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重楼皂苷Ⅰ对去势抵抗性前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响 被引量：1
1
作者 邹佩良 邹嘉茹 +3 位作者 蔡家丽 何启雄 周建甫 向松涛 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2023年第2期98-103,共6页
目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞株DU145细胞增殖的影响及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测PPⅠ对CRPC细胞株DU145细胞增殖能力的影响,使用流式细胞仪检测DU145细胞的凋亡率,同时应用Western blo... 目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞株DU145细胞增殖的影响及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测PPⅠ对CRPC细胞株DU145细胞增殖能力的影响,使用流式细胞仪检测DU145细胞的凋亡率,同时应用Western blot检测PPⅠ对DU145细胞p-ERK1/2、ERK1/2、特异性蛋白1(SP1)及Zeste基因增强子同源物2(EZH2)蛋白表达的影响;通过加入ERK1/2抑制剂(PD98059)检测PPⅠ对SP1表达的影响,通过转染SP1、EZH2过表达质粒分别检测PPⅠ对SP1、EZH2表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测EZH2启动子活性,并探讨ERK1/2、SP1和EZH2之间的关系。设未加药组为空白组。结果MTT法检测结果显示,PPⅠ能抑制DU145细胞体外生长,与空白组相比,细胞存活率从给药浓度0.4μmol·L^(-1)开始明显下降,且呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,PPⅠ能诱导DU145细胞早期凋亡,与空白组相比,细胞早期凋亡率从给药浓度0.4μmol·L^(-1)开始明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,PPⅠ以时间依赖性方式促进p-ERK1/2和ERK1/2蛋白的激活和表达(P<0.05),以剂量依赖性方式抑制SP1、EZH2蛋白的表达(P<0.05);抑制ERK1/2磷酸化能逆转PPⅠ对SP1表达的下调作用,SP1过表达可逆转PPⅠ对EZH2蛋白表达的下调作用,然而EZH2过表达不能逆转PPⅠ对SP1表达的下调作用,与PPⅠ组相比,ERK1/2抑制剂+PPⅠ组SP1表达上调(P<0.05),PPⅠ+SP1过表达质粒组EZH2蛋白表达上调(P<0.05),而PPⅠ+EZH2过表达质粒组SP1表达差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,SP1过表达可逆转PPⅠ对EZH2启动子活性的下调,与PPⅠ组相比,PPⅠ+SP1过表达质粒组EZH2启动子活性上调(P<0.05)。结论PPⅠ可通过介导ERK1/2通路抑制SP1和EZH2蛋白表达,从而诱导CRPC DU145细胞早期凋亡,进而抑制细胞生长。 展开更多
关键词 重楼皂苷Ⅰ du145 生长 凋亡 ERK1/2
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中性粒细胞胞外诱捕网通过上调DU145人前列腺癌细胞IL-8表达促进前列腺癌细胞增殖、 侵袭及迁移 被引量：3
2
作者 罗后宙 陈国强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期261-267,共7页
目的研究中性粒细胞胞外诱捕网(NET)对人前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其相关机制。方法收集28例前列腺癌患者肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测肿瘤及癌旁组织中白细胞介素8(IL-8)、淋巴细胞抗原6G(LY6G)、瓜氨酸化组蛋白H3... 目的研究中性粒细胞胞外诱捕网(NET)对人前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其相关机制。方法收集28例前列腺癌患者肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测肿瘤及癌旁组织中白细胞介素8(IL-8)、淋巴细胞抗原6G(LY6G)、瓜氨酸化组蛋白H3(H3CIT)的表达情况。提取患者外周血中性粒细胞,体外用佛波酯(PMA)刺激形成NET。将纯化后的NET与DU145人前列腺癌细胞共孵育,通过核糖核酸测序(RNA-seq)检测NET刺激后DU145细胞上调的基因,并采用实时定量PCR和Western blot法进行验证。使用注释、可视化和整合发掘数据库(DAVID)对上调基因进行基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)分析。采用CCK-8法检测DU145细胞增殖能力,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。敲低DU145细胞IL-8表达后,再次检测DU145细胞增殖、侵袭和迁移能力的改变情况。结果肿瘤组织IL-8、LY6G、H3CIT表达水平明显高于癌旁组织。NET刺激后,DU145细胞IL-8等638个基因表达上调,这些基因与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路以及细胞增殖、侵袭功能相关。NET能促进DU145细胞的增殖、侵袭和迁移。沉默IL-8后,NET对DU145细胞的促增殖、侵袭和迁移能力下降。结论NET通过上调DU145细胞IL-8的表达,促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 中性粒细胞胞外诱捕网(NET) 前列腺癌 du145细胞 小干扰RNA
