Pichia酵母宿主细胞DNA残留量检测方法的建立 被引量：5

1

作者 刘晓志 高健 +3 位作者 赵伟 刘艳玲 王志明 贾茜 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2012年第1期80-83,共4页

为检测重组人血白蛋白中外源性DNA残留量,以宿主酵母工程菌基因组DNA为模板,使用地高辛标记探针进行点杂交.结果证明:该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作安全简便,可用于重组人血白蛋白的检测.

关键词 地高辛 探针 dna残留量 重组人血白蛋白

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地高辛标记探针检测重组双功能水蛭素中的DNA残留量 被引量：2

2

作者 蔡旭 马端 +1 位作者 刘康达 宋后燕 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第6期392-394,共3页

为检测注射用重组双功能水蛭素半成品中的DNA残留量 ,应用地高辛标记重组双功能水蛭素工程菌DNA ,并以此为DNA探针进行点杂交 ,同时做特异性及灵敏度实验。结果证明 ,该方法检测最低限值可达1pg ,且重复性好 ,特异性强 ,操作较简便 。

关键词 地高辛标记探针 点杂交法 水蛭素 dna残留量

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地高辛标记DNA探针杂交法检测Vero细胞DNA残留量的适用性验证及应用 被引量：3

3

作者 孙小慧 刘晓凡 +6 位作者 赵雅静 马超 刘鹏 冯德杰 李薇 魏然 王革 《微生物学免疫学进展》 2016年第2期40-44,共5页

目的对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫... 目的对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的DNA残留量。结果地高辛标记探针的标记效率为0.1 pg。验证结果显示探针与非同源DNA无杂交;最低检测限度为1 pg;探针在-20℃放置7个月后,检测灵敏度仍可达到1 pg;3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中残留DNA含量均符合《中国药典》规定质量控制标准。结论地高辛标记DNA探针杂交法特异性、灵敏度好,结果稳定,适用于人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。 展开更多

关键词 地高辛 dna探针 斑点杂交 VERO细胞 dna残留量

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地高辛标记探针检测重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白宿主DNA残留量的研究 被引量：2

4

作者 蔡晓娜 王鹏 +4 位作者 贺晓强 刘立平 陈海容 郭晋霞 范开 《中国医药生物技术》 2014年第1期66-68,共3页

重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善... 重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善微循环，是一种有前景的心脑血管疾病治疗创新药物， 展开更多

关键词 白细胞抑制因子 嵌合蛋白 dna残留量 水蛭肽 地高辛标记 探针检测 重组 宿主

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地高辛标记探针检测重组人干扰素β_(1b)中DNA残留量 被引量：5

5

作者 刘君 张振龙 《微生物学免疫学进展》 2007年第2期19-21,共3页

为检测注射用重组人干扰素β1b半成品中外源性DNA残留量,以重组人干扰素β1b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,并以此探针进行点杂交。结果证明,该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作较安全简便,可用于重组人干扰素β1b制备过... 为检测注射用重组人干扰素β1b半成品中外源性DNA残留量,以重组人干扰素β1b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,并以此探针进行点杂交。结果证明,该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作较安全简便,可用于重组人干扰素β1b制备过程中的质量监控及半成品的检定。 展开更多

关键词 地高辛 探针 dna残留量 重组人干扰素β1b

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地高辛标记探针检测重组人干扰素α2b中DNA残留量的研究 被引量：2

6

作者 王淼 《广东药学院学报》 CAS 2009年第1期56-58,共3页

目的建立检测注射用重组人干扰素α2b半成品中外源性DNA残留量的方法。方法以重组人干扰素α2b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。结果半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于10 ng。结论该方法... 目的建立检测注射用重组人干扰素α2b半成品中外源性DNA残留量的方法。方法以重组人干扰素α2b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。结果半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于10 ng。结论该方法检测特异性较强,操作较安全简便,可用于重组人干扰素α2 b制备过程中的质量监控及半成品的检定。 展开更多

