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补阳还五汤提高血管性痴呆大鼠海马CREB、C/EBP的DNA结合活性 被引量：11
1
作者 张泓波 高维娟 +2 位作者 钱涛 唐敬龙 李君 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1166-1170,共5页
目的观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马CREB(cAMP反应元件结合蛋白)、C/EBP(CCAAT/增强子结合蛋白)DNA结合活性的影响。方法实验分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组。采用改良的4血管法制备血管性痴呆模型,分别给予生理... 目的观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马CREB(cAMP反应元件结合蛋白)、C/EBP(CCAAT/增强子结合蛋白)DNA结合活性的影响。方法实验分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组。采用改良的4血管法制备血管性痴呆模型,分别给予生理盐水、补阳还五汤、尼莫地平灌胃干预,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)测定各组大鼠CREB和C/EBP的DNA结合活性。结果与假手术组比较,模型组大鼠海马组织CREB的DNA结合活性明显降低(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组与补阳还五汤组明显升高(P<0.01);尼莫地平组与补阳还五汤组之间差异无显著性(P>0.05)。结论补阳还五汤可提高VD大鼠海马组织CREB、C/EBP与DNA的结合活性。 展开更多
关键词 补阳还五汤 血管性痴呆 海马组织 CAMP反应元件结合蛋白 CCAAT/增强子结合蛋白 dna结合活性
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丹参对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区AP-1 DNA结合活性的影响 被引量：13
2
作者 沈霞 崔桂云 +5 位作者 张璐 刘永海 葛巍 张尊胜 耿德勤 花放 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期422-424,共3页
目的　探讨丹参对活化蛋白 1(AP 1)在缺血性脑损伤中的影响及其神经保护作用的机制。方法　采用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型 ,用EMSA法和组织化学法观察海马CA1区AP 1的DNA结合活性以及神经元形态改变。结果　 (1)缺血... 目的　探讨丹参对活化蛋白 1(AP 1)在缺血性脑损伤中的影响及其神经保护作用的机制。方法　采用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型 ,用EMSA法和组织化学法观察海马CA1区AP 1的DNA结合活性以及神经元形态改变。结果　 (1)缺血再灌 3h ,丹参能不同程度的增加AP 1的结合活性 ,其中R6 0组较NS组明显增强 (P <0 0 5 ) ,R3 0组也有增强 ,活性由假手术组的 2 8倍增加为 3 0倍 ,但较NS组无显著性差异。同时RSM能不同程度的减轻再灌 72h和 7d的神经元损伤 ,CA1区存活细胞数目较NS组明显增加 (P <0 0 5 )。结论　丹参能明显提高缺血后海马CA1区AP 1的DNA结合活力 ,丹参的神经保护作用可能与其调节AP 1的DNA结合活力有关。 展开更多
关键词 丹参 大鼠 全脑缺血再灌注 海马CA1区 AP-1 dna结合活性 活化蛋白-1 缺血性脑血管病
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慢性鼻-鼻窦炎黏膜组织中核因子-κB的表达及其与DNA结合活性的研究 被引量：12
3
作者 李同丽 李源 +2 位作者 张革化 孙亚男 李永奇 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第8期489-492,共4页
目的 探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中的表达及活性状态。方法 采用免疫组化方法检测18份慢性鼻-鼻窦炎钩突黏膜NF-κB亚单位P50、p65的表达,并与10份中鼻道侧中鼻甲黏膜对照;同时采用凝胶电泳迁移率... 目的 探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中的表达及活性状态。方法 采用免疫组化方法检测18份慢性鼻-鼻窦炎钩突黏膜NF-κB亚单位P50、p65的表达,并与10份中鼻道侧中鼻甲黏膜对照;同时采用凝胶电泳迁移率法检测慢性鼻-鼻窦炎黏膜组织中核蛋白提取物与特异性NF-κB探针的结合活性。结果 p50主要位于上皮细胞和腺上皮细胞的胞核和胞质,p65则主要位于上皮细胞的胞质,偶见于胞核。