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寄生原虫DNA解旋酶家族研究进展
1
作者 陈君 蔡海明 +8 位作者 廖申权 戚南山 李娟 吕敏娜 林栩慧 胡俊菁 张健騑 刘文俊 孙铭飞 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期317-327,共11页
寄生原虫是一类单细胞真核生物,是人和动物疾病的重要病原之一,给人类健康和畜牧业发展造成了严重的危害。DNA解旋酶是一类参与几乎所有生物DNA代谢的重要解旋酶,目前原虫DNA解旋酶的研究主要集中在恶性疟原虫,且被报道的DNA解旋酶多为... 寄生原虫是一类单细胞真核生物,是人和动物疾病的重要病原之一,给人类健康和畜牧业发展造成了严重的危害。DNA解旋酶是一类参与几乎所有生物DNA代谢的重要解旋酶,目前原虫DNA解旋酶的研究主要集中在恶性疟原虫,且被报道的DNA解旋酶多为人类或酵母的同源物,其保守基序与人类、酵母等都存在差异,是研究抗原虫药物的重要潜在靶标。笔者主要综述了经典解旋酶的保守结构域及其功能特点,介绍了各个解旋酶的极性与偏好底物等生化特性,汇总了已报道原虫DNA解旋酶的种类。目前报道的DNA解旋酶大多集中在恶性疟原虫,其中疟原虫含18种,利士曼原虫含3种,布氏锥虫和兔脑原虫均含2种,弓形虫含1种。同时介绍了目前原虫中较为引人关注DNA解旋酶:RecQ家族、DEAD-box家族、UvrD解旋酶家族和RuvB家族的功能研究进展,其中DEAD-box家族中有3种疟原虫特异性解旋酶PfPSH1/H2/H3并未在宿主人类中发现相似物,另一种解旋酶UvrD则与人类、小鼠、秀丽隐杆线虫等无同源性,而与细菌、真菌等同源性较高。笔者对原虫DNA解旋酶的基本特性和功能进行综述,阐述了目前原虫DNA解旋酶的研究进展及其作为药物靶标的可能性,以期为抗原虫药物靶标筛选及原虫病的防控提供新的研究思路。 展开更多
关键词 寄生原虫 dna解旋酶 生物学功能
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BmNPV DNA解旋酶基因酵母双杂交诱饵载体的构建 被引量：3
2
作者 杨金宏 王代钢 +1 位作者 卢从德 孔卫青 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第2期161-163,共3页
为了筛选家蚕对BmNPV DNA解旋酶的受体基因,根据GenBank公布的BmNPV(T3株)的序列,设计引物对其DNA解旋酶基因的核心结构域进行PCR扩增,成功克隆该基因并利用双酶切亚克隆至酵母双杂交诱饵载体PGBKT7。实验证明重组诱饵载体不能自激活,... 为了筛选家蚕对BmNPV DNA解旋酶的受体基因,根据GenBank公布的BmNPV(T3株)的序列,设计引物对其DNA解旋酶基因的核心结构域进行PCR扩增,成功克隆该基因并利用双酶切亚克隆至酵母双杂交诱饵载体PGBKT7。实验证明重组诱饵载体不能自激活,可以作为诱饵进行蛋白结合试验。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 dna解旋酶 诱饵载体 自激活
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高等植物中的DNA解旋酶 被引量：3
3
作者 初立业 邵宏波 李茂言 《重庆邮电学院学报（自然科学版）》 2005年第4期511-515,共5页
综述了在离体实验条件下高等植物DNA解旋酶在以下多方面具有重要的生物学功能:包括DNA重组、DNA复制、翻译启始、rDNA转录及在pre-rRNA加工过程早期阶段,双链断裂修复、端粒长度维持、核苷酸切除修复、花发育中的细胞分裂/增殖、基因组... 综述了在离体实验条件下高等植物DNA解旋酶在以下多方面具有重要的生物学功能:包括DNA重组、DNA复制、翻译启始、rDNA转录及在pre-rRNA加工过程早期阶段,双链断裂修复、端粒长度维持、核苷酸切除修复、花发育中的细胞分裂/增殖、基因组甲基化方式保持、植物细胞周期和细胞基本生命活动的维持。最近玉米基因组中发现的解旋子(helitron)插入说明高等植物DNA解旋酶可能在植物生长与发育中有重要调控作用。因而有着重要的生物技术应用价值。 展开更多
关键词 高等植物 dna解旋酶 RNA解旋酶 理化特性 生物功能
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斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA解旋酶序列比较分析 被引量：2
4
作者 刘艳荷 方继朝 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期496-501,共6页
