期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到445篇文章
< 1 2 … 23 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
1
作者 刘丹 黄小洁 +5 位作者 吴华伟 孙淼 陈延飞 秦义娴 侯力丹 薛麒 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期51-56,共6页
为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重... 为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 e2蛋白 间接eLISA 抗体检测
下载PDF
表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺研究
2
作者 陈晓 李伟国 +4 位作者 宋欢欢 苏晓蕊 王同燕 谭菲菲 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期49-57,共9页
为建立一套表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺,提高反应器上猪瘟病毒E2蛋白的表达量,以商业化培养基为基础,通过对关键营养组分添加量的DOE试验设计优化,获得一种组合补料配方,并在3 L反应器上对补料方式进行优化,以最大限度... 为建立一套表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺,提高反应器上猪瘟病毒E2蛋白的表达量,以商业化培养基为基础,通过对关键营养组分添加量的DOE试验设计优化,获得一种组合补料配方,并在3 L反应器上对补料方式进行优化,以最大限度提高细胞密度。进一步在反应器上摸索了通气策略,以精确调控猪瘟E2重组杆状病毒培养过程的营养代谢平衡,解决副产物乳酸和氨过度积累导致细胞活力下降的问题。首次使用半连续补料工艺与渗透压动态平衡相结合的补料策略以及定向调节通气的工艺模式,使猪瘟病毒E2蛋白的表达量由130 mg/L增加至520 mg/L,提高了3倍。将3 L反应器工艺在100 L反应器上进行了连续3个批次的验证,结果猪瘟病毒E2蛋白的表达量均大于500 mg/L,收获猪瘟E2蛋白制备的疫苗抗体均在2周后转阳,且抗体水平持续上升,接种后8周抗体阻断率仍维持在80%左右。综上,3 L反应器工艺能够稳定放大至100 L反应器,建立了表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒100 L反应器工艺,且100 L反应器上重组蛋白的表达量稳定、免疫原性良好。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 重组杆状病毒 关键营养单元 半连续补料 定向调节
下载PDF
3种佐剂对猪瘟病毒E2蛋白免疫效果的影响
3
作者 陈玉梅 刘运超 +3 位作者 祁艳华 梁超 周景明 王爱萍 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期22-27,共6页
为筛选猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)亚单位疫苗高效佐剂,将杆状病毒表达系统制备的重组CSFV E2蛋白分别与铝佐剂(胶状)、50V佐剂(W/O)和201佐剂(W/O/W)3种不同佐剂配伍后免疫Balb/c小鼠,经间接ELISA和阻断ELISA测定抗体... 为筛选猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)亚单位疫苗高效佐剂,将杆状病毒表达系统制备的重组CSFV E2蛋白分别与铝佐剂(胶状)、50V佐剂(W/O)和201佐剂(W/O/W)3种不同佐剂配伍后免疫Balb/c小鼠,经间接ELISA和阻断ELISA测定抗体效价及血清IL2、IL4、IL10和IFN-γ细胞因子水平。结果显示,经Ni-NAT亲和层析纯化获得的重组E2蛋白纯度约95%;免疫后28 d,无佐剂的E2蛋白免疫Balb/c小鼠后抗体效价达到1∶3200,但血清抗体阻断率小于30%;加入佐剂后,抗体效价明显提升,血清抗体阻断率也随之升高,3种不同的佐剂免疫血清抗体阻断率大于40%。其中50V佐剂组抗体效价最高可达1∶204800,其抗体阻断率大于80%,且50V佐剂组免疫血清中IL-4表达量最高为892.23 pg/mL,说明50V佐剂可以有效激发以Th2型免疫应答为主的细胞免疫反应。综合B细胞和T细胞免疫应答结果,50V佐剂对E2蛋白的免疫效果提升明显优于其他佐剂,试验结果为进一步研究高效猪用CSFV亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 佐剂 免疫效果
下载PDF
小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备
