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牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立 被引量:4
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作者 钟发刚 黄新 +1 位作者 王新华 李娜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期761-764,共4页
【目的】为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法。【方法】重组质粒pET-(1-345)转化宿主菌BL21(DE),以IPTG进行诱导表达,使外源基因获得了较高水平的表达;Westem一blot检测表达产物反应原性,同时进行特异性检测;将收集... 【目的】为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法。【方法】重组质粒pET-(1-345)转化宿主菌BL21(DE),以IPTG进行诱导表达,使外源基因获得了较高水平的表达;Westem一blot检测表达产物反应原性,同时进行特异性检测;将收集的纯培养物进行超声波裂解后以His bind kit蛋白质纯化试剂盒纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度。【结果】重组蛋白表达可达菌体蛋白总量的19.7%,且具有较好的反应原性和特异性,以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约43头份血清样品进行检测,检测阳性结果与进口试剂盒检测结果符合率达到93.55%。【结论】以BVDV E2重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA检测方法是可行的,为其进一步的标准化莫定基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 e2重组蛋白 eLISA
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猪瘟病毒E2重组蛋白纯化和复性条件的研究 被引量:1
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作者 胡慧 邱昌庆 张彦明 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第4期251-255,共5页
对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了... 对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了免疫活性检测,结果表明,其比未纯化蛋白的免疫活性高20倍左右。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2重组蛋白 包涵体 复性 纯化
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猪瘟病毒E2蛋白重组T4噬菌体的构建及免疫学特性 被引量:5
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作者 吴健敏 任兆钧 +2 位作者 余兴龙 张念祖 涂长春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期521-524,共4页
利用重组 PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV) E2基因与 T4噬菌体 SOC基因 C端融合 ,构建了大小为 12 33bp的SOC/ E2融合基因 ,将其插入携带 T4溶菌酶基因 (e)和 denv基因的 T4重组载体 (p RH) ,构建了重组载体 p RSE2 ,通过重组载体与缺失突变型... 利用重组 PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV) E2基因与 T4噬菌体 SOC基因 C端融合 ,构建了大小为 12 33bp的SOC/ E2融合基因 ,将其插入携带 T4溶菌酶基因 (e)和 denv基因的 T4重组载体 (p RH) ,构建了重组载体 p RSE2 ,通过重组载体与缺失突变型 T4噬菌体基因发生同源重组 ,将 SOC/ E2融合基因整合入 T4噬菌体的基因组中。经EL ISA、Western blot等免疫学检测证实 ,T4噬菌体表达的 E2融合蛋白具有 CSFV免疫学活性 ,动物试验证实 T4 .SOC. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白重组 T4噬菌体 构建技术 免疫学特性
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用裁截的E_2重组蛋白作为抗原建立ELISA检测猪瘟病毒抗体
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作者 AClavijo 邱昌庆 《中国畜牧兽医》 CAS 2002年第5期46-48,共3页
关键词 e2重组蛋白 抗原 eISA检测 猪瘟 病毒抗体
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牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白PPA-ELISA方法的建立及临床应用 被引量:6
5
作者 柴顺秀 马花 +1 位作者 韩英 赵隆寿 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第6期106-110,共5页
用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(PPA)为二抗,建立了检测BVDV血清抗体的E2-PPA-ELISA方法。研究选取特异性良好的E2抗原,确定了最佳工作条件为:E2蛋白抗原的最适包被质量浓度为16.0μg/... 用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(PPA)为二抗,建立了检测BVDV血清抗体的E2-PPA-ELISA方法。研究选取特异性良好的E2抗原,确定了最佳工作条件为:E2蛋白抗原的最适包被质量浓度为16.0μg/mL,酶标二抗的工作浓度为1∶2 000,血清稀释度为1∶40时效果最佳。通过重复性试验、特异性试验和敏感性试验证明,与用BVDV全病毒为抗原的IDEXX ELISA试剂盒相比,建立的E2-PPA-ELISA抗体检测方法具有较好的重复性、敏感性和特异性。对285份不同地区采集的血清样本进行检测,阳性检出率为33.4%,与IDEXX ELISA试剂盒的检出率无明显差异。表明该方法为BVDV的快速诊断和流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法,适合规模化养牛场BVDV的抗体监测以及流行病学调查。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 重组e2蛋白 PPA-酶联免疫吸附试验
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猪瘟E2亚单位疫苗攻毒保护效力研究 被引量:9
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作者 王遵宝 李俊辉 +4 位作者 豆智华 郑侃 李森江 寇春 贺笋 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第4期18-23,共6页
猪瘟E2亚单位疫苗是一种用杆状病毒载体系统表达的猪瘟病毒E2重组蛋白,与油佐剂按比例混合、乳化制成的新型灭活疫苗,可区分感染和接种疫苗动物,有助于猪场的猪瘟净化。为评价该疫苗免疫效力,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟兔化弱毒疫... 猪瘟E2亚单位疫苗是一种用杆状病毒载体系统表达的猪瘟病毒E2重组蛋白,与油佐剂按比例混合、乳化制成的新型灭活疫苗,可区分感染和接种疫苗动物,有助于猪场的猪瘟净化。为评价该疫苗免疫效力,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟兔化弱毒疫苗(传代细胞源)分别免疫靶动物,二免后2 w用强毒人工感染试验动物,连续测温16 d,并记录试验猪临床症状,结合病理剖检、组织器官病毒含量测定结果,比较不同疫苗保护力。结果显示:对照组猪攻毒后体温高热稽留,表现出典型猪瘟症状,攻毒后11 d内5/5发病死亡,尸检剖检呈典型猪瘟病理解剖学变化;免疫猪全部健活,未表现任何猪瘟症状,组织器官剖检无病变。结果表明,猪瘟E2亚单位疫苗与活疫苗保护效力相当,可为靶动物提供可靠的免疫保护效力。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2重组蛋白 亚单位疫苗 保护效力
