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因为小,而而错过它?CREEK朗泉4040A紧凑型解码合并式功放
1
作者 小路(图/文) 《视听前线》 2024年第2期66-70,共5页
这应该是英国CREEK(朗泉)有史以来体积最小的合并式功放,其摆放面积还不及一张A4纸,如果光看照片而不看实物的话,你想象不到它是如此之小。但就是这么小的一台合并式功放,却集合了多种功能。如果是老一代发烧友,一定对4040这组数字很熟... 这应该是英国CREEK(朗泉)有史以来体积最小的合并式功放,其摆放面积还不及一张A4纸,如果光看照片而不看实物的话,你想象不到它是如此之小。但就是这么小的一台合并式功放,却集合了多种功能。如果是老一代发烧友,一定对4040这组数字很熟悉。早期,CREEK就有这样一台合并式功放,它具有纤细的机身,黑色的面板,具有木纹的顶板和侧板,面板上还有为数不少的按键和旋钮,它就是CREEK在1982年推出的CAS4040合并式功放。 展开更多
关键词 cre 解码 CAS EK 紧凑型 按键 多种功能 面板
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改进清洁消毒方法对烧伤整形病房CRE防控及消毒效果的对比分析
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作者 杨惠英 李骁骁 +2 位作者 张建设 孙丽 邹娟 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1506-1510,共5页
目的探讨改进清洁消毒方法对烧伤整形病房耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的防控及消毒效果。方法选取某院2021年2月1日—8月31日烧伤整形科住院的297例患者作为对照组,将2021年9月1日—2022年2月28日采取改进清洁消毒方法后住院的210例... 目的探讨改进清洁消毒方法对烧伤整形病房耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的防控及消毒效果。方法选取某院2021年2月1日—8月31日烧伤整形科住院的297例患者作为对照组,将2021年9月1日—2022年2月28日采取改进清洁消毒方法后住院的210例患者作为干预组,统计、比较干预前后患者CRE检出率、医院感染发生率及环境CRE检出率。结果干预组患者医院感染发病率、CRE检出率分别为0.95%、0,分别低于对照组的4.04%、2.02%(均P<0.05)。干预组空气微生物学、物体表面微生物学、ATP生物荧光、荧光标记检测的合格率均较对照组上升(χ^(2)值分别为5.52、13.08、6.66、15.01,均P<0.05)。结论改进清洁消毒方法能降低烧伤病房医院感染发病率和CRE检出率,提升环境物体表面的清洁度,改善医院感染防控效果。 展开更多
关键词 清洁与消毒 主动筛查 独立清洁单元 cre 烧伤整形病房
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Cre-recombinase systems for induction of neuronspecific knockout models:a guide for biomedical researchers 被引量:1
3
作者 Tetiana Shcholok Eftekhar Eftekharpour 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2023年第2期273-279,共7页
Gene deletion has been a valuable tool for unraveling the mysteries of molecular biology.Early approaches included gene trapping and gene targetting to disrupt or delete a gene randomly or at a specific location,respe... Gene deletion has been a valuable tool for unraveling the mysteries of molecular biology.Early approaches included gene trapping and gene targetting to disrupt or delete a gene randomly or at a specific location,respectively.Using these technologies in mouse embryos led to the generation of mouse knocko ut models and many scientific discoveries.The efficacy and specificity of