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题名CELI粗提物用于点突变检测的技术
被引量：2
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作者
崔海瑞
李春楠
吴殿星
舒庆尧
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机构
浙江大学原子核农业科学研究所/农业部核农学重点开放实验室
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出处
《核农学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期37-42,共6页
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基金
农业部农业公益性行业科研专项经费项目(200803034)
国际原子能机构研究合同项目(R13631)
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文摘
本文以含有单个错配的DNA异质双链为底物鉴定芹菜CEL I粗提物的错配切割酶学活性,并对影响其切割错配的反应条件进行优化,建立以CEL I粗提物为基础的点突变酶学检测技术。结果表明:自制的CEL I粗提物能有效识别和切割DNA异质双链中碱基错配。当异质双链DNA量恒定时,在一定的范围内CEL I粗提物用量对错配切割效果的影响不明显,由PCR产物形成的12μl异质双链DNA可用蛋白质总量约900ng的CEL I粗提物进行有效切割。常规PCR缓冲液与已报道的CEL I缓冲液的效果基本相近,实际工作中可选用PCR缓冲液作CEL I酶切反应液;缓冲液pH值对错配切割效果具有明显的影响,适宜pH约近中性(6.5～7.5)。Zn2+对错配切割具有促进作用,但不是必需的,最适浓度为0.25mmol/L。CEL I粗提物切割错配的反应时间以42℃下酶切20min为宜。比较试验显示,本研究建立技术的点突变检测效果与Transgenomic公司试剂盒SurveyorTM基本相同。
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关键词
celi粗提物
切割活性
条件优化
突变检测
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Keywords
CEL I crude extract
mismatch cleavage activity
condition optimization
mutation detection relative
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分类号
Q503
[生物学—生物化学]
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