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猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 张宝戈 黄雅琴 +2 位作者 蔡金双 朱晨光 李玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1170-1178,共9页
旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆... 旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆抗体作为检测抗体,经条件优化后建立了一种检测PCV3抗体的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测50份临床阴性血清,计算阻断率(PI)的临界值,以此来确定该方法的判定标准:当PI≤28.30%时,判定结果为阴性;当PI≥35.05%时,判定结果为阳性;当28.30%<PI<35.05%时,判定为可疑,重复一次试验后如果结果仍为可疑,则判定为阳性。特异性试验表明该方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以及猪瘟病毒(CSFV)的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验表明其检测效价可达到1:128;重复性试验表明批内与批间的变异系数均小于10%;符合性检验表明该方法与PCV检测金标准免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)比对的Kappa值达0.9,具有高度的一致性。综上所述,本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率,可用于后期进行PCV3抗体的检测,为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 cap重组蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA
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猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立
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作者 严杰聪 王帅勇 +11 位作者 王曼茱 王娟 荣新利 邢燕茹 虞凌雪 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期79-84,共6页
Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同... Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经测序鉴定成功获得重组质粒pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达,通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达,同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合,通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法,进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 cap蛋白 同源重组 表达纯化 ELISA
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昆虫杆状病毒表达的猪圆环病毒2d型Cap蛋白-VLP对仔猪的免疫保护效果
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作者 王亚文 张亚楠 +4 位作者 袁晨 任静 苏恺 杨柳 宋勤叶 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期76-84,共9页
猪圆环病毒2d基因型(Porcine circovirus type 2d,PCV2d)为猪场当前流行的PCV2优势基因型,为了研究针对PCV2d基因型的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗,提高猪圆环病毒病的防控效果。本研究利用杆状病毒表达系统表达了能够自组... 猪圆环病毒2d基因型(Porcine circovirus type 2d,PCV2d)为猪场当前流行的PCV2优势基因型,为了研究针对PCV2d基因型的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗,提高猪圆环病毒病的防控效果。本研究利用杆状病毒表达系统表达了能够自组装为VLP的PCV2d-Cap蛋白,然后将9头21日龄健康仔猪随机分为VLP组、攻毒对照组和空白对照组(n=3)。VLP组的每头仔猪经颈部肌肉注射400μg Cap蛋白-佐剂复合物(PCV2d-VLP),攻毒组注射等体积的PBS与佐剂混合物,空白组注射等体积的PBS。共接种2次,每次间隔14 d。于第2次免疫后21 d,VLP组和攻毒对照组的仔猪通过鼻腔感染PCV2 HBDX-2018株(106TCID50/头),评价PCV2d-VLP诱导的免疫效果。结果表明PCV2d-VLP能够诱导仔猪产生高水平的特异性IgG抗体和中和抗体,刺激IFN-γ水平升高,引起外周血淋巴细胞增殖能力增强,降低病毒经鼻腔和直肠的排毒率及病毒血症阳性率,减轻腹股沟淋巴结和脾脏的病理损伤,降低组织中的病毒载量。上述研究表明,应用杆状病毒表达的PCV2d-Cap蛋白能自组装为VLP,并能诱导仔猪产生良好的免疫保护效应,具有进一步开发为PCV2d-VLP疫苗的潜力。 展开更多
关键词 PCV2d cap蛋白 病毒样颗粒 杆状病毒 免疫效果
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茶树春梢萌发早晚关联基因CsAL1的CAPS分子标记开发
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作者 黄梦迪 陈兰 +5 位作者 苏芹 胡锦瑜 刘桂芝 谭月萍 刘硕谦 田娜 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期207-218,共12页