慢性鼻-鼻窦炎组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率是7.8％-52.1％,平均为23％;对照组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率仅0.7％。2组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率间比较差异有显著意义(x2=22.917,P<0.01)。慢性鼻-鼻窦炎组NF-κB的DNA结合的32P标记电泳带密度扫描值为28.14±16.71,与对照组(9.28±2.84)比较,差异有显著意义(t=4.56,P<0.05)。结论 NF-κB在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中表达显著增强,且其与DNA-蛋白结合活性显著增高,提示慢性鼻-鼻窦炎黏膜炎症反应中NF-κB被激活。 展开更多
关键词 慢性鼻炎 慢性鼻窦炎 黏膜组织 核因子-ΚB dna结合活性 病理特征
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氯化甲基汞对发育阶段大鼠小脑转录因子CREB DNA结合活性的影响 被引量：3
4
作者 郭杰 董丽波 +1 位作者 张春霞 李志超 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期338-340,共3页
目的 :探讨氯化甲基汞 ( MMC)对发育大鼠小脑组织转录因子 CREB DNA结合活性的影响。方法 :将妊娠大鼠于妊娠 7～ 1 0 d连续 4d每日灌胃给予氯化甲基汞 4mg· kg-1,取生后 1、3、7、1 4d大鼠小脑组织提取核蛋白。采用凝胶移位法观察... 目的 :探讨氯化甲基汞 ( MMC)对发育大鼠小脑组织转录因子 CREB DNA结合活性的影响。方法 :将妊娠大鼠于妊娠 7～ 1 0 d连续 4d每日灌胃给予氯化甲基汞 4mg· kg-1,取生后 1、3、7、1 4d大鼠小脑组织提取核蛋白。采用凝胶移位法观察 MMC对发育阶段大鼠小脑转录因子CREB DNA结合活性的影响。结果 :对照组和实验组各发育阶段小脑组织 CREB在凝胶移位电泳中均呈现两条迟滞带 ;对照组和实验组 P1 - 7大鼠幼仔小脑 CREB DNA结合活性随生后发育时间延长呈下降趋势 ;实验组大鼠幼仔小脑 CREB DNA结合活性均高于相应对照组。结论 :CREB参与大鼠脑发育的调节 ;甲基汞所致发育脑组织损伤可能与其引起 CREB DNA结合活性升高有关。 展开更多
关键词 氯化甲基汞 CREB dna结合活性 神经毒性 脑损伤 发育脑
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脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和海马组织CREB、C/EBP的DNA结合活性改变 被引量：4
5
作者 张泓波 高维娟 +2 位作者 钱涛 唐敬龙 李君 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1559-1561,共3页
目的观察脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和海马组织环磷酸腺苷反应(cAMP)元件结合蛋白(CREB)及CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)的DNA结合活性改变。方法采用4血管法制备大鼠缺血再灌注损伤模型,用水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马... 目的观察脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和海马组织环磷酸腺苷反应(cAMP)元件结合蛋白(CREB)及CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)的DNA结合活性改变。方法采用4血管法制备大鼠缺血再灌注损伤模型,用水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马CA1区神经元形态改变,凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)测定CREB和C/EBP的DNA结合活性。结果水迷宫检测:与假手术组术比较,模型组大鼠逃逸潜伏期明显延长(P<0.05),跨越平台次数明显减少(P<0.05)。HE染色:假手术组大鼠海马CA1区神经元排列整齐、均匀,细胞结构完整;模型组大鼠海马CA1区部分神经元正常结构消失,胞核区域浓染,出现凝固性坏死及细胞脱失,海马CA1区正常神经细胞数目较假手术组明显减少(P<0.05)。EMSA检测:模型组大鼠海马组织CREB和C/EBP的DNA结合活性均较假手术组显著降低(P<0.01)。结论 CREB和C/EBP的DNA结合活性下降可能参与了脑缺血再灌注损伤引起的神经元损伤和学习记忆能力下降。 展开更多
关键词 脑缺血再灌注 CAMP反应元件结合蛋白 CCAAT/增强子结合蛋白 dna结合活性
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电针对CFA大鼠脊髓背角CREB的DNA结合活性影响研究 被引量：3
6
作者 杜俊英 房军帆 +1 位作者 梁宜 方剑乔 《中华中医药学刊》 CAS 2014年第1期50-53,I0002,共5页
