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Calmodulins and calmodulin-like proteins-mediated plant organellar calcium signaling networks under abiotic stress
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作者 Shuang Liu Liyan Zhao +4 位作者 Maozi Cheng Jinfeng Sun Xiaomeng Ji Aman Ullah Guosheng Xie 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2024年第5期1321-1332,共12页
Plant calmodulins(CaMs)and calmodulin-like proteins(CMLs)mediate Ca~(2+)signaling in response to abiotic stresses.Manipulation of this signaling in crops could increase stress tolerance.We review methods for detecting... Plant calmodulins(CaMs)and calmodulin-like proteins(CMLs)mediate Ca~(2+)signaling in response to abiotic stresses.Manipulation of this signaling in crops could increase stress tolerance.We review methods for detecting Ca~(2+)signals,regulatory roles of Ca Ms and CMLs,binding targets,and Ca~(2+)networks under abiotic stress in organelles. 展开更多
关键词 Abiotic stress CALMODULIN calmodulin-like protein Organellar calcium signaling pathway
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TaCML36, a wheat calmodulin-like protein,positively participates in an immune response to Rhizoctonia cerealis 被引量:4
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作者 Lin Lu Wei Rong +2 位作者 Ronghua Zhou Naxin Huo Zengyan Zhang 《The Crop Journal》 SCIE CAS CSCD 2019年第5期608-618,共11页
Sharp eyespot,mainly caused by the soil-borne fungus Rhizoctonia cerealis,affects wheat(Triticum aestivum L.)production worldwide.In this study,we isolated TaCML36 gene encoding a wheat calmodulin-like protein,and stu... Sharp eyespot,mainly caused by the soil-borne fungus Rhizoctonia cerealis,affects wheat(Triticum aestivum L.)production worldwide.In this study,we isolated TaCML36 gene encoding a wheat calmodulin-like protein,and studied its defense role in protection against R.cerealis.Transcription of TaCML36 was significantly elevated by both R.cerealis infection and exogenous ethylene treatment.Transcription was higher in resistant wheat lines than in susceptible ones.There were copies of TaCML36 on chromosomes 5A,5B,and 5D.The TaCML36 protein is composed of 183 amino acids and contains two calcium-binding EFhand domains.Subcellular localization assays in wheat indicated that TaCML36 localizes in both the cytoplasm and nucleus.Virus-induced gene silencing and disease assessment indicated that compared to the controls,TaCML36-silenced wheat plants displayed significantly reduced resistance to R.cerealis and had greater fungal biomass,suggesting that knockdown of TaCML36 impaired host resistance.Knockdown of TaCML36 also significantly repressed expression of pathogenesis-related genes such as Chitinase 1,PDF35,and PR17C,the ethylene response factor-encoding gene TaPIE1,and ethylene biosynthesis gene ACO2.Collectively,our results suggest that TaCML36 positively participates in the innate immune response to R.cerealis infection by modulating expression of defense-associated genes possibly in the ethylene signaling pathway. 展开更多