关键词 地高辛 dna残留量 重组人干扰素Α2B

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荧光染色法测定生物制品中DNA残留量的研究 被引量：1

7

作者 王秋红 郑绍红 《海峡药学》 2016年第6期66-68,共3页

目的对荧光染色法测定生物制品中的DNA残留量进行初步的研究和分析,确定该方法用于DNA质量控制的可行性。方法依据《中国药典》2010年版三部附录ⅨB《外源性DNA残留量测定法》之荧光染色法。结果该方法的线性、重复性、回收率均能满足... 目的对荧光染色法测定生物制品中的DNA残留量进行初步的研究和分析,确定该方法用于DNA质量控制的可行性。方法依据《中国药典》2010年版三部附录ⅨB《外源性DNA残留量测定法》之荧光染色法。结果该方法的线性、重复性、回收率均能满足生物制品中DNA残留量检测的要求,如果用作生物制品行业适用的检测方法,应制备统一的DNA标准品。结论该方法具有简便、快速、可定量分析等优点,可基本满足生物制品行业对DNA残留量质量控制的要求。 展开更多

关键词 荧光染色法 PicoGreen试剂 dna残留量

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地高辛标记探针检测重组定点突变巴曲酶蛋白宿主DNA残留量的研究 被引量：1

8

作者 李娜 徐梅 +4 位作者 杨宇 张宏杰 薛雁 王宏英 薛百忠 《蛇志》 2013年第3期257-259,共3页

目的建立检测重组定点突变巴曲酶原液中外源性DNA残留量的方法。方法从重组定点突变巴曲酶酵母工程菌提取基因组DNA作为模板,制备地高辛标记探针。此探针与样品进行点样杂交,并进行显色反应。结果 3批重组定点突变巴曲酶原液中,每人份... 目的建立检测重组定点突变巴曲酶原液中外源性DNA残留量的方法。方法从重组定点突变巴曲酶酵母工程菌提取基因组DNA作为模板,制备地高辛标记探针。此探针与样品进行点样杂交,并进行显色反应。结果 3批重组定点突变巴曲酶原液中,每人份剂量的宿主DNA残留量均<10ng。结论该方法检测灵敏度较好,特异性较强,可用于重组定点突变巴曲酶的检测。 展开更多

关键词 重组定点突变巴曲酶 地高辛 探针 dna残留量

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地高辛探针检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的研究 被引量：5

9

作者 汪洁 卢雪梅 +2 位作者 黄演婷 金小宝 朱家勇 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期80-83,共4页

目的:建立检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的方法,根据此法检测3批重组肝靶向干扰素每人份剂量宿主DNA残留量。方法:以重组肝靶向干扰素工程菌基因组DNA为模板,并制备探针,用此标记探针对3批重组产品进行DNA残留量检测。结果:3批次... 目的:建立检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的方法,根据此法检测3批重组肝靶向干扰素每人份剂量宿主DNA残留量。方法:以重组肝靶向干扰素工程菌基因组DNA为模板,并制备探针,用此标记探针对3批重组产品进行DNA残留量检测。结果:3批次重组肝靶向干扰素原液每人份剂量宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:地高辛标记探针斑点杂交检测DNA残留量具有特异性强,灵敏度高,重现性好,操作简单,能快速高效检定重组肝靶向干扰素原液并对其制备过程进行质量监控。 展开更多

关键词 地高辛 重组肝靶向干扰素 斑点杂交 dna残留量

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蛋白酶消化结合荧光定量PCR法和杂交法检测重组人胰岛素中E.coli细胞DNA残留量的比较 被引量：1

10

作者 王杰 吕萍 +4 位作者 张慧 李晶 丁晓丽 魏云林 梁成罡 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期846-851,共6页