4
作者 武福星 董阳超 +6 位作者 张剑 薛潘 袁若栋 陈洋 元航 李宝莉 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期62-68,共7页
目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。 展开更多
关键词 西方马脑炎病毒(WeeV) e2包膜糖蛋白胞外区(e2ecto) 原核表达 单克隆抗体(mAb)
原文传递
基于E2蛋白BVDV-1病毒样颗粒的构建及对小鼠的免疫效力评估
5
作者 张家祺 贾浠宁 +4 位作者 周群 宋鑫 朱晨曦 李格格 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5143-5153,共11页
本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)E2病毒样颗粒(VLPs),并测定其对小鼠的免疫效力。选用BVDV-1 SWU-Z6株的E 2基因序列为模板,针对昆虫细胞密码子偏嗜性优化合成E 2基因,利用昆虫细胞-杆状病毒表达... 本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)E2病毒样颗粒(VLPs),并测定其对小鼠的免疫效力。选用BVDV-1 SWU-Z6株的E 2基因序列为模板,针对昆虫细胞密码子偏嗜性优化合成E 2基因,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备BVDV-1 E2 VLPs。采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证E2蛋白在SF9细胞中的表达,通过电镜鉴定BVDV-1 E2 VLPs的组装。对获得的VLPs进行超离纯化,使用不同剂量的VLPs添加MF59佐剂和CpG-ODN免疫增强剂肌注免疫小鼠,同时设立BVDV商业灭活苗组和PBS空白对照组。二免4周后选用BVDV-1 SWU-Z6毒株以灌胃途径对小鼠进行攻毒,通过小鼠体重变化以及粪便中的病毒载量来评估BVDV-1 E2 VLPs的免疫保护效果。经酶切鉴定和测序验证表明,优化后的E 2基因已正确克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Dual中,并获得重组质粒pFast Dual BVDV-1 E2,将重组质粒转化到DH10.Bac感受态细胞经过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-BVDV-1 E2,将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒Baculo-BVDV-1 E2。电镜下观察可见大量直径在80~100 nm的BVDV病毒样颗粒,IFA和Western blot结果证实重组杆状病毒能够正确表达E2蛋白,并具有良好的生物学活性。BVDV-1 E2 VLPs 50μg组小鼠首免2周时ELSIA抗体效价约为1∶10000,加强免疫2周后抗体效价达到1∶100000。攻毒保护试验结果表明,免疫组小鼠在攻毒后第7天表现出体重下降,而后开始回升;在攻毒后第10天采集粪便没有检测到病毒拷贝。与非免疫组小鼠相对比,BVDV-1 E2 VLPs 50μg剂量两次免疫后阻止了因病毒感染而导致体重下降以及消化道内病毒的复制。研究中成功制备了BVDV-1 E2 VLPs,能诱导机体产生较强的体液免疫反应,可使小鼠获得抵抗BVDV-1 SWU-Z6毒株感染的免疫保护力。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 e2蛋白 杆状病毒 病毒样颗粒 免疫原性
下载PDF
家兔ANXA1蛋白与猪瘟病毒E2蛋白相互作用并影响其复制的研究
6
作者 赵小天 谢利豹 +3 位作者 张柯慧 马吉飞 李永锋 仇华吉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期559-567,共9页
本研究团队前期研究发现,猪瘟病毒(CSFV) HCLV株E2蛋白结构域Ⅰ (E2^(Domain Ⅰ))是HCLV株适应家兔的关键结构域,Domain Ⅰ中108位脯氨酸(P)和109位苏氨酸(T)是HCLV株适应家兔必需氨基酸。为进一步探究HCLV适应家兔的分子机制,本研究提... 本研究团队前期研究发现,猪瘟病毒(CSFV) HCLV株E2蛋白结构域Ⅰ (E2^(Domain Ⅰ))是HCLV株适应家兔的关键结构域,Domain Ⅰ中108位脯氨酸(P)和109位苏氨酸(T)是HCLV株适应家兔必需氨基酸。为进一步探究HCLV适应家兔的分子机制,本研究提取家兔脾脏淋巴细胞膜蛋白分别与CSFV Shimen (SM)株E2蛋白(SM E2)、HCLV株E2蛋白突变体(HCLV E2^(P108L-T109I))及HCLV株E2蛋白(HCLV E2)共孵育,经SDS-PAGE后通过蛋白质质谱鉴定,结果却意外发现,CSFV SM E2与家兔脾脏淋巴细胞膜蛋白作用后在37 ku左右处多出一条带;质谱分析结果显示其可能为细胞膜蛋白膜联蛋白1 (ANXA1),且与CSFV SM E2蛋白之间可能存在相互作用。