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芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的作用机制研究
3
作者 周静 原凡 +4 位作者 骆春梅 朱坤 刘柏言 昌玥 尤耀东 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期255-263,共9页
目的:观察芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以DU145细胞为研究对象,通过观察不同浓度芪蓝方组(400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0μg/ml)细胞形态变化,筛选出高、中、低浓度应用... 目的:观察芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以DU145细胞为研究对象,通过观察不同浓度芪蓝方组(400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0μg/ml)细胞形态变化,筛选出高、中、低浓度应用于后续实验,并采用CCK-8法检测DU145细胞增殖,流式细胞术检测DU145细胞周期、凋亡情况,Western印迹检测DU145细胞中细胞周期、凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase 3的表达。结果:筛选结果显示100、200、400μg/ml浓度的芪蓝方均能显著抑制DU145细胞的生长、降低轮廓清晰度和贴壁能力,且200、400μg/ml浓度的芪蓝方可显著降低DU145细胞活力,故确定高中低浓度为400、200、100μg/ml,并用于后续实验研究。与空白组比较,G2期各浓度组DU145细胞数显著增加(P<0.01),而S期高、中浓度组细胞数显著下降(P<0.01、P<0.05);与空白对照组相比,芪蓝方各组DU145细胞总凋亡数均显著增高(P<0.01),高浓度组Cyclin D1表达显著降低,高、中浓度组Bcl-2表达明显降低,Bax和Cleaved-Caspase 3表达水平明显上升(P均<0.01)。结论:芪蓝方能够抑制前列腺癌DU145细胞的细胞增殖,促进其细胞凋亡,其机制可能与下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达,破坏Bax/Bcl-2平衡,上调Cleaved-Caspase 3表达相关。 展开更多
关键词 芪蓝方 人前列腺癌细胞du145 细胞增殖与凋亡 细胞周期蛋白D1 B细胞淋巴瘤-2 B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白 裂解半胱天冬酶3
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积雪草酸对前列腺癌细胞DU145的作用研究
4
作者 刘嘉 严宝飞 +1 位作者 田朝晖 曾庆琪 《中国肿瘤外科杂志》 CAS 2023年第4期391-395,共5页
目的研究积雪草酸(AA)对前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响。方法以不同浓度AA进行药物干预DU145细胞,MTT法检测细胞活力变化;显微镜观察细胞形态改变;Hoechst染色及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western Blot法检测细胞线粒体凋亡... 目的研究积雪草酸(AA)对前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响。方法以不同浓度AA进行药物干预DU145细胞,MTT法检测细胞活力变化;显微镜观察细胞形态改变;Hoechst染色及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western Blot法检测细胞线粒体凋亡相关蛋白表达变化;试剂盒检测细胞Caspase 3活性变化。结果与空白组比较,AA能够有效抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,显著诱导细胞凋亡(P<0.01),显著提升细胞Bax、Cleaved Caspase 3、Cyt-C蛋白表达和Bax/Bcl-2比值(P<0.05,P<0.01),显著降低Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),显著促进细胞Caspase 3活化(P<0.05,P<0.01)。与AA组比较,Caspase 3抑制剂Z-VAD-FMK能够显著抑制AA诱导的细胞Caspase 3活化(P<0.05),显著逆转AA诱导的细胞增殖抑制(P<0.05,P<0.01)。结论AA能够通过抑制DU145细胞增殖及诱导线粒体途径凋亡发挥抗前列腺癌作用。 展开更多
关键词 积雪草酸 前列腺癌 du145细胞 细胞增殖 线粒体凋亡
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LINC00341通过靶向miR-187对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响
5
作者 王玮 吴锴 +1 位作者 刘洪宇 邢天俊 《解剖学研究》 CAS 2023年第6期547-554,共8页