根据斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)基因组全序列设计引物,PCR扩增A6、X8、X15和X17的DNA解旋酶(Helicase)基因,并将得到的序列与SpltNPV及其他核型多角体病毒的helicase基因进行同源性比较... 根据斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)基因组全序列设计引物,PCR扩增A6、X8、X15和X17的DNA解旋酶(Helicase)基因,并将得到的序列与SpltNPV及其他核型多角体病毒的helicase基因进行同源性比较和分子进化分析。结果表明,A6、X8和X15与SpltNPV同源性较高,核苷酸序列相似性分别为89%、89%和91%,氨基酸序列相似性均为93%;X17与SpltNPV2和甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodopteraexguia NPV,SeNPV)同源性高,核苷酸序列相似性分别是90%和82%,氨基酸序列相似性分别为92%和83%;而SpltNPV、A6、X8、X15与X17、SpltNPV2、SeNPV的同源性较低,核苷酸序列相似性为52%～54%,氨基酸序列相似性为41%～43%。分子进化分析发现,供试斜纹夜蛾核型多角体病毒分为2组:X17、SpltNPV2、SeNPV处在一个分支,而A6、X8、X15、SpltNPV处在另外一个分支。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核型多角体病毒 dna解旋酶基因 序列比较
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极端嗜热古菌——芝田硫化叶菌DNA解旋酶的分离纯化和性质研究 被引量：1
5
作者 李昉 郝福英 黄力 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期340-347,共8页
采用QSepharose离子交换层析、磷酸纤维素P1 1吸附层析、肝素琼脂糖吸附层析、Su perdex 2 0 0凝胶过滤和PhenylSuperose疏水层析等步骤 ,从嗜酸热芝田硫化叶菌细胞裂解液中分离纯化了一个DNA解旋酶。该解旋酶具有受DNA激活的ATP酶活性... 采用QSepharose离子交换层析、磷酸纤维素P1 1吸附层析、肝素琼脂糖吸附层析、Su perdex 2 0 0凝胶过滤和PhenylSuperose疏水层析等步骤 ,从嗜酸热芝田硫化叶菌细胞裂解液中分离纯化了一个DNA解旋酶。该解旋酶具有受DNA激活的ATP酶活性。根据SDS PAGE测定结果 ,该酶的分子质量约为 63kD。芝田硫化叶菌DNA解旋酶可以解开底物上 70bp的双链区 ,其解旋活性依赖于双链区旁的单链分叉。该解旋酶的活性依赖于Mg2 + 和ATP的水解 ,在NaCl浓度超过 2 0 0mmol L时受到抑制。该酶的最适pH为 6 7。该酶在 40℃～ 80℃之间均有活性 ,70℃时活性最高。芝田硫化叶菌DNA解旋酶是从古菌中分离得到的第一个天然DNA解旋酶。 展开更多
关键词 极端嗜热古菌 芝田硫化叶菌 dna解旋酶 分离 纯化 性质
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沉默BLM DNA解旋酶基因对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和凋亡的影响
6
作者 黄亚兰 张望明 +5 位作者 刘小花 余晓静 安丽君 吴介恒 杨留启 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第8期869-878,共10页
目的探讨沉默BLM DNA解旋酶基因对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和凋亡的影响。方法利用数据库分析BLM DNA解旋酶在乳腺癌组织中的表达情况及后评估价值,免疫组织化学技术检测三阴性乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和癌旁组织中BLM DNA解旋酶表... 目的探讨沉默BLM DNA解旋酶基因对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和凋亡的影响。方法利用数据库分析BLM DNA解旋酶在乳腺癌组织中的表达情况及后评估价值,免疫组织化学技术检测三阴性乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和癌旁组织中BLM DNA解旋酶表达,Western blot检测MCF-10A细胞、MCF-7细胞、MDA-MB-468细胞中BLM DNA解旋酶蛋白表达水平;合成siRNA序列沉默MDA-MB-468细胞中BLM DNA解旋酶基因的表达,选取沉默效率最高的siRNA-BLM 3序列构建shRNA干扰载体慢病毒;将慢病毒感染MDA-MB-468细胞分为shRNA-NC组和shRNA-BLM组,MTT、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,单细胞凝胶电泳技术检测与DNA损伤相关的细胞尾部DNA含量,免疫细胞化学检测DNA损伤标志物γ-H2AX表达情况,Western blot检测凋亡相关蛋白及DNA损伤修复蛋白表达情况。