关键词 calmodulin-like protein Defense-associated gene Ethylene signaling SHARP EYESPOT TRITICUM AESTIVUM
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Calmodulin-like 5 promotes PEDV replication by regulating late-endosome synthesis and innate immune response
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作者 Wen-Jun Tian Xiu-Zhong Zhang +3 位作者 Jing Wang Jian-Feng Liu Fu-Huang Li Xiao-Jia Wang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期501-512,共12页
The infection caused by porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)is associated with high mortality in piglets worldwide.Host factors involved in the efficient replication of PEDV,however,remain largely unknown.Our recent ... The infection caused by porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)is associated with high mortality in piglets worldwide.Host factors involved in the efficient replication of PEDV,however,remain largely unknown.Our recent proteomic study in the virus-host interaction network revealed a significant increase in the accumulation of CALML5(EF-hand protein calmodulin-like 5)following PEDV infection.A further study unveiled a biphasic increase of CALML5 in 2 and 12 h after viral infection.Similar trends were observed in the intestines of piglets in the early and late stages of the PEDV challenge.Moreover,CALML5 depletion reduced PEDV mRNA and protein levels,leading to a one-order-of-magnitude decrease in virus titer.At the early stage of PEDV infection,CALML5 affected the endosomal trafficking pathway by regulating the expression of endosomal sorting complex related cellular proteins.CALML5 depletion also suppressed IFN-βand IL-6 production in the PEDV-infected cells,thereby indicating its involvement in negatively regulating the innate immune response.Our study reveals the biological function of CALML5 in the virology field and offers new insights into the PEDV-host cell interaction. 展开更多
关键词 Porcine epidemic diarrhea virus(PEDV) EF-hand protein calmodulin-like 5(CALML5) Late endosomes Innate immune response
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Mutation of the Arabidopsis Calmodulin-Like Protein CML37 Deregulates the Jasmonate Pathway and Enhances Susceptibility to Herbivory 被引量:11
