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山豆根多糖及其硫酸酯体外抗DHV-1感染细胞作用的比较 被引量:7
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作者 陈云 曾玲 +4 位作者 熊文 张玲 张清 王德云 刘家国 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期117-122,共6页
为研制抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)新药成分,用水煎醇沉法提取山豆根多糖(BSRPS),并采用氯磺酸-吡啶法制备其硫酸化产物山豆根多糖硫酸酯(sBSRPS),然后运用体外细胞培养法比较研究BSRPS和sBSRPS抗DHV-1感染鸭胚肝细胞的作用。采用直接荧光... 为研制抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)新药成分,用水煎醇沉法提取山豆根多糖(BSRPS),并采用氯磺酸-吡啶法制备其硫酸化产物山豆根多糖硫酸酯(sBSRPS),然后运用体外细胞培养法比较研究BSRPS和sBSRPS抗DHV-1感染鸭胚肝细胞的作用。采用直接荧光免疫法比较分析BSRPS和sBSRPS对DHV-1吸附肝细胞作用的差异,并用实时荧光定量PCR法比较分析了最有效药物浓度的BSRPS和sBSRPS对DHV-1在鸭胚肝细胞上的复制、释放的影响。结果表明:BSRPS和sBSRPS都具有较好的体外抗DHV-1的作用,sBSRPS的效果优于BSRPS。sBSRPS能有效抑制DHV-1的体外复制和释放,BSRPS仅能抑制DHV-1的复制。两者对病毒吸附鸭胚肝细胞没有明显的作用。结论:sBSRPS可以作为抗DVH的新药主要成分之一。 展开更多
关键词 1型鸭肝炎病毒 山豆根多糖 硫酸化修饰 抗病毒活性
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鸭肝炎病毒(DHV-1)及水飞蓟素对雏鸭生长的影响 被引量:5
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作者 刘为民 王丙云 +5 位作者 陈建红 王军 计慧琴 袁生 黄德纯 李康林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期1519-1523,共5页
【目的】观察雏鸭接种亚致死量鸭肝炎病毒后生长速度的改变及水飞蓟素对其的影响。【方法】100只雏鸭分为8组,于10日龄接种病毒。第1、2、3组腿肌接种105倍稀释的病毒尿囊液,并分别口服0、30、50mg·kg-1bw·d-1的水飞蓟素;第4... 【目的】观察雏鸭接种亚致死量鸭肝炎病毒后生长速度的改变及水飞蓟素对其的影响。【方法】100只雏鸭分为8组,于10日龄接种病毒。第1、2、3组腿肌接种105倍稀释的病毒尿囊液,并分别口服0、30、50mg·kg-1bw·d-1的水飞蓟素;第4、5、6组腿肌接种5×105倍稀病毒尿囊液并分别口服0、10、30mg·kg-1bw·d-1的水飞蓟素;第7组为水飞蓟素对照组,不接种病毒,但口服水飞蓟素10mg·kg-1bw·d-1;第8组为空白对照组,仅腿肌注射0.2ml灭菌生理盐水。水飞蓟素连续给药5d,于攻毒的第5天采集血浆,测定血浆T3、甲状腺素(T4)、IGF-Ⅰ浓度。于攻毒后10d测定体重。【结果】用5×105倍稀释病毒尿囊液接种雏鸭,动物显示出显著高的生长速度(P<0.01,与对照组比较),此种效应可被口服水飞蓟素剂量依赖性的抑制。T4水平在接种病毒后极显著的降低,未见水飞蓟素对其显著的影响,生长速度与血浆T3水平在一定程度上呈正相关关系,与IGF-Ⅰ水平相关性不强。【结论】亚致死量鸭肝炎病毒可显著促进雏鸭的生长,水飞蓟素可拮抗病毒的这种作用,血浆T3水平与动物生长速度关系密切。 展开更多
关键词 J型鸭肝炎病毒 DHV 增重 水飞蓟素 感染 雏鸭
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1型鸭肝炎病毒衣壳蛋白的分子特征 被引量:4
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作者 王丽艳 潘梦 +2 位作者 付余 丁春宇 张大丙 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第9期3-6,共4页
本研究测定了2株1型鸭肝炎病毒(DHV-1)的衣壳蛋白编码区序列,并将推导的氨基酸序列与其他小RNA病毒衣壳蛋白的氨基酸序列进行了比较分析。结果显示,DHV仅编码3种衣壳蛋白,3种衣壳蛋白中均存在类似于其他小RNA病毒的核心结构,即八链反向... 本研究测定了2株1型鸭肝炎病毒(DHV-1)的衣壳蛋白编码区序列,并将推导的氨基酸序列与其他小RNA病毒衣壳蛋白的氨基酸序列进行了比较分析。结果显示,DHV仅编码3种衣壳蛋白,3种衣壳蛋白中均存在类似于其他小RNA病毒的核心结构,即八链反向平行β桶结构。DHV-1与其他小RNA病毒之间衣壳蛋白的氨基酸序列差异主要位于VP1的两端、VP3的N端以及连接β链的环,特别是βB-C、βE-F及βG-H环的序列差异更为显著。与9个属小RNA病毒P1蛋白的比较结果表明,DHV-1与双埃柯病毒属的成员具有相近的遗传关系,但在P1进化树中,DHV-1形成一个独立的分支,故应在小RNA病毒科中为该病毒成立一个新属。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒1 衣壳蛋白 八链反向平行β桶结构 进化分析
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1型鸭肝炎病毒强毒株在雏鸭体内分布情况研究 被引量:2
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作者 赵丽丽 刘海燕 +3 位作者 牛银杰 祝明皓 刘胜旺 陈洪岩 《实验动物科学》 2015年第3期13-15,共3页