为了分析ANXA1在HCLV适应家兔中的作用,将CSFV SM株和HCLV株分别接种家兔,48 h和72 h后分离各组兔外周血单个核淋巴细胞(PBMC),采用RT-q PCR方法检测ANXA1基因m RNA的转录水平。结果显示,与对照组相比,家兔在接种SM株和HCLV株后,ANXA1基因m RNA转录水平均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)下调,且与接种HCLV株的家兔相比,接种SM株家兔中ANXA1基因m RNA的转录水平极显著(P<0.001,72 h)或者显著(P<0.05,48 h)下调,表明接种SM株后的家兔可能通过调控ANXA1的转录水平抑制SM株的复制。将pCAGGS-Flag-ANXA1和pCAGGS-Flag分别转染HKE293T细胞,48 h后收集细胞样品,通过GST pulldown验证ANXA1与CSFV SM E2蛋白的相互作用;将pCAGGS-Strep-SME2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为强毒实验组,将pCAGGS-Myc-HCLV E2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为弱毒实验组,48 h后采用Co-IP试验验证ANXA1与不同CSFV E2的相互作用。上述结果进一步表明,ANXA1与CSFV SM E2存在相互作用,但其与HCLV E2无相互作用;将pCAGGS-Strep-SME2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为实验组,采用激光共聚焦显微镜观察发现SM E2蛋白和ANXA1蛋白共定位于细胞浆中。将表达ANXA1的重组质粒转染ST细胞,48 h后分别接种CSFV SM株和HCLV株,采用RT-q PCR检测CSFV基因的拷贝数。结果显示,与转染pCAGGS-Flag的ST细胞相比,接种CSFV SM株的细胞中病毒基因拷贝数极显著上升(P<0.01),而接种HCLV株细胞中病毒基因拷贝数无明显变化。表明过表达ANXA1后可以促进CSFV强毒株的复制,但不影响弱毒株的复制。本研究首次证实,家兔脾脏淋巴细胞ANXA1通过与CSFV SM E2蛋白的相互作用促进CSFV的复制,为进一步研究CSFV E2蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 病毒复制 适应性 家兔脾脏淋巴细胞膜蛋白膜联蛋白1
下载PDF
牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立
7
作者 孙丹 黄小洁 +4 位作者 薛麒 秦义娴 高月异 孙淼 刘丹 《中国兽药杂志》 2023年第11期1-7,共7页
为建立检测牛病毒性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法,利用大肠杆菌表达系统成功表达E2蛋白并纯化,利用纯化后的蛋白作为包被抗原,用方阵法对影响ELISA试验的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。确定E2抗原最佳包被浓... 为建立检测牛病毒性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法,利用大肠杆菌表达系统成功表达E2蛋白并纯化,利用纯化后的蛋白作为包被抗原,用方阵法对影响ELISA试验的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。确定E2抗原最佳包被浓度为1μg/mL,最佳血清稀释度为1∶40,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min;最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450nm≥0.255。与血清中和试验和商品化试剂盒进行比较,总符合率分别为98%和96%,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与其它常见牛病毒阳性血清均无交叉反应。本研究成功建立了间接ELISA方法,为进一步用于大批量牛血清样本的抗体检测和流行病学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 e2蛋白 原核表达 间接eLISA方法
下载PDF
BVDV-1E2蛋白抗原表位的串联表达及其多克隆抗体的制备
8
