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CRISPR/Cas9基因编辑技术在炎症性肠病中的研究进展 被引量:1
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作者 田梦 常虹 +2 位作者 欧阳晶 王玉平 陈兆峰 《现代消化及介入诊疗》 2023年第12期1575-1579,共5页
炎症性肠病(IBD)是一类严重影响全球人口健康的疾病,而CRISPR/Cas9基因编辑技术作为一种革命性的基因工具,正在为IBD的治疗带来新的希望。本文综述了CRISPR/Cas9基因编辑技术在炎症性肠病(IBD)研究中的最新进展。介绍了CRISPR/Cas9基因... 炎症性肠病(IBD)是一类严重影响全球人口健康的疾病,而CRISPR/Cas9基因编辑技术作为一种革命性的基因工具,正在为IBD的治疗带来新的希望。本文综述了CRISPR/Cas9基因编辑技术在炎症性肠病(IBD)研究中的最新进展。介绍了CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理和方法,并对其在IBD基因研究中的应用进行了探讨。尽管CRISPR/Cas9技术在IBD领域显示出潜在的巨大优势,但在递送效率、特异性和安全性等方面仍然面临一些挑战。未来的研究需要进一步解决这些问题,以深入探索CRISPR/Cas9技术在IBD治疗中的潜力和应用前景。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑 炎症性肠病 溃疡性结肠炎 克罗恩病
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基于CRISPR/Cas9基因编辑的高油酸大豆品系创制
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作者 张威 许文静 +5 位作者 许亚男 张红梅 刘晓庆 崔晓艳 陈新 陈华涛 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期321-327,共7页
高油酸能够显著提升大豆食用油的稳定性和食用价值,是大豆品质改良的育种目标之一。为提高大豆籽粒油酸含量,本研究采用CRISPR/Cas9多基因编辑技术,同时敲除负调控大豆油酸含量的2个关键基因GmFAD2-1A和GmFAD2-1B。采用农杆菌介导的大... 高油酸能够显著提升大豆食用油的稳定性和食用价值,是大豆品质改良的育种目标之一。为提高大豆籽粒油酸含量,本研究采用CRISPR/Cas9多基因编辑技术,同时敲除负调控大豆油酸含量的2个关键基因GmFAD2-1A和GmFAD2-1B。采用农杆菌介导的大豆子叶节转化方法获得20株T_(0)代阳性苗,但发生基因编辑的株系只有11个,其中GmFAD2-1A发生突变的有7株,GmFAD2-1B发生突变的有10株,这2个基因同时发生突变的有6株。经过加代纯合后,检测转基因株系(T_(3)代)大豆籽粒的脂肪酸组分,发现油酸含量显著提升,最高达81.38%,而亚油酸含量则显著降低,获得了高油酸新种质。本研究采取多基因敲除策略,成功突变大豆基因GmFAD2-1A和GmFAD2-1B,并获得高油酸大豆突变体株系,为高油酸大豆育种提供了新的种质资源。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑 大豆 油酸 GmFAD2-1A GmFAD2-1B
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在临床研究中的伦理审查问题探讨 被引量:14
3
作者 周吉银 刘丹 +1 位作者 曾圣雅 周来新 《中国医学伦理学》 2017年第8期927-931,共5页
目的探讨CRISPR/Cas9基因编辑技术在临床研究中引发的伦理审查问题,为临床研究中涉及该技术的伦理审查注意事项提供参考。方法总结国内外CRISPR/Cas9基因编辑技术存在的伦理问题,分析其原因并提出符合我国国情新技术应用的建议。结果应... 目的探讨CRISPR/Cas9基因编辑技术在临床研究中引发的伦理审查问题,为临床研究中涉及该技术的伦理审查注意事项提供参考。方法总结国内外CRISPR/Cas9基因编辑技术存在的伦理问题,分析其原因并提出符合我国国情新技术应用的建议。结果应该允许将基因编辑技术应用于体细胞基因治疗,禁止用于生殖系基因治疗和不考虑用来增强;鉴于CRISPR/Cas9缺乏明确的责任伦理主体,带来安全性、权利冲突和社会公平问题,需采取的措施包括加强文化沟通、尽快形成基因编辑技术伦理规范、在国家层面上设立独立的基因编辑技术项目伦理审查机构、健全法律规范、制定技术标准和伦理准则以及在国家层面应对基因编辑研究领域进行重点支持。结论鉴于CRISPR/Cas9技术潜在的临床应用,国家应逐步从禁止到限制性开展人类胚胎基因编辑技术的研究。伦理委员会要负起临床研究的伦理审查和监管。伦理委员会委员和伦理工作人员应加强相关新知识的学习,从受理涉及CRISPR/Cas9技术的临床科研项目到伦理审查都严格对接政策法规,确保有效审查基因编辑技术项目的伦理问题。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 临床研究 伦理审查