目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的... 目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的组织脏器进行了定量检测。结果接种后4 h即可在雏鸭心、肝、脑、肺、胰腺、回肠、盲肠、直肠、法氏囊和脾脏组织中检测到一定水平的病毒RNA,随着病程发展,RNA拷贝数持续升高,接种24 h后,肝脏中的病毒RNA拷贝数为最高,达到108.81copies/g,心、肺、肾、脾次之,约107copies/g。结论DHV-1强毒在雏鸭的早期感染雏鸭的实质器官、免疫器官和消化系统等均具有广泛的嗜性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 实时荧光定量PCR 雏鸭 动态分布
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新Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1和3D蛋白的原核表达及鉴定
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作者 孟凡依 殷秀辰 +4 位作者 李刚 陈玉环 张云 刘明 冯新畅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期149-151,共3页
为表达新I型亚肝炎病毒(DHV-1C)的VP1和3D重组蛋白,本研究根据GenBank中的DHV-1C N株全基因序列,设计合成两对引物扩增其VP1和3D基因,构建重组表达载体并进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot分析表明,VP1和3D重组蛋白分别在诱导3 h和... 为表达新I型亚肝炎病毒(DHV-1C)的VP1和3D重组蛋白,本研究根据GenBank中的DHV-1C N株全基因序列,设计合成两对引物扩增其VP1和3D基因,构建重组表达载体并进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot分析表明,VP1和3D重组蛋白分别在诱导3 h和4 h后表达量达到峰值,其大小分别为37.68 ku和65.80 ku,并且能够与抗DHV-1C阳性血清产生特异性免疫反应。 展开更多
关键词 新I型鸭肝炎病毒 dhv-1C 3D VP1 克隆表达
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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因串联表达载体的构建
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作者 李日顺 于淼 +4 位作者 黄昌力 曹宗喜 王文华 张超佚 张桂红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期15-17,共3页
为了构建Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因的原核表达质粒,试验采用RT-PCR技术扩增鸭肝炎病毒VP1基因,将其连接到克隆载体pGEM-T Easy中得到重组克隆质粒pGEM-T-VP1,阳性克隆质粒经鉴定正确后,分别用BamHⅠ、XholⅠ、BglⅡ进行酶切,重组后得... 为了构建Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因的原核表达质粒,试验采用RT-PCR技术扩增鸭肝炎病毒VP1基因,将其连接到克隆载体pGEM-T Easy中得到重组克隆质粒pGEM-T-VP1,阳性克隆质粒经鉴定正确后,分别用BamHⅠ、XholⅠ、BglⅡ进行酶切,重组后得到pGEM-T-2VP1,然后将双拷贝VP1基因亚克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-2VP1。结果表明:得到了含有目的基因的阳性克隆。说明Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因原核表达质粒构建成功。 展开更多
关键词 I型鸭肝炎病毒 2VP1基因 串联表达
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1型鸭肝炎病毒E53株VP1基因在昆虫细胞中的表达及产物分析
7
作者 付培芬 刘华 +5 位作者 刘琰 母晓宇 董井泉 刘晓玫 马波 王君伟 《中国家禽》 北大核心 2012年第8期24-27,共4页
根据1型鸭肝炎病毒E53株基因组序列设计并合成一对特异性引物,RT-PCR扩增VP1基因,将其定向克隆至pFastBacTMHTB载体,转化至DH10BacTM感受态细胞中,蓝白斑筛选获得重组穿梭质粒rBacmid-VP1,重组质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获... 根据1型鸭肝炎病毒E53株基因组序列设计并合成一对特异性引物,RT-PCR扩增VP1基因,将其定向克隆至pFastBacTMHTB载体,转化至DH10BacTM感受态细胞中,蓝白斑筛选获得重组穿梭质粒rBacmid-VP1,重组质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。结果表明VP1蛋白在昆虫细胞中获得表达,表达产物能够与兔抗1型鸭肝炎病毒VP1蛋白多抗血清和鸭肝炎病毒阳性血清发生特异性反应。在昆虫细胞中表达VP1蛋白为VP1功能的研究及鸭肝炎病毒抗体的检测提供了物质材料。 展开更多
关键词 1型鸭肝炎病毒 VP1基因 昆虫细胞 Bac—to—Bac系统