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作者 Sandra S. Scholz Jyothilakshmi Vadassery +5 位作者 Monika Heyer Michael Reichelt Kyle W. Bender Wayne A. Snedden Wilhelm Boland Axel Mithofer 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2014年第12期1712-1726,共15页
Throughout their life, plants are challenged by various abiotic and biotic stress factors. Among those are attacks from herbivorous insects. The molecular mechanisms underlying the detection of herbivores and the subs... Throughout their life, plants are challenged by various abiotic and biotic stress factors. Among those are attacks from herbivorous insects. The molecular mechanisms underlying the detection of herbivores and the subsequent signal transduction are not well understood. As a second messenger, fluxes in intracellular Ca2+ levels play a key role in mediating stress response pathways. Ca2+ signals are decoded by Ca2+ sensor proteins such as calmodulin-like proteins (CMLs). Here, we demonstrate that recombinant CML37 behaves like a Ca2+ sensor in vitro and, in Arabidopsis, AtCML37 is induced by mechanical wounding as well as by infestation with larvae of the generalist lepidopteran herbivore Spodoptera littoralis. Loss of function of CML37 led to a better feeding performance of larvae suggesting that CML37 is a positive defense regulator. No herbivory-induced changes in secondary metabolites such as glucosinolates or flavonoids were detected in cml37 plants, although a significant reduction in the accumulation of jasmonates was observed, due to reduced expression of JAR1 mRNA and cellular enzyme activity. Consequently, the expression of jasmonate-responsive genes was reduced as well. Summarizing, our results suggest that the Ca2+ sensor protein, CML37, functions as a positive regulator in Ca2+ signaling during herbivory, connecting Ca2+ and jasmonate signaling. 展开更多
关键词 HERBIVORY oral secretion JASMONATES cytosolic calcium calmodulin-like proteins.
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甘蔗类钙调素ScCML13与SCMV运动蛋白P3N-PIPO的互作研究
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作者 玉泉馨 杨宗桃 +7 位作者 张海 程光远 焦文迪 曾康 罗廷绪 黄国强 王璐 徐景升 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1855-1866,共12页
类钙调素(Calmodulin-like,CML)是植物特有的钙信号感受器蛋白之一,参与植物生长发育和响应外界环境信号转导。甘蔗(Saccharum spp.hybrid)中CML应答甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)侵染尚未见报道。本研究从甘蔗热带种Badil... 类钙调素(Calmodulin-like,CML)是植物特有的钙信号感受器蛋白之一,参与植物生长发育和响应外界环境信号转导。甘蔗(Saccharum spp.hybrid)中CML应答甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)侵染尚未见报道。本研究从甘蔗热带种Badila(S.officinarum)中克隆了一个CML基因,命名为ScCML13。该基因开放读码框(open reading frame,ORF)长度为519 bp,编码172 aa。生物信息学分析表明,ScCML13属于稳定的亲水脂溶蛋白,无跨膜结构域,有4个结合Ca2+的EF-hand结构域;系统进化树分析表明,该蛋白在单子叶和双子叶植物中及单子叶C3和C_(4)植物中具有明显分化;酵母双杂交(yeast two-hybrid,Y2H)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验表明,ScCML13与SCMV的运动蛋白P3N-PIPO互作。亚细胞定位试验表明ScCML13定位于内质网和细胞核。共定位试验发现ScCML13会干扰SCMV-P3N-PIPO的质膜(plasma membrane)或胞间连丝(plasmodesmata)定位。实时荧光定量PCR(Real Time Quantitative PCR,RT-qPCR)分析发现,ScCML13基因主要在甘蔗叶片中表达,在节间和根中的相对表达量低;ScCML13基因在感染SCMV后2 h显著上调,随后下调至与对照组相比的水平,而在感染后期上调。 展开更多