目的 探讨LINC00341对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的靶向影响及机制。方法 将LINC00341过表达载体(pcDNA3.1-LINC00341)转染前列腺癌细胞DU145,检测细胞的增殖力、细胞凋亡及迁移和侵袭能力,蛋白质印记(Western blot)法检... 目的 探讨LINC00341对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的靶向影响及机制。方法 将LINC00341过表达载体(pcDNA3.1-LINC00341)转染前列腺癌细胞DU145,检测细胞的增殖力、细胞凋亡及迁移和侵袭能力,蛋白质印记(Western blot)法检测Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2和E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。双荧光素酶报告实验联合RT-qPCR验证LINC00341对miR-187的靶向调控关系。将miR-187模拟物(miR-187 mimics)和pcDNA3.1-LINC00341共转染DU145细胞,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化。结果 过表达LINC00341抑制DU145细胞Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的表达,促进P21、Bax和E-cadherin蛋白的表达水平,抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。miR-187是LINC00341的靶基因,LINC00341靶向负性调控miR-187表达。过表达miR-187可逆转LINC00341过表达对DU145细胞的增殖、迁移侵袭抑制作用和凋亡促进作用。结论 LINC00341通过靶向下调miR-187抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 前列腺癌 LINC00341 miR-187 细胞增殖 细胞凋亡 细胞迁移 细胞侵袭 du145细胞株
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Rock蛋白抑制剂法舒地尔对前列腺癌PC3、DU145细胞侵袭、迁移和凋亡的影响 被引量：7
6
作者 高庆强 陈海 +5 位作者 陈赟 徐志鹏 朱磊磊 余文 韩友峰 戴玉田 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期483-490,共8页
目的:探讨Rho A/Rock信号传导通路在前列腺癌形成过程中的可能作用;研究Rock蛋白抑制剂法舒地尔潜在抗肿瘤侵袭、迁移和促凋亡的作用。方法:分别用5、10、20、40、80、160μmol/L浓度的法舒地尔作用于前列腺癌PC3、DU145细胞24 h,MTT法... 目的:探讨Rho A/Rock信号传导通路在前列腺癌形成过程中的可能作用;研究Rock蛋白抑制剂法舒地尔潜在抗肿瘤侵袭、迁移和促凋亡的作用。方法:分别用5、10、20、40、80、160μmol/L浓度的法舒地尔作用于前列腺癌PC3、DU145细胞24 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,并计算其IC50,取法舒地尔IC50的1/4作为给药剂量用于进一步研究。免疫细胞化学法检测法舒地尔对PC3、DU145细胞Rho A、RockⅠ、RockⅡ蛋白表达的影响;Western印迹检测法舒地尔对PC3、DU145细胞Rho A总蛋白、Rho A膜蛋白、RockⅠ、RockⅡ蛋白表达的影响;通过Transwell、划痕实验、流式细胞术评估细胞的侵袭、迁移、凋亡情况。结果:随着法舒地尔作用浓度的增加,对PC3、DU145的抑制率分别从(9.29±1.23)%、(7.59±1.54)%增加到(81.37±3.97)%、(76.53±2.67)%,呈一定剂量依赖性(P均<0.05);细胞迁移实验中实验组穿入下室的PC3、DU145细胞为(39.2±8.4)个和(34.2±6.7)个,阴性对照组分别为(116.8±9.3)和(112.5±10.8)个,差异有统计学意义(P均<0.05);划痕实验结果显示实验组PC3、DU145细胞24 h划痕愈合率为(37.26±1.17)%和(32.38±2.73)%,阴性对照组愈合率为(78.12±4.16)%和(69.47±6.71)%(P均<0.05);Annexin V-FITC/PI双染色法的结果显示,法舒地尔作用PC3、DU145细胞后凋亡率分别为(31.88±2.49)%、(28.65±2.99)%,显著高于阴性对照组[(7.51±2.28)%、(7.13±1.61)%,P均<0.05]。免疫细胞化学检测显示,法舒地尔能明显降低RockⅠ和RockⅡ的表达(与阴性对照组比较P均<0.05),而Rho A的表达与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);Western印迹也显示,法舒地尔也明显降低Rho A膜蛋白、RockⅠ、RockⅡ蛋白的表达(与阴性对照组比较P均<0.05),而Rho A总蛋白表达与阴性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Rho A/Rock信号传导途径可能参与了前列腺癌的形成;法舒地尔能够有效地抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡,其机制可能与法舒地尔下调Rho A/Rock信号通路有关。 展开更多
关键词 前列腺癌 RhoA/Rock通路 法舒地尔 侵袭 凋亡 PC3 du145
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环巴胺对DU145细胞增殖和细胞周期的影响 被引量：9
7
作者 孙全武 周逢海 +1 位作者 王养民 迟强 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期227-231,共5页