these approaches have significantly increased with the advent of new technology such as cluste red regula rly inters paced short palindromic repeats for targetted gene deletion.However,several limitations including unwanted off-target gene deletion have hindered their widespread use in the field.Crerecombinase technology has provided additional capacity for cell-specific gene deletion.In this review,we provide a summary of currently available literature on the application of this system for targetted deletion of neuronal genes.This article has been constructed to provide some background info rmation for the new trainees on the mechanism and to provide necessary information for the design,and application of the Cre-recombinase system thro ugh reviewing the most f requent promoters that are currently available for genetic manipulation of neuro ns.We additionally will provide a summary of the latest technological developments that can be used for targeting neurons.This may also serve as a general guide for the selection of appropriate models for biomedical research. 展开更多
关键词 central nervous system CEREBELLUM cre/LoxP system cre-recombinase transduction gene deletion gene delivery hippocampus in vivo genome editing stereotaxic injection
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药师参与CRE血流感染药物治疗的实践与体会
4
作者 张寒娟 于丽 郭琳 《上海医药》 CAS 2023年第13期86-89,共4页
目的:总结药师参与耐碳青霉烯类肠杆菌科(CRE)血流感染治疗的实践与体会。方法:通过分析典型病例,阐述药师参与CRE血流感染治疗的临床思维与体会。结果:在CRE血流感染治疗中,药师可以协助医师从用药方案制订、治疗药物监测和用药安全性... 目的:总结药师参与耐碳青霉烯类肠杆菌科(CRE)血流感染治疗的实践与体会。方法:通过分析典型病例,阐述药师参与CRE血流感染治疗的临床思维与体会。结果:在CRE血流感染治疗中,药师可以协助医师从用药方案制订、治疗药物监测和用药安全性监护等方面发挥重要作用。结论 :药师通过参与药物治疗,可帮助医师提高药物治疗水平。 展开更多
关键词 cre血流感染 多黏菌素B 替加环素
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重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测 被引量:4
5
作者 王文棋 盖颖 +1 位作者 陆海 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期57-60,共4页
为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用,以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点... 为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用,以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础. 展开更多
关键词 DNA重组酶cre pET30-cre高效表达 一步纯化 cre酶活性检测
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儿童重症监护病区CRE感染的危险因素及耐药情况分析