茶树(Camelliasinensis)作为一种叶用型经济植物,春梢萌发时间是关系茶叶经济价值的重要生物学性状。因此,选育茶树早生品种,对提升茶叶品质和经济效益具有重要的现实意义。以铁观音为参考基因组,通过全基因组关联分析,筛选到一个与茶... 茶树(Camelliasinensis)作为一种叶用型经济植物,春梢萌发时间是关系茶叶经济价值的重要生物学性状。因此,选育茶树早生品种,对提升茶叶品质和经济效益具有重要的现实意义。以铁观音为参考基因组,通过全基因组关联分析,筛选到一个与茶树春梢萌发早晚高度相关的基因CsAL1(Auxilin-like 1,TGY040711)。运用SNP calling获得CsAL1各样本的SNPs,将SNPs与其春梢萌发表型进行关联分析,获得与早生性状显著相关的SNP位点。分析各SNPs的酶切位点,选择合适位点开发茶树早生性状相关CAPS分子标记。利用标记对12份茶树材料基因组DNA进行PCR扩增和酶切检测,随后在72份茶树材料中进一步验证,以期借助CAPS分子标记技术为探究CsAL1中单碱基位点突变与茶树早生性状的联系提供参考,为茶树早生品种的选育提供理论支撑。 展开更多
关键词 茶树 SNP capS分子标记 早生 分子标记育种
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猪圆环病毒3型Cap重组蛋白的低温诱导表达研究
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作者 潘向英 祝羊 +8 位作者 曾智勇 汤德元 梁海英 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期73-77,共5页
为了提高猪圆环病毒3型(PCV-3)Cap重组蛋白的可溶性表达量,试验采用PCR方法扩增PCV-3 Cap基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-32a(+)-Cap,再将重组原核表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,分... 为了提高猪圆环病毒3型(PCV-3)Cap重组蛋白的可溶性表达量,试验采用PCR方法扩增PCV-3 Cap基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-32a(+)-Cap,再将重组原核表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,分析不同浓度IPTG和温度的诱导表达效果,并通过Western-blot鉴定重组蛋白。结果表明:PCR扩增出大小为645 bp的Cap基因片段,与预期结果一致;构建的重组原核表达载体pET32a(+)-Cap可在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,重组蛋白分子量约为43.1 ku;不同浓度IPTG诱导表达可溶性蛋白的表达量不同,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时重组蛋白可溶性表达量较高;37℃诱导时重组蛋白主要在沉淀中表达,而20℃诱导时重组蛋白主要在上清液中表达;表达的重组蛋白能与带His标签的抗体特异性结合。说明试验成功构建了重组蛋白,低温诱导可获得了更多的可溶性蛋白。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 cap蛋白 低温诱导 原核表达 可溶性蛋白
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周期性张应变调控的CAPZA1在内皮祖细胞归巢中的机制研究
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作者 邹敏文 霍云龙 +1 位作者 齐颖新 韩悦 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期364-364,共1页
目的内皮祖细胞(EPCs)在损伤和缺血组织的修复中起重要作用。前期研究表明,黏附在损伤区域的EPCs会受到生理性周期性张应变的作用,通过上调长链酯酰辅酶A合成酶1(Acsl1)促进线粒体脂肪酸代谢,进而促进EPCs的归巢能力。然而,Acsl1如何感... 目的内皮祖细胞(EPCs)在损伤和缺血组织的修复中起重要作用。前期研究表明,黏附在损伤区域的EPCs会受到生理性周期性张应变的作用,通过上调长链酯酰辅酶A合成酶1(Acsl1)促进线粒体脂肪酸代谢,进而促进EPCs的归巢能力。然而,Acsl1如何感受力学作用促进EPCs归巢的机制尚不明确。方法应用Flexcell张应变加载系统,对EPCs施加10%幅度,1.25 Hz频率的生理性周期性张应变24 h。应用原子力显微镜检测静止组和牵拉组的细胞硬度,利用高内涵细胞成像分析系统和结构照明显微镜检测F-actin的变化,再通过Co IP-MS/MS寻找Acsl1的关键互作蛋白并验证。结果与静态组相比,张应变组EPCs的硬度显著上升。100倍油镜下张应变组EPCs的F-actin微丝更致密且变长,提示张应变促进了EPCs的骨架重塑。过表达Acsl1后,Co IP-MS/MS检测到潜在的互作蛋白,将其中与细胞骨架相关的蛋白分别与Acsl1进行分子对接,预测结果提示,F-actin的加帽蛋白CAPZA1与Acsl1互作的可能性最大,且Co IP验证二者确实存在互作。结论CAPZA1主要抑制F-actin的聚合,周期性张应变可能通过上调Acsl1水平,从而竞争性结合与F-actin互作的CAPZA1,进而促进F-actin的聚合,导致细胞骨架重塑,最终促进EPCs的归巢。 展开更多
关键词 周期性张应变 油镜 内皮祖细胞 显微镜检测 归巢 脂肪酸代谢 力学作用 cap
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猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立
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作者 欧云文 潘琴 +5 位作者 汪洋 代军飞 任绍科 张洋 翟佳佳 张杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3056-3066,共11页