目的:研究Hedgehog信号通路阻断剂(环巴胺)对DU145细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度(1、10、50、100μmol/L)环巴胺干预DU145细胞,分别在24、48、72h后采用噻唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测环巴胺对细胞周期的... 目的:研究Hedgehog信号通路阻断剂(环巴胺)对DU145细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度(1、10、50、100μmol/L)环巴胺干预DU145细胞,分别在24、48、72h后采用噻唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测环巴胺对细胞周期的影响;RT-PCR检测50μmol/L环巴胺作用48h后实验组和对照组细胞周期蛋白E(cyclinE)mRNA表达水平的差异。结果:环巴胺对DU145细胞的抑制作用呈时效和量效依赖关系,当浓度>10μmol/L作用24h后会显著抑制细胞增殖,10、50、100μmol/L浓度组对细胞的抑制率分别为7.42%、12.70%和59.15%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测发现,当环巴胺浓度达10μmol/L以上,干预48h后G1期细胞比例明显升高。对照组、10、50μmol/L浓度组的G1期细胞百分比分别为:(52.17±2.21)%、(60.13±2.75)%和(74.30±3.52)%,差异有统计学意义(P<0.01);凋亡峰也随环巴胺浓度增加而逐渐增高。50μmol/L环巴胺作用48h后DU145细胞cyclinEmRNA表达显著降低,与空白对照组相比降低61.90%(P<0.01)。结论:环巴胺可以抑制DU145细胞的增殖能力,其机制可能与下调DU145细胞cyc-linEmRNA表达水平,从而将DU145细胞阻滞于G1期有关。环巴胺亦可以诱导DU145细胞凋亡。 展开更多
关键词 环巴胺 前列腺癌 du145细胞 HEDGEHOG信号通路 细胞周期
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Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用 被引量：6
8
作者 刘艳波 沈维高 +3 位作者 芦丽莉 葛贺 盖晓东 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1474-1478,共5页
目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检... 目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P<0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 SURVIVIN 前列腺肿瘤 du145细胞 细胞凋亡
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鸦胆子苦醇抑制人前列腺癌DU145细胞生长及作用机制 被引量：16
9
作者 谭亚芳 李娟 +1 位作者 胡树枝 江仁望 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期431-436,共6页
中药鸦胆子是一种常用的抗肿瘤中草药,鸦胆子苦醇是来源于鸦胆子的主要成分。该研究探讨了鸦胆子苦醇(brusatol)对人前列腺癌DU145细胞的生长抑制及其作用机制。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测鸦胆子苦醇对不同细胞株的生长抑制情况,以... 中药鸦胆子是一种常用的抗肿瘤中草药,鸦胆子苦醇是来源于鸦胆子的主要成分。该研究探讨了鸦胆子苦醇(brusatol)对人前列腺癌DU145细胞的生长抑制及其作用机制。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测鸦胆子苦醇对不同细胞株的生长抑制情况,以及不同浓度的鸦胆子苦醇对DU145细胞的增殖抑制率;应用Hoechst 33258染色法观察鸦胆子苦醇处理DU145细胞后所发生的形态学变化;分别采用PI单染及AnnexinV-FITC双染法流式细胞术分析细胞周期分布个凋亡率的变化;以Western blot测定鸦胆子苦醇对MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。结果表明:鸦胆子苦醇对人前列腺癌DU145细胞的抑制作用更为显著,并且可以时间和剂量依赖性地抑制人前列腺癌DU145细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为(0.27±0.04)μmol·L-1;鸦胆子处理DU145细胞后,Hoechst 33258染色可见到明显的凋亡特征;细胞周期图中可见明显的亚二倍体峰,且随着作用时间的延长凋亡比例增加,FCM检测鸦胆子苦醇作用24 h后凋亡图中,可见凋亡的发生;Western blot检测表明鸦胆子苦醇处理后可使磷酸化的p38和JNK表达增加,使磷酸化的ERK表达降低。鸦胆子苦醇能显著抑制DU145细胞增殖,诱导DU145细胞凋亡。磷酸化的P38和JNK的表达增加,但磷酸化的ERK表达下降,这表明MAPK途径的活化可能是鸦胆子苦醇对DU145细胞生长抑制的作用机制之一。因此,鸦胆子苦醇是潜在的抗前列腺癌药物,有必要进一步在动物水平阐明其抗前列腺癌活性。 展开更多
关键词 鸦胆子苦醇 人前列腺癌du145细胞 凋亡 MAPK
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胡椒碱与棉酚联用对前列腺癌DU145细胞生长抑制的协同作用 被引量：5
10
作者 曾龙辉 徐丽慧 +3 位作者 何贤辉 欧阳东云 张延亭 任帅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1101-1105,共5页
目的研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达。结果胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉... 目的研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达。结果胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉酚联用时,表现出协同作用。棉酚对细胞的半数抑制浓度IC50由单用时的21.00μmol·L-1下降到联合用药时的8.07μmol·L-1;两药相互作用指数CDI<1。胡椒碱与棉酚联合用药,可引起细胞G0/G1期阻滞和亚二倍体峰(凋亡峰)增加;同时上调细胞周期抑制蛋白p21Cip1的表达,并下调Cyclin D1、Cyclin A、CyclinB1以及药物代谢酶CYP3A4的表达。结论胡椒碱与棉酚联用,可能是通过诱导细胞周期阻滞,增强凋亡以及抑制CYP3A4药物代谢酶活性,发挥其协同抗前列腺癌作用。 展开更多