关键词 类钙调素 甘蔗花叶病毒 P3N-PIPO 蛋白互作
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大蒜类钙调蛋白基因AsCML15和AsCML42的分离及其在渗透胁迫中的功能分析
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作者 王广龙 许吴俊 +3 位作者 陈洋洋 胡珍珠 孙敏 熊爱生 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期80-86,共7页
类钙调素蛋白(CMLs)是植物中的Ca 2+感受器之一,参与植物的生长发育和适应环境变化的过程。为了解大蒜CML的序列特征及其对渗透胁迫的响应,从大蒜品种苍山四六瓣中克隆得到AsCML15和AsCML42基因,并对其在干旱以及盐胁迫条件下的表达模... 类钙调素蛋白(CMLs)是植物中的Ca 2+感受器之一,参与植物的生长发育和适应环境变化的过程。为了解大蒜CML的序列特征及其对渗透胁迫的响应,从大蒜品种苍山四六瓣中克隆得到AsCML15和AsCML42基因,并对其在干旱以及盐胁迫条件下的表达模式进行了分析。结果表明,AsCML15和AsCML42基因开放阅读框长度分别为498,543 bp,编码165,180个氨基酸残基。AsCML15和AsCML42分别含有4,3个EF-hand结构域。AsCML42与拟南芥AtCML42和AtCML43在进化关系上更为接近,而AsCML15与拟南芥AtCML15、AtCML16亲缘关系较近。荧光定量PCR结果表明,AsCML15和AsCML42在鳞茎、叶片、根都有表达,且均能被200 mmol/L NaCl和15%PEG6000所诱导。AsCML15和AsCML42基因可能参与了大蒜抵御盐胁迫和干旱胁迫的过程,可进一步鉴定其生物学功能。 展开更多
关键词 大蒜 类钙调蛋白 基因克隆 表达分析 渗透胁迫
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黄瓜类钙调蛋白CML8与性型分化主效基因编码蛋白的互作分析
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作者 许俊强 张新梅 +4 位作者 吕霞 苏甜 张国平 张应华 许彬 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第5期904-912,共9页
【目的】为探索类钙调蛋白CMLs是否参与黄瓜性型分化过程,以便进一步完善性型分化调控网络提供参考。【方法】通过克隆黄瓜CML8、ACS1G、ACS2及ACS11基因,qPCR检测CML8基因在不同花型中的表达量,酵母双杂交检测CML8与黄瓜性型分化主效... 【目的】为探索类钙调蛋白CMLs是否参与黄瓜性型分化过程,以便进一步完善性型分化调控网络提供参考。【方法】通过克隆黄瓜CML8、ACS1G、ACS2及ACS11基因,qPCR检测CML8基因在不同花型中的表达量,酵母双杂交检测CML8与黄瓜性型分化主效基因编码蛋白间的互作情况。【结果】克隆得到黄瓜CML8基因,完整ORF 441 bp,编码146 aa,不含信号肽;不含跨膜域,为胞外蛋白,含4个具有Ca^(2+)结合能力的EF-hand结构域,不含内含子,亚细胞定位在细胞膜和细胞质;克隆得到黄瓜性型分化关键基因F(ACS1G)、M(ACS2)及A(ACS11),序列比对表明三者的基因序列及编码蛋白序列与黄瓜数据库中的一致,且在雌花、雄花和两性花3种不同花型中的表达量差异显著,在雄花中差异极显著;酵母双杂交试验表明,CML8均可与ACS1G和ACS2发生互作,而不能与ACS11发生互作。【结论】成功克隆得到黄瓜CML8基因,且CML8可与ACS1G和ACS2发生互作,可能参与黄瓜性型分化过程,本研究首次探索类钙调蛋白参与植物性型分化过程,期望为钙信号系统参与植物性型分化提供参考。 展开更多
关键词 黄瓜 类钙调蛋白(CML8) 性型分化 主效基因 蛋白互作
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蓖麻类钙调蛋白基因RcCML42克隆与表达载体构建 被引量:1
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作者 孙德慧 王晓宇 +4 位作者 王莹 霍红雁 刘海臣 徐惠 张继星 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期94-101,共8页
