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可诱导稳定表达DLX4细胞系的构建及其表达分析 被引量:2
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作者 张连美 傅俊江 《泸州医学院学报》 2011年第5期480-482,共3页
目的:建立一种可诱导稳定表达方法,并构建DLX4细胞系。分析DLX4细胞系的表达调控。方法:将DLX4全长基因克隆入pcDNA5/FRT/TO表达载体,将其转染入宿主细胞Flp-InTMT-RExTM-293细胞系,潮霉素B筛选或者阳性克隆。采用不同剂量的DOX或者不... 目的:建立一种可诱导稳定表达方法,并构建DLX4细胞系。分析DLX4细胞系的表达调控。方法:将DLX4全长基因克隆入pcDNA5/FRT/TO表达载体,将其转染入宿主细胞Flp-InTMT-RExTM-293细胞系,潮霉素B筛选或者阳性克隆。采用不同剂量的DOX或者不同作用时间对pcDNA5/DLX4细胞系进行诱导表达,用Western blotting检测DLX4表达情况。结果:构建了可被Doxycline(DOX)诱导的稳定表达pcDNA5/DLX4的细胞系。0.001μg/ml的DOX即可诱导pcDNA5/DLX4细胞系的表达,0.1μg/ml DOX即可诱导该细胞系表达达到高峰;DOX对该细胞系作用1h后即可诱导该细胞系表达,对其作用16h后该细胞系表达明显增强。结论:构建了可被DOX诱导稳定表达的DLX4细胞系,不同剂量的DOX和不同作用时间对DLX4细胞系表达有不同的影响。该细胞系的建立为深入探索DLX4的功能提供了一种新的有效方法和实验材料。 展开更多
关键词 doxycline DLX4 稳定细胞系 蛋白质表达 诱导
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可诱导表达hFGFR1α稳定细胞系的建立与表达优化 被引量:1
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作者 朱先玉 王历 +3 位作者 杨茂 吴婷 何涛 杨文理 《西南医科大学学报》 2019年第3期215-218,共4页
目的:构建hFGFR1α(human fibroblast growth factor receptor 1 alpha, hFGFRα)稳定细胞系,优化获得最适诱导表达条件,实现可诱导的、高效的稳定表达。方法:将hFGFR1α基因编码区全长克隆入pcDNA5/FRT/TO/2 × Flag表达载体,连同p... 目的:构建hFGFR1α(human fibroblast growth factor receptor 1 alpha, hFGFRα)稳定细胞系,优化获得最适诱导表达条件,实现可诱导的、高效的稳定表达。方法:将hFGFR1α基因编码区全长克隆入pcDNA5/FRT/TO/2 × Flag表达载体,连同pOG44重组酶质粒共转染人宿主细胞Flp-InTM-T-RexTM-293细胞系(HEK293H),潮霉素B筛选获得阳性克隆细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ。用不同浓度强力霉素(doxycline, Dox)或者不同作用时间对HEK293H/hFGFR1ɑ细胞系进行诱导表达,Western Blot鉴定hFGFR1ɑ蛋白的表达情况。结果:构建了pcDNA5-FRT/TO/2 × Flag/hFGFR1ɑ重组表达载体,获得了可被Dox诱导表达的HEK293H/hFGFR1ɑ稳定细胞系;0.001μg/mL Dox即可诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,0.01μg/mL Dox即可诱导表达量达峰值;Dox对该细胞系作用2 h即诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,对其作用24 h后该细胞系的表达明显增强。结论:成功构建了可诱导的、高效的稳定表达细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ;Dox诱导该细胞系表达具有剂量差异性和时间依赖性。 展开更多
关键词 FGFR1 稳定细胞系 蛋白质表达 doxycline 诱导
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