6
作者 王双双 李亚玲 +3 位作者 陈丽琴 韩永慧 麻明彪 李小娟 《昆明医科大学学报》 CAS 2023年第9期49-54,共6页
目的研究重症监护病区患儿CRE感染的耐药情况及发生CRE医院感染的危险因素,为儿童治疗CRE感染和医院制定感染防控策略提供参考依据。方法回顾性分析2019年1月至2022年12月入住云南省某三甲儿童医院重症监护病区患儿的临床资料,将92例耐... 目的研究重症监护病区患儿CRE感染的耐药情况及发生CRE医院感染的危险因素,为儿童治疗CRE感染和医院制定感染防控策略提供参考依据。方法回顾性分析2019年1月至2022年12月入住云南省某三甲儿童医院重症监护病区患儿的临床资料,将92例耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)医院感染的患儿纳入病例组,按1∶1随机选择同期92例对碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌(CSE)感染的患儿纳入对照组,进行菌株鉴定和药敏试验,分析感染菌株和耐药情况,并通过SPSS 26.0对CRE感染患儿进行单因素和多因素Logistic回归分析,探究重症患儿发生CRE感染的相关危险因素。结果CRE感染菌株检出最多的为肺炎克雷伯菌81例(88.04%),其次为大肠埃希菌5例(5.43%)。CRE组左氧氟沙星、阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶、亚胺培南、头孢吡肟、头孢曲松、阿米卡星耐药率均高于CSE组,均显示差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,留置胃管、中心静脉置管、机械通气、碳青霉烯类、抗真菌药、糖肽类及多粘菌素类抗生素使用史、抗生素药物使用种类≥3种、抗生素药物使用时间、碳青霉烯类抗生素使用时间、入住ICU时间和总住院时间均是CRE感染的危险因素,显示差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,碳青霉烯类抗生素使用史及使用时间和抗菌药物使用时间(P<0.05)是重症患儿CRE感染的独立危险因素。结论结合重症患儿CRE感染的危险因素,尽量减少穿刺置管等侵入性操作,规范抗生素药物在重症患儿治疗中的使用管理,特别是碳青霉烯类抗生素,尽可能缩短患儿入住ICU时长和总住院时长,加强对重症患儿CRE的主动筛查,制定合理有效的感染防控策略,减少重症患儿CRE院内感染的发生。 展开更多
关键词 儿童重症监护病区 cre 危险因素 耐药
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基于Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性突变NLRP3转基因小鼠模型
7
作者 杨熙玥 周永婷 +1 位作者 叶菜英 朱蕾 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期594-598,共5页
目的应用Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性NLRP3点突变转基因小鼠模型并对其进行鉴定。方法利用Cre-LoxP技术,构建NLRP3基因T346M点突变的flox杂合子(NLRP3^(flox)/+)小鼠。将该小鼠与广谱表达Cre重组酶工具鼠(CAG-Cre/ERT2,CreT)杂... 目的应用Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性NLRP3点突变转基因小鼠模型并对其进行鉴定。方法利用Cre-LoxP技术,构建NLRP3基因T346M点突变的flox杂合子(NLRP3^(flox)/+)小鼠。将该小鼠与广谱表达Cre重组酶工具鼠(CAG-Cre/ERT2,CreT)杂交繁育,获得基因型NLRP3^(flox)/+CreT^(+/-)小鼠,后者与NLRP3 T346M的flox纯合子(NLRP3^(flox)/flox)小鼠进一步交配获得NLRP3^(flox)/flox CreT^(+/-)(KI/KI)和NLRP3^(flox)/+CreT^(+/-)(KI/WT)小鼠,于6~8周时经他莫昔芬的诱导实现NLRP3 T346M突变基因的时间特异性敲入。小鼠繁育和鉴定过程中,用PCR方法检测鼠尾基因组DNA。采用Western blot法检测小鼠肝脏和心脏中NLRP3、pro-Caspase-1和Caspase-1的蛋白质表达水平。结果小鼠给予他莫昔芬后,NLRP3 T346M突变基因被诱导敲入。Western blot结果显示,KI/KI小鼠肝脏和心脏组织以及KI/WT小鼠心脏中NLRP3炎性小体效应蛋白Caspase-1的表达水平较同窝野生型小鼠显著上调。结论本研究基于Cre-LoxP技术成功构建了NLRP3 T346M突变转基因小鼠模型,该模型小鼠在他莫昔芬诱导后可出现自发性的NLRP3炎症小体活化,这为探究NLRP3炎症小体活化机制以及筛选和评价NLRP3炎症小体抑制剂提供了新的时间特异性的实验动物模型。 展开更多