目的:观察电针对CFA大鼠脊髓背角环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的干预作用以探讨电针的镇痛机制。方法:清洁级健康雄性SD大鼠按完全随机分为空白对照组(N组),模型对照组(CFA组)和电针治疗组(EA组),CFA组和EA组大鼠通过... 目的:观察电针对CFA大鼠脊髓背角环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的干预作用以探讨电针的镇痛机制。方法:清洁级健康雄性SD大鼠按完全随机分为空白对照组(N组),模型对照组(CFA组)和电针治疗组(EA组),CFA组和EA组大鼠通过足底内注射弗氏完全佐剂(CFA)建立炎症痛模型,EA组大鼠于造模后5.5 h选取双侧"足三里"、"昆仑"穴进行电针治疗。分别观察造模前、造模后5 h、6 h、2 d、7 d和14 d六个时点的足跖容积和痛阈(PWTs),及造模后6 h、2 d和14 d患侧脊髓背角CREB的DNA结合活性。结果:与N组大鼠比较,造模后各时间点,CFA组大鼠足跖显著肿胀,PWTs明显降低,CREB的DNA结合活性增加;造模后各时间点,EA组大鼠PWTs均显著高于同期CFA组,CREB的DNA结合活性减少,但足跖容积未见明显改变。结论:电针具有良好的镇痛作用,且其镇痛作用可能与调节脊髓背角CREB的DNA结合活性相关。 展开更多
关键词 电针 CREB的dna结合活性 炎性痛 镇痛
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降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区活化蛋白-1 DNA结合活性的影响 被引量：3
7
作者 张璐 沈霞 +2 位作者 崔桂云 花放 耿德勤 《徐州医学院学报》 CAS 2003年第1期13-16,共4页
探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)对活化蛋白 - 1(AP - 1)在缺血性脑损伤中的影响及其神经保护作用的机制。方法　采用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型 ,用EMSA法和组织化学法观察海马CA1区AP - 1的DNA结合活性以及神经元形态... 探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)对活化蛋白 - 1(AP - 1)在缺血性脑损伤中的影响及其神经保护作用的机制。方法　采用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型 ,用EMSA法和组织化学法观察海马CA1区AP - 1的DNA结合活性以及神经元形态改变。结果　①缺血再灌 3h ,CGRP能不同程度的增加AP - 1的结合活性 ,其中C4.0组较NS组明显增强 (P <0 .0 5 ) ,C2 .0组也有增强 ,活性由假手术组的 2 .7倍增加为 3 .1倍 ,但较NS组无显著性差异。同时CGRP能不同程度的减轻再灌 72h和 7d的神经元损伤 ,CA1区存活细胞数目较NS组明显增加 (P <0 .0 5 )。结论　CGRP能明显提高缺血后海马CA1区AP - 1的DNA结合活力 ,CGRP的神经保护作用可能与其调节AP - 展开更多
关键词 降钙素基因相关肽 大鼠 脑缺血再灌注 海马CA1区 活化蛋白-1 dna结合活性 影响
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鼠疫菌重要调控子蛋白的表达纯化及DNA结合活性分析 被引量：2
8
作者 罗张 高鹤 +5 位作者 张义全 王丽 谭亚芳 郭兆彪 杨瑞馥 周冬生 《生物技术通讯》 CAS 2011年第4期468-473,共6页
目的:利用大肠杆菌BL21(λDE3)的表达系统,表达7个有活性的、与鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)传播及致病密切相关的调控子蛋白,并对这些蛋白与DNA的结合活性进行分析,为构建鼠疫菌毒力基因转录调控网络建立分子生化实验平台。方法:通过分子克隆... 目的:利用大肠杆菌BL21(λDE3)的表达系统,表达7个有活性的、与鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)传播及致病密切相关的调控子蛋白,并对这些蛋白与DNA的结合活性进行分析,为构建鼠疫菌毒力基因转录调控网络建立分子生化实验平台。方法:通过分子克隆技术构建鼠疫菌调控子蛋白的表达菌株,所得菌株经IPTG诱导后能分别表达鼠疫菌CRP、Fur、PhoP、OxyR、OmpR、RcsB和RovA带His标签的融合蛋白;对这些蛋白与DNA的结合基序进行生物信息学预测;通过体外凝胶迁移实验验证上述蛋白与靶DNA的结合活性。结果:表达了7种有活性的鼠疫菌调控子蛋白,这些蛋白与靶基因启动子区具有体外结合活性。结论:表达的7种调控子蛋白在鼠疫菌的传播致病中有重要作用,这些调控子蛋白与DNA体外结合实验平台的建立,是构建鼠疫菌毒力基因转录调控网络的基础。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 调控蛋白 dna结合活性