【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段... 【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET30a-PCV3-Cap。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,获得具有良好抗原性的重组Cap蛋白。基于纯化的重组Cap蛋白建立间接ELISA方法,确定最佳抗原包被浓度、待检血清最佳稀释比例、酶标抗体稀释比例和阴阳性临界值,对间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性、相关性和符合率进行分析,并对2018-2022年采自川东北地区猪场的351份临床猪血清进行检测,分析该区域PCV3流行情况。【结果】试验成功构建pET30a-PCV3-Cap重组表达载体,实现重组Cap蛋白(1-197位氨基酸)的原核截短表达,蛋白大小约为26 ku,可与PCV3阳性猪血清发生特异性反应;确定最佳抗原包被浓度为1 ng/μL,待检血清最佳稀释比例为1∶100,酶标抗体稀释比例为1∶60000,阴阳性临界值D_(450 nm)为0.684;建立的间接ELISA方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪细小病毒1型(PPV1)阳性猪血清均不发生交叉反应,敏感度达1∶1600,批内变异系数和批间变异系数均<10%,与病毒中和试验(VNT)结果呈正相关,与Western blotting方法的阳性符合率为95.8%;2018-2022年川东北地区的351份猪血清样品阳性率为7.12%。【结论】本研究成功截短表达了PCV3四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PCV3间接ELISA方法,为PCV3的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) cap蛋白 截短表达 ELISA
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血凝试验和反向间接血凝试验定量检测PCV2 Cap抗原的研究 被引量:2
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作者 李晶梅 谢红玲 +8 位作者 薛霜 李文静 黄涛 王焕君 刘项羽 张飞雁 朱薇 李婷婷 石宝兰 《中国兽药杂志》 2024年第1期1-5,共5页
为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血... 为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血凝效价(RIHA效价)。结果显示,用猪、鸡、绵羊红细胞在不同稀释液条件下测得的同一批次PCV2Cap抗原凝集效价为3log2~9log2,说明PCV2Cap抗原可凝集猪、鸡、绵羊红细胞,但红细胞不同、稀释液不同,测得的PCV2Cap抗原凝集效价也不同。使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,测得的PCV2Cap抗原RIHA效价为14log2,且纯化后和未纯化的PCV2Cap抗原的RIHA效价均与ELISA定量检测结果有平行关系;空杆状病毒、CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、TCEV的RIHA效价均小于1log2。说明反向间接血凝方法可定量检测重组杆状病毒表达的PCV2Cap抗原,该方法敏感、特异,适用于疫苗生产中的PCV2Cap抗原的定量检测。 展开更多
关键词 PCV2 cap抗原 反向间接血凝 血凝 红细胞
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鸽圆环病毒Cap基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用
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作者 韩晓语 杨俊杰 +4 位作者 赵洪哲 郭昊 王亚新 温永俊 王凤雪 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期95-101,共7页
为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件... 为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件下,所建立的PiCV荧光定量PCR方法在1×10^(2)~1×10^(7) copies/μL标准品范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数为0.9846;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1×10^(2) copies/μL标准品,是常规PCR检测方法的100倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于2%;所建立PiCV荧光定量PCR方法对临床病死鸽肝脏样品检测结果显示,PiCV阳性率达75.7%,高于常规PCR方法的检测阳性率(54.1%),说明该方法具有良好的适用性。可应用于对PiCV的快速检测,为PiCV的及时防控提供有力技术支持。 展开更多
关键词 cap基因 鸽圆环病毒 实时定量PCR
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猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备
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作者 孙荣航 容芳 +2 位作者 陈桂娥 刘郁夫 陈瑞爱 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第14期61-67,73,126,共9页
为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋... 为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋白,利用His标签对表达的重组蛋白进行纯化;将纯化后的重组蛋白于皮下免疫Balb/c小鼠,免疫结束后测定免疫小鼠血清效价,当小鼠血清抗体效价达到1∶100000时进行细胞融合;采用有限稀释法进行亚克隆,筛选能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性杂交瘤细胞株,鉴定杂交瘤细胞株抗体亚类,并选择1株抗体效价最高的细胞株再次注射到小鼠腹腔中(5×10^(5)个/只),取腹水采用亲和层析法对单克隆抗体进行纯化;采用间接ELISA方法测定单克隆抗体效价并检测其特异性,分别采用Western-blot和间接免疫荧光试验检测单克隆抗体的反应性。