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题名犬MC4R突变体D90N真核表达载体的构建及表达
被引量：2
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作者
魏嘉
王光川
武洁
张轶博
宋慧娟
巴彩凤
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机构
辽宁医学院科学实验中心
辽宁医学院实验动物中心
辽宁医学院病理教研室
辽宁医学院免疫与病原生物学教研室
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出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010年第12期6118-6121,6124,共5页
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基金
辽宁省科技基金项目(2007408001-6)
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文摘
[目的]构建犬黑皮质素受体4(MC4R)突变体D90N真核表达载体,并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板,应用重叠PCR扩增MC4R突变体D90N目的基因,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N经酶切和测序鉴定;采用FuGENEHD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72.0h,提取细胞内总RNA,用RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,用WesternBlot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N重组真核表达载体,测序结果显示含有D90N突变位点。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N,重组体能在MD-CK细胞中表达。
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关键词
犬
黑皮质素受体4
真核表达载体
MDCK细胞
d90n
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Keywords
Canis
Melanocortin receptor 4
Eukaryotic expressive vector
MDCK cell
d90n
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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