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布鲁菌Irr蛋白的生物信息学分析、表达纯化以及ELISA方法的初步建立
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作者 孙天浩 张倩 +5 位作者 曹旭东 李楠 程科建 张江伟 王震 陈创夫 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期57-66,共10页
为建立一种检测布鲁菌抗体的间接ELISA检测方法,本研究对Irr蛋白进行生物信息学分析、原核表达,用纯化的重组蛋白Irr作为包被抗原,建立了一种检测布鲁菌抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组蛋白Irr包被量为0.25μg,5%脱脂奶粉封闭2 h,... 为建立一种检测布鲁菌抗体的间接ELISA检测方法,本研究对Irr蛋白进行生物信息学分析、原核表达,用纯化的重组蛋白Irr作为包被抗原,建立了一种检测布鲁菌抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组蛋白Irr包被量为0.25μg,5%脱脂奶粉封闭2 h,一抗稀释浓度1∶500孵育2 h,二抗稀释浓度1∶5000孵育2 h,显色15 min时建立的间接ELISA方法条件最优,该方法的OD_(450)临界值为0.55,与凝集实验的符合率达到96.7%,同时具有较好的特异性和重复性。以上结果表明,本研究基于Irr蛋白建立了操作简单、特异性高、重复性好的血清学间接ELISA检测方法,为布鲁菌病的诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 布鲁菌 Irr蛋白 原核表达 生物信息学 间接elisa方法
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猪流行性腹泻病毒感染小鼠血清抗体间接ELISA方法的建立
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作者 李沛恒 伊立超 +4 位作者 陈竞 邹万成 张国庆 金宁一 李昌 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第7期64-68,共5页
为建立检测感染小鼠血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体的方法,本研究应用PEDV受体结合区(receptor binding domain, RBD)重组蛋白作为抗原,通过探索各反应的最佳条件,并进行了该方法灵敏度、重复性、特异性分析。结果显示,最佳蛋白包被... 为建立检测感染小鼠血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体的方法,本研究应用PEDV受体结合区(receptor binding domain, RBD)重组蛋白作为抗原,通过探索各反应的最佳条件,并进行了该方法灵敏度、重复性、特异性分析。结果显示,最佳蛋白包被浓度为5μg/mL,待检血清稀释浓度为1∶400,孵育时间为37℃30 min,羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,孵育条件为37℃30 min,底物显色时间为15 min。对建立的ELISA检测方法进行验证,阳性对照血清的稀释度为1∶204 800倍时OD450值仍大于临界值,批内和批间的变异系数均小于10%,对猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒抗体小鼠阳性血清检测均不发生交叉反应。结果表明本研究建立的小鼠血清PEDV抗体间接ELISA方法具有很好的灵敏度、重复性、特异性。为PEDV候选疫苗的小鼠血清特异性抗体检测提供了一种精准、高效的方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 受体结合区 小鼠血清 间接elisa方法
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应用ELISA方法调查鸡骨髓细胞瘤病 被引量:19
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作者 成子强 赵心力 +6 位作者 郝永清 郭金贵 高娃 顾玉芳 杨玉莹 张二芹 赵振华 《中国家禽》 北大核心 2002年第6期9-10,共2页
在内蒙古地区5个种鸡场采血、分离血清共229份,其中3个肉种鸡场血清共184份;2个蛋种鸡场血清共45份,在ALV—Jgp85抗原包被的96孔板中进行微量滴定,检查结果,ALV—J抗体阳性率:3个肉种鸡场分别为28.12%,9.38%和8.33%,平均为12.0%;2个蛋... 在内蒙古地区5个种鸡场采血、分离血清共229份,其中3个肉种鸡场血清共184份;2个蛋种鸡场血清共45份,在ALV—Jgp85抗原包被的96孔板中进行微量滴定,检查结果,ALV—J抗体阳性率:3个肉种鸡场分别为28.12%,9.38%和8.33%,平均为12.0%;2个蛋种鸡场都为0%。 展开更多
关键词 elisa方法 调查 骨髓细胞瘤病 血清学调查
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双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌 被引量:17
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作者 段霞 黄欣 +2 位作者 黄岭芳 魏华 赖卫华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第24期272-276,共5页
采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特... 采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7×105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 多克隆抗体 单克隆抗体 双抗夹心elisa方法
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双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金黄色葡萄球菌肠毒素B 被引量:11
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作者 李红云 姚咏明 +4 位作者 施志国 董宁 于燕 陆连荣 盛志勇 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 2002年第9期655-657,共3页