结果表明:PCR扩增得到大小为708 bp的Cap基因,经双酶切与测序验证后,成功构建重组表达质粒pET28a-Cap;重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)经诱导后表达的重组蛋白可与His标签抗体发生特异性反应,纯化后的重组蛋白在预期位置(31.7 ku)出现清晰的单一条带;共筛选出8株能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性单克隆细胞株(1E5、2A9、3C6、4B3、5F7、6D11、7A2、8G1株),抗体亚类鉴定均为IgG1亚类。其中7A2株抗体效价最高,用于单克隆抗体的制备;间接ELISA方法证实7A2株单克隆抗体仅与PCV-2 Cap蛋白发生反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)不发生反应;Western-blot和间接免疫荧光试验均证实PCV-2 Cap蛋白可被7A2株单克隆抗体特异性识别。说明本试验成功制备出具有高纯度、强特异性、良好反应性的PCV-2 Cap蛋白单克隆抗体。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV-2) 单克隆抗体 cap蛋白 细胞融合 亚克隆
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超声脂肪指数(UDFF)对比MRI-PDFF、CAP诊断非酒精性脂肪肝的初步研究
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作者 周林梦 解翔 +2 位作者 姜凡 李瑞莹 蒋卉 《临床医学进展》 2024年第8期20-26,共7页
目的:探讨超声脂肪指数(UDFF)对比MRI质子密度脂肪分数(MRI-PDFF)、受控衰减参数(CAP)对非酒精性脂肪肝的脂肪含量测定的价值。方法:本研究选取126名受试者,其中46名进行UDFF和MRI-PDFF的测定,80名进行UDFF和CAP的测定。分析UDFF和MRI-P... 目的:探讨超声脂肪指数(UDFF)对比MRI质子密度脂肪分数(MRI-PDFF)、受控衰减参数(CAP)对非酒精性脂肪肝的脂肪含量测定的价值。方法:本研究选取126名受试者,其中46名进行UDFF和MRI-PDFF的测定,80名进行UDFF和CAP的测定。分析UDFF和MRI-PDFF,UDFF和CAP的一致性及相关性。结果:Bland-Altman分析显示肝脏S8段的UDFF值和MRI-PDFF值、UDFF值和CAP值在整体上具有良好的一致性。Spearman相关性分析显示肝脏S8段的UDFF值和MRI-PDFF值之间相关性较高(r = 0.721, P < 0.001),UDFF值与CAP值之间相关性较高(r = 0.812, P < 0.001)。结论:使用UDFF测量肝脏脂肪变性与MRI-PDFF和CAP测量结果一致性强,表明UDFF在非酒精性脂肪肝的脂肪定量测定中具有较高的价值。 展开更多
关键词 超声脂肪指数(UDFF) 核磁共振质子密度脂肪分数(PDFF) 受控衰减参数(cap) 定量检测 非酒精性脂肪肝
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猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达与鉴定
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作者 朱钰英 高翠翠 +6 位作者 唐青海 刘婷 赵婷芳 曾沛暄 赵铖 胡意 李小申 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期35-38,共4页
[目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋... [目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白鉴定。[结果]PCV3 Cap蛋白在p ET28a原核表达系统中无表达;Rosetta-p Cold-PCV3-Cap在诱导温度为15℃、IPTG浓度为1.0 mmo L/L、诱导4 h的条件下,能够表达分子量约为25 k Da的Cap蛋白,且为可溶性表达。[结论]试验成功制备了PCV3 Cap蛋白,为制备PCV3疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) cap蛋白 原核表达 鉴定
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CAPS在膀胱癌患者尿液中的表达及意义
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作者 薛菲 李婷淼 +1 位作者 岳斯琦 何成彦 《中国实验诊断学》 2024年第10期1162-1164,共3页
膀胱癌具有较高的发病率和死亡率[1]。目前临床上膀胱癌最可靠的诊断方法是膀胱镜检查,但这种侵入性检查容易造成微小肿瘤病灶的漏诊[2]。随着液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术的广泛应用,寻找诊断膀胱癌的蛋白标志物有了可能。本实验采... 膀胱癌具有较高的发病率和死亡率[1]。目前临床上膀胱癌最可靠的诊断方法是膀胱镜检查,但这种侵入性检查容易造成微小肿瘤病灶的漏诊[2]。随着液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术的广泛应用,寻找诊断膀胱癌的蛋白标志物有了可能。本实验采用LC-MS/MS技术,研究钙磷蛋白(Calcyphosine,CAPS)在膀胱癌患者尿液中的表达水平,旨在为膀胱癌筛查提供一种新的方法。 展开更多
关键词 膀胱镜检查 蛋白标志物 肿瘤病灶 膀胱癌患者 侵入性检查 capS 表达及意义 尿液
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Integrated hazard assessment of rockfall incidents in the Cap Aokas Cliff Region
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作者 Zohra LADJEL Farid ZAHRI +3 位作者 Riheb HADJI Younes HAMED Karim ZIGHMI Kaddour BENMARCE 《Journal of Mountain Science》 SCIE CSCD 2024年第6期1916-1929,共14页