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穿膜肽-LacI HPM载体的构建及其DNA结合活性测定 被引量：1
9
作者 绳纪坡 张宏达 +2 位作者 于芳 黄君健 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2013年第6期778-781,共4页
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,构建新型基因转导载体。方法:PCR扩增LacI、LacI基因前头肽序列、前头肽序列突变体、TAT序列的编码基因,构建前头肽序列突变体和TAT的原核表达载体... 目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,构建新型基因转导载体。方法:PCR扩增LacI、LacI基因前头肽序列、前头肽序列突变体、TAT序列的编码基因,构建前头肽序列突变体和TAT的原核表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,在缓冲液中氧化获得TATLacI HPM二聚体并浓缩,PCR检测二聚体融合蛋白与质粒的体外结合能力。结果:获得了pET-28a(+)-LacI HPM及pET-28a(+)-TAT-LacI HPM表达质粒,表达纯化并获得二聚化融合蛋白,体外结合实验确定TAT-LacI HPM二聚体融合蛋白与检测质粒DNA具有特异的高亲和力结合活性。结论:构建了穿膜肽TAT-LacI HPM,为进一步研究其作为新型DNA转运载体的可行性奠定了基础。 展开更多
关键词 穿膜肽 LACI LacI前头肽突变体 dna结合活性
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N-乙酰半胱氨酸对脑缺血诱导信号转导与转录激活子-3的磷酸化及DNA结合活性的影响 被引量：1
10
作者 李洪春 张光毅 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期391-393,共3页
目的　研究抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸对全脑缺血诱导海马组织信号转导与转录激活子 - 3(STAT3)的激活及 DNA结合活性的影响。方法　采用 SD雄性大鼠四动脉结扎 (4- VO)全脑缺血模型 ,以及腹腔注射给药的方法。运用抗磷酸化 STAT3抗体做... 目的　研究抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸对全脑缺血诱导海马组织信号转导与转录激活子 - 3(STAT3)的激活及 DNA结合活性的影响。方法　采用 SD雄性大鼠四动脉结扎 (4- VO)全脑缺血模型 ,以及腹腔注射给药的方法。运用抗磷酸化 STAT3抗体做免疫印迹 (IB)检测海马核抽提物磷酸化 STAT3的变化 ;以及电泳迁移率改变实验 (EMSA)分析核内 STAT3DNA结合活性的变化。结果　全脑缺血不同时间导致核内 STAT3磷酸化水平及 DNA结合活性的持续增高 ;缺血前 2 0 m in腹腔注射抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸能明显抑制其增高。结论　全脑缺血所致 STAT3的磷酸化水平及 DNA结合活性的增高与氧化应激有一定的关系。 展开更多
关键词 N-乙酰半胱氨酸 脑缺血 酪氨酸磷酸化 信号转导与转录激活子-3 dna结合活性
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小鼠烧伤早期肝组织AP-1 DNA结合活性的变化
11
作者 李军 张薏 +6 位作者 孙充洲 粟永萍 楼淑芬 徐贵森 代雪梅 周乐顺 安虹 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期206-207,共2页
目的　观察烧伤小鼠早期肝组织AP - 1DNA结合活性的时相变化特点 ,初步探讨烧伤早期应激和炎症反应的分子机制。方法　将 36只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组 ,实验组给予背部Ⅲ度 15 %～ 2 0 %烧伤。分别于伤后 2、4、6、12、2... 目的　观察烧伤小鼠早期肝组织AP - 1DNA结合活性的时相变化特点 ,初步探讨烧伤早期应激和炎症反应的分子机制。方法　将 36只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组 ,实验组给予背部Ⅲ度 15 %～ 2 0 %烧伤。分别于伤后 2、4、6、12、2 4h用EMSAs测定肝组织AP - 1的DNA结合活性。结果　烧伤后 2hAP - 1的DNA结合活性与正常对照组相比无显著差别 ,4h后AP - 1的DNA结合能力逐渐升高 ,12h达到最大值 ,以后逐渐恢复 ,至 2 4h仍显著高于正常对照组。结论　烧伤早期引起小鼠肝组织AP - 1的DNA结合活性显著增强。 展开更多
关键词 小鼠 烧伤 AP-I dna结合活性 EMSAs
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人脑星形细胞瘤组织中NF-κB的DNA结合活性
12