为了探究类钙调蛋白基因家族成员在蓖麻体内的作用及表达模式,在蓖麻体内挖掘家族基因CML42,并对其进行克隆与表达分析。以哲蓖三号植株为试验材料,克隆获得RcCML42完整编码区序列(CDS),利用生物信息学方法对RcCML42基因序列进行分析,... 为了探究类钙调蛋白基因家族成员在蓖麻体内的作用及表达模式,在蓖麻体内挖掘家族基因CML42,并对其进行克隆与表达分析。以哲蓖三号植株为试验材料,克隆获得RcCML42完整编码区序列(CDS),利用生物信息学方法对RcCML42基因序列进行分析,包括编码氨基酸、蛋白分子量及等电点、跨膜结构域、氨基酸序列一致性等内容。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,检测RcCML42基因在蓖麻植株根、茎、叶位置不同时间点的特异性表达情况。结果显示,RcCML42 CDS长度为597 bp,编码198个氨基酸,含有3个EF-hand钙结合结构域。蛋白分子量为22.27 ku,等电点为4.55,不存在跨膜结构域。氨基酸序列一致性分析表明,RcCML42与巴西橡胶树一致性最高,达86.84%。qRT-PCR结果显示,RcCML42基因在蓖麻根、茎、叶组织中均有表达,在经NaCl处理后,RcCML42在根中的表达量呈现先下降后上升的趋势。RcCML42在茎中12 h高度表达,在叶中为8 h高度表达。且在茎中的表达量显著高于其在根、叶中的表达。CML是植物体内最重要的一类钙感受器,通过与钙调素结合蛋白结合进而对植物细胞进行调控。当植物受到环境中NaCl侵害时,CML可以参加体内钙离子的调节,进而减轻盐胁迫对植物体的损害。综上,推测RcCML42在盐胁迫条件下的蓖麻信号转导中起重要作用。 展开更多
关键词 蓖麻 类钙调蛋白 耐盐 钙离子 生物信息学
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Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag联合检测在肺腺癌与肺鳞癌鉴别诊断中的潜在价值
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作者 王天伦 焦会珍 《转化医学杂志》 2023年第4期143-148,共6页
目的探讨Let-7i-5p、钙调蛋白样蛋白3(CALML3)和鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)联合检测在肺腺癌与肺鳞癌鉴别诊断中的潜在价值。方法选取2019年1月—2022年1月收治的肺癌120例,根据病理检查结果将其分为肺腺癌组(68例)和肺鳞癌组(52例)2组。比... 目的探讨Let-7i-5p、钙调蛋白样蛋白3(CALML3)和鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)联合检测在肺腺癌与肺鳞癌鉴别诊断中的潜在价值。方法选取2019年1月—2022年1月收治的肺癌120例,根据病理检查结果将其分为肺腺癌组(68例)和肺鳞癌组(52例)2组。比较2组Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag表达水平,分析其与临床病理特征相关性,探讨其对肺腺癌与肺鳞癌鉴别诊断价值,评价鉴别诊断结果与病理诊断结果一致性,并比较2组Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag不同水平者生存情况。结果肺腺癌组Let-7i-5p表达高于肺鳞癌组,CALML3及SCC-Ag低于肺鳞癌组(P<0.01)。2组临床分期高、分化程度低和有淋巴结转移者Let-7i-5p、CALML3及SCC-Ag水平升高(P<0.01)。Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag联合鉴别诊断肺腺癌与肺鳞癌的曲线下面积明显大于单独诊断,且联合鉴别诊断与病理检查结果的一致性较高(P<0.05,P<0.01)。肺腺癌组和肺鳞癌组Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag高水平患者生存率低于低水平患者(P<0.05)。结论肺腺癌和肺鳞癌患者Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag表达存在差异;Let-7i-5p、CALML3、SCC-Ag与肺腺癌和肺鳞癌患者临床病理特征和预后密切相关,且联合检测鉴别诊断肺腺癌和肺鳞癌有一定临床价值。 展开更多
关键词 肺肿瘤 腺癌 肿瘤 鳞状细胞 Let-7i-5p 钙调蛋白样蛋白3 鳞状细胞癌抗原 诊断 鉴别 生存情况
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血清NTX、FGF-2、IGF-1及CaM水平预测肱骨干骨折内固定术后骨不愈合的预测价值 被引量:1
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作者 周峰 高一淋 谢丁丁 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第15期1826-1831,1837,共7页
目的探讨血清Ⅰ型胶原氨基端末肽(NTX)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及钙调蛋白(CaM)水平对肱骨干骨折内固定术后骨不愈合的预测价值。方法选取2017年1月至2020年7月该院收治的拟行内固定术治疗的114例肱... 目的探讨血清Ⅰ型胶原氨基端末肽(NTX)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及钙调蛋白(CaM)水平对肱骨干骨折内固定术后骨不愈合的预测价值。方法选取2017年1月至2020年7月该院收治的拟行内固定术治疗的114例肱骨干骨折患者作为研究对象,均于术前及术后1周、4周、8周行血清NTX、FGF-2、IGF-1及CaM水平检测。根据随访术后12个月骨愈合情况将患者分为骨愈合组与骨不愈合组,对比一般资料及血清NTX、FGF-2、IGF-1、CaM水平,采用多因素Logistic回归法分析肱骨干骨折内固定术后骨不愈合的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析上述各指标单项及联合对内固定术后骨不愈合的预测价值。结果骨不愈合组高能量损伤占比高于骨愈合组,骨不愈合组解剖复位占比低于骨愈合组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组术后1周、4周、8周的血清各指标水平均高于术前,术后4周、8周的血清各指标水平均高于术后1周,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归性分析,结果显示高能量损伤是肱骨干骨折内固定术后骨不愈合的危险因素(P<0.05),而解剖复位及术后4周的血清NTX、FGF-2、IGF-1、CaM水平均是肱骨干骨折内固定术后骨愈合的保护因素(P<0.05)。经ROC曲线分析,术后4周血清NTX、FGF-2、IGF-1、CaM水平联合预测肱骨干骨折内固定术后骨不愈合的灵敏度与曲线下面积均高于各指标单独预测(P<0.05)。结论血清NTX、FGF-2、IGF-1、CaM水平均与肱骨干骨折患者内固定术后骨不愈合密切关联,均对其术后骨不愈合具有一定的预测价值,且四项指标联合预测的价值更为良好,可作为早期评估肱骨干骨折内固定术后骨愈合情况的参考指标而指导临床进一步治疗。 展开更多