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鸭肝炎病毒基因的生物信息学分析及多聚蛋白的加工预测 被引量:5
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作者 聂奎 胡燕宾 +1 位作者 曾兴艳 周作勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期481-484,共4页
对NCBIGenBank中登录的鸭肝炎病毒1型(DHV-1)全基因组及VP1基因进行生物信息学分析,27株DHV-1全基因组序列其核苷酸同源性分别为93.3%~99.8%、多聚蛋白氨基酸序列同源性则达97%~99.8%,DHV-1和其他小RNA科病毒的多聚蛋白的氨基酸序列... 对NCBIGenBank中登录的鸭肝炎病毒1型(DHV-1)全基因组及VP1基因进行生物信息学分析,27株DHV-1全基因组序列其核苷酸同源性分别为93.3%~99.8%、多聚蛋白氨基酸序列同源性则达97%~99.8%,DHV-1和其他小RNA科病毒的多聚蛋白的氨基酸序列同源性均低于30%,多聚蛋白氨基酸序列进化分析显示DHV-1在小RNA科病毒上形成一个独立的进化分支。因此,应在小RNA病毒科中设立一个DHV-1的新病毒属。分析发现,在DHV-1 VP1区存在多个免疫优势辅助性T淋巴细胞抗原位点及其抗原决定簇。在DHV-1多聚蛋白的第1757aa~1761aa位,出现3C蛋白酶(3Cpro)的共有基序Gly-Ser-Cys-Gly-Gly,同时发现在751aa/752aa处存在自我切割基序NPG↓P。推测在整个DHV-1多聚蛋白的切割过程中首先进行NPG↓P切割,形成P1,P2-P3前体蛋白,进而再由3Cpro对2个前体蛋白进行二级加工,最终DHV-1多聚蛋白总共被切割成12个成熟产物,形成其结构蛋白与非结构蛋白。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 序列分析 多聚蛋白
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鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT—PCR诊断方法的建立 被引量:3
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作者 高骏 孙凤萍 +2 位作者 胡建华 王胜昌 易建中 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2008年第2期124-126,共3页
根据Genebank上发表的鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-1)的部分序列设计了1对引物D1/D2,通过对反应条件的优化,建立起了有效的鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR诊断方法。并应用此方法对近年在上海及周遍地区分离到的2株DHV-1分离毒进行了检测和测序鉴定,结... 根据Genebank上发表的鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-1)的部分序列设计了1对引物D1/D2,通过对反应条件的优化,建立起了有效的鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR诊断方法。并应用此方法对近年在上海及周遍地区分离到的2株DHV-1分离毒进行了检测和测序鉴定,结果证实此株分离毒为DHV-1病毒。结果显示建立的DHV-1的PCR诊断方法具有快速、准确的优点。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒Ⅰ型 dhv-1 RT—PCR
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Ⅰ型雏鸭肝炎病毒侵染后鸭组织中ALB基因表达的分析 被引量:1
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作者 李秀 毕瑜林 +8 位作者 徐琪 赵文明 张扬 陈昌义 陈阳 黄正洋 甄霆 段修军 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期773-778,共6页
检测Ⅰ型雏鸭肝炎病毒侵染后ALB基因mRNA以及ALB蛋白分别在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、腿肌和胸腺等组织中的相对表达量和含量并分析其意义。分别利用实时荧光定量RT-PCR技术和ELISA法检测ALB基因在易感组、抗病组和对照组各... 检测Ⅰ型雏鸭肝炎病毒侵染后ALB基因mRNA以及ALB蛋白分别在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、腿肌和胸腺等组织中的相对表达量和含量并分析其意义。分别利用实时荧光定量RT-PCR技术和ELISA法检测ALB基因在易感组、抗病组和对照组各组织中mRNA的表达量以及ALB蛋白含量。总体而言,除腿肌外,ALB基因mRNA在易感组中的表达量极显著低于对照组和抗病组(P<0.01),抗病组显著或极显著低于对照组(P<0.01或P<0.05);各处理组间,肝、小脑和胸腺中ALB蛋白含量与ALB基因mRNA相对表达量规律一致,在其他组织中,各处理组间ALB蛋白含量差异均不显著(P>0.05)。RT-PCR与ELISA的结果比较可见,两者在肝脏、胸腺、小脑等与雏鸭肝炎病直接相关的指示性组织中表现一致。本试验研究结果,进一步揭示了ALB基因为Ⅰ型雏鸭肝炎病的抗性基因,与前期抑制性消减杂交法得到的结果一致,其表达量的变化可以作为区分易感鸭和抗病鸭的标志。 展开更多
关键词 ALB基因 实时荧光定量RT-PCR ELISA Ⅰ型雏鸭肝炎病毒