关键词 NLRP3突变 cre-LoxP系统 转基因小鼠 时间特异性 基因型鉴定 表型鉴定
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位点特异性重组酶Cre的克隆、表达、纯化及体外活性鉴定
8
作者 高虹 张传生 +2 位作者 魏影允 胡国法 劳为德 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第6期31-33,共3页
克隆了Cre基因 ,分别构建了真核表达载体 pEF EBFP Cre和 pGEX Cre,在大肠杆菌中表达了Cre重组酶 ,并证明了重组酶的删除特性 。
关键词 位点特异性重组酶cre 克隆 纯化 体外活性 鉴定 cre/LOXP系统 原核表达 cre基因 基因表达 大肠杆菌
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利用Cre-Loxp技术构建标记肝星状细胞的小鼠模型
9
作者 黄紫薇 赵殿元 +1 位作者 徐龙 唐丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第7期1065-1070,共6页
目的通过Cre-Loxp技术构建转基因小鼠,应用Lrat^(Cre)工具鼠示踪肝星状细胞分布。方法将Lrat^(Cre)小鼠与H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠交配,通过PCR鉴定得Lrat^(Cre)H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告... 目的通过Cre-Loxp技术构建转基因小鼠,应用Lrat^(Cre)工具鼠示踪肝星状细胞分布。方法将Lrat^(Cre)小鼠与H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠交配,通过PCR鉴定得Lrat^(Cre)H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠。固定小鼠肝脏切片,借助免疫荧光标记肝脏非实质细胞抗体,通过Imaris 3D还原分析肝星状细胞和其他肝脏非实质细胞间的表达与分布,以及进行肝星状细胞的自定位检验。结果Lrat^(Cre)介导的红色荧光蛋白tdTomato的表达可以特异性标记肝星状细胞,并通过肝星状细胞与肝脏巨噬细胞、肝窦内皮细胞的免疫荧光定位为细胞间相互作用分析提供了途径。结论Lrat^(Cre)可以介导tdTomato对肝星状细胞进行示踪,同时可用做肝星状细胞特异性的报告基因工具鼠。 展开更多
关键词 肝星状细胞 肝脏巨噬细胞 肝窦内皮细胞 报告基因小鼠 cre-LOXP
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CRISPR/Cas9联合Cre-Loxp系统建立VASN条件敲除的小鼠肝细胞系
10
作者 甘暨 杨丽超 +3 位作者 张起 孙俊铭 张俊 何敏 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第2期173-181,共9页
目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同... 目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同源序列的供体载体donor DNA质粒;将3个质粒共转染至小鼠肝细胞AML12中,分离单克隆,提取基因组DNA,经PCR及测序鉴定获得稳定敲入Loxp序列的单克隆细胞株AML12-Loxp;将pALB-Cre质粒转染至AML12-Loxp,筛选建立敲除VASN基因的细胞系。结果:成功构建2个靶向敲除VASN基因的pX459-gRNA-VASN-1和pX459-gRNAVASN-2重组载体及一个供体载体;转染药筛后获得12个单细胞克隆,经测序,5个单克隆细胞实现VASN基因上下游精确敲入Loxp序列;同源重组敲入效率为41.6%;pALB-Cre质粒转染后获得20个单细胞克隆,经PCR和测序获得12个VASN基因敲除的单克隆细胞,敲除效率为60%。结论:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统成功构建了VASN基因敲除的AML12细胞,为后续体外研究VASN在肝细胞中的功能及在动物体内实现VASN的条件性敲除奠定了分子基础。 展开更多
关键词 VASN CRISPR/Cas9 cre-Loxp系统 条件性敲除 AML12细胞
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异基因造血干细胞移植合并CRE定值出现皮肤损伤的护理
11
作者 王菲 高磊 汪菊萍 《当代护士(中旬刊)》 2023年第4期154-157,共4页