关键词 胡椒碱 棉酚 前列腺癌细胞du145 协同作用 细胞周期 CYP3A4
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双氢青蒿素诱导前列腺癌DU145细胞凋亡的实验研究 被引量：5
11
作者 夏金生 陈先国 +2 位作者 庄乾元 刘继红 叶章群 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第15期2418-2420,共3页
目的:观察双氢青蒿素(dihydroarteannuin,DHA)对前列腺癌DU145细胞作用并对其抗癌机制进行初步探讨。方法:进行前列腺癌DU145细胞培养,MTT法测定不同浓度和时间DHA对DU145细胞的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测DU145细胞凋亡率;Western b... 目的:观察双氢青蒿素(dihydroarteannuin,DHA)对前列腺癌DU145细胞作用并对其抗癌机制进行初步探讨。方法:进行前列腺癌DU145细胞培养,MTT法测定不同浓度和时间DHA对DU145细胞的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测DU145细胞凋亡率;Western blot检测不同浓度DHA作用48h凋亡蛋白caspase-3、survivin的表达情况。结果:MTT法显示与对照组比较,各实验组DHA可显著抑制DU145细胞增殖(P<0.01);FCM检测表明DU145细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P<0.01),且呈时间剂量依赖性;Western blot显示与对照组相比,各实验组DHA可显著下调DU145细胞survivin的表达(P<0.01),而caspase-3的表达增加(P<0.01)。结论:DHA可能通过下调survivin的表达,上调caspase-3而诱导DU145细胞凋亡。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 du145 双氢青蒿素 凋亡 SURVIVIN CASPASE-3
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重组P53基因复合物对DU145细胞致瘤性的抑制作用 被引量：4
12
作者 孔祥波 马庆杰 +1 位作者 谷欣权 刘群 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期369-370,共2页
目的　观察野生型 P53基因对前列腺癌细胞系 DU1 4 5致瘤性的抑制作用。方法　将野生型 P53真核表达载体用 lipofec-tamine导入 DU1 4 5细胞中。PCR法和抗 P53基因单抗免疫组化方法检测 P53基因的表达情况 ,MTT法检测细胞的生长程度 ,... 目的　观察野生型 P53基因对前列腺癌细胞系 DU1 4 5致瘤性的抑制作用。方法　将野生型 P53真核表达载体用 lipofec-tamine导入 DU1 4 5细胞中。PCR法和抗 P53基因单抗免疫组化方法检测 P53基因的表达情况 ,MTT法检测细胞的生长程度 ,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况 ,软琼脂生长试验检测细胞集落形成能力的变化。结果　 P53基因可转染入 DU1 4 5细胞中 ,且对其致瘤性有一定的抑制作用。结论　本实验从理论上证明了利用野生型 P53基因对前列腺癌进行基因治疗的可行性。 展开更多
关键词 P53基因 du145细胞株 基因治疗
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shRNA介导GSTP1基因沉默对激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145的影响 被引量：3
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作者 金鹏 谢晋良 +3 位作者 朱向荣 周成 丁翔 杨罗艳 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期807-816,共10页
目的:探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的DNA模板设计... 目的:探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的DNA模板设计3条表达载体(shRNA255,shRNA554,shRNA593),并克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo。经酶切和测序鉴定,筛选转染率最高基因沉默效果最好的shRNA作RNA干扰。DU145细胞株分为空白质粒转染组和shRNA转染组。转染前后按化学治疗药物分为氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)组及紫杉醇(paclitaxel,PA)组,并按作用浓度(FU:30,60,120,240μg/mL;PA:0.2,2,10,20μg/mL)分别分成4个亚组,并分别设有一个空白对照组。四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测转染后细胞增殖活性的变化,MTT及末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(terminal de-oxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测转染前后不同浓度FU和PA对DU145细胞抑制增殖及诱导凋亡的效果。