本文以HeLa细胞为材料研究一种着丝粒蛋白CENP-B的基因表达与细胞周期及细胞核骨架的关系。将HeLa细胞同步在不同周期时相,以流式细胞光度术、同位素掺入和ACA着丝粒染色等方法检测细胞同步化效果。我们分别提取了各周期时相细胞的总RNA...本文以HeLa细胞为材料研究一种着丝粒蛋白CENP-B的基因表达与细胞周期及细胞核骨架的关系。将HeLa细胞同步在不同周期时相,以流式细胞光度术、同位素掺入和ACA着丝粒染色等方法检测细胞同步化效果。我们分别提取了各周期时相细胞的总RNA和Poly(A)^+RNA,用Dot blot和Northern blot杂交方法研究CENP-B在细胞周期中的表达。结果表明,CENP-B基因在细胞周期中的各个时相均有表达,但表达的强度差别很大:G2期表达最强,S期最弱,G1期中的表达介于二者之间;有意义的是CENP-B基因在M期仍然有较强的表达,表现出其在细胞周期中表达的持续性;这种表达的持续性反映了一种可能性:着丝粒、动粒蛋白不断合成,但直到S期后进入G2期时着丝粒、动粒蛋白到一定临界浓度时才开始组装新的动粒。另外,着丝粒、动粒蛋白的持续合成对着丝粒、动粒功能的发挥可能是必需的。用Bam H I限制性内切酶消化处于不同细胞周期时相的HeLa细胞核骨架,提取与核骨架紧密结合的DNA,用^(32)P标记的cDNA为探针研究CENP-B基因与细胞核骨架的结合与其表达的关系。结果证明,在G2期细胞中CENP-B基因表达最强,与细胞核骨架结合最为紧密,G1期细胞中次之,S期中CENP-B基因与核骨架结合最弱,说明CENP-B基因与细胞核骨架结合的紧密度影响其表达强度。展开更多
文摘本文以HeLa细胞为材料研究一种着丝粒蛋白CENP-B的基因表达与细胞周期及细胞核骨架的关系。将HeLa细胞同步在不同周期时相,以流式细胞光度术、同位素掺入和ACA着丝粒染色等方法检测细胞同步化效果。我们分别提取了各周期时相细胞的总RNA和Poly(A)^+RNA,用Dot blot和Northern blot杂交方法研究CENP-B在细胞周期中的表达。结果表明,CENP-B基因在细胞周期中的各个时相均有表达,但表达的强度差别很大:G2期表达最强,S期最弱,G1期中的表达介于二者之间;有意义的是CENP-B基因在M期仍然有较强的表达,表现出其在细胞周期中表达的持续性;这种表达的持续性反映了一种可能性:着丝粒、动粒蛋白不断合成,但直到S期后进入G2期时着丝粒、动粒蛋白到一定临界浓度时才开始组装新的动粒。另外,着丝粒、动粒蛋白的持续合成对着丝粒、动粒功能的发挥可能是必需的。用Bam H I限制性内切酶消化处于不同细胞周期时相的HeLa细胞核骨架,提取与核骨架紧密结合的DNA,用^(32)P标记的cDNA为探针研究CENP-B基因与细胞核骨架的结合与其表达的关系。结果证明,在G2期细胞中CENP-B基因表达最强,与细胞核骨架结合最为紧密,G1期细胞中次之,S期中CENP-B基因与核骨架结合最弱,说明CENP-B基因与细胞核骨架结合的紧密度影响其表达强度。