关键词 Ⅰ型胶原氨基末端肽 成纤维细胞生长因子-2 胰岛素样生长因子-1 钙调蛋白 肱骨干骨折
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葡萄类钙调磷酸酶B亚基互作蛋白激酶VvCIPK10的特性与表达 被引量:8
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作者 余义和 李秀珍 +4 位作者 郭大龙 张会灵 杨英军 李学强 张国海 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第19期3798-3806,共9页
【目的】在葡萄中克隆丝苏氨酸蛋白激酶Vv CIPK10,分析其激酶特性和在逆境胁迫下的表达模式,为进一步研究该基因参与逆境胁迫的分子功能,探讨葡萄抗逆分子机制提供理论依据。【方法】利用电子克隆技术获得Vv CIPK10序列,设计特异引物进... 【目的】在葡萄中克隆丝苏氨酸蛋白激酶Vv CIPK10,分析其激酶特性和在逆境胁迫下的表达模式,为进一步研究该基因参与逆境胁迫的分子功能,探讨葡萄抗逆分子机制提供理论依据。【方法】利用电子克隆技术获得Vv CIPK10序列,设计特异引物进行RT-PCR反应,对克隆到的序列进行开放阅读框和保守结构域分析;构建原核表达载体,转化表达菌株后用IPTG进行诱导表达,收集菌体后裂解细胞,制备蛋白上样液,SDS-PAGE电泳对表达产物进行分析,同时对融合蛋白进行可溶性分析;IPTG大量诱导表达融合蛋白,收集菌体后进行超声破碎细胞,用麦芽糖结合蛋白纯化柱纯化MBP-Vv CIPK10融合蛋白,SDS-PAGE电泳进行分析;纯化后的融合蛋白与体外自磷酸化缓冲液进行自磷酸化反应,反应后SDS-PAGE电泳,压磷屏检测体外自磷酸化反应;构建重组瞬时表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10;分离拟南芥原生质体,通过PEG介导的瞬时转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至原生质体;通过基因枪介导的转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至洋葱表皮细胞,培养16 h后用激光共聚焦显微镜进行荧光信号检测;选择生长相对一致且健壮的葡萄植株,于干旱、低温和盐胁迫处理后不同时间取样,同时在田间取葡萄不同组织样品,实时荧光定量PCR检测Vv CIPK10在葡萄不同组织中的表达以及在不同逆境胁迫下的表达模式。【结果】PCR克隆获得葡萄Vv CIPK10全长为1 357 bp,5′端非编码区为30 bp,3′端非编码区为156 bp,开放阅读框为1 171 bp,编码436个氨基酸,理论等电点为8.59,分子量为48.7 k Da。保守结构域预测分析显示该蛋白5′端具有一个激酶结构域,3′末端具有一个PPI结构域和一个NAF结构域。BLSATP分析表明葡萄Vv CIPK10与桃树CIPK(XP_007205151)一致性最高(74%)。重组表达载体p MAL-C5X/Vv CIPK10在大肠杆菌中经诱导表达获得与理论分子量(43 k Da+48.7 k Da)相一致的融合蛋白。MBP-Vv CIPK10融合蛋白经柱纯化后获得单一的蛋白条带,Vv CIPK10的自磷酸化活性依赖于Mn^(2+),不依赖于Mg^(2+)和Ca^(2+),EDTA可以抑制Vv CIPK10的自磷酸化活性。亚细胞定位结果显示,Vv CIPK10定位在细胞核、细胞膜和细胞质。Vv CIPK10在葡萄各个组织中均有表达,主要在葡萄根和叶片中大量表达,葡萄茎、花序、果实和卷须中的表达量较低。在干旱、低温和盐胁迫处理后,Vv CIPK10呈现受诱导表达模式。Vv CIPK10的表达在低温胁迫后6 h达到峰值,干旱和盐胁迫后2 h即达到峰值。【结论】葡萄Vv CIPK10能够响应干旱、低温和盐胁迫,推测Vv CIPK10在葡萄抗非生物逆境胁迫中具有重要作用。 展开更多
关键词 葡萄 类钙调磷酸酶B亚基 丝苏氨酸蛋白激酶 VvCIPK10 表达分析
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小麦类钙调素TaCML79基因的克隆和表达分析 被引量:7
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作者 周硕 刘永伟 +6 位作者 董福双 杨帆 赵和 柴建芳 吕孟雨 孙果忠 王海波 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1-6,共6页
为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6... 为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6,属于酸性蛋白,具有2个典型的和一个不完整的EF-hand结构域。多序列比对和系统进化树分析表明,TaCML79与野生稻的ObCML35和水稻的OsCML10亲缘关系较近,相似性分别为84.6%和86.8%。该基因的表达在根和地上部分受到热激、NaCl、渗透和冷胁迫的诱导或抑制,初步推断该基因可能与植物抗逆有密切的关系。 展开更多
关键词 小麦 类钙调素 EF-hand结构域 基因克隆 基因表达
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新疆无苞芥类钙调素蛋白基因OpCML13的克隆与分析 被引量:8