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 StxⅡ基因表达
4
作者 樊欢 吴涛 +6 位作者 朱小娟 葛以跃 曾晓燕 焦永军 史智扬 朱凤才 崔仑标 《江苏预防医学》 CAS 2016年第5期520-523,共4页
目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157∶H7StxⅡ基因表达,并评价其对细菌生长的影响及细胞毒性。方法针对EHEC O157∶H7StxⅡ基因设计引物,构建CRISPR/Cas9表达质粒pdCas9-StxⅡ并转化EHEC O157∶H7感受态... 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157∶H7StxⅡ基因表达,并评价其对细菌生长的影响及细胞毒性。方法针对EHEC O157∶H7StxⅡ基因设计引物,构建CRISPR/Cas9表达质粒pdCas9-StxⅡ并转化EHEC O157∶H7感受态细胞,采用RT-PCR及胶体金法检测StxⅡ基因表达情况,绘制菌株生长曲线,将菌株培养上清液接种Vero细胞观察细胞病变情况。结果测序分析显示pdCas9-StxⅡ表达质粒被成功构建;转化EHEC O157∶H7(00G097)感受态细胞后,StxⅡ基因mRNA、蛋白表达均受抑制,EHEC O157∶H7生长曲线未受影响(P值均>0.05)。pdCas9-StxⅡ-00G097菌株培养上清液对细胞的毒性效应(CPE为30%)显著低于对照菌株00G097和pdCas9-00G097(CPE均>80%)。结论成功构建的pdCas9-StxⅡ表达质粒能特异抑制EHEC O157∶H7StxⅡ基因表达、降低细胞毒性,为进一步研究志贺毒素StxⅡ在EHEC O157∶H7致病机理和基因工程减毒活菌苗奠定了基础。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 EHEC0157:H7菌株 志贺毒素
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利用CRISPR/Cas9基因编辑靶向下调FGFR2缓解Apert综合征小鼠颅缝早闭
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作者 罗凤涛 谢杨丽 +3 位作者 李灿 谭乔燕 杜晓兰 陈林 《生物医学转化》 2021年第2期63-71,共9页
Apert综合征(Apert Syndrome,AS)是一类常染色体显性遗传疾病,主要表现为颅缝早闭、中面部发育不良、并指(趾)、智力发育障碍等,多由FGFR2分子功能增强型点突变引起。目前,此疾病主要靠手术矫形来恢复功能,其中大脑等病变部位手术难度大... Apert综合征(Apert Syndrome,AS)是一类常染色体显性遗传疾病,主要表现为颅缝早闭、中面部发育不良、并指(趾)、智力发育障碍等,多由FGFR2分子功能增强型点突变引起。目前,此疾病主要靠手术矫形来恢复功能,其中大脑等病变部位手术难度大,难以实施,且通常需要多次手术。CRISPR/Cas9基因编辑技术在人类遗传病治疗中具有巨大潜力。本研究筛选到靶向FGFR2基因的gRNA,与Cas9经慢病毒包装后作用于Apert小鼠(FGFR2^(+/P253R))的原代颅骨细胞、体外培养的颅骨以及活体小鼠颅骨中,可敲低FGFR2的表达,改善Apert原代颅骨细胞的分化程度。CRISPR/Cas9处理体外培养的颅骨及注射至Apert小鼠头颅,颅骨冠状缝早闭状态有效缓解,异常降低的颅骨骨量、骨密度等也显著改善,表明CRISPR/Cas9基因编辑可缓解Apert小鼠头颅异常。本研究为Apert综合征的基因治疗提供了实验依据,有望为其它骨骼遗传病治疗提供新的策略与借鉴。 展开更多
关键词 颅缝早闭 APERT综合征 2型成纤维细胞生长因子受体 crispr/cas9基因编辑
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在大型真菌研究中的应用现状 被引量:3
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作者 徐瑞平 周雁 边银丙 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期119-127,共9页