作者 陈小金 张俊哲 +6 位作者 曲鹏 侯文婷 殷其刚 赵丹 霍蕾 肖妍 张海滨 《中国动物检疫》 CAS 2023年第9期104-109,共6页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与猪瘟病毒(CSFV)的E2蛋白具有部分同源性,可导致血清学交叉反应。为准确检测BVDV,排除CSFV的干扰,以柔性氨基酸(GSGS)将BVDV-1NADL株E2蛋白的5个特异性抗原表位(E1~5)串联(E1-E1-GSGS-E2-E2-GSGS-E3-E3-GSGS-E4-... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与猪瘟病毒(CSFV)的E2蛋白具有部分同源性,可导致血清学交叉反应。为准确检测BVDV,排除CSFV的干扰,以柔性氨基酸(GSGS)将BVDV-1NADL株E2蛋白的5个特异性抗原表位(E1~5)串联(E1-E1-GSGS-E2-E2-GSGS-E3-E3-GSGS-E4-E4-GSGS-E5-E5,命名为5BE),构建原核表达载体pET-28a-5BE,诱导表达重组蛋白His-5BE;将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并以间接ELISA和WesternBlot方法检测多克隆抗体的效价及反应性。结果显示:体外表达获得的重组蛋白His-5BE大小为22kD;经ELISA检测,制备的His-5BE多抗血清效价至少达到1:160000;经WesternBlot检测,制备的抗血清1:500稀释时具有良好的反应性。结果表明,本研究成功获得了BVDV5BE重组蛋白及其多克隆抗体,为后续BVDV单克隆抗体制备及检测方法建立奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 e2蛋白 原核表达 多克隆抗体
下载PDF
盖塔病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
9
作者 孟慧 鹿田原 +2 位作者 周景业 牟春晓 陈振海 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2023年第3期51-58,共8页
为制备盖塔病毒(GETV)E2蛋白单克隆抗体,通过大肠埃希菌表达系统表达重组E2蛋白,经过镍柱吸附、切胶纯化,获得E2蛋白,将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,3次免疫后加强免疫,细胞融合,通过间接免疫荧光筛选阳性杂交瘤细胞,最终筛选出1株针对G... 为制备盖塔病毒(GETV)E2蛋白单克隆抗体,通过大肠埃希菌表达系统表达重组E2蛋白,经过镍柱吸附、切胶纯化,获得E2蛋白,将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,3次免疫后加强免疫,细胞融合,通过间接免疫荧光筛选阳性杂交瘤细胞,最终筛选出1株针对GETV E2蛋白的阳性杂交瘤细胞9E8,将该杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔内生产腹水。经间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验鉴定,该单抗可与GETV发生特异性反应。经IP试验证明,该单抗可识别天然结构的GETVE2蛋白。对E2单抗进行抗原表位鉴定,确定其所识别的多肽序列为66KIRYIAGHD74。与GenBank上登录的其他GETV毒株序列对比,发现该段序列高度保守。综上,E2单抗9E8免疫学反应特性良好,为研究该病毒提供了有效的免疫学检测工具。 展开更多
关键词 盖塔病毒 e2蛋白 单克隆抗体 抗原表位
下载PDF
不同免疫增效剂对免疫猪瘟E2蛋白亚单位疫苗小鼠抗体的影响
10
作者 徐龙飞 王遵宝 +5 位作者 李俊辉 廖勇 曹剑 唐慧芬 侯玉珍 贺笋 《中国动物保健》 2023年第8期95-98,共4页
为了研究不同免疫增效剂对免疫猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗小鼠产生特异性抗体与鼠IFN-γ水平的影响。本研究将昆明白小鼠随机分为6组:CpG-A组、CpG-B组、复合增效剂组[单磷酰脂质A(MPL):胞壁酰二肽(MDP):β-葡聚糖=1:1:1]、纳米颗粒组、... 为了研究不同免疫增效剂对免疫猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗小鼠产生特异性抗体与鼠IFN-γ水平的影响。本研究将昆明白小鼠随机分为6组:CpG-A组、CpG-B组、复合增效剂组[单磷酰脂质A(MPL):胞壁酰二肽(MDP):β-葡聚糖=1:1:1]、纳米颗粒组、猪瘟E2疫苗组,非免疫对照组(Control组)。实验共使用6种免疫增效剂:CpG-A、CpG-B、单磷酰脂质A(MPL)、胞壁酰二肽(MDP)、β-葡聚糖、纳米颗粒与猪瘟E2蛋白(40μg/m L)混合制备疫苗,小鼠经皮下注射疫苗定期眼眦采血,分别使用猪瘟E2抗体检测试剂盒与鼠IFN-γ检测试剂盒测定猪瘟病毒E2蛋白特异性抗体和鼠IFN-γ水平。