目的:利用蛋白酶K消化结合荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)技术,检测重组人胰岛素原料中E.coli细胞DNA残留量,并进行初步的方法学验证,与狭缝杂交-放射自显影方法进行比较。方法:通过蛋白酶K消化样品,利用核酸纯化提取试剂盒提取DNA,然... 目的:利用蛋白酶K消化结合荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)技术,检测重组人胰岛素原料中E.coli细胞DNA残留量,并进行初步的方法学验证,与狭缝杂交-放射自显影方法进行比较。方法:通过蛋白酶K消化样品,利用核酸纯化提取试剂盒提取DNA,然后采用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,再根据标准曲线对样品中DNA残留量进行分析。对方法进行线性、范围、准确度和精密度的验证,对重组人胰岛素中DNA残留量进行测定。结果:该方法检测E.coli细胞DNA残留的最低定量限度为0.03 pg·μL^(-1),DNA含量在0.03~2.25×10~3 pg·μL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数在0.98以上;该方法检测不同加标样品回收率较接近,3次测定的相对标准偏差均小于20%;该方法检测各批次重组人胰岛素的DNA残留量均小于10 ng·剂量^(-1),而狭缝杂交——放射自显影法50 pg(标准DNA)均未出现条带。结论:蛋白酶消化结合试剂盒洗脱解决了残留DNA检测中样品前处理的难题,定量PCR检测可能代替杂交法,快速、准确、灵敏地对重组人胰岛素原料中E.coli细胞残余DNA进行定量测定,为将来荧光定量PCR检测药物中宿主DNA残留方法标准化奠定了基础。 展开更多

关键词 蛋白酶消化 定量聚合酶链式反应(q-PCR) 狭缝杂交 重组人胰岛素 E.coli细胞 dna残留量比较

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地高辛标记探针检测重组RMBAYL多肽DNA残留量的研究

11

作者 马义 洪岸 谢秋玲 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第6期540-544,共5页

为了建立标记探针检测基因重组RMBAYL多肽DNA残留量的方法,以基因重组技术和固相柱纯化技术制备重组PACAP衍生多肽RMBAYL,以工程菌总DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。实验结果表明,3批重组RMBAYL半成品中每人... 为了建立标记探针检测基因重组RMBAYL多肽DNA残留量的方法,以基因重组技术和固相柱纯化技术制备重组PACAP衍生多肽RMBAYL,以工程菌总DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。实验结果表明,3批重组RMBAYL半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于100 Pg。研究的实验方案可实现重组PACAP衍生多肽RMBAYL的高效表达和纯化,地高辛标记探针技术检测外源性DNA灵敏度高、稳定性强,可用于RMBAYL等重组PACAP衍生多肽制备过程中的质量监控及半成品的快速、高效检定。 展开更多

关键词 地高辛 dna残留量 基因重组 PACAP衍生多肽

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特立帕肽宿主DNA残留量检测方法研究

12

作者 吕萍 辛中帅 梁成罡 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期668-671,共4页

目的:对特立帕肽宿主DNA残留量进行了方法学研究,为该品种的质控标准提供依据。方法:根据中国药典2010年版三部的方法,分别对10 dose.mL-1和1 dose.mL-1 2个样品浓度的宿主DNA残留量检测进行了方法学研究。结果:研究表明特立帕肽原液2... 目的:对特立帕肽宿主DNA残留量进行了方法学研究,为该品种的质控标准提供依据。方法:根据中国药典2010年版三部的方法,分别对10 dose.mL-1和1 dose.mL-1 2个样品浓度的宿主DNA残留量检测进行了方法学研究。结果:研究表明特立帕肽原液2个浓度的宿主DNA残留检测均符合系统适用性要求。特立帕肽注射液的10 dose.mL-1浓度对加样回收有一定干扰,不能保证加样回收测定均符合规定,而1 dose.mL-1浓度的注射液在10 ng和1 ng的加样回收均没有干扰,因此将1 dose.mL-1样品浓度作为宿主DNA残留量检测浓度。对1 dose.mL-1样品浓度分别进行了1 ng、0.1 ng的加样回收测定,结果均符合要求。对3批特立帕肽原液和注射液检测结果表明每1剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法检测灵敏度较高,特异性较强,操作较安全简便,可用于特立帕肽的质量评价及进口检定。 展开更多

