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共表达IκBα-IRES2-CD40L胞外区双基因的腺病毒载体构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
丁小明
牛晓丽
+1 位作者
薛武军
李杨
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期416-419,共4页
目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和IκB的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、IκB和IRES2,将目的基因进行连接,得到IκB-IRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩...
目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和IκB的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、IκB和IRES2,将目的基因进行连接,得到IκB-IRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩增,测序正确后,再将连接成功地两个目的基因片段与分别与载体pshuttle-CMV连接获得穿梭质pshuttle-CMV-shCD40L和pshuttle-cmv-IκB-IRES2,将穿梭质粒在DH5α感受态细胞中扩增。再与AdEasy-1-BJ5183菌同源重组,得到含有两个目的基因的腺病毒骨架,脂质体法转染293细胞,包装成具有感染能力的共表达IκB-IRES2-shCD40L腺病毒颗粒。PCR法对腺病毒的上清液中的表达差异进行鉴定,检测病毒滴度,并用其感染细胞PK15和293细胞以检验其安全性。结果:所构建的IκB-IRES2-shCD40L基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确,原代腺病毒的滴度达到6.561×1012pfu/L,PCR法从提取的病毒上清液中分别扩增出了是shCD40L(600bp)和IKBa(700bp)的特异性片段,感染了腺病毒后的PK15细胞形态未见明显异常,但293细胞出现了明显的气球样变。结论:成功构建了共表达IκBα-IRES2-shCD40L双基因的腺病毒载体。
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关键词
分泌型人
cd40l胞外区
IΚBΑ
重组腺病毒
免疫耐受
原文传递
人CD_(40)L胞外区和人CTLA_4Ig双基因共表达腺病毒载体的克隆和鉴定
被引量：
1
2
作者
田普训
吴军
+6 位作者
张寅生
李钊伦
薛武军
贺伟峰
易绍萱
陈希炜
张小容
《西北国防医学杂志》
CAS
2004年第6期401-404,共4页
目的 :构建人CD40 L胞外区和CTLA4Ig双基因共表达重组腺病毒载体并鉴定。方法 :RT -PCR扩增人CD40 L胞外区片段 ,与致瘤素信号肽连接后构建穿梭质粒 ,经酶切、插入、同源重组 ,获质粒pAdshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,经 2 93细胞包装 ,获...
目的 :构建人CD40 L胞外区和CTLA4Ig双基因共表达重组腺病毒载体并鉴定。方法 :RT -PCR扩增人CD40 L胞外区片段 ,与致瘤素信号肽连接后构建穿梭质粒 ,经酶切、插入、同源重组 ,获质粒pAdshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,经 2 93细胞包装 ,获共表达双基因的腺病毒pAdvshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,并行凝胶电泳、PCR、共聚焦显微镜检测。结果 :电泳、PCR扩增出了 6 0 0bp和 4 0 0bp的特异性片段、共聚焦显微镜观察到CD40 L绿色荧光和CTLA4Ig红色荧光的共表达。结论 :成功构建了人CD40 L胞外区和CTLA4Ig共表达双基因重组腺病毒载体。
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关键词
重组腺病毒
cd40l胞外区
CT
l
A4IG
基因表达
免疫耐受
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职称材料
题名
共表达IκBα-IRES2-CD40L胞外区双基因的腺病毒载体构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
丁小明
牛晓丽
薛武军
李杨
机构
西安交通大学医学院第一附属医院肾病中心肾移植科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期416-419,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30772096
30972947)
+3 种基金
陕西省"13115"科技创新工程重大科技专项计划资助项目(2007ZDKG-67)
卫生部临床重点学科资助项目(2004
2006年度)
陕西省自然科学基金资助项目(30571799)
文摘
目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和IκB的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、IκB和IRES2,将目的基因进行连接,得到IκB-IRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩增,测序正确后,再将连接成功地两个目的基因片段与分别与载体pshuttle-CMV连接获得穿梭质pshuttle-CMV-shCD40L和pshuttle-cmv-IκB-IRES2,将穿梭质粒在DH5α感受态细胞中扩增。再与AdEasy-1-BJ5183菌同源重组,得到含有两个目的基因的腺病毒骨架,脂质体法转染293细胞,包装成具有感染能力的共表达IκB-IRES2-shCD40L腺病毒颗粒。PCR法对腺病毒的上清液中的表达差异进行鉴定,检测病毒滴度,并用其感染细胞PK15和293细胞以检验其安全性。结果:所构建的IκB-IRES2-shCD40L基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确,原代腺病毒的滴度达到6.561×1012pfu/L,PCR法从提取的病毒上清液中分别扩增出了是shCD40L(600bp)和IKBa(700bp)的特异性片段,感染了腺病毒后的PK15细胞形态未见明显异常,但293细胞出现了明显的气球样变。结论:成功构建了共表达IκBα-IRES2-shCD40L双基因的腺病毒载体。
关键词
分泌型人
cd40l胞外区
IΚBΑ
重组腺病毒
免疫耐受
Keywords
secretory human
cd
40
l
extrace
l
l
u
l
ar domain
IκBα
recombination adenovirus
immune to
l
erance
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
人CD_(40)L胞外区和人CTLA_4Ig双基因共表达腺病毒载体的克隆和鉴定
被引量：
1
2
作者
田普训
吴军
张寅生
李钊伦
薛武军
贺伟峰
易绍萱
陈希炜
张小容
机构
西安交通大学第一医院肾病中心
第三军医大学西南医院烧伤研究所
出处
《西北国防医学杂志》
CAS
2004年第6期401-404,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 (3 0 3 714 16)
文摘
目的 :构建人CD40 L胞外区和CTLA4Ig双基因共表达重组腺病毒载体并鉴定。方法 :RT -PCR扩增人CD40 L胞外区片段 ,与致瘤素信号肽连接后构建穿梭质粒 ,经酶切、插入、同源重组 ,获质粒pAdshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,经 2 93细胞包装 ,获共表达双基因的腺病毒pAdvshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,并行凝胶电泳、PCR、共聚焦显微镜检测。结果 :电泳、PCR扩增出了 6 0 0bp和 4 0 0bp的特异性片段、共聚焦显微镜观察到CD40 L绿色荧光和CTLA4Ig红色荧光的共表达。结论 :成功构建了人CD40 L胞外区和CTLA4Ig共表达双基因重组腺病毒载体。
关键词
重组腺病毒
cd40l胞外区
CT
l
A4IG
基因表达
免疫耐受
Keywords
Recombinant adenovirus
Extrace
l
l
u
l
ar domain of
cd
40
l
CT
l
A 4Ig
Ge ne expression
Immune to
l
erance
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
共表达IκBα-IRES2-CD40L胞外区双基因的腺病毒载体构建及鉴定
丁小明
牛晓丽
薛武军
李杨
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
原文传递
2
人CD_(40)L胞外区和人CTLA_4Ig双基因共表达腺病毒载体的克隆和鉴定
田普训
吴军
张寅生
李钊伦
薛武军
贺伟峰
易绍萱
陈希炜
张小容
《西北国防医学杂志》
CAS
2004
1
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