大型真菌与人类生活密切相关,但大部分大型真菌缺乏高效的遗传操作系统,极大地影响了功能基因功能分析及遗传改良研究。近年来CRISPR/Cas9基因编辑技术发展迅速,已经成为生命科学研究领域不可或缺的技术之一。笔者概述了CRISPR/Cas系统... 大型真菌与人类生活密切相关,但大部分大型真菌缺乏高效的遗传操作系统,极大地影响了功能基因功能分析及遗传改良研究。近年来CRISPR/Cas9基因编辑技术发展迅速,已经成为生命科学研究领域不可或缺的技术之一。笔者概述了CRISPR/Cas系统的结构类型及CRISPR/Cas9系统作用机理,介绍了CRISPR/Cas9基因编辑技术在大型真菌研究中的应用现状,并针对Cas9和sgRNA的表达、遗传转化策略、靶位点选择等影响编辑效率的关键问题进行了分析讨论,旨在为该技术在大型真菌研究中的应用提供参考。 展开更多
关键词 食用菌 药用菌 crispr/cas结构类型 crispr/cas9系统作用机理 crispr/cas9基因编辑技术应用现状
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在水生甲壳动物中的应用进展 被引量:1
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作者 郭华荣 陶奕文 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期105-112,119,共9页
CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated nuclease 9)技术是一种由gRNA(guide RNA)引导的Cas9核酸内切酶靶向编辑技术,已广泛用于基因的敲除、敲入和敲降,其操作简便快速,成本低,已... CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated nuclease 9)技术是一种由gRNA(guide RNA)引导的Cas9核酸内切酶靶向编辑技术,已广泛用于基因的敲除、敲入和敲降,其操作简便快速,成本低,已成为人们探究基因功能、修复受损基因、沉默有害基因以及改良经济物种种质性状的重要工具。目前,该技术已经在少数几种水生甲壳动物中得到成功应用,但是由于显微注射技术在应用上的局限性,该技术在许多重要海水养殖经济物种如对虾中的应用受到限制,导致其基因编辑效率低下,难以广泛开展。本文对CRISPR/Cas9基因编辑技术在水生甲壳动物中的应用进行了综述和展望,为今后海水养殖虾蟹类的基因功能研究以及遗传育种研究提供参考。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 水生甲壳动物 应用 显微注射 基因编辑效率
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在精神分裂症研究和治疗中的应用前景综述 被引量:1
8
作者 刘艳艳 赵鹏 《医学理论与实践》 2017年第14期2054-2055,2051,共3页
精神分裂症是多发于青壮年的精神障碍性疾病之一,至今病因未明。遗传学研究结果显示遗传因素在精神分裂症发病过程中起着重要作用,它是一种具有遗传性的脑基因异常表达疾病。近年来大量的和分裂症有关的基因被鉴定和标记,治疗上依赖于... 精神分裂症是多发于青壮年的精神障碍性疾病之一,至今病因未明。遗传学研究结果显示遗传因素在精神分裂症发病过程中起着重要作用,它是一种具有遗传性的脑基因异常表达疾病。近年来大量的和分裂症有关的基因被鉴定和标记,治疗上依赖于新型的基因编辑工具进行基因的再编辑,从而治疗精神分裂症。本文综述了CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用。 展开更多
关键词 精神分裂症 MIRNA lncRNAs crispr/cas9基因编辑技术
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在心血管领域中的研究进展 被引量:1
9
作者 孙兆庆 闫波 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第6期890-894,共5页
CRISPR/Cas9基因编辑技术以其独特的优势已经在生物医学领域中被广泛应用。利用该技术在人类心血管疾病的相关研究如:心肌细胞水平、先天性心脏病动物模型建立、冠心病高危因素、心律失常、心力衰竭和心肌病等方面已经取得了很大进步,... CRISPR/Cas9基因编辑技术以其独特的优势已经在生物医学领域中被广泛应用。利用该技术在人类心血管疾病的相关研究如:心肌细胞水平、先天性心脏病动物模型建立、冠心病高危因素、心律失常、心力衰竭和心肌病等方面已经取得了很大进步,但目前的基因编辑技术在实际运用中仍然面临着许多问题。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑 心血管疾病 基础研究 临床转化 基因治疗
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在肿瘤研究及治疗中的应用 被引量:3