关键词 重组人甲状旁腺激素 特立帕肽 原液 注射液 宿主dna残留量 dna探针杂交法 方法学研究

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地高辛标记探针检测重组人p43蛋白宿主DNA残留量的研究 被引量：9

13

作者 黄相红 胡立德 +2 位作者 梁文璐 谭小钉 刘大涛 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期356-359,共4页

目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组DNA为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残留量... 目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组DNA为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法灵敏度高,特异性强,重复性好,操作安全简便,可用于重组人p43制备过程中的原液检定及质量监控。 展开更多

关键词 dna残留量 地高辛 重组人p43蛋白 斑点杂交

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重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测

14

作者 侯慧丽 王艺诺 +3 位作者 汤晓闯 梁明征 马杉姗 韩成权 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期667-670,共4页

目的建立特异的重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用磁珠分离法提取样品中残留的CHO细胞DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行Q-PCR检测,根据标准曲线进行DNA残留量分析。对建立的... 目的建立特异的重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用磁珠分离法提取样品中残留的CHO细胞DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行Q-PCR检测,根据标准曲线进行DNA残留量分析。对建立的方法进行专属性、准确性、重复性及中间精密度验证,并对重组人凝血因子Ⅷ原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果该方法 DNA浓度在0.003~300 pg/μL范围内,线性关系良好,R2为0.999,灵敏度可达0.003 pg/μL;对大肠埃希菌DNA无特异性扩增曲线,专属性良好;检测高、中、低浓度DNA加标量样品的回收率分别为82.68%、71.75%和72.67%,准确性良好;重复性检测的RSD为7.02%,中间精密度检测的RSD为9.31%,重复性及精密度良好。用该方法检测的3批重组人凝血因子Ⅷ原液的DNA残留量均远低于100 pg/剂量。结论成功建立了特异的CHO细胞DNA残留量的检测方法,该方法专属性好,准确性及精密度高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。 展开更多

关键词 人凝血因子Ⅷ CHO细胞 dna残留量 荧光定量PCR

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康柏西普制品中CHO细胞DNA残留量的检测 被引量：5

15

作者 牛冬云 连炜 +2 位作者 何静 邬智刚 柯潇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第7期1023-1026,共4页

目的建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR（Q-PCR）检测方法。方法采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品;确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确... 目的建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR（Q-PCR）检测方法。方法采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品;确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确性及精密性;用建立的方法对1003b02、1008b05、1012b09、1104b04、1108b13、1112b24批康柏西普原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果建立的标准曲线Ct值与模板DNA浓度的对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.99以上;检测HUVEC、HEK293细胞的DNA残留量均无特异性扩增曲线;检测高、中、低浓度的DNA标准品（105、103、101pg/ml）的平均回收率均在Q-PCR方法可接受的回收率范围（50%~200%）内,批间变异系数分别为9.3%、21.8%、26.8%;检测100pg/ml浓度的DNA标准品的平均回收率为111.6%,变异系数为20.4%;康柏西普原液的DNA残留量远低于100 pg/剂量。结论已成功建立特异的CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,该方法专属性好,准确性及精密性高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。 展开更多