总结了5例进行异基因造血干细胞移植合并耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterobacteriaceae,CRE)定值出现皮肤损伤患者的护理方法及效果,为临床护理提供参考。护理内容主要包括对于不同损伤情况给予针对性的治疗方法... 总结了5例进行异基因造血干细胞移植合并耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterobacteriaceae,CRE)定值出现皮肤损伤患者的护理方法及效果,为临床护理提供参考。护理内容主要包括对于不同损伤情况给予针对性的治疗方法及护理措施,密切关注治疗效果及有无并发症。其中4例进行异基因造血干细胞移植合并CRE定值出现皮肤损伤患者均治愈出院,受损皮肤愈合,未发生皮肤感染,住院治疗平均时间为39~56 d,1例患者因CRE入血,住院23 d后死亡。及时发现异基因造血干细胞移植合并CRE定值患者皮肤的变化并进行合适的处理,避免局部皮肤软组织感染,是降低相关病死率的关键,也是移植成功的关键。 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 cre 皮肤损伤 护理
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基于16S rRNA测序分析CRE定植对ICU患者肠道微生物的影响
12
作者 康佳 赵志军 贾伟 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1239-1245,共7页
目的 采用16S rRNA测序方法分析耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)定植对重症监护病房(ICU)患者肠道微生物的影响。方法 收集ICU患者新鲜粪便或肛拭子标本,接种于含有2μg/mL厄他培南的MacConkey平板上培养。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质... 目的 采用16S rRNA测序方法分析耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)定植对重症监护病房(ICU)患者肠道微生物的影响。方法 收集ICU患者新鲜粪便或肛拭子标本,接种于含有2μg/mL厄他培南的MacConkey平板上培养。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对菌株进行鉴定,纸片扩散法对菌株进行药敏分析,采用聚合酶链式反应(PCR)对初步筛查出的CRE菌株进行16S rDNA片段扩增,采用微量肉汤稀释法进一步确定CRE。最后,分别提取CRE定植组与非定植组患者的粪便或肛拭子标本基因组DNA在HiSeq平台进行16S rRNA测序分析。结果 共收集ICU患者粪便或肛拭子标本241份,其中CRE阳性标本17份。16S扩增子V3~V4区测序共分离到726 OTUs, CRE未定植组有631 OTUs, CRE定植组有480 OTUs,两组间共有385 OTUs。这些共有OTUs绝大多数属于厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门、疣微菌门及放线菌门。在纲水平上,CRE定植前后γ-变形菌纲(W=193.000,P<0.001,FDR=0.004)和互营养菌(W=37.500,P=0.001,FDR=0.018)相对丰度差异有统计学意义。在种水平上,两组间肺炎克雷伯菌(W=195.000,P<0.001)、解糖肠球菌(W=153.000,P=0.038)及弯曲杆菌(W=63.500,P=0.050)比较差异有统计学意义。未发现肠道CRE定植对ICU患者肠道微生物KEGG功能通路有显著影响。结论 CRE定植会降低ICU患者肠道微生物的多样性,CRE定植组在肺炎克雷伯菌、解糖肠球菌及弯曲杆菌的丰度上与非定植组存在显著差异。 展开更多
关键词 肠道微生物 cre 定植 16S rRNA测序 重症监护病房 ICU
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Cre/loxP系统应用于毕赤酵母基因敲除的研究进展
13
作者 王未鲜 韩铭海 《安徽农业科学》 CAS 2023年第15期10-13,17,共5页
毕赤酵母是重组蛋白最常用的表达系统之一,蛋白高水平表达策略一直是领域内最重要的研究课题之一。在后基因组时代,高效而便捷的基因改造是一种有效提高毕赤酵母蛋白表达能力的手段,其中由Cre/loxP系统介导的基因改造技术受到了科研人... 毕赤酵母是重组蛋白最常用的表达系统之一,蛋白高水平表达策略一直是领域内最重要的研究课题之一。在后基因组时代,高效而便捷的基因改造是一种有效提高毕赤酵母蛋白表达能力的手段,其中由Cre/loxP系统介导的基因改造技术受到了科研人员的广泛关注。综述了Cre/loxP系统的基本原理、应用于毕赤酵母基因敲除的技术路线及其关键的技术问题。 展开更多
关键词 毕赤酵母 cre/loxP 基因敲除