结果生物信息学分析显示BLM DNA解旋酶在乳腺癌组织中高表达,且与乳腺癌患者不良预后密切相关;三阴性乳腺癌组织BLM DNA解旋酶表达水平高于乳腺纤维腺瘤和癌旁组织(P<0.001);与MCF-10A细胞、MCF-7细胞比较,MDA-MB-468细胞中BLM DNA解旋酶蛋白表达水平升高(P<0.01);与未转染组比较,siRNA-BLM 3组BLM DNA解旋酶蛋白表达下调(P<0.05);与shRNA-NC组比较,shRNA-BLM组细胞增殖能力被抑制、凋亡率升高、尾部DNA含量增加、γ-H2AX阳性细胞比例升高(P<0.01)、凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8表达上调,Bcl-2及DNA损伤修复蛋白BRCA1、Rad51、BLM表达下调(P<0.05)。结论沉默BLM DNA解旋酶基因表达抑制三阴性乳腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,凋亡机制可能与细胞DNA损伤增加,DNA损伤修复相关蛋白受抑制有关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 BLM dna解旋酶基因 RNA干扰
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RNA的转录过程是否需要DNA解旋酶 被引量：1
7
作者 张华玲 《教育教学论坛》 2012年第33B期161-162,共2页
目前在高中教学中,对于转录是否需要DNA解旋酶这个问题看法不统一,本人对此理解资料分析认为,RNA聚合酶以基因序列为遗传信息模板,催化合成序列互补的RNA,包括转录起始、延伸、终止等过程。原核生物与真核生物DNA转录都需要RNA聚合酶,... 目前在高中教学中,对于转录是否需要DNA解旋酶这个问题看法不统一,本人对此理解资料分析认为,RNA聚合酶以基因序列为遗传信息模板,催化合成序列互补的RNA,包括转录起始、延伸、终止等过程。原核生物与真核生物DNA转录都需要RNA聚合酶,但是有所差异。转录为RNA的过程不需要DNA解旋酶。 展开更多
关键词 RNA的转录 dna解旋酶 教学
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基因诊断技术与DNA解旋酶有关吗
8
作者 游云霞 《生物学教学》 北大核心 2006年第1期26-27,共2页
关键词 dna解旋酶 基因诊断技术 血红蛋白基因 碱基序列 贫血症 选择题 生物细胞
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RecQDNA解旋酶结构与功能及其相互关系的研究
9
作者 许厚强 奚绪光 +4 位作者 窦硕星 徐春华 任华 郭融冰 陈祥 《中国科技成果》 2020年第10期36-37,47,共3页
RecQ解旋酶是DNA解旋酶中的一个家族,从细菌到人类均具有高度保守性.人类RecQ解旋酶有:RecQ1、BLM、WRN、RecQ4和RecQ5五种.RecQ解旋酶的缺陷易患相关遗传病和各种癌症.RecQ解旋酶作为一种分子发动机,将ATP水解产生的化学能量转化成机械... RecQ解旋酶是DNA解旋酶中的一个家族,从细菌到人类均具有高度保守性.人类RecQ解旋酶有:RecQ1、BLM、WRN、RecQ4和RecQ5五种.RecQ解旋酶的缺陷易患相关遗传病和各种癌症.RecQ解旋酶作为一种分子发动机,将ATP水解产生的化学能量转化成机械能,以"蠕动"和"滚动"两种模式沿DNA分子运动,解开双链DNA,通过复制、转录和翻译指导蛋白质合成.RecQ解旋酶在DNA复制、修复、重组、转录、端粒维持等细胞代谢过程中具有非常重要的作用.项目总体思路是弄清RecQ解旋酶结构与功能及其相互关系,为靶标新药的设计治疗提供科学理论基础.研究内容包括:①解旋酶活性检测新方法的建立;②大肠杆菌RecQ解旋酶结构与功能关系研究;③人BLM解旋酶重要结构域及其功能研究;④RecQDNA解旋酶动力学研究. 展开更多
关键词 dna解旋酶 结构与功能 蛋白质合成 dna复制 双链dna ATP水解 科学理论基础 细胞代谢过程
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DNA解旋酶RecQL1在宫颈癌及其癌前病变中的表达及临床意义 被引量：1
10
作者 吴林 杨慧 +4 位作者 高孝家 王巧丽 杨垒 周福祥 周云峰 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2015年第4期506-509,516,共5页
目的:探讨宫颈癌及癌前病变组织中DNA解旋酶RecQL1的表达及临床意义。方法:采用链霉卵白素-过氧化物酶连结(SP)免疫组化方法,检测宫颈癌(75例)、宫颈上皮内瘤变(CIN,60例)和正常宫颈(20例)组织中RecQL1蛋白表达与宫颈癌临床病理特征和... 目的:探讨宫颈癌及癌前病变组织中DNA解旋酶RecQL1的表达及临床意义。方法:采用链霉卵白素-过氧化物酶连结(SP)免疫组化方法,检测宫颈癌(75例)、宫颈上皮内瘤变(CIN,60例)和正常宫颈(20例)组织中RecQL1蛋白表达与宫颈癌临床病理特征和预后的关系。结果:在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中,RecQL1蛋白的阳性表达率分别为10.000%(2/20)、55.000%(33/60)、74.700%(55/75),差异均有统计学意义(P<0.05)。