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作者 王韶嵘(综述) 高兴春 +2 位作者 陈芳妮 乔文伟 米亚静(审校) 《实用癌症杂志》 2019年第7期1216-1218,共3页
恶性肿瘤严重威胁着我们的健康,根据国家癌症中心发布的全国癌症统计数据显示,2014年我国恶性肿瘤估计新发病例数380.4万例(男性211.4万例,女性169.0万例),2015年这一数字达到400万。恶性肿瘤是由遗传因素、环境因素及机体免疫系统等在... 恶性肿瘤严重威胁着我们的健康,根据国家癌症中心发布的全国癌症统计数据显示,2014年我国恶性肿瘤估计新发病例数380.4万例(男性211.4万例,女性169.0万例),2015年这一数字达到400万。恶性肿瘤是由遗传因素、环境因素及机体免疫系统等在内的多种因素共同作用下所引发的,其发病机制复杂,目前还不能完全阐明其具体机制。此外,恶性肿瘤的治疗主要依赖于放、化疗及手术治疗,但对于放、化疗均不耐受或已经处于晚期、失去手术机会的患者仍然没有一种有效且具有特异性的治疗方法,这些导致恶性肿瘤患者的治愈率不高且预后极差。CRISPR/Cas9基因编辑技术发展迅猛,具有广泛的应用前景,研究人员开创性地将其应用到肿瘤的研究中,探索复杂的肿瘤表型与基因功能间的关系,为肿瘤的研究及治疗提供了新的技术。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 恶性肿瘤 基因治疗
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CRISPR/Cas9基因编辑技术及其在动物细胞系构建中的应用 被引量:1
11
作者 葛玉凤 安芳兰 +2 位作者 刘学荣 崔治亮 田波 《安徽农业科学》 CAS 2018年第35期9-10,13,共3页
CRISPR/Cas9[Clustered regular interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9]系统是广泛存在于细菌和古生菌中可降解入侵病毒和噬菌体DNA的一种基因定点编辑技术,由于其具有快速、精准、高效,易于设计... CRISPR/Cas9[Clustered regular interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9]系统是广泛存在于细菌和古生菌中可降解入侵病毒和噬菌体DNA的一种基因定点编辑技术,由于其具有快速、精准、高效,易于设计,且特异性高等优势,得到了广泛的应用。概述了CRISPR/Cas9基因编辑技术的发展历程,并介绍其结构和编辑原理、在动物细胞系构建中的应用及展望,以便为更合理地应用和改进该技术提供系统的文献参考。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 动物细胞系 构建
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CRISPR/Cas9基因编辑技术及其在肿瘤治疗方面的研究进展 被引量:2
12
作者 程得洛 《系统医学》 2020年第20期195-198,共4页
当前肿瘤疾病依然是威胁人们健康、生活质量的一个重要因素,探寻有效的干预手段来缓解肿瘤疾病发展甚至是治愈肿瘤是临床的重要课题,准确的诊断手段、对病情发展与干预程度的评估是控制病情的前提,随着对基因编辑技术了解逐渐深入,近年... 当前肿瘤疾病依然是威胁人们健康、生活质量的一个重要因素,探寻有效的干预手段来缓解肿瘤疾病发展甚至是治愈肿瘤是临床的重要课题,准确的诊断手段、对病情发展与干预程度的评估是控制病情的前提,随着对基因编辑技术了解逐渐深入,近年来尝试将其应用于治疗肿瘤并取得了一定的成效,其中规律成簇间隔短回文重复/CRISPR相关蛋白核酸酶9(Regular cluster interval short palindrome repeats/CRISPR-related protein nuclease 9,CRISPR/Cas9)是相对新型的基因编辑手段,通过该技术不但能够准确完成RNA导向,同时还可实现对于DNA的识别、编辑,这种手段让基因编辑技术在高效、安全等方面得到厚实基础,随着该技术的深入已经实现在碱基水平基础上完成定点修饰基因的操作,为该基因编辑技术治疗肿瘤提供可靠的科学依据。CRISPR/Cas9基因编辑技术近年来被应用于治疗肿瘤,该文就对该技术的分子机制以及对于肿瘤疾病的治疗研究相关进展情况作出综述,为以后临床应用该技术治疗肿瘤疾病提供可参考数据。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 肿瘤 基因治疗 研究进展
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关于《CRISPR/Cas9基因编辑技术在链霉菌天然产物挖掘中的应用》的撤稿声明