作者 郭春宝 陈峰 高宗炜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1207-1209,共3页
背景与目的:人类肿瘤细胞的转录因子可在转录水平调控许多恶性相关基因的表达,与肿瘤细胞的低分化和高转移有关,并抑制肿瘤细胞凋亡。本研究旨在观察人脑星形细胞瘤组织中核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)的DNA结合活性,探讨其... 背景与目的:人类肿瘤细胞的转录因子可在转录水平调控许多恶性相关基因的表达,与肿瘤细胞的低分化和高转移有关,并抑制肿瘤细胞凋亡。本研究旨在观察人脑星形细胞瘤组织中核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)的DNA结合活性,探讨其在人脑星形细胞瘤发生和发展中的意义。方法:采用电泳迁移率(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)同位素放射自显影方法分别检测12例正常脑组织及37例人脑星形细胞瘤组织中NF-κB的DNA结合活性。结果:NF-κB的DNA结合活性在人脑星形细胞瘤组织光密度值为134.2±24.1,高于正常脑组织的97.5±1.9(P<0.05),其中多形胶质母细胞瘤(Ⅳ级)NF-κB的DNA结合活性最高,为106.8±7.4,依次为间变性星形细胞瘤(Ⅲ级)123.2±10.1,星形母细胞瘤(Ⅱ级)139.3±16.8,星形细胞瘤(Ⅰ级)160.2±18.6(P<0.05)。结论:NF-κB的DNA结合活性与人脑星形细胞瘤分级有关,并随恶性程度增加而增强。 展开更多
关键词 dna结合活性 人脑星形细胞瘤 NF-ΚB 瘤组织 瘤细胞 正常 脑组织 转录水平 恶性相关基因 变性
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低氧诱导因子1-α的表达及DNA结合活性在非小细胞肺癌中的临床意义
13
作者 潘坤 张泽明 +1 位作者 赵学琴 冯欣 《河北医药》 CAS 2014年第7期972-975,共4页
目的探讨非小细胞肺癌患者肺组织中HIF-1α的表达及DNA结合活性的动态变化与肿瘤病理学特性的关系。方法收集89例非小细胞肺癌患者肿瘤及癌旁正常肺组织标本,RT-PCR检测HIF-1α的mRNA表达水平,Western blot检测HIF-1α的蛋白质表达水平,... 目的探讨非小细胞肺癌患者肺组织中HIF-1α的表达及DNA结合活性的动态变化与肿瘤病理学特性的关系。方法收集89例非小细胞肺癌患者肿瘤及癌旁正常肺组织标本,RT-PCR检测HIF-1α的mRNA表达水平,Western blot检测HIF-1α的蛋白质表达水平,EMSA法检测HIF-1αDNA结合活性的表达变化,并结合临床及病理特征进行分析。结果 HIF-1αmRNA及蛋白的表达水平在肿瘤组织中均明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α的表达与非小细胞肺癌病理分期及有无淋巴结转移有关。肿瘤组HIF-1α的DNA结合活性较癌旁正常组织增高,2组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HIF-1α的高表达及转录活性的增强与非小细胞肺癌发病密切相关,可将此作为抑制肿瘤发病的靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 低氧诱导因子-1Α dna结合活性
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水稻转录因子WRKY39的克隆表达及DNA结合活性分析
14
作者 郑元涛 欧娜 韦星明 《广西科学院学报》 2012年第3期197-200,共4页
根据水稻转录因子WRKY39的cDNA基因序列设计引物,克隆水稻日本晴(Oryza sativa L.)WRKY类转录因子的cDNA基因并进行原核表达,通过凝胶阻滞实验分析融合蛋白与DNA的结合活性。结果克隆了1个新的WRKY基因OsWRKY39,其编码的蛋白OsWRKY39能... 根据水稻转录因子WRKY39的cDNA基因序列设计引物,克隆水稻日本晴(Oryza sativa L.)WRKY类转录因子的cDNA基因并进行原核表达,通过凝胶阻滞实验分析融合蛋白与DNA的结合活性。结果克隆了1个新的WRKY基因OsWRKY39,其编码的蛋白OsWRKY39能够与顺式元件W盒特异结合,Os-WRKY39具有转录因子的最基本特征。 展开更多
关键词 转录因子 WRKY 水稻 原核表达 dna结合活性
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副溶血弧菌CalR蛋白的表达纯化及其DNA结合活性分析 被引量：1
15
作者 张凌宇 侯书宁 +3 位作者 赵昕 孙佳遥 张义全 黄新祥 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2017年第1期36-39,共4页