Rock fall accidents in mountainous cliff areas have significant consequences for human life and transportation.This study aimed to evaluate the rockfall hazard in the Cap Aokas cliff region located along the northeast... Rock fall accidents in mountainous cliff areas have significant consequences for human life and transportation.This study aimed to evaluate the rockfall hazard in the Cap Aokas cliff region located along the northeast coast of Algeria by identifying the key factors contributing to rockfall occurrence.We employed a combination of kinematic analysis,Matterocking method,and 3D trajectory simulations to determine zones that are susceptible to rockfall mobilization.By using a probabilistic and structural approach in conjunction with photogrammetry,we identified the controlling factors.The kinematic analysis revealed the presence of five discontinuity families,which indicated both plane and wedge failure modes.The 3D trajectory simulations demonstrated that the falling blocks followed the stream direction.We then validated the susceptibility maps generated from the analysis using aerial photos and historical rockfall events.The findings of this study enhance our understanding of rockfall phenomena and provide valuable insights for the development of effective strategies to mitigate rockfall hazards. 展开更多
关键词 Trajectory simulations Probabilistic analysis Structural approach Rockfall hazard cap Aokas cliff
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杆状病毒表达系统中NLS序列对鸭圆环病毒Cap基因表达的影响及其免疫原性研究
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作者 栾明朱 马跃宇 +4 位作者 刘立 孙莉 李明 费东亮 马鸣潇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期66-72,共7页
为了研究核定位信号肽(Nuclear localization signal,NLS)序列对鸭圆环病毒(duck Circovirus,DuCV)Cap蛋白表达的影响,并探究不同免疫策略下重组蛋白的免疫原性,试验将去除和未去除NLS序列的DuCV Cap基因分别克隆至杆状病毒载体pFastBa... 为了研究核定位信号肽(Nuclear localization signal,NLS)序列对鸭圆环病毒(duck Circovirus,DuCV)Cap蛋白表达的影响,并探究不同免疫策略下重组蛋白的免疫原性,试验将去除和未去除NLS序列的DuCV Cap基因分别克隆至杆状病毒载体pFastBacⅠ中,通过杆状病毒表达系统进行表达,分析NLS序列对Cap蛋白表达的影响。采用不同的免疫策略,分别以原核表达系统构建的重组蛋白rCap(rCap组)、杆状病毒表达系统构建的rvAc-Cap(rvAc-Cap组)及rCap与rvAc-Cap联合(Prime-Boost组)作为免疫源免疫Balb/c小鼠,并设置PBS对照组,定期采血,检测DuCV IgG抗体水平、淋巴细胞增殖指数(SI)和γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)等细胞因子水平,评价其免疫效果。结果表明:利用杆状病毒表达系统成功表达出重组杆状病毒rvAc-Cap和rvAc-NLS-Cap,且去除NLS序列的Cap基因表达水平更高;小鼠免疫重组蛋白rCap后,重组蛋白rCap与重组杆状病毒rvAc-Cap均能够刺激小鼠产生特异性IgG抗体,三免后Prime-Boost组的IgG抗体水平最高,而与其他免疫组差异不显著(P>0.05);三免后各免疫组淋巴细胞增殖指数显著高于PBS对照组,差异显著(P<0.05);各免疫组IFN-γ、IL-2和IL-4水平与PBS对照组比较差异显著(P<0.05),且Prime-Boost组水平最高。说明在杆状病毒表达系统中去除NLS序列可以提高Cap基因的表达;重组杆状病毒rvAc-Cap能够活化小鼠的免疫系统,刺激小鼠机体产生体液免疫与细胞免疫,而Prime-Boost免疫策略有效提高了免疫效果。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 cap蛋白 核定位信号肽 杆状病毒表达系统 免疫原性
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Adrenaline in pulp capping treatment of reversible pulpitis
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作者 Si-Yun Yang Jin-Zhu Wang +1 位作者 Hao Fan Min Chen 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2024年第22期5024-5031,共8页