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作者 《沈阳药科大学学报》编辑部 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期480-480,共1页
本刊接到举报,称彭飞等发表于我刊2020年第37卷第4期的论文《CRISPR/Cas9基因编辑技术在链霉菌天然产物挖掘中的应用》涉嫌剽窃、抄袭,经编辑部认真调查核实,该文剽窃、抄袭行为属实,情节严重,特郑重声明:1.撤销我刊2020年第37卷第4期... 本刊接到举报,称彭飞等发表于我刊2020年第37卷第4期的论文《CRISPR/Cas9基因编辑技术在链霉菌天然产物挖掘中的应用》涉嫌剽窃、抄袭,经编辑部认真调查核实,该文剽窃、抄袭行为属实,情节严重,特郑重声明:1.撤销我刊2020年第37卷第4期刊登的《CRISPR/CaS9基因编辑技术在链霉菌天然产物挖掘中的应用》论文。 展开更多
关键词 基因编辑技术 crispr/cas9 crispr/cas9基因编辑技术在链霉菌天然产物挖掘中的应用》 链霉菌 天然产物
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基于CRISPR/Cas9的棉花GhbHLH71基因编辑突变体的分析
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作者 上官小霞 杨琴莉 李换丽 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期138-148,共11页
碱性/螺旋-环-螺旋(basic/helix-loop-helix,bHLH)转录因子在植物的生长发育、次生代谢、信号转导、逆境胁迫等方面起重要的调控作用。棉花GhbHLH71基因c DNA全长996 bp,编码331个氨基酸残基,蛋白序列中含有保守的bHLH结构域,属于bHLH... 碱性/螺旋-环-螺旋(basic/helix-loop-helix,bHLH)转录因子在植物的生长发育、次生代谢、信号转导、逆境胁迫等方面起重要的调控作用。棉花GhbHLH71基因c DNA全长996 bp,编码331个氨基酸残基,蛋白序列中含有保守的bHLH结构域,属于bHLH转录因子家族成员。实时荧光定量分析结果表明,GhbHLH71基因在棉花纤维快速伸长期3~12 DPA (days post anthesis,DPA)相对高表达,暗示其主要在棉花纤维发育过程中发挥作用。构建该基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体进行了棉花遗传转化,T_0代再生株经过Cas9基因的PCR检测以及靶位点突变情况检测分析,获得6个T_0代基因编辑突变体。T_1代不同突变株系在棉花生长发育期的表型性状与对照相比无明显差异,但成熟纤维的长度与对照相比皆明显变短。T_2代突变株系可以稳定遗传T_1代株系纤维变短的表型。其中4#和8#株系连续2代的纤维长度与对照相比缩短比率皆达20%以上,表明GhbHLH71基因的突变主要影响了棉花纤维细胞的伸长。本研究为深入了解棉花中bHLH转录因子的生物学功能以及棉花纤维发育的分子机制提供了一定的参考。 展开更多
关键词 棉花 bHLH转录因子 GhbHLH71基因 纤维发育 crispr/cas9基因编辑
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利用CRISPR/Cas9基因编辑系统创制新型水稻温敏雄性核不育系 被引量:1
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作者 覃玉芬 廖山岳 +7 位作者 郭新颖 周海 房耀宇 滕开冲 刘芳 覃宝祥 庄楚雄 李容柏 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第5期1551-1561,共11页
为迅速获得优良的温敏雄性核不育(TGMS)系,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑系统对一份优良的水稻品系GXU41的TMS5基因上2个靶点进行编辑,对编辑植株进行靶点突变检测,筛选无外源DNA的编辑TGMS系,并进行育性转换、农艺性状和米质分析评价... 为迅速获得优良的温敏雄性核不育(TGMS)系,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑系统对一份优良的水稻品系GXU41的TMS5基因上2个靶点进行编辑,对编辑植株进行靶点突变检测,筛选无外源DNA的编辑TGMS系,并进行育性转换、农艺性状和米质分析评价。结果共获得12株T_(0)代转基因阳性植株,其中靶点1和靶点2的纯合突变率分别为50%和58.4%,一个或两个靶点为纯合突变占83.3%,双纯合突变率达到25%,在T_(1)代中筛选到无外源DNA的TGMS系。与野生型相比,编辑获得的TGMS系GXU41-5S随着温度升高小穗育性和花粉育性逐渐降低,在24℃时均表现完全不育;由于不育效应,GXU41-5S的株高增长和有效穗数增加显著,且GXU41-5S全部米质指标达到优质一等大米的标准要求。本研究证明了CRISPR/Cas9基因编辑系统是快速获得TGMS系有效途径,所创制的TGMS系对选育两系杂交水稻品种具有重要应用价值。 展开更多