目的:原核表达和纯化副溶血弧菌的CalR蛋白并分析其DNA结合活性,为后续深入研究其对靶基因的分子调控机制奠定基础。方法:以副溶血弧菌野生株RIMD2210633基因组DNA为模板,PCR扩增calR的编码区序列,将其克隆入p ET28a中获得重组载体;将... 目的:原核表达和纯化副溶血弧菌的CalR蛋白并分析其DNA结合活性,为后续深入研究其对靶基因的分子调控机制奠定基础。方法:以副溶血弧菌野生株RIMD2210633基因组DNA为模板,PCR扩增calR的编码区序列,将其克隆入p ET28a中获得重组载体;将重组载体导入大肠埃希菌BL21λDE3中,获得重组蛋白表达菌株,该菌株经IPTG诱导表达His6-CalR,用Ni-柱树脂进行蛋白纯化。PCR扩增T3SS1相关基因exsC、exsD和VP1687的启动子区序列,通过凝胶阻滞实验检测His6-CalR蛋白对它们的结合活性。结果:成功表达纯化出可溶性His6-CalR蛋白;凝胶阻滞实验结果显示,重组蛋白His6-CalR能够直接结合exsC、exsD和VP1687的启动子区。结论:本研究表达纯化的副溶血弧菌CalR蛋白具有DNA结合活性,可用于后续的转录调控机制研究。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 CalR dna结合活性
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鼠疫菌H-NS蛋白的表达与纯化及其DNA结合活性分析 被引量：19
16
作者 张义全 高鹤 +5 位作者 王丽 罗张 谭亚芳 郭兆彪 杨瑞馥 周冬生 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期615-621,共7页
【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hn... 【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hns重组质粒转入大肠杆菌BL21λDE3菌株中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出鼠疫菌His-H-NS蛋白;通过体外的凝胶迁移实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验对His-H-NS蛋白与DNA的结合活性进行分析。【结果】成功表达出有活性的鼠疫菌His-H-NS蛋白,该蛋白对鼠疫菌pH6抗原基因(psaA、psaE)及rovA基因均有结合活性。【结论】鼠疫菌His-H-NS具有DNA结合活性,说明H-NS能调控鼠疫菌基因的转录。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森氏菌 H-NS dna结合活性
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钙调素对植物热激转录因子的DNA结合活性的影响 被引量：4
17
作者 李冰 刘宏涛 +2 位作者 穆睿聆 周人纲 孙大业 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第20期1578-1581,共4页
热刺激能诱导植物热激转录因子（HSF）与热激元件（HSE）在体外结合.在玉米幼苗全细胞提取液中加入钙调素（CaM）抗血清,抑制热诱导的HSF的DNA结合活性,而向此提取液中回加CaM则可恢复HSF的DNA结合能力.另外,在非热激条件下,直接加入 Ca... 热刺激能诱导植物热激转录因子（HSF）与热激元件（HSE）在体外结合.在玉米幼苗全细胞提取液中加入钙调素（CaM）抗血清,抑制热诱导的HSF的DNA结合活性,而向此提取液中回加CaM则可恢复HSF的DNA结合能力.另外,在非热激条件下,直接加入 CaM也可诱导HSF与HSE在体外结合,而BSA无此作用.以小麦和番茄为材料也得到相似的结果.该实验提供了CaM调节HSF活性的直接证据. 展开更多
关键词 植物热激转录因子 钙调素 dna结合活性 玉米 小麦 番茄 热激元件 热激蛋白 耐热性
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尼莫地平对血管性痴呆大鼠海马CAMP反应元件结合蛋白、转录因子CCAAT增强子结合蛋白DNA结合活性的影响 被引量：6
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作者 张泓波 高维娟 钱涛 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期518-520,共3页
目的观察尼莫地平对血管性痴呆大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白（CREB）和CCAAT增强子结合蛋白（C／EBP）的DNA结合活性的影响，探讨其治疗血管性痴呆的机制。方法66只sD大鼠随机分为模型组，假手术组和尼莫地平组，每组22只，采用4血管... 目的观察尼莫地平对血管性痴呆大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白（CREB）和CCAAT增强子结合蛋白（C／EBP）的DNA结合活性的影响，探讨其治疗血管性痴呆的机制。方法66只sD大鼠随机分为模型组，假手术组和尼莫地平组，每组22只，采用4血管法制备大鼠血管性痴呆模型，分别给予生理盐水（8ml·kg-1·d-1）、尼莫地平（20mg·kg-1·d-1）灌胃，用HE染色法观察海马CA1区神经元形态变化，水迷宫法检测大鼠学习和记忆能力，凝胶电泳迁移率改变分析法（EMSA）测定海马组织CREB和C／EBP的DNA结合活性。结果水迷宫检测：尼莫地平组大鼠学习记忆能力[逃逸潜伏期（26．