结果:3条表达载体(pGPU6/GFP/Neo-shRNA255,pGPU6/GFP/Neo-shRNA554,pGPU6/GFP/Neo-shRNA593)的转染率分别为(63.3±1.04)%,(76.2±0.68)%,(72.7±0.33)%,shRNA554转染率最高,三者之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染后mRNA含量分别为128.31±2.50,43.24±4.30和85.62±6.30,GSTP1蛋白含量分别为163.92±12.40,65.38±9.30和114.25±16.70,shRNA554转染后GSTP1基因mRNA和蛋白含量均最低,三者比较差异有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率分别为(95.60±2.11)%,(90.20±0.86)%,(83.10±3.12)%和(74.60±1.32)%;转染后存活率为(91.30±1.43)%,(84.6±2.13)%,(73.2±1.52)%和(65.5±0.94)%。TUNEL检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(5.50±0.88)%,(10.20±1.64)%,(15.20±2.39)%和(25.10±2.59)%;转染后凋亡率(10.80±0.62)%,(15.70±1.32)%,(20.40±1.89)%和(34.90±2.54)%。转染后相同FU浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率为(98.50±2.34)%,(95.20±1.32)%,(89.40±0.68)%和(82.70±1.73)%;转染后存活率为(94.2±0.78)%,(86.5±2.13)%,(78.7±1.34)%和(70.1±0.76)%。TUNEL检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(2.4±1.07)%,(5.2±1.33)%,(10.5±2.41)%和(20.7±1.92)%;转染后凋亡率(5.46±2.13)%,(13.8±1.24)%,(21.2±2.39)%和(29.2±2.21)%。转染后相同PA浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:shRNA介导的GSTP1基因沉默可抑制雄激素非依赖型前列腺癌DUl45细胞增殖活性,诱导凋亡,并且其作用呈现时间依赖性,可提高其对于化学治疗的药物敏感性。 展开更多
关键词 前列腺癌细胞株du145 短发卡状RNA 谷胱甘肽S-转移酶P1 化学治疗敏感性
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AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响 被引量：2
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作者 张嵩 郝斌 +1 位作者 李惠翔 张海鹏 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第3期342-344,共3页
目的:观察AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抗癌机制。方法:DU145细胞分组培养,对照组单纯用DMEM高糖培养基培养,实验组给予终浓度为10、25、50及80μmol/L的AG490,分别培养24、48和72h后,采用MT... 目的:观察AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抗癌机制。方法:DU145细胞分组培养,对照组单纯用DMEM高糖培养基培养,实验组给予终浓度为10、25、50及80μmol/L的AG490,分别培养24、48和72h后,采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率,Western blot检测作用72h后STAT3信号通路相关蛋白(p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL)。结果:AG490能够抑制DU145细胞的增殖,呈剂量(F=786.170,P<0.001)、时间依赖性(F=354.570,P<0.001)。AG490作用于DU145细胞72h后,p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL蛋白的表达均降低。结论:AG490能抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,其机制可能与阻断STAT3信号通路有关。 展开更多
关键词 AG490 前列腺癌 du145 STAT3 增殖
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Survivin-siRNA真核重组质粒的构建和鉴定及其对前列腺癌DU145细胞的影响 被引量：2
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作者 刘艳波 葛贺 +1 位作者 卢丽莉 赵雪俭 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期642-645,共4页
目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞株内源性survivin基因和蛋白表达的影响。方法构建重组质粒shRNA-sur1和-sur2并分别转染DU145细胞株,通过半定量RT-PCR和Western印迹检测survivinm... 目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞株内源性survivin基因和蛋白表达的影响。方法构建重组质粒shRNA-sur1和-sur2并分别转染DU145细胞株,通过半定量RT-PCR和Western印迹检测survivinmRNA转录水平和蛋白表达的变化。结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒;两种重组质粒shRNA-sur1和-sur2均能明显抑制内源性survivin基因表达,其抑制率分别为72%±8%和77%±5%;两种质粒均能明显抑制survivin蛋白的表达,其抑制率分别为75%±8%和80%±6%。结论重组质粒shRNA-sur1和-sur2均可明显抑制DU145细胞内源survivin蛋白表达和mRNA转录,为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础。 展开更多