关键词 两系杂交水稻 温敏雄性核不育系 crispr/cas9基因编辑系统 TMS5 育性转换
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基于CRISPR/Cas9基因编辑技术生成靶向识别Her2的B细胞免疫治疗研究
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作者 罗保红 詹钦茹 李淑华 《热带医学杂志》 CAS 2023年第9期1212-1217,1342,共7页
目的利用规律成簇的间隔排列的短回文重复序列及其核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建靶向识别Her2的B细胞,探究基因编辑B细胞的抗肿瘤免疫治疗作用。方法设计针对B细胞抗原受体(BCR)的sgRNA并克隆至lentiCRISPR v2载体上,经重组T7... 目的利用规律成簇的间隔排列的短回文重复序列及其核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建靶向识别Her2的B细胞,探究基因编辑B细胞的抗肿瘤免疫治疗作用。方法设计针对B细胞抗原受体(BCR)的sgRNA并克隆至lentiCRISPR v2载体上,经重组T7核酸内切酶I(T7E1)酶切实验验证sgRNA的切割效率。通过分子克隆技术从曲妥珠单抗基因中调取scFv序列并和同源臂连接在一起,构建到cppt-IRES-GFP慢病毒载体中作为同源重组模板。分别将Cas9/sgRNA表达质粒和同源模板质粒与BaEVTR包膜质粒、psPAX2-D64V骨架质粒包装成整合酶缺陷的慢病毒(IDLV),用2种慢病毒同时感染人原代B细胞进行基因编辑。将基因编辑的B细胞与Her2阳性肿瘤细胞SKBR-3共培养,通过流式检测B细胞的活化和增殖。用293T-CD40L-sBAFF饲养细胞扩增基因编辑的B细胞。从临床生物样本库获取Her2阳性乳腺癌标本构建患者来源的肿瘤类器官模型,评估基因编辑B细胞浸润、清除肿瘤的能力。结果选择IGHD作为打靶位点、切割率最高的sgRNA(约为52%)作为最终的打靶序列。2种IDLV同时感染B细胞后,scFv整合效率明显提高,达到25%,差异有统计学意义(t=6.357,P<0.001)。对基因编辑的B细胞进行基因组PCR的结果显示,scFv基因定点敲入到了靶位点。流式检测基因编辑的B细胞能靶向识别SKBR-3,从而活化并增殖。靶向识别Her2的B细胞与293T-CD40L-sBAFF饲养细胞共培养能迅速大量扩增。Biotek活细胞实时荧光成像系统观测到靶向识别Her2的B细胞浸润、清除肿瘤类器官的能力显著增强。结论本研究成功获得了大量靶向识别Her2的B细胞,在肿瘤类器官模型中靶向识别Her2的B细胞能有效浸润并清除肿瘤。 展开更多
关键词 细胞免疫治疗 crispr/cas9基因编辑技术 B细胞 Her2
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制EV71复制 被引量:3
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作者 吴涛 朱小娟 +7 位作者 樊欢 葛以跃 陈银 郭喜玲 赵康辰 史智扬 朱凤才 崔仑标 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期859-864,共6页
目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对肠道病毒71型(EV71)的特定基因进行编辑,评价其抑制EV71复制的效应。方法针对EV71的VP4区设计CRISPR/Cas9表达质粒pCas-Guide-GFP-G1及含PAM序列的DNA片段并转染Vero细胞株。采用噻唑蓝( MTT)... 目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对肠道病毒71型(EV71)的特定基因进行编辑,评价其抑制EV71复制的效应。方法针对EV71的VP4区设计CRISPR/Cas9表达质粒pCas-Guide-GFP-G1及含PAM序列的DNA片段并转染Vero细胞株。采用噻唑蓝( MTT)法测定细胞毒性,转染后接种病毒观察细胞病变作用( CPE),荧光定量RT-PCR法检测EV71含量,免疫共沉淀结合荧光定量RT-PCR法测定 Cas9-gRNA 在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合的能力。