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Cre-miR171在柑橘响应干旱胁迫中的作用
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作者 冯继鹏 胡洲 +4 位作者 张曼曼 汪小利 易倩 朱世平 赵晓春 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期123-137,共15页
干旱是影响柑橘生产的一个重要因素.为探究Cre-miR171在柑橘耐旱中的作用,本研究对其前体上游启动子顺式作用元件进行了分析,研究了其在柑橘组织及生长发育时期的表达特征,验证了Cre-miR171在柑橘中的靶基因,评价了干旱胁迫下Cre-miR17... 干旱是影响柑橘生产的一个重要因素.为探究Cre-miR171在柑橘耐旱中的作用,本研究对其前体上游启动子顺式作用元件进行了分析,研究了其在柑橘组织及生长发育时期的表达特征,验证了Cre-miR171在柑橘中的靶基因,评价了干旱胁迫下Cre-miR171及其靶基因在根不同部位的表达模式,以及过表达Cre-miR171的拟南芥和柑橘的耐旱性.结果表明,Cre-miR171前体序列启动子区具有与应答及调控逆境胁迫相关的多种响应元件.在根发育的早期高表达,在侧根发生区的表达量高于根尖.通过生物信息分析及组织表达相关分析鉴定到了3个靶基因,CclSCL6,CclSCL22和CclSCL26,并利用烟草瞬时表达试验证实了这3个靶基因与Cre-miR171的靶向关系.在为期15 d的干旱胁迫处理中,Cre-miR171在侧根区和根尖的表达在处理的第10 d出现了明显的相反趋势,在根尖上调表达,在侧根区下调表达,3个靶基因的表达也呈现相应的变化.过表达Cre-miR171的拟南芥和柑橘对干旱的敏感性显著高于对照,过表达Cre-miR171的柑橘主根的伸长生长和侧根的发生受到了抑制.以上结果表明,Cre-miR171能影响柑橘根的伸长生长和侧根发生,负调控柑橘的耐旱性. 展开更多
关键词 cre-miR171 干旱胁迫 根系生长发育 柑橘
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基于Cre-LoxP系统的B细胞特异性荧光报告基因小鼠模型的构建及鉴定
15
作者 吴孟瑶 张雪婷 +1 位作者 程倩倩 张纪岩 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期361-367,共7页
目的应用Cre^(-)LoxP重组酶系统构建B细胞特异性表达tdTomato蛋白的荧光报告基因小鼠。方法在Gt(ROSA)26Sor(Rosa26)位点插入1个由CAG启动子驱动的报告基团,其LoxP侧翼设计有STOP盒,可阻止tdTomato荧光蛋白表达,经与CD19-Cre工具小鼠交... 目的应用Cre^(-)LoxP重组酶系统构建B细胞特异性表达tdTomato蛋白的荧光报告基因小鼠。方法在Gt(ROSA)26Sor(Rosa26)位点插入1个由CAG启动子驱动的报告基团,其LoxP侧翼设计有STOP盒,可阻止tdTomato荧光蛋白表达,经与CD19-Cre工具小鼠交配繁殖获得tdTomato^(CD19-Cre)小鼠,Cre重组酶特异性识别LoxP序列,删除STOP盒,从而使B细胞特异性表达tdTomato荧光蛋白。利用PCR进行基因型鉴定。通过流式细胞术和脑膜免疫荧光分别检测野生型对照组小鼠和tdTomato^(CD19-Cre)荧光报告基因小鼠脾和脑膜B细胞中tdTomato红色荧光蛋白表达。结果基因型为tdTomato^(F/-)CD19-Cre^(+)或tdTomatoF/FCD19-Cre^(+)的小鼠为B细胞特异性表达tdTomato天然红色荧光蛋白的荧光报告基因小鼠。而对照组小鼠基因型为tdTomato^(F/-)CD19-Cre^(-)或tdTomatoF/FCD19-Cre^(-)。流式细胞术测定结果表明,与野生型对照组小鼠相比,tdTomato^(CD19-Cre)荧光报告基因小鼠脾中表达tdTomato荧光蛋白的B细胞百分比均显著增加(P<0.01);在非B细胞群中仅检测到少量的tdTomato+细胞。且在滤泡型B细胞、边缘区B细胞、T1 B细胞、T2 B细胞和成熟B细胞等B细胞亚群细胞表面tdTomato荧光蛋白均能稳定表达(P<0.01),百分比分别为(88±8)%,(80±9)%,(86±9)%,(92±6)%和(89±7)%。通过与CD45共定位,在tdTomato^(CD19-Cre)荧光报告基因小鼠脑膜中也检测到tdTomato红色荧光蛋白表达。结论成功构建B细胞特异性表达tdTomato荧光蛋白的荧光报告基因小鼠模型,且tdTomato荧光蛋白可在外周免疫器官和中枢神经系统稳定表达。 展开更多
关键词 cre-LoxP系统 tdTomato荧光蛋白 B细胞
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LepR 3'UTR缺失导致CreER工具鼠示踪特征改变的研究