关键词 CHO细胞 dna残留量 荧光定量PCR

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大肠埃希菌DNA质控品的研制

16

作者 夏雪 徐洁茹 +3 位作者 王尚君 季红梅 黄蓓 燕茹 《工业微生物》 CAS 2024年第2期19-22,共4页

研制大肠埃希菌DNA残留量测定所用质控品。抽提大肠埃希菌基因组DNA作为质控品原料,通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量测定,采用紫外分光光度法和定量PCR法检测其均匀性和稳定性,并评价其加标回收率。经检测,A_(260)/A_(280)均在1... 研制大肠埃希菌DNA残留量测定所用质控品。抽提大肠埃希菌基因组DNA作为质控品原料,通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量测定,采用紫外分光光度法和定量PCR法检测其均匀性和稳定性,并评价其加标回收率。经检测,A_(260)/A_(280)均在1.8~2.0之间,电泳图谱条带单一,无RNA和寡核苷酸存在。应用紫外分光光度法和定量PCR法对质控品进行均匀性和稳定性检测,统计结果表明,质控品均匀性良好;在-20℃的保存条件下,半年内未发现不稳定现象;在25℃的保存条件下,7 d内未发现不稳定现象。进行定量PCR法测定,在10^(-2)~10^(3)pg之间线性良好,标准曲线R值为0.997,斜率为-3.65,同时每组加标样品的回收率在70%~130%之间,S_(RSD)≤20%。该批大肠杆菌DNA质控品各项指标均符合要求,可作为质控品用于定量PCR检测大肠埃希菌的DNA残留量,含量定为111.73μg/mL。 展开更多

关键词 大肠杆菌dna 质控品 dna残留量 定量聚合酶链式反应法

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定量PCR法和DNA杂交法检测聚乙二醇修饰尿酸酶原液中DNA残留量的比较

17

作者 霍晶晶 武小琪 +2 位作者 郭勇 姚继鹏 张淳 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第14期1868-1873,共6页

目的建立快速准确的聚乙二醇修饰重组尿酸酶(PEGylated uricase,PEG-UHC)原液DNA残留量测定法,为其他多位点PEG修饰蛋白药物的DNA残留量检测提供参考。方法参照中国药典2020年版三部“外源性DNA残留量检测法”第一法DNA探针杂交法和第... 目的建立快速准确的聚乙二醇修饰重组尿酸酶(PEGylated uricase,PEG-UHC)原液DNA残留量测定法,为其他多位点PEG修饰蛋白药物的DNA残留量检测提供参考。方法参照中国药典2020年版三部“外源性DNA残留量检测法”第一法DNA探针杂交法和第三法定量PCR法,检测PEG-UHC原液DNA残留量;对定量PCR法进行检测限度、线性范围、准确度和精密度等方法学验证;进行3批次PEG-UHC原液DNA残留量测定。结果探针杂交法DNA残留量测定线性范围为1×10^(-4)~0.1 ng·μL^(-1),3批次PEG-UHC原液未见明显显色,DNA残留量均低于每剂10 ng。PCR法检测限度为1×10^(-5) ng·μL^(-1),DNA浓度在1×10^(-4)~100 ng·μL^(-1)内线性关系良好(R^(2)=0.999)。不同浓度的标准DNA在PEG-UHC原液中的回收率范围为92.57%~114.17%,表明PEG偶联物对定量PCR影响较小。3批次PEG-UHC原液中DNA残留量分别为每剂0.143,0.187,0.154 ng,符合国家药品监督管理局限量要求。结论DNA探针杂交法为传统定性检测,耗时较长,准确度较低。定量PCR法操作简便快速、灵敏度高,且可定量分析,适于PEG-UHC等多位点PEG修饰蛋白药物DNA残留量测定。 展开更多

关键词 dna残留量 定量PCR法 探针杂交法 PEG修饰尿酸酶

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地高辛标记探针检测重组人干扰素α2b中DNA残留量的研究

18

作者 赵喜红 王延涛 《按摩与康复医学》 2011年第17期54-54,共1页

目的：建立检测注射用重组人干扰素α2b半成品中外源性DNA残留量的方法.方法：以重组人干扰素α2b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应.结果：半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于10ng.结论：该... 目的：建立检测注射用重组人干扰素α2b半成品中外源性DNA残留量的方法.方法：以重组人干扰素α2b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应.结果：半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于10ng.结论：该方法检测特异性较强,敏感性高,操作较安全简便,可用于重组人干扰素α2b制备过程中的质量监控及半成品的检测. 展开更多

