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抑制CRIF1基因促进L615白血病细胞体内增殖的动物实验初步研究 被引量:2
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作者 肖燕妮 邓小军 +2 位作者 龚奕 李凤杰 李忠俊 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期488-491,共4页
目的探讨CRIF1基因对L615白血病细胞小鼠体内增殖的影响。方法实验分为3组,CRIF1-RNAi L615实验组(n=3):慢病毒干扰载体抑制L615细胞CRIF1-GFP基因表达;空载体对照组(n=3):空载体转染L615细胞;空白对照组(L615细胞空白对照)(n=3);建立... 目的探讨CRIF1基因对L615白血病细胞小鼠体内增殖的影响。方法实验分为3组,CRIF1-RNAi L615实验组(n=3):慢病毒干扰载体抑制L615细胞CRIF1-GFP基因表达;空载体对照组(n=3):空载体转染L615细胞;空白对照组(L615细胞空白对照)(n=3);建立白血病小鼠模型。通过肝脾印片、骨髓涂片及外周血流式细胞仪检测观察各组小鼠体内L615细胞增殖情况,比较各组小鼠的外周血白细胞计数(WBC)、生活质量和生存时间、肝脾指数。结果流式细胞仪检测:CRIF1-RNAi L615实验组、空载体对照组的小鼠外周血均见大量GFP阳性L615细胞;肝、脾印片及骨髓涂片结果显示肝、脾、骨髓均被白血病细胞浸润,3组小鼠均成瘤。CRIF1-RNAi L615实验组、空载体对照组及L615对照组小鼠在白血病细胞植入d5后外周血WBC(×109/L)分别为:42.23±15.08 vs 17.10±4.10 vs 17.30±5.05(P<0.01);生存时间(d)分别为:6.33±1.15 vs 10.00 vs 8.33±2.89(P<0.01);CRIF1-RNAi L615实验组小鼠脱毛、弓背等并发症出现提前;肝、脾指数分别为:122.31±2.83、35.21±0.45 vs 110.89±13.30、21.54±3.40 vs 89.76±5.56、24.71±2.48(P<0.05)。结论抑制小鼠L615白血病细胞CRIF1基因表达后,明显著促进L615白血病细胞在小鼠体内增殖、浸润并加快移植小鼠发病死亡。 展开更多
关键词 crif1(CR6交互作用因子1) 白血病细胞 L615 体内增值 小鼠 动物模型
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CRIF1介导白血病骨髓基质细胞诱导Jurkat细胞周期阻滞的探讨 被引量:2
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作者 冉茜 李忠俊 +2 位作者 张曦 梁雪 陈幸华 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1014-1017,共4页
目的研究白血病骨髓基质细胞对白血病细胞周期分布的影响及其可能机制。方法分离培养原代正常和白血病骨髓基质细胞体外模拟骨髓微环境功能,与Jurkat细胞共培养后,检测Jurkat细胞周期分布情况;抑制性消减杂交技术筛选和分析与白血病骨... 目的研究白血病骨髓基质细胞对白血病细胞周期分布的影响及其可能机制。方法分离培养原代正常和白血病骨髓基质细胞体外模拟骨髓微环境功能,与Jurkat细胞共培养后,检测Jurkat细胞周期分布情况;抑制性消减杂交技术筛选和分析与白血病骨髓基质细胞共培养24 h后Jurkat细胞差异表达基因;RT-PCR技术验证目的基因的表达水平。结果成功分离培养正常和白血病骨髓基质细胞,体外与Jurkat细胞共培养24 h后,Jurkat细胞周期阻滞("G0/G1"期)细胞数明显升高(P<0.05);抑制性消减杂交试验发现,与白血病骨髓基质细胞共培养24 h后Jurkat细胞上调表达30个基因克隆、下调表达22个基因克隆;RT-PCR验证发现,与白血病骨髓基质细胞共培养24 h后,Jurkat细胞高表达CRIF1基因。结论白血病骨髓基质细胞诱导Jurkat细胞周期阻滞("G0/G1"期),可能部分通过高表达CRIF1实现。 展开更多
关键词 白血病 骨髓基质细胞 细胞周期 抑制性消减杂交 crif1
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原代白血病骨髓基质细胞对Jurkat细胞CRIF1基因表达的影响 被引量:4
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作者 李忠俊 陈幸华 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2008年第1期25-27,共3页