免疫后小鼠检测结果显示,首免后35天CpG-B组、复合增效剂组小鼠血清样品猪瘟E2抗体均高于猪瘟E2组,CpG-B组与猪瘟E2组比较抗体水平差异显著(F=0.048,p<0.05),复合增效剂组与猪瘟E2组比较抗体水平差异极显著(F=0.008,p<0.01);CpG-A、纳米颗粒组与猪瘟E2组比较,抗体水平差异不显著(F_(CpG-A)=0.56、F_(纳米颗粒)=0.35,p<0.05),CpG-B组与复合增效剂组效果对于猪瘟E2疫苗特异性抗体促进作用显著。综合以上研究结果首次表明,添加复合增效剂制成的疫苗进行单次免疫后,均能有效提高免疫后小鼠的猪瘟E2蛋白特异性抗体的水平;CpG-B与复合增效剂均能有效提高小鼠血清中猪瘟病毒中和抗体的水平;CpG-B能促进免疫后7~14 d小鼠IFN-γ的上调。本研究为昆虫细胞-杆状病毒系统表达的重组蛋白制备亚单位疫苗的免疫增效剂开发和研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 免疫增效剂 中和抗体 猪瘟e2蛋白 鼠IFN-γ
下载PDF
猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备 被引量：25
11
作者 侯强 彭伍平 +1 位作者 孙元 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-5,共5页
利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被... 利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被CSFV C株抗血清识别。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株稳定分泌抗tE2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克隆抗体能够与CSFV C株和石门株以及杆状病毒表达的重组E2蛋白发生特异性反应。推测,该单克隆抗体是针对CSFV E2蛋白的一个保守线性表位。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 原核表达 单克隆抗体
下载PDF
猪瘟兔化弱毒E2蛋白A/D区的高效表达和蛋白纯化及其应用 被引量：13
12
作者 苏小运 缪德年 +2 位作者 许立华 陈德胜 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第2期164-168,共5页
本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件... 本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件下,对所得的重组蛋白质进行了定量。重组蛋白质被用来包被96孔ELISA板并应用于免疫猪瘟抗体水平的测定。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒 e2蛋白A/D区 原核表达 e2糖蛋白 eIISA 血清抗体
下载PDF
原核表达的猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽的复性和纯化 被引量：13
13
作者 刘伯华 余兴龙 +5 位作者 张茂林 肖昌 徐兴然 吴健敏 李作生 涂长春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期145-148,共4页
对原核中以包涵体形式高效表达的猪瘟病毒 (CSFV) E2蛋白抗原表位区段 (m E2 )进行了变性、复性与纯化研究。包涵体经超声破菌分离 ,然后进行变性溶解和复性 ,复性产物经硫酸铵沉淀浓缩后 ,利用免疫亲和层析进行纯化。纯化产物的 SDS- P... 对原核中以包涵体形式高效表达的猪瘟病毒 (CSFV) E2蛋白抗原表位区段 (m E2 )进行了变性、复性与纯化研究。包涵体经超声破菌分离 ,然后进行变性溶解和复性 ,复性产物经硫酸铵沉淀浓缩后 ,利用免疫亲和层析进行纯化。纯化产物的 SDS- PAGE分析结果表明 ,其纯度达 97%。酶联免疫试验测定的结果显示 ,与复性前变性蛋白相比 ,纯化蛋白与 CSFV特异的单抗和多克隆阳性血清的反应活性提高了 2～ 16倍。 展开更多
关键词 原核表达 猪瘟病毒 e2蛋白抗原多肽 包涵体 复性 纯化 保护性抗原蛋白
下载PDF
猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选 被引量：10
14
作者 廖亚金 李素 +5 位作者 贺番 何文瑞 董泓 冯烁 孙元 仇华吉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期707-710,共4页