75例宫颈癌患者中,有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的RecQL1阳性表达率分别为89.300%和63.800%,差异有统计学意义(P<0.05)。随访的75例宫颈癌患者中,RecQL1阳性和阴性患者的总生存时间(OS)分别为(42.000±20.762)个月和(115.990±13.593)个月,两者差异有统计学意义(P<0.001)。多因素分析显示,RecQL1表达情况、淋巴结转移情况和肿瘤分期为影响宫颈癌预后的独立因素。结论:RecQL1蛋白可能参与了宫颈癌的发生和发展,其与宫颈癌是否发生淋巴结转移及预后有关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤样病变 免疫组织化学 dna解旋酶RecQL1
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应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌 被引量：10
11
作者 石琰璟 王建广 +6 位作者 房保海 张健 祝素珍 刘云国 姜英辉 雷质文 杨大伟 《青岛科技大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第1期42-45,共4页
以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·... 以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 检测 依赖解旋酶dna恒温扩增技术
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依赖解旋酶DNA等温扩增技术的研究进展 被引量：4
12
作者 贾辉 胡兰 马晓威 《新农业》 2015年第9期9-10,共2页
依赖解旋酶DNA等温扩增技术(HDA)是近年来发明的一种新型的模拟动物体内DNA复制的等温扩增技术,HDA具有简便、高效、快速的优点,不需复杂的科学仪器,反应在常温下进行,适用于基层实验室,具有广阔的应用前景。
关键词 依赖解旋酶dna等温扩增技术 dna解旋酶 单链dna结合蛋白
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单核细胞增生李斯特氏菌依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法的建立 被引量：7
13
作者 王建广 雷质文 +7 位作者 石琰璟 付静芸 祝素珍 房保海 姜英辉 刘云国 张健 杨大伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期130-132,共3页
为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dN... 为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dNTPs以及引物等的浓度进行优化,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明,所建立起的检测法最低检测限为7.8×103 cfu/mL,灵敏度与普通PCR方法相当。Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 检测 依赖解旋酶dna恒温基因扩增
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应用依赖解旋酶DNA扩增技术检测转基因大豆 被引量：1
14
作者 章晶晶 王赞 +3 位作者 张翠侠 马超峰 周巍 张岩 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期164-168,共5页
目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplifi cation,HDA)技术,建立快速检测转基因大豆的方法。方法:采用以CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS 3种外源基因和内源基因Lectin(大豆凝集素基因)为目的片段设计4对特... 目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplifi cation,HDA)技术,建立快速检测转基因大豆的方法。方法:采用以CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS 3种外源基因和内源基因Lectin(大豆凝集素基因)为目的片段设计4对特异引物,建立反应体系,通过HDA方法对内源基因和3种外源基因的检测特异性和灵敏度进行实验,并对结果进行同源性分析。结果:建立了转基因大豆HDA检测法,检测特异性良好,3种外源基因的检出限为0.2%。结论:转基因大豆的HDA检测方法具有普通聚合酶链式反应的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 依赖解旋酶dna扩增 转基因大豆 检测
