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光谱及分子探针方法研究番茄Metacaspase蛋白与Ca^(2+)的相互作用
被引量：
1
1
作者
温帅
马营轩
+3 位作者
吴坤胜
崔金田
罗云波
曲桂芹
《光谱学与光谱分析》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期1643-1648,共6页
Metacaspases(MCPs)是发现于植物、真菌、原生动物体内的一种结构上类似多细胞动物Caspase的半胱氨酸蛋白酶家族,其大多数成员的激活依赖于钙离子,但钙离子如何影响MCPs的激活机制有待深入研究。借助圆二色谱技术、Terbium/Stains-all...
Metacaspases(MCPs)是发现于植物、真菌、原生动物体内的一种结构上类似多细胞动物Caspase的半胱氨酸蛋白酶家族,其大多数成员的激活依赖于钙离子,但钙离子如何影响MCPs的激活机制有待深入研究。借助圆二色谱技术、Terbium/Stains-all探针技术以及荧光光谱技术,以番茄Ⅱ型Metacaspase(LeMCA1)重要位点突变的三种体外原核表达重组蛋白,包括LeMCA1C139A(活性催化位点突变体)、LeMCA1K223G(自降解位点突变体)以及预测的Ca2+结合位点突变体LeMCA1D116A/D117A为研究材料,探究了MCPs与Ca2+相互作用机制。实验结果表明,Ca2+与LeMCA1之间既不存在强烈的结合作用,也不影响蛋白的二级结构,但Ca2+通过相互作用改变LeMCA1的三级结构来实现对LeMCA1的酶原激活过程。其中,LeMCA1蛋白的Asp-116,Asp-117氨基酸残基作为预测的与Ca2+作用的重要位点,其缺失将导致蛋白与Ca2+相互作用能力下降。利用圆二色谱、荧光光谱结合离子探针技术研究了典型茄科植物番茄中Ca2+与LeMCA1的相互作用特性,结合之前同源序列比对、位点突变结果确定了LeMCA1中的Asp-116,Asp-117氨基酸残基影响着Ca2+与蛋白质的相互作用。该结果对后续LeMCA1的生化特性及晶体结构的解析研究有着重要的参考价值。
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关键词
番茄Meta
ca
spase
ca
2
+
圆二色谱
荧光光谱
ca
2
+
探针
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职称材料
新型钙荧光探针在H_2O_2对HL-60胞浆钙影响研究中的应用
被引量：
1
2
作者
张小玲
阎宏涛
《分析科学学报》
CAS
CSCD
2005年第5期496-499,共4页
采用H2O2、黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶、H2O2/抗坏血酸/Fe2+(或H2O2/Fe2+)、H2O2和辣根过氧化酶(HRP)等不同活性氧产生体系,对自行合成的胞浆特异性钙荧光探针STDIn的活性氧耐受性进行了考察。以STDIn-AM为探针标记HL-60细胞,激光共聚焦技术...
采用H2O2、黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶、H2O2/抗坏血酸/Fe2+(或H2O2/Fe2+)、H2O2和辣根过氧化酶(HRP)等不同活性氧产生体系,对自行合成的胞浆特异性钙荧光探针STDIn的活性氧耐受性进行了考察。以STDIn-AM为探针标记HL-60细胞,激光共聚焦技术检测单细胞内Ca2+-STDIn荧光强度的变化;探讨了不同浓度的H2O2对胞内Ca2+浓度变化的影响,从膜结构和生物信号传导的角度研究了氧自由基对培养细胞的生物效应。
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关键词
新型
ca
2
+荧光
探针
激光共聚焦显微镜
ca
2
+
活性氧
HL-60细胞
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职称材料
基于液滴技术的烟草细胞免疫应激信号的检测
3
作者
苍小鑫
赵小明
+4 位作者
钟润涛
王文霞
尹恒
朱靖博
丁燕
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期759-766,共8页
基于液滴微流控芯片技术,用壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)处理悬浮培养的烟草细胞(BY-2cell),对烟草细胞产生的免疫应激信号分子(H_2O_2和Ca^(2+))进行荧光检测。用50μg/mL的壳寡糖水溶液分别刺激装载过氧化氢和钙离子荧光探...