结果成功构建pCas-Guide-GFP-G1表达质粒;转染细胞后未见明显细胞毒性效应;细胞转染后接种病毒发现pCas-Guide-GFP-G1+PAM1组细胞病变明显少于其他对照组;培养上清中 EV71含量较对照组降低了40.4%(P=0.056),细胞中 EV71含量较对照组降低了52.8%(P=0.014);pCas-Guide-GFP-G1+PAM1组在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合能力最高。结论针对 EV71的 VP4基因设计的CRISPR/Cas9表达质粒在特定PAM存在下能通过对EV71基因组的剪切实现抑制EV71病毒复制的作用,可以为EV71治疗提供新的途径。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 肠道病毒71型 病毒复制 抑制
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制HBV复制 被引量:1
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作者 吴涛 朱小娟 +6 位作者 崔仑标 樊欢 陈银 郭喜玲 赵康辰 史智扬 朱凤才 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期600-605,共6页
目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对乙型肝炎病毒( HBV)的特定基因进行编辑,评价其抑制HBV复制的效应。方法针对HBV的S 基因设计2套CRISPR/Cas9表达质粒并转染HepG2-N10细胞株。采用噻唑蓝( MTT)法测定细胞毒性、化学发光法检测H... 目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对乙型肝炎病毒( HBV)的特定基因进行编辑,评价其抑制HBV复制的效应。方法针对HBV的S 基因设计2套CRISPR/Cas9表达质粒并转染HepG2-N10细胞株。采用噻唑蓝( MTT)法测定细胞毒性、化学发光法检测HBsAg、荧光定量RT-PCR( qRT-PCR)法检测病毒mRNA表达水平,荧光定量PCR( qRT-PCR)法检测HBV DNA含量,高通量测序分析HBV基因组编辑情况。结果未见明显细胞毒性效应;2套针对HBV的CRISPR/Cas9表达质粒组培养基中HBsAg含量较对照组降低了24.2%(P=0.031)和16.9%(P〉0.05),细胞中HBsAg含量分别降低了16.4%(P〉0.05)和32.1%(P〉0.05);S、C、X基因mRNA基因表达呈现不同程度降低;培养上清中HBV DNA含量较对照组降低了23%(P〉0.05)和35%(P=0.047),细胞中HBV DNA含量降低了7.2%(P〉0.05)和18%(P〉0.05);高通量测序提示HBV基因组出现不同类型的插入/缺失突变。结论针对HBV的S 基因设计的2套CRISPR/Cas9表达质粒能通过对HBV基因组的编辑实现抑制HBV基因表达及病毒复制作用,可能为HBV治疗提供新的途径。 展开更多
关键词 crispr/cas9基因编辑技术 乙型肝炎病毒 抑制
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利用CRISPR/Cas9技术编辑AFP1基因提高水稻耐逆性 被引量:8
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作者 周天顺 余东 +4 位作者 刘玲 欧阳宁 袁贵龙 段美娟 袁定阳 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期11-18,共8页
【目的】为鉴定水稻AFP1在非生物胁迫响应中的作用,创制非生物胁迫抗性的水稻新材料。【方法】以优异籼稻恢复系华占为转化受体,利用CRISPR/Cas9技术创制afp1突变体,并对afp1突变体的耐逆性进行初步鉴定。【结果】AFP1靶点1和靶点2的编... 【目的】为鉴定水稻AFP1在非生物胁迫响应中的作用,创制非生物胁迫抗性的水稻新材料。【方法】以优异籼稻恢复系华占为转化受体,利用CRISPR/Cas9技术创制afp1突变体,并对afp1突变体的耐逆性进行初步鉴定。【结果】AFP1靶点1和靶点2的编辑效率分别为66.67%和75.00%。所有突变株系中,突变类型仅有插入和缺失突变,90%突变株系的突变长度为小片段突变(<5 bp)。获得了6种无转基因成分的afp1纯合突变体。正常条件下,afp1突变体株高和结实率降低,有效分蘖增加,穗长显著升高,单株产量在-4.06%和11.75%之间变化。和野生型相比,afp1突变体的ABA敏感性和叶片水分散失率降低,耐干旱、热和渗透胁迫能力提高。【结论】编辑AFP1基因可提高水稻多种非生物胁迫抗性。 展开更多
关键词 水稻 crispr/cas9基因编辑技术 AFP1 耐逆性
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