关键词 SIRNA du145细胞株 SURVIVIN基因 质粒
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薄荷醇抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和迁移 被引量：9
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作者 王永志 王行环 +4 位作者 杨中华 朱广斌 陈东 孟哲 周章炎 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2012年第5期301-306,共6页
目的探讨薄荷醇对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖和迁移能力的影响。方法通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和TRPA1的表达;MTT和划痕试验检测薄荷醇对DU145细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TRPM8对D... 目的探讨薄荷醇对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖和迁移能力的影响。方法通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和TRPA1的表达;MTT和划痕试验检测薄荷醇对DU145细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TRPM8对DU145细胞周期和凋亡的影响。结果 RT-PCR、免疫组织化学和Western blot提示TRPM8在DU145细胞中高表达而TRPA1在DU145细胞中不表达;薄荷醇能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与未经薄荷醇处理的细胞相比,经100μmol/L薄荷醇处理的细胞培养24、48和72h后,G0/G1期细胞显著增加(49.12%±1.92%vs61.71%±2.70%、77.65%±1.63%、71.81%±2.46%,P<0.05,P<0.01),进而抑制细胞增殖(P<0.05),并抑制细胞迁移(P<0.05),流式细胞术检测显示薄荷醇并不引起细胞凋亡。结论 TRPM8可能成为前列腺癌治疗的一个新靶点,对于高表达TRPM8的雄激素非依赖性前列腺癌针对TRPM8通道的药物治疗可能比TRPM8基因治疗更为实用,因此,薄荷醇作为一个潜在的抗肿瘤药物也拥有很大的发展前景。 展开更多
关键词 薄荷醇 前列腺肿瘤 du145
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Survivin-siRNA真核重组质粒的构建及对前列腺癌DU145细胞增殖抑制作用 被引量：2
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作者 刘艳波 耿艳 +1 位作者 葛贺 芦丽莉 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第2期129-133,共5页
目的应用RNA干扰技术（RNAi），构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA，并检测其对DU145细胞增殖抑制的影响．方法构建重组质粒shRNA-sur1和shRNA-sur2并分别转染DU145细胞株，通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用及凋亡... 目的应用RNA干扰技术（RNAi），构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA，并检测其对DU145细胞增殖抑制的影响．方法构建重组质粒shRNA-sur1和shRNA-sur2并分别转染DU145细胞株，通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用及凋亡的影响．结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒，转染72h后，两个实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的（37．2％±5．8％）（n=3）和（43．5％±7．2％）（n=3）．流式细胞术发现：实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡，与脂质体组比较，两实验组细胞的凋亡率分别为（21．70％±6．45％），（14．835±5．65％）．结论成功构建针对survivin siRNA的真核重组质粒，两种质粒体外均可抑制DU145增殖并诱导其凋亡，为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础． 展开更多
关键词 SIRNA du145细胞株 SURVIVIN基因 前列腺癌
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雷公藤内酯醇对DU145/ADM细胞阿霉素化疗敏感性及逆转耐药的影响 被引量：6
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作者 郭琼 南小新 +3 位作者 张欢 罗飏 张俊 杨金瑞 《中南药学》 CAS 2013年第2期81-84,共4页