63±1．31）S，跨越平台次数（7．25±0．92）次]较模型组[逃逸潜伏期（41．25±1．83）S，跨越平台次数（5．33±0．64））次]强，差异有统计学意义（P〈0．05）。HE染色：模型组大鼠海马CAi区部分神经元正常结构消失，胞核区域浓染，出现凝固性坏死及细胞脱失，尼莫地平组大鼠海马CA1区神经元排列较模型组病理改变减轻，细胞结构完整；尼莫地平组海马CA1区正常神经细胞数目（43．19±2．87）较模型组（16．33±1．09）增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。EMSA：尼莫地平组CREB和C／EBP的DNA结合活性[分别为（369．75±13．22），（428．25±17．69）]较模型组[分别为（142．25±27．86），（97．00±5．88）]均升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论尼莫地平改善血管性痴呆大鼠海马神经元损伤和学习功能下降，可能与提高CREB和C／EBP的DNA结合活性有关。 展开更多
关键词 血管性痴呆 CAMP反应元件结合蛋白 CCAAT/增强子结合蛋白 dna结合活性
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在线HPLC-DAD-MS^n-DNA-AO-FLD系统的建立及紫草中DNA结合活性化合物的研究（英文）
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作者 黄文芳 张藏蔓 +3 位作者 李森森 梁毅 王弘 陈世忠 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2015年第9期581-590,共10页
本文首次以吖啶橙为荧光探针建立了在线HPLC--DAD--MSn-D-NA--AO--FLD检测系统并应用于天然药物的活性成分研究中,该系统可以同时给出所测天然药物的指纹图谱、各色谱峰的紫外光谱、总离子流图,多级高分辨MS数据以及各化合物与DNA结合... 本文首次以吖啶橙为荧光探针建立了在线HPLC--DAD--MSn-D-NA--AO--FLD检测系统并应用于天然药物的活性成分研究中,该系统可以同时给出所测天然药物的指纹图谱、各色谱峰的紫外光谱、总离子流图,多级高分辨MS数据以及各化合物与DNA结合的活性图谱,能够对天然药物进行高效分离、结构鉴定和活性检测以及构效、量效关系和作用机理研究。本文采用该系统对紫草正己烷提取物进行了快速分离、结构鉴定和活性研究,证明5个萘醌类化合物具有明显的DNA结合活性?构效和量效关系研究表明,紫草萘醌化合物的母核能嵌插在DNA碱基对中,阻断DNA的复制,侧链上的羟基酰化能够促进与DNA结合,对活性有较大的影响。本文为天然药物中发现抗肿瘤药物提供了简便、快速、精密度高、稳定性好的研究方法。 展开更多
关键词 在线 紫草 吖啶橙 脱氧核糖核酸 dna结合活性
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副溶血弧菌ToxR截短体蛋白的表达纯化及其DNA结合活性 被引量：2
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作者 胡小许 张义全 +5 位作者 黄倩 王丽 杨瑞馥 黎晓敏 周冬生 钟青萍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期956-961,共6页
【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片... 【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片段,并将其直接克隆入pET28a中,获得重组质粒;将重组质粒导入大肠杆菌BL21λDE3中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出His-ToxR-N蛋白。利用限制级凝血酶切除His-ToxR-N中的His-标签,进而以VP的calR和VP1687为靶基因,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)验证ToxR-N蛋白的DNA结合活性。分别构建克隆有calR和VP1687上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入野生株(WT)和toxR突变株(ΔtoxR)中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中靶基因启动子活性,以验证ToxR对calR和VP1687的调控关系。【结果】成功表达出有活性的ToxR-N蛋白,该蛋白对calR启动子区具有结合活性。LacZ结果显示ToxR对calR的转录具有激活作用,而对VP1687的转录具有抑制作用。【结论】所表达的ToxR-N可用于后续的转录调控机制研究;ToxR通过直接激活calR的转录表达,而间接抑制T3SS1相关基因的表达。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 ToxR dna结合活性 转录调控
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