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作者 贠海涛 庞思怡 +3 位作者 贺婷 胡景岩 郑超 杨柳 《骨科》 CAS 2023年第1期68-75,共8页
目的构建瘦素受体(Leptin receptor,LepR)报告基因(LepR-CreER)小鼠,在体内研究LepR 3’UTR中引入polyA对骨关节和其他脏器中LepR基因表达模式的影响。方法通过CRISPR-Cas9基因编辑技术在LepR基因终止密码子前定点敲入2A-CreERT2-WPER-p... 目的构建瘦素受体(Leptin receptor,LepR)报告基因(LepR-CreER)小鼠,在体内研究LepR 3’UTR中引入polyA对骨关节和其他脏器中LepR基因表达模式的影响。方法通过CRISPR-Cas9基因编辑技术在LepR基因终止密码子前定点敲入2A-CreERT2-WPER-polyA表达框,构建诱导型LepR-CreER基因小鼠,与R26^(tdTomato)小鼠杂交繁育,获得LepR-CreER;R26^(tdTomato)基因小鼠,提取小鼠组织DNA,采用PCR进行基因型鉴定。对幼龄及成年期LepR-CreER;R26^(tdTomato)基因小鼠的骨关节和脏器组织进行冰冻切片,利用DAPI和免疫荧光染色检测体内LepR+细胞表达情况,并与LepR-Cre;R26^(tdTomato)小鼠LepR+细胞表达进行比较。在LepR-Cre和LepR-CreER小鼠关节腔注射Leptin重组蛋白,采用Safranin O染色和Aggrecan免疫荧光染色观察关节软骨的变化。结果幼龄期,LepR-CreER;R26^(tdTomato)和LepR-Cre;R26^(tdTomato)小鼠的生长板肥大区及骨髓中均有LepR+细胞存在,关节软骨中没有LepR+细胞的出现;而成年期,LepR-CreER;R26^(tdTomato)小鼠关节软骨中LepR+细胞的数目较LepR-Cre;R26^(tdTomato)小鼠明显增多,阳性细胞分布范围扩大。关节腔注射Leptin后,LepR-CreER小鼠较LepR-Cre小鼠出现更严重的关节软骨退变表现。进一步生物信息学及表达对比分析发现LepR基因的3’UTR存在关节软骨中高表达的miR-31-5p互补结合位点。结论成年期,不同方式构建的LepR报告基因小鼠中LepR+细胞表达具有差异,激活异位表达LepR+细胞的关节软骨出现更严重的骨关节炎,生信分析提示其中的差异可能源自LepR基因3’UTR存在miR-31-5p的潜在结合区域。 展开更多
关键词 瘦素受体 关节软骨 骨关节炎 cre-LoxP系统
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血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立(英文) 被引量:3
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作者 李文龙 程萱 +4 位作者 谭晓红 张继帅 孙岩松 陈林 杨晓 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期909-915,共7页
血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠,利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细... 血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠,利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和SouthernBlot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布,我们将Tie2-Cre转基因小鼠分别与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配。Tie2-Cre;Smad4Co/+小鼠的多个组织的基因组DNA的PCR结果显示,Cre重组酶在所有包含血管内皮细胞的组织中表达并能介导LoxP间的重组。Tie2-Cre;ROSA26双转基因胚胎LacZ染色结果显示,Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。因此,Tie2-Cre转基因小鼠可作血管内皮细胞谱系分析和在血管内皮细胞进行条件基因打靶的理想工具小鼠。 展开更多
关键词 TIE2 血管内皮细胞 cre-LOXP 转基因小鼠 cre重组酶 特异表达 基因组DNA cre-LOXP Southern 组织分布
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利用Cre/lox重组系统建立番茄基因工程雄性不育恢复系 被引量:3