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染色质解旋酶DNA结合蛋白7表达与肝癌临床病理特征及预后的关系 被引量：2
15
作者 陈颖 邓周峰 +4 位作者 江卫华 周嘉 苏明琪 韩骏 张辉 《中国实验诊断学》 2017年第5期761-765,共5页
目的通过研究肝癌组织内染色质解旋酶DNA结合蛋白7(CHD7)的表达及其与肝癌患者临床病理特征及预后的关系,探讨CHD7作为肝癌预后预测指标的可行性。方法将286例肝切除术后病理确诊为肝细胞肝癌的标本制作成组织芯片。采用免疫组化法检测... 目的通过研究肝癌组织内染色质解旋酶DNA结合蛋白7(CHD7)的表达及其与肝癌患者临床病理特征及预后的关系,探讨CHD7作为肝癌预后预测指标的可行性。方法将286例肝切除术后病理确诊为肝细胞肝癌的标本制作成组织芯片。采用免疫组化法检测肝癌及癌旁肝组织中CHD7的表达水平,分析其与肝癌患者临床病理特征及预后之间的关系。结果免疫组化结果显示CHD7在肝癌组织中表达明显高于对应的癌旁肝组织。CHD7高表达与肿瘤数目、肿瘤包膜完整性、肿瘤血管侵犯、TNM分期及BCLC分期密切相关,与肝癌患者术后总体生存率呈负相关,而与肝癌患者术后复发率呈正相关。结论 CHD7在肝癌中明显高表达,可作为肝癌患者预后的独立预测指标之一。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌(HCC) 染色质解旋酶dna结合蛋白7(CHD7) 预后 组织芯片
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染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因致瘤机制研究进展
16
作者 傅点 王玲 +1 位作者 田丰 程文 《医学综述》 2015年第14期2562-2565,共4页
染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新近被证实与在许多实体瘤中表达增多的致癌基因,它定位于第1号染色体q21区。CHD1L在肝细胞癌和其他肿瘤中的功能性研究提示,该基因在肿瘤形成过程中可以引起细胞增殖、调节G1/S过... 染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新近被证实与在许多实体瘤中表达增多的致癌基因,它定位于第1号染色体q21区。CHD1L在肝细胞癌和其他肿瘤中的功能性研究提示,该基因在肿瘤形成过程中可以引起细胞增殖、调节G1/S过渡期并且可以抑制细胞凋亡。CHD1L活化的潜在机制可能是通过结合凋亡蛋白Nur77,或通过上调CHD1L调控的靶基因(如ARHGEF9、SPOCK1或TCTP)受体以激活蛋白激酶B通路,从而干扰细胞死亡程序。CHD1L目前已经被认为是一种新的可独立评价一些实体性肿瘤进展、预后以及生存率的生物标志物。现有的对CHD1L的认识在将来也许可以激励大家进行对一些特定肿瘤的靶向治疗研究。 展开更多
关键词 染色质解旋酶/ATP酶的dna结合蛋白1样基因 致癌基因 染色体1q21 扩增 ρ鸟嘌呤核苷酸交换因子9 蛋白聚糖1 Nur77
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汉防己乙素衍生物LYY-47对三阴性乳腺癌细胞及其多倍体巨瘤细胞增殖、凋亡的作用和机制
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作者 余晓静 张望明 +6 位作者 贺天辉 刘小花 艾海锋 安丽君 杨留启 潘卫东 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第3期313-328,共16页
目的探讨汉防己乙素衍生物LYY-47对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞及其多倍体巨瘤细胞(PGCCs)增殖、凋亡的作用和机制。方法取TNBC MDA-MB-231细胞和MDA-MB-436细胞培养至对数生长期,诱导形成PGCCs,培养35 d,采用苏木素-伊红(H&E)染色观察... 目的探讨汉防己乙素衍生物LYY-47对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞及其多倍体巨瘤细胞(PGCCs)增殖、凋亡的作用和机制。方法取TNBC MDA-MB-231细胞和MDA-MB-436细胞培养至对数生长期,诱导形成PGCCs,培养35 d,采用苏木素-伊红(H&E)染色观察不同培养时间时2种细胞的PGCCs形态学特征并进行计数;收集MDA-MB-231细胞、PGCCs及其子代细胞,采用流式细胞仪检测分析细胞周期,采用Western blot检测周期相关蛋白[细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和细胞周期蛋白B1(CyclinB1)]、干性相关蛋白[乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)、白细胞分化抗原44(CD44)及白细胞分化抗原133(CD133)]、DNA损伤修复相关蛋白[布卢姆(BLM)、Rad51及乳腺癌易感基因1(BRCA1)]及凋亡相关蛋白[BCL2-相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤蛋白-2(Bcl-2)、裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)及裂解凋亡蛋白酶-8(cleaved