关键词 地高辛 dna残留量 重组人干扰素Α2B

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生物技术药物中宿主DNA残留Q-PCR检测法的方法验证 被引量：1

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作者 刘晓志 张斌 +3 位作者 赵伟 魏敬双 王志明 高健 《中国医药生物技术》 2016年第1期69-73,共5页

自20世纪50年代,用于生产生物技术药物的细胞基质一直因其安全性而备受关注,生产用基质细胞经历了从原代细胞,二倍体细胞到传代细胞的发展历程,人们对其潜在风险的认识也在不断变化。虽然,至今没有因为生物制品中DNA残留量而引发不良反... 自20世纪50年代,用于生产生物技术药物的细胞基质一直因其安全性而备受关注,生产用基质细胞经历了从原代细胞,二倍体细胞到传代细胞的发展历程,人们对其潜在风险的认识也在不断变化。虽然,至今没有因为生物制品中DNA残留量而引发不良反应或安全事故,但其用量随着临床治疗的需求越来越大,需要长期反复用药的生物制品也越来越多,同时,疫苗的使用者为健康人群,这些都使得药品监管部门更加重视生物技术产品的安全性，其中DNA残留量的质量控制一直是人们关注的热点。 展开更多

关键词 dna残留量 生物技术药物 PCR检测法 宿主 生物技术产品 药品监管部门 生物制品 二倍体细胞

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一种磁珠提取结合实时荧光定量核酸扩增定量检测重组人血白蛋白中毕赤酵母DNA残留方法的建立 被引量：2

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作者 王敏力 马秋平 侯继锋 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期804-807,共4页

目的探索利用磁珠提取法结合实时荧光定量核酸扩增技术,建立定量测定毕赤酵母来源重组人血白蛋白中残留DNA的方法。方法将蛋白裂解后采用磁珠提取法提取样品中的残留DNA,利用Taqman探针法对样品和DNA标准品进行定量PCR测定,根据标准曲... 目的探索利用磁珠提取法结合实时荧光定量核酸扩增技术,建立定量测定毕赤酵母来源重组人血白蛋白中残留DNA的方法。方法将蛋白裂解后采用磁珠提取法提取样品中的残留DNA,利用Taqman探针法对样品和DNA标准品进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量进行分析。采用重组人血白蛋白和血浆来源人血白蛋白2种基质对建立的方法进行回收率和重复性测定,评价方法准确性及精密度,并测定毕赤酵母来源重组人血白蛋白产品中残留DNA含量。结果该方法测定毕赤酵母DNA残留最低准确定量浓度为3 fg·μL^(-1),DNA含量在3 fg·μL^(-1)～300 pg·μL^(-1)内曲线线性良好,标准曲线相关系数r^2为0.998 3;以重组人血白蛋白作为基质时,100和10fg·μL^(-1)DNA加标回收率均值分别为93.58%(n=4)和215.56%(n=4);相对标准偏差RSD分别为19.6%及42.9%;以人血白蛋白作为基质时,100和10 fg·μL^(-1)DNA加标回收率均值分别为67.09%(n=3)和113.40%(n=3);相对标准偏差RSD分别为6.9%和11.1%。按该方法检测毕赤酵母来源的3批重组人血白蛋白DNA残留量均值(n=7)分别为5.98、4.16和4.49 fg·μL^(-1)(n=7);3批样品DNA残留量均小于1 ng·10 g(Pro)^(-1)。结论磁珠分离法结合荧光定量PCR方法可解决超高蛋白浓度背景下重组人血白蛋白痕迹量DNA定量测定的技术难题,准确性和重现性良好,可以用于重组人血白蛋白毕赤酵母DNA残留量的定量检测。 展开更多

关键词 重组人血白蛋白 dna残留量 磁珠提取 实时荧光定量核酸扩增 质量控制 毕赤酵母

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