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鸭病毒性肝炎病毒JH2株感染雏鸭血清生化指标的动态变化
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作者 马秀丽 杨军 +3 位作者 于可响 林树乾 宋敏训 廖明 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第9期103-107,共5页
用1型鸭肝炎病毒山东分离株JH2人工感染3日龄健康樱桃谷雏鸭,对接种后1~5 d的血清酶、血糖及血脂等多项血清生化指标进行测定,结果表明:鸭肝炎病毒感染雏鸭1~2 d内丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性较未攻毒的对照组极显著... 用1型鸭肝炎病毒山东分离株JH2人工感染3日龄健康樱桃谷雏鸭,对接种后1~5 d的血清酶、血糖及血脂等多项血清生化指标进行测定,结果表明:鸭肝炎病毒感染雏鸭1~2 d内丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性较未攻毒的对照组极显著升高;碱性磷酸酶活性在接种后2~3 d内与对照组差异极显著;接种后1~5 d攻毒组总胆红素和间接胆红素的含量均低于对照组,其中接种后1、3、4 d时差异显著;攻毒组胆碱脂酶和甘油三脂在接种后1~2 d内较对照组极显著升高,胆固醇在整个试验中无明显变化;谷氨酰胺转移酶活性在接种后1~4 d内较对照组有极显著升高;乳酸脱氢酶活性1~3 d内较对照组极显著升高,而肌酸激酶活性虽高于对照组,但差异不显著;雏鸭在接种后1~3 d内表现出明显的低尿酸血症,接种后1 d肌酐含量较对照组显著升高;α-淀粉酶活性呈逐渐升高的趋势,但均低于对照组,接种后1~2d与对照组差异极显著;攻毒组总蛋白、白蛋白和球蛋白在整个试验期间表现为先升高后降低的趋势,血清葡萄糖在接种后1 d降至最低,与对照组差异极显著。 展开更多
关键词 雏鸭 鸭病毒性肝炎病毒 1 血清 生化指标
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Complete Genomic Sequence of a Chinese Isolate of Duck Hepatitis Virus 被引量:9
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作者 Guang-qing LIU Fei WANG +4 位作者 Zheng NI Tao YUN Bin YU Jiong-gang HUANG Jian-Ping CHEN 《中国病毒学》 CSCD 2007年第5期353-359,共7页
The complete genomic sequence of Duck hepatitis virus 1(DHV-1) ZJ-V isolate was sequenced and determined to be 7 691 nucleotides(nt) in length with a 5'-terminal un-translated region(UTR) of 626 nt and a 3'-te... The complete genomic sequence of Duck hepatitis virus 1(DHV-1) ZJ-V isolate was sequenced and determined to be 7 691 nucleotides(nt) in length with a 5'-terminal un-translated region(UTR) of 626 nt and a 3'-terminal UTR of 315 nt(not including the poly(A) tail).One large open reading frame(ORF) was found within the genome(nt 627 to 7 373) coding for a polypeptide of 2 249 amino acids.Our data also showed that the poly(A) tail of DHV-1 has at least 22 A's.Sequence comparison revealed significant homology(from 91.9% to 95.7%) between the protein sequences of the ZJ-V isolate and those of 21 reference isolates.Although DHV-1 has been classified as an unassigned virus in the Picornaviridae family,its genome showed some unique characteristics.DHV-1 contains 3 copies of the 2A gene and only 1 copy of the 3B gene,and its 3'-NCR is longer than those of other picornaviruses.Phylogenetic analysis to do sequence homology based on the VP1 protein sequences showed that the ZJ-V isolate shares high sequence homology with the reported DHV-1 isolates(from 92.9% to 99.2%),indicating that DHV-1 is genetically stable. 展开更多
关键词 全基因序列 鸭肝炎病毒 中国 隔离群
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