BACKGROUND The role of epinephrine in the treatment of pulp capping in patients with reversible pulpitis is not clear.AIM To explore the role of epinephrine in the treatment of pulp capping in patients with reversible... BACKGROUND The role of epinephrine in the treatment of pulp capping in patients with reversible pulpitis is not clear.AIM To explore the role of epinephrine in the treatment of pulp capping in patients with reversible pulpitis.METHODS A total of 100 patients with reversible pulpitis who were treated in Anhui Jieshou People's Hospital from January 2020 to December 2021 were included in the study.They were categorized into an observation group(n=50;treatment with adrenaline)and a control group(n=50;treatment with zinc oxide eugenol paste).The 24-h postoperative pain,regression time of gingival congestion and redness,clinical efficacy,and incidence of adverse reactions were compared between the groups.Patients were further categorized into the ineffective and effective treatment groups based on clinical efficacy.Logistic multiple regression analysis explored factors affecting the efficacy of pulp capping treatment.RESULTS A significant difference in 24-h postoperative pain was observed between the groups(P<0.05),with a higher proportion of grade I pain noted in the observation group than in the control group(P<0.01).The regression time of gingival congestion and swelling was lower in the observation group(2.61±1.44 d and 2.73±1.36 d,respectively)than in the control group(3.85±1.47 d and 4.28±1.61 d,respectively)(P<0.05).The 2-wk postoperative total effective rate was lower in the control group(80.00%)than in the observation group(94.00%)(P<0.05).The incidence of adverse reactions was not significantly different between the control(14.00%)and observation(12.00%)groups(P>0.05).The proportion of adrenaline usage was lower(P<0.05)and that of anaerobic digestion by Streptococcus and Fusobacterium nucleatum was higher in the ineffective treatment group than in the effective treatment group(P<0.05).Logistic multiple regression analysis revealed adrenaline as a protective factor(P<0.05)and anaerobic digestion by Streptococcus and F.nucleatum as risk factors for pulp capping in reversible pulpitis(P<0.05).CONCLUSION Adrenaline demonstrated therapeutic efficacy in pulp capping treatment for reversible pulpitis,reducing pain and improving clinical symptoms safely.It is a protective factor for pulp capping,whereas Streptococcus and F.nucleatum are risk factors.Targeted measures can be implemented to improve clinical efficacy. 展开更多
关键词 ADRENALINE Reversible pulpitis Pulp capping EFFICACY SAFETY
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Evaluation of Hepatic Fibrosis and Hepatic Steatosis by Pulse Elastography (FIBROSCAN/CAP) in Asymptomatic Patients about 170 Cases at the Donka CHU National Hospital in Conakry
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作者 Mamadou Sarifou Diallo Oumarou Youssouf +8 位作者 Abdoulatif Yaogo Djenabou Diallo Kadiatou Diallo Thierno Amadou Wann Ahmed Tidiane Diallo Mamadou Lamine Yaya Bah Mamdou Diakhaby Mamadou Aliou Kanté Djibril Sylla 《Open Journal of Gastroenterology》 CAS 2024年第4期125-138,共14页