目的研究与原代白血病骨髓基质细胞共培养后。白血病细胞的CRIF1基因表达情况。方法:1)采用Percoll体外分离正常、初治白血病患者骨髓单个核细胞,贴壁培养骨髓基质细胞;2)应用RT-PCR技术检测白血病骨髓基质细胞屏蔽的Jurkat细胞CRIF1 m... 目的研究与原代白血病骨髓基质细胞共培养后。白血病细胞的CRIF1基因表达情况。方法:1)采用Percoll体外分离正常、初治白血病患者骨髓单个核细胞,贴壁培养骨髓基质细胞;2)应用RT-PCR技术检测白血病骨髓基质细胞屏蔽的Jurkat细胞CRIF1 mRNA表达的改变。结果发现Jurkat细胞CRIF1 mRNA有一定量的基础表达,白血病骨髓基质细胞屏蔽的Jurkat细胞CRIF1 mRNA的表达与对照组相比明显上调。结论CRIF1高表达可能与白血病骨髓基质细胞抑制白血病细胞增殖有关。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 细胞周期 Jurket细胞 crif1基因
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CRIF1基因的克隆表达 被引量:1
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作者 冉茜 单佑安 李忠俊 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1018-1020,共3页
目的克隆表达CRIF1基因蛋白,为进一步研究该基因在骨髓微环境诱导白血病细胞G0/G1期阻滞过程中作用以及相关机制奠定基础。方法自HL60细胞中提取总RNA、逆转录,并与pET32a构建融合蛋白表达载体、蛋白原核表达载体;优化蛋白表达诱导条件... 目的克隆表达CRIF1基因蛋白,为进一步研究该基因在骨髓微环境诱导白血病细胞G0/G1期阻滞过程中作用以及相关机制奠定基础。方法自HL60细胞中提取总RNA、逆转录,并与pET32a构建融合蛋白表达载体、蛋白原核表达载体;优化蛋白表达诱导条件,蛋白纯化;SDS-PAGE、Western Blot检测目的蛋白的表达。结果克隆并经测序获得全长744bp的CRIF1基因,成功构建融合蛋白表达载体和原核表达载体,优化并纯化蛋白;SDS-PAGE在42.5 kD处获得目的条带,Western Blot检测确定为CRIF1表达蛋白。结论成功克隆表达出CRIF1基因蛋白。 展开更多
关键词 细胞周期 crif1 白血病
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CRIF1参与高糖诱导的rRNA基因转录
5
作者 贾会会 阎海霞 +1 位作者 程谟斌 张业 《医学研究杂志》 2017年第11期20-23,27,共5页
目的探索CRIF1在高糖诱导下对rRNA基因转录中的作用。方法在HEK293T细胞中,转染CRIF1表达载体或空载对照,培养48h后收取细胞提取总RNA,通过RT-q PCR检测pre-rRNA的mRNA水平;用含0、1、4.5g/L糖浓度的培养基培养HEK293T细胞12h后,收集全... 目的探索CRIF1在高糖诱导下对rRNA基因转录中的作用。方法在HEK293T细胞中,转染CRIF1表达载体或空载对照,培养48h后收取细胞提取总RNA,通过RT-q PCR检测pre-rRNA的mRNA水平;用含0、1、4.5g/L糖浓度的培养基培养HEK293T细胞12h后,收集全细胞提取物,进行Western blot法检测CRIF1蛋白的表达水平;在HEK293T细胞中转染sh CRIF1干扰质粒或空载对照,36h后换用含0、1、4.5g/L糖浓度的培养基继续培养细胞12h后,收取细胞提取总RNA,通过RTq PCR检测pre-rRNA的水平。结果 CRIF1可促进pre-rRNA的表达;随着糖浓度的升高,CRIF1的表达量逐渐增加;敲低CRIF1可抑制糖浓度依赖的pre-rRNA的表达。结论 CRIF1可提高高糖诱导下pre-rRNA的表达水平,从而参与高糖诱导的rRNA基因的转录调控。 展开更多
关键词 crif1 pre-rRNA 葡萄糖 诱导
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CRIF1基因启动子克隆及活性分析
6
作者 冉茜 李忠俊 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-27,共3页
目的研究急性髓性白血病基因1(AML-1/RUNX1)调控CR6相互作用因子(CRIF1)基因启动子的主要活性区域。方法采用PCR技术克隆CRIF1基因启动子并测序,构建截短突变体,以双荧光素酶报告系统检测AML-1/RUNX1调节CRIF1基因启动子的主要活性区域... 目的研究急性髓性白血病基因1(AML-1/RUNX1)调控CR6相互作用因子(CRIF1)基因启动子的主要活性区域。方法采用PCR技术克隆CRIF1基因启动子并测序,构建截短突变体,以双荧光素酶报告系统检测AML-1/RUNX1调节CRIF1基因启动子的主要活性区域。结果克隆出CRIF1基因启动子-2 505—+9共计2 514 bp的活性区域,并构建了截短突变体CRIF1-1 800、1 500、1 000、600及300 bp;较之CRIF1基因启动子全长序列转录活性,CRIF1-300 bp突变启动子活力明显下降,CRIF1-600 bp内启动子活力与其相当,CRIF1-1 500 bp区启动子活性是它的2.8倍。结论本研究提示CRIF1基因启动子-1 500—-2 514 bp间可能是AML-1/RUNX1对其进行转录负性调控的主要活性区域。 展开更多
关键词 CR6相互作用因子(CRIFl) 启动子 急性髓性白血病基因1(AML-1/RUNXl) 白血病细胞 残留白血病(MRD)
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