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作者 赵云霞 魏艳玲 黄先忠 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期431-437,共7页
通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框... 通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框(ORF)为447bp,编码148个氨基酸。生物信息学分析表明,OpCMLl3蛋白的二级结构含有4个ca^2+结合基序(EF-hands)结构,是一个亲水蛋白,无信号肽,无跨膜区域,为非跨膜蛋白;同源建模发现该蛋白包含8个α-螺旋结构和10个β-转角。系统进化树分析表明,OpCMLl3编码产物与拟南芥AtCMLl3和AtCMI。14进化关系较近,属于同一进化分支。半定量RTPCR结果显示,OpCMLl3基因在无苞芥的不同组织中都有表达,在根中表达量最高;高盐胁迫处理6~24h,OpCMLl3基因的表达明显增强,随后逐渐恢复正常表达水平;低温、干旱和ABA处理6h后基因表达明显上调,并且一直保持较高的表达水平。研究表明,OpCMLl3基因在无苞芥逆境胁迫中可能起着重要作用。 展开更多
关键词 无苞芥 类钙调素蛋白13 基因表达 抗逆
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在PEG模拟干旱下水稻根系几个疑似PEG毒害响应转录本研究 被引量:3
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作者 马廷臣 陈荣军 +2 位作者 余蓉蓉 曾汉来 张端品 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第6期1090-1094,共5页
通过差别显示的方法,利用Affymetrix水稻60K芯片研究2个不同耐旱性的水稻品种(湘丰早119和爱华5号)根系对PEG毒害响应的转录本表达变化,结果表明:共发现了17个疑似对PEG毒害响应的转录本,它们均表现为下调表达,且大部分功能是假设的或... 通过差别显示的方法,利用Affymetrix水稻60K芯片研究2个不同耐旱性的水稻品种(湘丰早119和爱华5号)根系对PEG毒害响应的转录本表达变化,结果表明:共发现了17个疑似对PEG毒害响应的转录本,它们均表现为下调表达,且大部分功能是假设的或未知的;其中5个功能假设为水解酶相关的转录本表达活性被PEG抑制;3个功能假设为编码蛋白酶的转录本表达活性被PEG抑制。 展开更多
关键词 水稻 基因组芯片 PEG毒害 水解酶相关基因 钙调素相关蛋白基因 根系
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拟南芥中一个类似钙调素蛋白的基因结构及其缺磷、缺钾诱导表达 被引量:3
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作者 段瑞君 易可可 吴平 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期520-526,共7页
通过拟南芥芯片杂交分析发现推测的钙调素基因(GenBankaccessionNo.At1g76650)与低磷胁迫有关。对该基因的结构研究确认了该基因编码一个含有三个EF-hand结构域的类似钙调素的蛋白,Northern检测表明该基因在缺钾、缺磷条件下诱导表达,... 通过拟南芥芯片杂交分析发现推测的钙调素基因(GenBankaccessionNo.At1g76650)与低磷胁迫有关。对该基因的结构研究确认了该基因编码一个含有三个EF-hand结构域的类似钙调素的蛋白,Northern检测表明该基因在缺钾、缺磷条件下诱导表达,但在缺氮、高盐等胁迫条件下不受影响。经RT-PCR和启动子融合GUS转基因植株的组织化学染色分析,表明该基因在拟南芥中为全株表达,但各器官中表达丰度不尽相同。 展开更多
关键词 拟南芥 类似钙调素蛋白的基因 磷或钾缺乏
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杜氏盐藻cDNA文库的构建及KCBP基因的克隆 被引量:4
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作者 柳丽平 李杰 +2 位作者 王翠 阎赟梦 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第6期907-910,共4页
目的:构建杜氏盐藻cDNA文库并从该文库中筛选类驱动蛋白钙调素结合蛋白(KCBP)基因cDNA序列。方法:取对数生长期的杜氏盐藻细胞,提取总RNA并分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,连接到pAP3neo载体上,采用电转化法将重组质粒转化大肠杆菌DH... 目的:构建杜氏盐藻cDNA文库并从该文库中筛选类驱动蛋白钙调素结合蛋白(KCBP)基因cDNA序列。方法:取对数生长期的杜氏盐藻细胞,提取总RNA并分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,连接到pAP3neo载体上,采用电转化法将重组质粒转化大肠杆菌DH10B。计算平板上单菌落数,测定文库的滴定度和重组率。运用PCR法筛选含有KCBP基因特异片段的质粒。结果:文库滴定度为5.6×106pfu/mL,重组率在90%左右,插入片段长度在0.4~6.0kb,平均长度为1.9kb。利用PCR法从该文库中筛选到了含有新基因KCBP特异片段的单菌落,经测序与cDNA末端快速扩增(RACE)-PCR获得的杜氏盐藻KCBP基因cDNA序列相符,此序列属于kine-sin-14家族。结论:成功构建杜氏盐藻cDNA文库,并从该文库筛选出一个kinesin样cDNA序列。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 CDNA文库 类驱动蛋白钙调素结合蛋白