Introduction: Fibroscan is a recent, non-invasive and non-irradiating diagnostic method. It is based on the principle of ultrasound, which enables liver tissue elasticity to be quantified using a probe, and fibrosis t... Introduction: Fibroscan is a recent, non-invasive and non-irradiating diagnostic method. It is based on the principle of ultrasound, which enables liver tissue elasticity to be quantified using a probe, and fibrosis to be assessed. Fibroscan measures both elasticity correlated with hepatic fibrosis and CAP correlated with steatosis. The aim of this study was to evaluate hepatic fibrosis and steatosis using pulse elastometry (Fibroscan/CAP). Methods: This was a descriptive and analytical cross-sectional study in which 170 patients were included. It was conducted from October 1 2021 to December 31 2023, i.e. 27 months, in an outpatient clinic in the hepato-gastroenterology department of the Donka national hospital of the CHU Conakry. Results: Of the 170 patients identified, 87 were male (51%) and 83 female (49%), giving a M/F sex ratio of 1.04. The average age of our patients was 40. The 30 - 50 age group was the most affected, with a frequency of 58.23% (n = 99), followed by the 50 age group with a frequency of 29.41% (n = 50). Hepatomegaly, steatotic liver on ultrasonography, transaminase elevation and obesity were the main indications, respectively: (21.76%), (17.65%), (14.71%), and (13.53%). The examinations were requested by hepatogastroenterologists (47.06%), diabetologists (35.88%) and general practitioners (29%). Of the 170 patients, 100 patients (58.82%) had no significant fibrosis F0F1, 39 (22.94%) had moderate fibrosis F2, 20 patients (11.76%) had severe fibrosis F3 and 11 patients (6.47%) had fibrosis F4. Hepatic steatosis: 62 patients (36.47%) had no S0 steatosis;29.41% had S1 steatosis, 20% had S2 steatosis and 24 patients (14.11%) had S3 steatosis. Abdominal ultrasound revealed a normal liver in 67.05% of patients, hepatic steatosis in 29.41% and non-decompensated cirrhosis in 6 cases. Thus, 108 patients had the parameters required to calculate the Fatty Liver Index (FLI), steatosis was present in 20% of our patients, while 29.41% had an undetermined status and 24 14.11% had a normal FLI. Conclusion: Identifying subjects at risk of metabolic steatopathy, diagnosing and managing these patients is a public health issue and one of the future challenges of hepato-gastroenterology. Fibroscan is an increasingly popular screening tool for hepatic fibrosis and steatosis. The fight against obesity must be a priority. 展开更多
关键词 Cirrhosis Fibrosis Fibroscan/cap Non-Alcoholic Hepatic Steatosis STEATOSIS CHU Conakry
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Transparent cap adjusted the stent placed for stenosis after endoscopic injection of esophageal varices:A case report
