期刊文献+
共找到4篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区真核表达载体的构建及其在DK细胞中的表达 被引量:1
1
作者 袁子国 王晓虎 +3 位作者 徐慧娟 张守峰 扈荣良 张秀香 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期60-63,共4页
为了研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(rgp)膜外区在以糖蛋白为免疫原的免疫应答中的作用,提取RV的RNA,通过RT-PCR扩增RV糖蛋白膜外区1375 bp的序列,将其克隆入pMD18-T载体中,经测序比对正确后,通过酶切将其亚克隆入pVAX1表达载... 为了研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(rgp)膜外区在以糖蛋白为免疫原的免疫应答中的作用,提取RV的RNA,通过RT-PCR扩增RV糖蛋白膜外区1375 bp的序列,将其克隆入pMD18-T载体中,经测序比对正确后,通过酶切将其亚克隆入pVAX1表达载体的多克隆酶切位点处,将酶切鉴定正确的阳性重组子命名为pVAX-rgp,构建表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区的真核表达载体,在质脂体介导下转染DK细胞观察其表达情况。研究结果表明,经免疫荧光和Western blotting鉴定,有特异性荧光和60 ku条带产生,证明pVAX-rgp载体中的rgp可在DK细胞中表达。本研究通过成功构建狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区的真核表达载体,为下一步有关功能基因组的研究和基因疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒糖蛋白膜外区 真核表达 转染 dk细胞
下载PDF
端粒酶活性在哺乳动物细胞中的表达 被引量:1
2
作者 阮承迈 陈守义 +4 位作者 吴东林 李鹏 马鹤雯 马永红 张玉静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期66-68,共3页
为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染... 为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染和 TRAP- EL ISA定量方法测定转染细胞。结果显示 ,在人肝癌细胞株中仅 h TERT表达即可使端粒酶活性显著增加 ,而 DK细胞中 h TERT必须和 h TR同时转染才有端粒酶活性表达。这一结果表明 ,端粒酶活性表达主要和 h TERT/ h TR有关 ,采用人的端粒酶 h TERT/ h TR在其他哺乳动物细胞中表达端粒酶活性是可行的。 展开更多
关键词 端粒酶活性 哺乳动物细胞 表达 激活 dk细胞 人肝癌细胞
下载PDF
正常宫颈上皮细胞原代培养体系的改良 被引量:1
3
作者 李雅 荣守华 +3 位作者 智艳芳 樊婷婷 邱翠 李肖甫 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2017年第3期370-375,共6页
目的:探索一种高效、可重复的正常宫颈上皮细胞原代培养方法。方法:取60例正常宫颈组织,分成2组,分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA(中性蛋白酶联合法)及Ⅰ型胶原酶消化分离后进行原代培养,比较两种分离效果;观察采用... 目的:探索一种高效、可重复的正常宫颈上皮细胞原代培养方法。方法:取60例正常宫颈组织,分成2组,分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA(中性蛋白酶联合法)及Ⅰ型胶原酶消化分离后进行原代培养,比较两种分离效果;观察采用中性蛋白酶联合法消化不同时间对分离效果的影响。观察添加体积分数5%FBS dK-SFM培养基与单纯dK-SFM培养基培养原代宫颈上皮细胞的生长曲线差异,并用形态学、广谱角蛋白免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。结果:正常宫颈上皮细胞原代培养总成功率为40%。中性蛋白酶联合法成功率、分离所得细胞密度、原代细胞融合时间及细胞纯度均高于Ⅰ型胶原酶消化法(P<0.05)。中性蛋白酶消化20 h的分离效果优于消化16和24 h(P<0.05)。体积分数5%FBS dK-SFM培养基原代培养的宫颈上皮细胞增殖活性高于单纯dK-SFM培养基(P<0.05)。细胞生长状况良好,可在体外传代至5~6代,并可冻存与复苏,免疫细胞化学染色显示广谱角蛋白表达阳性。结论:Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA分离法和体积分数5%FBS dK-SFM培养基培养原代正常宫颈上皮细胞,高效、可重复性好。 展开更多
关键词 原代培养 宫颈上皮细胞 中性蛋白酶 角质细胞无血清培养基
下载PDF
犬2型腺病毒E1转化细胞的建立
4
作者 邱薇 夏咸柱 +6 位作者 范泉水 扈荣良 王雷 高玉伟 张守峰 孙阳 杨美峰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第4期65-70,共6页
为建立能表达犬 2型腺病毒 (CAV 2 )E1基因的辅助细胞 ,本研究用含CAV 2E1基因的重组质粒pc E1t对DK细胞进行转染 ,经G41 8的筛选 ,得到 2 6个细胞克隆。用CAV 2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RT PCR检测 ,PCR结果表明转染后的细胞... 为建立能表达犬 2型腺病毒 (CAV 2 )E1基因的辅助细胞 ,本研究用含CAV 2E1基因的重组质粒pc E1t对DK细胞进行转染 ,经G41 8的筛选 ,得到 2 6个细胞克隆。用CAV 2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RT PCR检测 ,PCR结果表明转染后的细胞克隆都能扩增出 5 3 6bp的特异性片段 ,但仅有 6株为RT PCR强阳性 ,能扩增出 6 5 2bp的特异带。再对RT PCR强阳性的细胞克隆进行Westernblot分析 ,最终挑选到一个既能转录E1A基因 ,又能表达E1B 1 9kD蛋白的克隆细胞株 (DK E1 )。 展开更多
关键词 犬2型腺病毒 E1基因 细胞克隆 表达载体 dk细胞系
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部