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原核生物中的类钙调蛋白 被引量:7
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作者 张蔚文 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第2期98-102,共5页
钙是重要的生命元素之一,真核生物中普遍存在介导钙信号的钙调蛋白已有深入的研究,证明钙调蛋白是细胞复杂调控系统中的一个重要成员,但是在原核生物中是否也存在类似的蛋白因子却一直说法不一。自80年代初在大肠杆菌(Esche... 钙是重要的生命元素之一,真核生物中普遍存在介导钙信号的钙调蛋白已有深入的研究,证明钙调蛋白是细胞复杂调控系统中的一个重要成员,但是在原核生物中是否也存在类似的蛋白因子却一直说法不一。自80年代初在大肠杆菌(Escherichiacoli)中首次发现类钙调蛋白(calmodulin-like-protein)以来,已在多种原核生物中陆续发现了类钙调蛋白的存在,证明其可能参与了原核生物的孢子形成,细胞分裂,生物固氮,异型胞形成和兰细菌光合作用等多种调控功能。文章综述了近年来这一领域的部分研究成果。 展开更多
关键词 原核生物 类钙调蛋白 生理功能
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结球甘蓝类钙调蛋白CMLs与花粉萌发NPG1及NPGRs相互作用研究
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作者 许彬 曹绍玉 +5 位作者 苏甜 彭梦玲 吕霞 李振林 张国平 许俊强 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期2934-2944,共11页
类钙调蛋白作为钙调蛋白的家族之一,调控植物生长发育、激素调控及各种胁迫,对类钙调蛋白对参与花粉萌发及伸长的深入研究具有重要意义。为研究结球甘蓝花粉CMLs与NPG1及相关蛋白互作关系,探索CMLs在花粉发育及萌发过程的功能,本研究以... 类钙调蛋白作为钙调蛋白的家族之一,调控植物生长发育、激素调控及各种胁迫,对类钙调蛋白对参与花粉萌发及伸长的深入研究具有重要意义。为研究结球甘蓝花粉CMLs与NPG1及相关蛋白互作关系,探索CMLs在花粉发育及萌发过程的功能,本研究以结球甘蓝ZG为材料,克隆到12个花粉发育及萌发相关CMLs基因,及花粉萌发基因NPG1、NPGR1和NPGR2,通过酵母双杂交试验检测编码蛋白相互之间的互作关系,并检测NPG1、NPGR1和NPGR2在不同授粉时间后的表达水平。结果表明, 12个CMLs基因开放阅读框(open reading frame, ORF)在447~1095bp之间,其中CML20、CML48、CML49、CML50均含有4个内含子, CML21含有2个内含子,其余均不含内含子;编码蛋白均不含信号肽和跨膜域,均为胞外蛋白,且均为亲水性蛋白;分别含有2~4个EF-Hands结构域,氨基酸数目在148~364个氨基酸之间,亚细胞定位预测主要定位于细胞膜、液泡及细胞核中;结球甘蓝NPG1、NPGR1、NPGR2分别聚类到不同的进化枝上,与油菜、白菜的亲缘关系最近,与拟南芥亲缘关系较近;酵母双杂交试验表明, CML13、CML21、CML24、CML42不能与NPG1、NPGR1及NPGR2在体外发生相互作用, CML15、CML20、CML25、CML39、CML41、CML48、CML49均能与NPG1、NPGR1及NPGR2在体外发生相互作用, CML50可与NPGR1、NPGR2互作,而不能与NPG1发生互作。表达分析表明, NPG1表达量在授粉后的柱头中呈显著上升趋势, NPGR1、NPGR2表达量变化均不显著;CMLs在不同授粉时间均有不同的表达量变化,其中CML15、CML20、CML39、CML41、CML49均呈现出先升高后下降的趋势。本研究在结球甘蓝中筛选得到能与NPG1、NPGRs互作的CMLs蛋白,说明多个CMLs能参与花粉萌发及花粉管伸长过程,期望为Ca^(2+)信号系统参与花粉萌发及花粉管伸长的机制研究提供参考。 展开更多
关键词 结球甘蓝 花粉 CMLs NPG1 NPGRs 蛋白互作
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微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
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作者 杨晓娇 周鹏 +7 位作者 米荣升 黄燕 石凯 王晓娟 王向佩 刘宇轩 雷晓思 陈兆国 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期26-30,共5页
为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶Bam... 为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 类钙调蛋白基因 克隆 原核表达
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皮肤特异表达钙调素类蛋白研究进展
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作者 丁存宝 刘海燕 《河北理工大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第1期110-112,共3页
钙调素是广泛存在于各种动植物细胞的信号转导分子,近年在皮肤中发现了一些钙调素类蛋白,其分布、特征、功能都与钙调素不同,在表皮的分化发育中发挥重要作用。本文就此作一简单介绍。
关键词 钙调素 钙调素类蛋白 皮肤
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