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利用重组E2蛋白检测BVDV血清抗体间接Dot-ELISA方法的建立 被引量:6
7
作者 赵月兰 王建永 +4 位作者 左玉柱 张磊 郭红斌 秦建华 杨汉春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1093-1096,共4页
利用大肠杆菌表达的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白作为抗原,建立了检测BVDV血清抗体的间接Dot-ELISA。最佳工作条件为:E2蛋白抗原的最适包被质量浓度2.0 mg/L(2.0 ng/点),酶标抗体的工作浓度为1∶500,血清稀释度为1∶100,3%明胶-TB... 利用大肠杆菌表达的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白作为抗原,建立了检测BVDV血清抗体的间接Dot-ELISA。最佳工作条件为:E2蛋白抗原的最适包被质量浓度2.0 mg/L(2.0 ng/点),酶标抗体的工作浓度为1∶500,血清稀释度为1∶100,3%明胶-TBS作为封闭液,封闭45 min效果最佳。通过重复性试验、交叉试验、特异性试验和稳定性试验等证明,该方法重复性好、特异性强、灵敏度高;与用BVDV全病毒为抗原的IDEXX ELISA试剂盒相比,特异性96.67%,灵敏度90%,符合率95%。应用建立的检测方法对河北省4个奶牛场采集的178份腹泻奶牛血清样本进行检测,结果BVDV血清抗体阳性率40.45%,与IDEXX ELISA试剂盒的检出率无明显差异。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) e2重组蛋白 间接Dot—eLISA
原文传递
Bioinformatic Analysis of zm ERECTA-LIKE2Gene from Zea mays
8
作者 Wencheng JIA Yihong JI +9 位作者 Yanyan ZHANG Jinbao PAN Yongkun YU Min LU Jun HAN Zhanjie NAN Weixiang WANG Liyu SHI Ye WANG Qingpeng SUN 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2016年第1期45-47,共3页
Zm ERECTA-LIKE2 sequences were isolated according to the Zea mays genome. The study indicates that zm ERECTALIKE2 is composed of 2 410 nucleotides and encodes a receptor-like kinase which consists of 774 amino acids b... Zm ERECTA-LIKE2 sequences were isolated according to the Zea mays genome. The study indicates that zm ERECTALIKE2 is composed of 2 410 nucleotides and encodes a receptor-like kinase which consists of 774 amino acids by biological analysis. The results show that zm ERECTA-LIKE2 protein contains 13 domains of leucine-rich repeats and belongs to the PKclike family, it is a liposoluble protein, with a conserved transmembrane region. 展开更多
关键词 Zea mays zm eReCTA-LIKe2 BIOINFORMATICS
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猪瘟病毒重组E2蛋白PPA-ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量:16
9
作者 李娇 王金良 +2 位作者 祖立闯 谢金文 沈志强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1390-1394,1399,共6页
以纯化的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,组装了检测CSFV抗体的PPA-ELISA诊断试剂盒。该试剂盒与其他7种常见猪病毒(PRRSV、PPV、JEV、PCV-2、PEDV、PRV、TGEV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的... 以纯化的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,组装了检测CSFV抗体的PPA-ELISA诊断试剂盒。该试剂盒与其他7种常见猪病毒(PRRSV、PPV、JEV、PCV-2、PEDV、PRV、TGEV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与间接血凝试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为86.2%,85.4%,87.2%;与IDEXX ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为91.3%,93.2%,88.7%。表明本试验研制的E2-PPA-ELISA抗体检测试剂盒具有良好的重复性、敏感性和特异性,将为CSFV的快速诊断、免疫猪群抗体水平监测和CSFV流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 重组e2蛋白 PPA-eLISA
原文传递
猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立 被引量:3
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作者 杨利 张浩明 +2 位作者 李丁 郑其升 芮荣 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第5期68-74,共7页
采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1∶10240。采用HRP标记的... 采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1∶10240。采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体,配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原,建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后的抗原包被浓度为0.5μg/mL,阻断抗体稀释度为1∶8000。通过对100份阴性猪血清的检测,确定该方法的阻断率cut-off值为30%。该方法敏感性高,对中和抗体效价低至1∶16的血清检测仍呈阳性;特异性强,仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应,与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应;良好的可重复性,批内、批间变异系数分别为0.90%~3.21%、1.89%~6.57%,均小于10%。对188份现有猪血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3%、94.7%。用该方法对南京市浦口区某养殖场猪瘟疫苗免疫猪血清进行检测,抗体阳性率为80.8%(189/234),证明了该疫苗免疫效果良好。此外,该方法为一步法,与现有方法相比,检测过程缩短至40 min。试验结果表明,利用酵母表达E2蛋白并制备中和抗体,建立了一种更加高效检测猪瘟中和抗体的阻断ELISA方法。 展开更多
关键词 CSFV 高效中和抗体 阻断eLISA 毕赤酵母 重组CSFV e2蛋白
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