基于液滴微流控芯片技术,用壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)处理悬浮培养的烟草细胞(BY-2cell),对烟草细胞产生的免疫应激信号分子(H_2O_2和Ca^(2+))进行荧光检测。用50μg/mL的壳寡糖水溶液分别刺激装载过氧化氢和钙离子荧光探针的烟草细胞,在荧光显微镜下观察到烟草细胞产生的荧光;以液滴微流控芯片为实验平台,研究发现水相流速为100μL/h,油相流速为300μL/h时,液滴尺寸为300μm,适合烟草细胞的包裹,在该条件下将COS与荧光探针孵育后的细胞包裹在液滴中,在荧光显微镜下观察到液滴中的荧光;后用荧光酶标仪检测96孔板和液滴承载的细胞的荧光强度,结果显示1h内两者的变化趋势一致。试验为液滴微流控芯片在植物免疫诱导剂和生物农药方面的研究提供了参考。
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关键词
液滴微流控芯片
壳寡糖
烟草细胞
H
2
O
2
荧光
探针
ca
2
+荧光
探针
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职称材料
题名
光谱及分子探针方法研究番茄Metacaspase蛋白与Ca^(2+)的相互作用
被引量：
1
1
作者
温帅
马营轩
吴坤胜
崔金田
罗云波
曲桂芹
机构
中国农业大学食品科学与营养工程学院
出处
《光谱学与光谱分析》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期1643-1648,共6页
基金
国家(973计划)项目(2013CB127104)
现代农业产业技术研究体系项目(ycytx-30-zy-05)资助
文摘
Metacaspases(MCPs)是发现于植物、真菌、原生动物体内的一种结构上类似多细胞动物Caspase的半胱氨酸蛋白酶家族,其大多数成员的激活依赖于钙离子,但钙离子如何影响MCPs的激活机制有待深入研究。借助圆二色谱技术、Terbium/Stains-all探针技术以及荧光光谱技术,以番茄Ⅱ型Metacaspase(LeMCA1)重要位点突变的三种体外原核表达重组蛋白,包括LeMCA1C139A(活性催化位点突变体)、LeMCA1K223G(自降解位点突变体)以及预测的Ca2+结合位点突变体LeMCA1D116A/D117A为研究材料,探究了MCPs与Ca2+相互作用机制。实验结果表明,Ca2+与LeMCA1之间既不存在强烈的结合作用,也不影响蛋白的二级结构,但Ca2+通过相互作用改变LeMCA1的三级结构来实现对LeMCA1的酶原激活过程。其中,LeMCA1蛋白的Asp-116,Asp-117氨基酸残基作为预测的与Ca2+作用的重要位点,其缺失将导致蛋白与Ca2+相互作用能力下降。利用圆二色谱、荧光光谱结合离子探针技术研究了典型茄科植物番茄中Ca2+与LeMCA1的相互作用特性,结合之前同源序列比对、位点突变结果确定了LeMCA1中的Asp-116,Asp-117氨基酸残基影响着Ca2+与蛋白质的相互作用。该结果对后续LeMCA1的生化特性及晶体结构的解析研究有着重要的参考价值。
关键词
番茄Meta
ca
spase
ca
2
+
圆二色谱
荧光光谱
ca
2
+
探针
Keywords
Tomato Meta
ca
spase
ca
2
＋
CD Spectroscopy
Fluorescence
ca
2
＋probe
分类号
O657.3 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
新型钙荧光探针在H_2O_2对HL-60胞浆钙影响研究中的应用
被引量：
1
2
作者
张小玲
阎宏涛
机构
西北大学化学系
出处
《分析科学学报》
CAS
CSCD
2005年第5期496-499,共4页
基金
陕西省自然科学基金(No.2003B09)
文摘
采用H2O2、黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶、H2O2/抗坏血酸/Fe2+(或H2O2/Fe2+)、H2O2和辣根过氧化酶(HRP)等不同活性氧产生体系,对自行合成的胞浆特异性钙荧光探针STDIn的活性氧耐受性进行了考察。以STDIn-AM为探针标记HL-60细胞,激光共聚焦技术检测单细胞内Ca2+-STDIn荧光强度的变化;探讨了不同浓度的H2O2对胞内Ca2+浓度变化的影响,从膜结构和生物信号传导的角度研究了氧自由基对培养细胞的生物效应。
关键词
新型
ca
2
+荧光
探针
激光共聚焦显微镜
ca
2
+
活性氧
HL-60细胞
Keywords
Fluorescent
ca
^
2
＋ probe
Laser s
ca
nning confo
ca
l microscopy
Reactive oxygen
HL-60 cell
分类号
P657.39 [天文地球—地质学]
O614.231 [理学—无机化学]
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职称材料
题名
基于液滴技术的烟草细胞免疫应激信号的检测
3
作者
苍小鑫
赵小明
钟润涛
王文霞
尹恒
朱靖博
丁燕
机构
中国科学院大连化学物理研究所
大连工业大学食品学院
大连海事大学环境科学与工程学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期759-766,共8页
基金
国家自然科学基金(31370391)
中国科学院科技服务网络计划(STS计划)(KFJ-SW-STS-143)~~
文摘
基于液滴微流控芯片技术,用壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)处理悬浮培养的烟草细胞(BY-2cell),对烟草细胞产生的免疫应激信号分子(H_2O_2和Ca^(2+))进行荧光检测。用50μg/mL的壳寡糖水溶液分别刺激装载过氧化氢和钙离子荧光探针的烟草细胞,在荧光显微镜下观察到烟草细胞产生的荧光;以液滴微流控芯片为实验平台,研究发现水相流速为100μL/h,油相流速为300μL/h时,液滴尺寸为300μm,适合烟草细胞的包裹,在该条件下将COS与荧光探针孵育后的细胞包裹在液滴中,在荧光显微镜下观察到液滴中的荧光;后用荧光酶标仪检测96孔板和液滴承载的细胞的荧光强度,结果显示1h内两者的变化趋势一致。试验为液滴微流控芯片在植物免疫诱导剂和生物农药方面的研究提供了参考。
关键词
液滴微流控芯片
壳寡糖
烟草细胞
H
2
O
2
荧光
探针
ca
2
+荧光
探针
Keywords
Droplet microfluidic
Chitosan oligosaccharide
BY-
2
cell
H
2
DCF-DA
Fluo-3AM
分类号
S432.2 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
光谱及分子探针方法研究番茄Metacaspase蛋白与Ca^(2+)的相互作用
温帅
马营轩
吴坤胜
崔金田
罗云波
曲桂芹
《光谱学与光谱分析》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
下载PDF
职称材料
2
新型钙荧光探针在H_2O_2对HL-60胞浆钙影响研究中的应用
张小玲
阎宏涛
《分析科学学报》
CAS
CSCD
2005
1
下载PDF
职称材料
3
基于液滴技术的烟草细胞免疫应激信号的检测
苍小鑫
赵小明
钟润涛
王文霞
尹恒
朱靖博
丁燕
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
下载PDF
职称材料
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