Caspase-8)]的表达,采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验检测细胞活力和细胞集落数,采用细胞免疫荧光实验检测磷酸化组蛋白2AX(γ-H2AX)的表达;采用荧光偏振实验检测BLM DNA解旋酶的活性;收集对数生长期MDA-MB-231细胞,分为对照组(同等体积的完全培养基)、紫杉醇(PTX)组(500 nmol/L PTX)、3-CF 3,4-F-苯基类似物(ML216)组(3μmol/L ML216)及ML216+PTX组(500 nmol/L PTX和3μmol/L ML216),采用Image J软件计数各组细胞数;收集对数生长期MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞,分为对照组(0.00μmol/L)、LYY-47给药组(2.50μmol/L、5.00μmol/L及6.50μmol/L),采用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡情况;6周龄雌性无特定病原体(SPF)级无胸腺BALB/c裸鼠12只,皮下分别注射5×10^(6)个MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞,每隔3天测量1次肿瘤体积,连续29 d,处死裸鼠剥离肿瘤、称重,取肿瘤组织制作切片,采用H&E染色和免疫组织化学染色观察细胞形态和检测BLM、Ki-67的表达。结果与TNBC MDA-MB-231和MDA-MB-436细胞相比,PTX诱导的PGCCs出现增大的细胞核和细胞质区域,通过不对称分裂产生子代细胞;与MDA-MB-231细胞相比,PGCCs中S期和G2/M期细胞增加、CDK1和CyclinB1蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),其子代细胞中S期细胞增加、G2/M期细胞减少且CDK1、CyclinB1蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),PGCCs及其子代细胞中ALDH1A1、CD44及CD133蛋白表达上调(P<0.05),PGCCs子代细胞的增殖和克隆形成能力增强(P<0.05),γ-H2AX、BLM、BRCA1及Rad51蛋白表达上调(P<0.05);与PTX组相比,ML216+PTX组PGCCs形成的数量明显减少(P<0.01);PGCCs子代细胞体内成瘤的生长速度、肿瘤的体积和重量均大于MDA-MB-231细胞(P<0.01),瘤体中BLM与Ki-67均呈高表达(P<0.01);与对照组相比,LYY-47给药组BLM 642-1290 DNA解旋酶的ATPase、dsDNA解链活性以及DNA结合活性均下调(P<0.05),MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞中BLM、Rad51及BRCA1蛋白表达也均下调(P<0.05);与对照组相比,LYY-47给药组和ML216给药组MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞增殖和克隆形成能力降低(P<0.05),LYY-47给药组能够引起MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞G2/M期细胞增加(P<0.05)、S期细胞减少(P<0.05)、细胞内周期相关蛋白CDK1与CyclinB1的表达下调(P<0.05),ML216给药组MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞G1期细胞增多、S期细胞减少(P<0.05);与对照组比较,LYY-47给药组MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞的总凋亡比例增加、Bcl-2表达下调及Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达上调(P<0.05)。结论LYY-47和ML216可影响TNBC及其PGCCs子代细胞的增殖,其机制可能与抑制BLM DNA解旋酶诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 dna解旋酶类 细胞增殖 细胞凋亡 汉防己乙素衍生物 多倍体巨瘤细胞 BLM dna解旋酶
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染色质解旋酶DNA结合蛋白对舌鳞状细胞癌CAL27细胞侵袭和转移影响的研究
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作者 胡凯莉 范欣 +3 位作者 胡温庭 李洪利 唐清华 孙学辉 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期81-87,共7页