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作者 宋洪元 任雪松 +3 位作者 司军 李成琼 宋明 雷建军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期3581-3591,共11页
【目的】利用Cre/lox重组系统具有的重组删除特性建立番茄工程恢复系,特异删除F1中的雄性不育基因恢复其育性。【方法】将TA29-Barnase雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与NPTⅡ基因、Bar基因融合后获得植物表达载体pBinBarl... 【目的】利用Cre/lox重组系统具有的重组删除特性建立番茄工程恢复系,特异删除F1中的雄性不育基因恢复其育性。【方法】将TA29-Barnase雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与NPTⅡ基因、Bar基因融合后获得植物表达载体pBinBarloxTABn,转化番茄获得雄性不育转基因植株。Cre基因在CaMV35S启动子的驱动下转入番茄获得工程恢复系。两者在开花时进行杂交,利用Cre重组酶删除F1中的TA29-Barnase不育基因表达盒使育性恢复。【结果】利用NPTⅡ作为转化筛选标记基因获得了番茄雄性不育转基因植株。转基因植株中的Bar基因能正常表达,真叶叶盘在含PPT3mg·L-1(phosphinothricin)分化培养基上能分化愈伤组织及芽;真叶具有抗PPT20mg·L-1浓度以上的能力。获得的TA29-Barnase转基因植株表现雄蕊退化、无花粉产生或产生少量形状畸形且无生活力的花粉。雄性不育植株自花授粉不能坐果,用非转基因保持系花粉授粉后,果实正常膨大结籽,杂交后代对除草剂Basta的抗性按1﹕1分离。不育植株与Cre转基因工程恢复系杂交后,果实也正常膨大结籽。对不育植株与Cre转基因工程恢复系杂交后代进行分子检测,结果发现同时含Bar基因和Cre基因F1植株中的TA29-Barnase雄性不育基因被精确删除。TA29-Barnase基因删除植株育性被恢复,能正常开花结果。【结论】利用Cre/lox重组系统建立的Cre工程恢复系成功将番茄F1代中的不育基因删除,恢复了F1的育性。该研究结果为植物基因工程雄性不育系的育性恢复提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 cre/lox重组系统 工程不育系 cre工程恢复系 番茄
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细胞可透过性Cre重组酶表达、纯化及生物活性检测(英文) 被引量:1
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作者 郭中敏 徐康 +6 位作者 岳颖 黄冰 唐欢 马芸 洪迅 陈系古 肖东 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期784-790,共7页
Cre/loxP系统由Cre位点特异重组酶和可被Cre特异性识别的loxP位点构成,该系统广泛用于条件性基因敲除和表达,以研究基因功能.为了表达和纯化一种细胞可透过性Cre重组酶(即His6 NLS Cre MTS);经IPTG诱导,在BL2 1(DE3)宿主菌成功表达His6... Cre/loxP系统由Cre位点特异重组酶和可被Cre特异性识别的loxP位点构成,该系统广泛用于条件性基因敲除和表达,以研究基因功能.为了表达和纯化一种细胞可透过性Cre重组酶(即His6 NLS Cre MTS);经IPTG诱导,在BL2 1(DE3)宿主菌成功表达His6 NLS Cre MTS融合蛋白,通过His BondNi NTA树脂分离并纯化了该蛋白质,随后借助细胞和非细胞的重组系统成功检测了His6 NLS Cre MTS的生物活性. 展开更多
关键词 cre/LOX P系统 细胞可透过性cre重组酶 表达 纯化 生物活性检测 细胞和非细胞的重组系统
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Cre/loxP位点特异性重组系统及其在口腔医学领域中的应用 被引量:4
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作者 张文娟 于丹妮 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期55-58,共4页
Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗... Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗传信息的重要的试验工具。本文主要就Cre/loxP系统的结构、重组机制、特点及其在口腔医学领域中的应用作一综述。 展开更多
关键词 位点特异性重组 cre/LOXP系统 cre重组酶
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