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作者 Fu-Long Zhang Jing Xu +8 位作者 Yuan-Dong Zhu Qian-Neng Wu Yan Shi Lei Fang Dan Zhou Hai Wang Chao-JunHuang Chun-Hua Zhou Qun Zhu 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2024年第15期2614-2620,共7页
BACKGROUND The stent embedded in the esophageal mucosa is one of the complications after stenting for esophageal stricture.We present a case of stent adjustment with the aid of a transparent cap after endoscopic injec... BACKGROUND The stent embedded in the esophageal mucosa is one of the complications after stenting for esophageal stricture.We present a case of stent adjustment with the aid of a transparent cap after endoscopic injection of an esophageal varices stent.CASE SUMMARY A 61-year-old male patient came to the hospital with discomfort of the chest after the stent implanted for the stenosis because of endoscopic injection of esophageal varices.The gastroscopy was performed,and the stent embedded into the esophageal mucosa.At first,we pulled the recycling line for shrinking the stent,however,the mucosa could not be removed from the stent.Then a forceps was performed to remove the mucosa in the stent,nevertheless,the bleeding form the mucosa was obvious.And then,we used a transparent cap to scrape the mucosa along the stent,and the mucosa were removed successfully without bleeding.CONCLUSION A transparent cap helps gastroscopy to remove the mucosa embedded in the stent after endoscopic injection of the esophageal varices stent. 展开更多
关键词 STENT Transparent cap STENOSIS Endoscopic injection Esophageal varices Case report
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CAP1000型蒸汽发生器内部构件关键安装工艺与清洁控制
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作者 路扬 庄思明 《压力容器》 北大核心 2024年第6期83-88,共6页
针对CAP1000型蒸汽发生器内部构件关键安装工艺及清洁控制等问题,分析了初级分离器及给水环等内部构件在有限空间精确位置的调节和临时固定等难点,研究了内套筒在下壳体内同轴安装以及换热管U形端在壳体最终对接焊接时所面临的污染和磕... 针对CAP1000型蒸汽发生器内部构件关键安装工艺及清洁控制等问题,分析了初级分离器及给水环等内部构件在有限空间精确位置的调节和临时固定等难点,研究了内套筒在下壳体内同轴安装以及换热管U形端在壳体最终对接焊接时所面临的污染和磕碰问题。基于该设备各部分内部构件结构特征提出清洁安装工艺方案,通过设计和应用多种防护用具和机械支撑调节装置,取代常规焊接固定方式,更加精准控制各项安装尺寸,避免了焊接和打磨带来的内部污染。实践表明,采用该安装工艺和方法可有效提高CAP1000型蒸汽发生器内部构件的制造精度、清洁度和产品总体质量。 展开更多
关键词 cap1000型蒸汽发生器 内部构件 机械支撑 安装工艺
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改良的RIHA方法定量检测PCV2 Cap抗原的研究
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作者 谢红玲 李晶梅 +8 位作者 冯钊 雷环城 杨思谊 黄泳芳 刘项羽 程敏华 秦红刚 田丽娜 孙文 《中国兽药杂志》 2024年第10期1-7,共7页
为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4... 为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4、3、2、1、0分,将几个稀释度的被检样品全部检测孔的分数加和;3)同法检测参照品并将参照品分数加和;4)被检样品与参照品总分数对比计算,获得被检样品抗原含量。改良的RIHA方法进行稳定性评价并与ELISA方法做比较。结果显示,改良RIHA方法的批内差异为6.8%~19.4%、批间差异为11.4%~23.6%、检测同一个样品差异系数为8.5%,均优于常规RIHA方法。改良RIHA方法检测纯化前和纯化后的PCV2 Cap抗原共30份,与ELISA方法检测结果比较相关系数为0.9568。研究结果表明,改良的PCV2 Cap抗原RIHA定量检测方法稳定性良好,且与ELISA方法检测结果有相关性,可在PCV2 Cap抗原生产中做定量检测,也可在毒种筛选、生产工艺优化中快速定量检测PCV2 Cap抗原含量。 展开更多
关键词 PCV2 cap抗原 改良 反向间接血凝试验(RIHA) ELISA 定量检测
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