为研究猪瘟病毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA。纯化双链cDNA并与载体pGADT7-... 为研究猪瘟病毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA。纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库。以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 PBMC CDNA文库 酵母双杂交 e2蛋白
下载PDF
猪瘟病毒E2蛋白主要抗原域的高效表达及间接ELISA方法的初步建立 被引量：13
15
作者 王海震 李学仁 +1 位作者 冯秀丽 陈溥言 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期81-85,共5页
重组质粒pET-2e转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导表达,比较不同诱导条件下目的蛋白的表达量,确定其最佳表达条件,使外源基因获得了较高水平的表达,可达菌体蛋白总量的36.6％。Western-blot检测表明表达产物具有良好的免疫反应原性。... 重组质粒pET-2e转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导表达,比较不同诱导条件下目的蛋白的表达量,确定其最佳表达条件,使外源基因获得了较高水平的表达,可达菌体蛋白总量的36.6％。Western-blot检测表明表达产物具有良好的免疫反应原性。将收集的纯培养物进行超声波裂解后以镍亲和层析柱纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定了目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度,初步建立了检测CSF血清抗体水平的间接ELISA方法。以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约120头份血清样品进行检测,结果显示:使用囊素与疫苗共同免疫猪的血清抗体水平明显高于未加囊素组猪的血清抗体水平,与以往的报道一致,为以CSFV重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA方法的标准化奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 抗原域 基因表达 间接eLISA 猪瘟 抗体检测 诊断试剂盒
下载PDF
猪瘟病毒糖基化E2蛋白和E0蛋白的协同免疫保护作用 被引量：10
16
作者 李文良 毛立 +2 位作者 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期357-361,共5页
为了研究杆状病毒表达的糖基化亚单位疫苗的协同免疫保护作用,将重组杆状病毒感染Sf9细胞制备猪瘟E2、E0重组蛋白,Western blot检测蛋白表达和糖基化情况。用重组蛋白单独或联合免疫家兔,检测血清中抗体水平变化。在首免后4周用猪瘟兔... 为了研究杆状病毒表达的糖基化亚单位疫苗的协同免疫保护作用,将重组杆状病毒感染Sf9细胞制备猪瘟E2、E0重组蛋白,Western blot检测蛋白表达和糖基化情况。用重组蛋白单独或联合免疫家兔,检测血清中抗体水平变化。在首免后4周用猪瘟兔化弱毒疫苗C株攻毒家兔,监测其体温变化,并运用RT-PCR检测家兔脾脏中病毒RNA。结果表明,E2、E2+E0免疫组兔均可诱导产生高水平的抗体和中和抗体,但两组间差异不显著。攻毒后E2免疫组2/5兔出现轻热症状,1/5兔脾脏病毒阳性;E2+E0组兔均未出现发热症状,也未检测到C株病毒RNA。E0组不能诱导兔产生中和抗体,但也能提供部分保护(2/5)。可见,基于E2、E0的亚单位疫苗具有良好的免疫原性,且两者联合使用具有协同作用,有望成为新型亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 猪瘟 亚单位疫苗 e2蛋白 e0蛋白 协同作用
下载PDF
基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：7
17
作者 孙元 夏照和 +2 位作者 梁冰冰 彭伍平 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期315-319,共5页
根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法... 根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35。将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%。表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 密码子优化 杆状病毒表达系统 间接eLISA
下载PDF
猪瘟病毒野毒株E2蛋白特异性单抗免疫抑制制备法的建立 被引量：7
18