目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白(CHD1L)影响舌鳞状细胞癌侵袭和转移的分子机制,为临床抑制舌鳞状细胞癌的侵袭和转移提供新的靶点。方法运用Ualcan网站分析CHD1L在正常上皮组织和原发性头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,分析有无淋巴... 目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白(CHD1L)影响舌鳞状细胞癌侵袭和转移的分子机制,为临床抑制舌鳞状细胞癌的侵袭和转移提供新的靶点。方法运用Ualcan网站分析CHD1L在正常上皮组织和原发性头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,分析有无淋巴结转移对头颈鳞状细胞癌组织中CHD1L表达情况的影响;通过GEPIA网站分析CHD1L在头颈鳞状细胞癌中的表达与生存率的关系;蛋白质印迹法检测人舌鳞状细胞癌细胞CAL27和人正常皮肤细胞HaCaT中CHD1L蛋白的表达水平;用RNA干扰质粒敲低人舌鳞状细胞癌细胞CAL27中的CHD1L后,将细胞分别命名为SiCHD1L/CAL27及Scr/CAL27;蛋白质印迹法检测CHD1L在每组细胞中的表达情况;EdU增殖实验检测每组细胞增殖能力的改变;伤口愈合实验检测每组细胞迁移能力的改变;蛋白质印迹法检测上皮间质转化(EMT)标志物上皮钙黏着蛋白和波形蛋白的表达水平。结果Ualcan数据库显示:CHD1L在原发头颈鳞状细胞癌组织中表达高于正常上皮组织中的表达,在出现淋巴结转移的头颈鳞状细胞癌组织中表达更高。GEPIA网站分析显示:CHD1L表达量高的头颈鳞状细胞癌患者总生存率较表达量低的患者明显降低。蛋白质印迹结果显示:人舌鳞状细胞癌细胞CAL27中CHD1L表达高于人正常皮肤细胞HaCaT中CHD1L的表达,敲低CHD1L以后CAL27细胞中CHD1L的表达量明显低于Scr/CAL27组细胞。EdU增殖实验结果显示:SiCHD1L/CAL27组细胞增殖能力明显降低。伤口愈合实验显示:SiCHD1L/CAL27组迁移能力降低,SiCHD1L/CAL27组细胞上皮钙黏着蛋白表达量增加而波形蛋白表达量降低。结论CHD1L促进舌鳞状细胞癌细胞的EMT,促进舌鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移侵袭能力。 展开更多
关键词 舌鳞状细胞癌 染色质解旋酶dna结合蛋白 上皮间质转化 增殖 侵袭
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siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响 被引量：1
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作者 李善华 张薇 《微循环学杂志》 2019年第1期7-12,共6页
目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si... 目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P<0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P<0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 卵巢癌 小干扰RNA 染色质解旋酶dna结合蛋白1 核因子κB 侵袭 迁移
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赖解旋酶恒温基因扩增技术的原理、应用和展望 被引量：12
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作者 刘洵 程天印 +1 位作者 常小斌 王小君 《长沙大学学报》 2007年第2期29-31,共3页
赖解旋酶恒温基因扩增方法(HDA法)是新近发明的一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术.该法依靠DNA解旋酶解开双链DNA、单链DNA结合蛋白(SSB)维持单链状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增.研究表明,HDA能扩增微生物基因组DNA、病原菌... 赖解旋酶恒温基因扩增方法(HDA法)是新近发明的一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术.该法依靠DNA解旋酶解开双链DNA、单链DNA结合蛋白(SSB)维持单链状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增.研究表明,HDA能扩增微生物基因组DNA、病原菌DNA、质粒DNA和cDNA等,从灵敏性、准确性和可操作性几方面看,该方法具有广阔的实用前景. 展开更多
关键词 赖解旋酶恒温基因扩增 dna解旋酶 单链dna结合蛋白
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