,较多基层医院的会诊切片CD10免疫组化染色效果欠佳,甚至影响诊断,分析其原因,除了组织蜡块固定等因素外,更多的原因是未摸索出适合本实验室的最佳染色方案。为此,本实验室在全自动免疫组化平台基础上进行该抗体临床实验室自建项目(laboratory developed test,LDT)实验,建立实验室内部质控方案,取得了良好的染色效果,现介绍如下。展开更多
目的探讨bcl-2、bcl-6、CD10在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DL-BCL)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法,检测60例弥漫性大B细胞淋巴瘤标本中bcl-2、bcl-6、CD10蛋白的表达水平。结果bcl-2、bcl-6、CD10...目的探讨bcl-2、bcl-6、CD10在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DL-BCL)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法,检测60例弥漫性大B细胞淋巴瘤标本中bcl-2、bcl-6、CD10蛋白的表达水平。结果bcl-2、bcl-6、CD10在60例弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达率分别为55.0%(33/60)、48.3%(29/60)、46.7%(28/60),其中CD10(+)/bcl-6(+)15例,25%;CD10(+)/bcl-6(-)13例,21.7%;CD10(-)/bcl-6(+)14例,23.3%;CD10(-)/bcl-6(-)18例,30%。CD10(+)/bcl-6(+)与CD10(-)/bcl-6(-)中bcl-2的表达差异具有统计学意义。结论bcl-2有望成为DLBCL亚分类的指标。展开更多
文摘目的:探讨体外CD10^(+)干细胞与VSV病毒共培养分化后,能否从分化后细胞的基因组中扩增出成熟抗体IgG重链(VH)、轻链(VL)可变区基因片段。方法:37℃培养CD10^(+)干细胞至单层细胞,B细胞扩增培养基及添加的白介素因子、VSV病毒与CD10^(+)干细胞共培养15 d,留存每天细胞上清测定IgM含量,以15 d细胞为样本抽提总RNA,反转录为cDNA,以其为模板,用单链抗体(ScFv)噬菌体抗体库构建引物扩增VH、VL。结果:利用含VSV病毒、IL-2、IL-4、IL-7、IL-10、IL-21、CD40L的B细胞扩增培养基成功将CD10^(+)干细胞分化为CD38、CD138阳性浆细胞,IgM含量随时间递减,诱导15 d后成功扩增出成熟抗体IgG的370 bp VH、320 bp VL可变区基因片段。结论:成功完成了基于CD10^(+)干细胞的人源抗体基因获取,可用于各类人畜共患病病毒噬菌体抗体库构建。
文摘CD10又称共同型急性淋巴细胞白血病抗原,表达于上皮和非上皮组织,在粒细胞、未成熟的淋巴细胞及生发中心细胞阳性[1-2]。在病理诊断中,该抗体主要用于一些淋巴瘤和白血病的分型和诊断,如弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lym-phoma,DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)、Burkitt淋巴瘤、前驱B淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITL)及滤泡性T细胞淋巴瘤等。由此可见,CD10免疫组化检测在淋巴瘤类型鉴别诊断中非常重要,但作者在工作中发现,较多基层医院的会诊切片CD10免疫组化染色效果欠佳,甚至影响诊断,分析其原因,除了组织蜡块固定等因素外,更多的原因是未摸索出适合本实验室的最佳染色方案。为此,本实验室在全自动免疫组化平台基础上进行该抗体临床实验室自建项目(laboratory developed test,LDT)实验,建立实验室内部质控方案,取得了良好的染色效果,现介绍如下。
文摘目的探讨bcl-2、bcl-6、CD10在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DL-BCL)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法,检测60例弥漫性大B细胞淋巴瘤标本中bcl-2、bcl-6、CD10蛋白的表达水平。结果bcl-2、bcl-6、CD10在60例弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达率分别为55.0%(33/60)、48.3%(29/60)、46.7%(28/60),其中CD10(+)/bcl-6(+)15例,25%;CD10(+)/bcl-6(-)13例,21.7%;CD10(-)/bcl-6(+)14例,23.3%;CD10(-)/bcl-6(-)18例,30%。CD10(+)/bcl-6(+)与CD10(-)/bcl-6(-)中bcl-2的表达差异具有统计学意义。结论bcl-2有望成为DLBCL亚分类的指标。