作者 夏照和 彭伍平 +4 位作者 成丹 侯强 王万利 孙元 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期757-761,共5页
采用环磷酰胺免疫抑制法制备特异性识别猪瘟病毒(CSFV)野毒株的单克隆抗体,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株能稳定分泌抗E2... 采用环磷酰胺免疫抑制法制备特异性识别猪瘟病毒(CSFV)野毒株的单克隆抗体,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株能稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,结果显示,该单克隆抗体能够与CSFV石门株发生反应,同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群CSFV野毒发生特异性反应,并具有中和活性,而与CSFV兔化弱毒疫苗株不发生反应。表明,该单克隆抗体可以用于鉴别CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 重组杆状病毒 单克隆抗体 免疫抑制
下载PDF
利用随机肽库鉴定猪瘟病毒E2蛋白抗原表位 被引量：8
19
作者 肖昌 余兴龙 +3 位作者 张茂林 徐兴然 涂长春 张玉静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期449-453,共5页
利用噬菌体随机12肽库对抗猪瘟病毒(classical swine fever virus CSFV)糖蛋白E2特异的单抗A11进行表位鉴定,经过4轮筛选后,随机挑取10个噬菌体克隆作竞争ELISA检测.结果表明,10个克隆中除4号克隆外,其余9个均能抑制原核表达的E2蛋白和... 利用噬菌体随机12肽库对抗猪瘟病毒(classical swine fever virus CSFV)糖蛋白E2特异的单抗A11进行表位鉴定,经过4轮筛选后,随机挑取10个噬菌体克隆作竞争ELISA检测.结果表明,10个克隆中除4号克隆外,其余9个均能抑制原核表达的E2蛋白和A11单抗之间的抗原抗体反应,抑制率在35%～64%;DNA测序表明,所有产生竞争抑制作用的8个噬菌体克隆的12肽序列均含有XXWRXXXL核心序列,而没有抑制作用的克隆则不含该核心序列;Western-blot试验证明,所挑阳性克隆均能被单抗A11识别.多序列比较发现,该核心序列与猪瘟病毒E蛋白的28～35位氨基酸TTWKEYSH有一定的同源性,人工合成的含有部分核心序列氨基酸的多肽可以与单抗A11反应,表明单抗A11所针对的抗原表位位于CSFV E2蛋白的28～35位氨基酸. 展开更多
关键词 随机肽库 猪瘟病毒 e2蛋白 抗原表位
下载PDF
PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白在杆状病毒囊膜表面的共展示及展示蛋白的免疫原性分析 被引量：6
20
作者 许信刚 王志昇 +2 位作者 李兆才 张琪 童德文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期892-898,共7页
本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株。利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF5... 本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株。利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF5-E2。该重组病毒带有His6标签,且胞质区域(CTD)和跨膜区域(TM)均来源于杆状病毒囊膜蛋白gp64的CTD和TM。对重组病毒进行Western blot分析、激光共聚焦显微镜观察、免疫金电子显微镜检测、动物免疫试验以及淋巴细胞增殖试验。Western blot分析结果表明,重组杆状病毒中表达了重组GP5和E2蛋白;激光共聚焦显微镜检测表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf-9后在细胞膜上展示了重组GP5和E2蛋白;免疫金电子显微镜观察表明,重组GP5和E2蛋白展示在杆状病毒囊膜上;动物免疫试验表明,重组杆状病毒免疫小鼠后产生了抗PRRSV和抗CSFV的特异性抗体;淋巴细胞增殖试验表明,重组杆状病毒能诱发较强的细胞免疫应答。本试验成功构建表面展示PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和CSFV的混合感染奠定基础。 展开更多
关键词 杆状病毒表面展示系统 PRRSV CSFV GP5蛋白 e2蛋白
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 23 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部