目的探讨雷公藤内酯醇(TP)对DU145/ADM细胞阿霉素敏感性及逆转耐药的影响。方法采用MTT法检测TP预处理DU145/ADM细胞对阿霉素敏感性的影响,采用RT-PCR和Western blot分别检测相关基因转录水平与蛋白水平的变化。结果不同浓度TP(20、40、... 目的探讨雷公藤内酯醇(TP)对DU145/ADM细胞阿霉素敏感性及逆转耐药的影响。方法采用MTT法检测TP预处理DU145/ADM细胞对阿霉素敏感性的影响,采用RT-PCR和Western blot分别检测相关基因转录水平与蛋白水平的变化。结果不同浓度TP(20、40、80 ng mL-1)预处理DU145/ADM细胞72 h后,均可使细胞对不同浓度阿霉素(10、20、30、40、50 ng mL-1)敏感性较TP预处理前明显增加,mdr1表达较TP预处理前明显下降,并呈剂量相关性。结论 TP通过下调mdr1表达增强DU145/ADM细胞对阿霉素的敏感性,其有可能成为一种耐药逆转剂。 展开更多
关键词 雷公藤内酯醇 du145 ADM细胞株 阿霉素 多药耐药
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SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞凋亡的影响及可能机制 被引量：1
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作者 张大田 石建国 +1 位作者 张强 刘岩 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2599-2601,共3页
目的观察SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞系细胞凋亡和细胞凋亡关键调控因子(Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3)表达变化的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生的可能机制。方法体外培养DU145细胞,实验分对照组(DMSO组)和sirtinol... 目的观察SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞系细胞凋亡和细胞凋亡关键调控因子(Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3)表达变化的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生的可能机制。方法体外培养DU145细胞,实验分对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度为10,25和50μmol/L),Western印迹检测DU145细胞SIRT1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测DU145细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达。结果与对照组相比,随着sirtinol浓度的增加,SIRT1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡比例增加,诱导细胞发生凋亡。不同浓度sirtinol作用DU145细胞后Bcl-2蛋白表达减少,且随剂量增加表达越低;Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比率降低;伴随Cytochrome C的释放和Caspase-3的激活。结论下调SIRT1表达诱导前列腺癌细胞DU145细胞凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达相关。 展开更多
关键词 SIRT1 sirtinol 前列腺癌 du145 细胞凋亡
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吉非替尼对前列腺癌DU145细胞生长增殖及表皮生长因子受体蛋白表达的影响 被引量：2
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作者 陈永昌 陈卫国 +4 位作者 张杰 张鸽 马俊 张庆磊 付振宇 《中国临床医学》 2011年第5期606-607,共2页
目的:观察吉非替尼(Gefitinib)对前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达水平变化的影响。方法:不同浓度的Gefitinib(0～20μmol/L)分别作用于体外培养的前列腺癌DU145细胞24～120 h后,采用噻唑蓝(MTT... 目的:观察吉非替尼(Gefitinib)对前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达水平变化的影响。方法:不同浓度的Gefitinib(0～20μmol/L)分别作用于体外培养的前列腺癌DU145细胞24～120 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞周期分布,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞EGFR蛋白表达水平。结果:Gefitinib可以显著抑制DU145细胞的生长,呈时间-剂量依赖效应,并且细胞生长多停滞于G0/G1期,细胞EGFR蛋白表达分别下降了10.92%(2.5μmol/L)、43.71%(5μmol/L)、53.53%(10μmol/L)和85.98%(20μmol/L),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Gefitinib能显著抑制前列腺癌DU145细胞的生长,其机制可能与细胞生长在G0/G1期阻滞及EGFR蛋白表达水平下调等因素有关。 展开更多
关键词 du145细胞 吉非替尼 生长增殖 表皮生长因子受体
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