目的 建立一种敏感、快速的酶免疫测定方法 ,用于定量检测动物体液及组织中金黄色葡萄球菌 (SAU)肠毒素 B(SEB)。方法 采用生物素 -链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法 ,以 SEB单抗 1D2为包被抗体、生物素标记的另一种 SEB单... 目的 建立一种敏感、快速的酶免疫测定方法 ,用于定量检测动物体液及组织中金黄色葡萄球菌 (SAU)肠毒素 B(SEB)。方法 采用生物素 -链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法 ,以 SEB单抗 1D2为包被抗体、生物素标记的另一种 SEB单抗 2 D1为标记抗体进行测定。结果 在 0 .0 78~ 10 .0 0 0μg/ L的浓度范围内 ,SEB标准品浓度与吸光度值线性关系良好 ,相关系数为 r=0 .990 6,平均变异系数为 5 .3 2 % ;正常大鼠、家兔和人血浆中的平均回收率分别为 96.43 %、97.3 4%和 19.99% ,正常人尿液中平均回收率为 91.5 3 %。结论 本法灵敏度高、准确性好、稳定性强 ,而且简便、快速 ,适用于动物血浆及组织中微量 SEB的定量测定 。 展开更多
关键词 双单抗夹心elisa方法 金黄色葡萄球菌 肠毒素 酶联免疫吸附试验
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幽门螺杆菌vacA基因重组表达的包涵体复性及ELISA方法的建立 被引量:9
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作者 党双锁 王宏仓 +5 位作者 贾晓黎 袁利超 王宝峰 张欣 张正国 程延安 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第20期2500-2503,共4页
目的:通过对vacA重组工程菌表达产物包涵体的变性、复性,提高表达产物的生物学活性,建立ELISA方法,讨论VacA抗原规模生产的可行性.方法:利用已经构建的表达VacA抗原的工程菌,用IPTG诱导,表达的包涵体通过系列条件的变性、复性、透析,并... 目的:通过对vacA重组工程菌表达产物包涵体的变性、复性,提高表达产物的生物学活性,建立ELISA方法,讨论VacA抗原规模生产的可行性.方法:利用已经构建的表达VacA抗原的工程菌,用IPTG诱导,表达的包涵体通过系列条件的变性、复性、透析,并经活性鉴定.所制抗原用以包被ELISA板,建立ELISA方法并确定抗原的生物学活性.结果:重组工程菌可表达Mr3300的目的蛋白,表达形式为包涵体,条件优化后的包涵体经SDS-PAGE显示纯度达95%以上,活性经ELISA法测定正常人126例和blot电泳测定结果符合率为97.1%.结论:包涵体变性复性后生物活性大幅度提高,并且具有良好的重复性和稳定性,可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原及临床检测的诸多方法的抗原原料. 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 VACA基因 包涵体 变性 复性 elisa方法 VACA 重复性 基因重组表达 acA抗原
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用ELISA方法检测稻田捕食者对摇蚊的捕食作用 被引量:3
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作者 刘雨芳 古德祥 +2 位作者 张古忍 陈东 温瑞贞 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1699-1703,共5页
应用酶联免疫吸附 ( ELISA)双抗体夹心法 ,研究了稻田 1 9种常见捕食性天敌对中性昆虫摇蚊的捕食作用。用摇蚊作抗原免疫雄性大白兔获得抗血清 ,用中和法、双向琼脂扩散实验及交叉反应对所制备的抗血清作特异性检测 ,抗体反应表明制备... 应用酶联免疫吸附 ( ELISA)双抗体夹心法 ,研究了稻田 1 9种常见捕食性天敌对中性昆虫摇蚊的捕食作用。用摇蚊作抗原免疫雄性大白兔获得抗血清 ,用中和法、双向琼脂扩散实验及交叉反应对所制备的抗血清作特异性检测 ,抗体反应表明制备的抗血清对摇蚊抗原具较高的特异性。测定了 1 9种捕食者捕食摇蚊的临界吸收值。在检测的 1 9种捕食者中 ,有 1 3种捕食了摇蚊 ,占被检测捕食者种数的 6 7.89%。ELISA阳性反应率最高的是在早稻前期采集的褶管巢蛛 ,阳性率高达 5 0 % ,其次是晚稻中期采集的拟水狼蛛 ,其阳性率为 4 0 %。ELISA方法敏感 ,能快速检测捕食者对猎物的捕食作用及确定节肢类捕食者如蜘蛛对水稻害虫控制作用大小 ,作为一种有效实验工具 。 展开更多
关键词 elisa方法 检测 稻田 捕食者 摇蚊 捕食作用
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用大肠杆菌表达FMDV NSP3ABC鉴别感染与注苗动物ELISA方法的建立 被引量:13
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作者 曹轶梅 卢曾军 +1 位作者 刘在新 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期381-386,共6页
用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样... 用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样品效价。当效价小于012为阴性,介于012~013之间为可疑,大于013为阳性。根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性,敏感性达100%;97.06%疫苗注射动物血清为阴性;98.39%的非免疫健康牛(未感染也未注射疫苗牛)血清为阴性。研究证实感染牛在1年以后仍能检测到3ABC抗体。这说明3ABC-I-ELISA能够鉴别FMDV感染动物和注苗动物,可作为大面积疫情监测的方法应用。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达 鉴别 间接elisa方法 FMDV 感染动物 判定标准 动物血清 血清样品 疫苗注射 注射疫苗 方法应用 疫情监测 阳性 敏感性 健康牛 检测 效价 抗原 后作 免疫 抗体
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ELISA方法测定尿8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)含量及其临床意义 被引量:16
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作者 郑全美 郭绍春 +2 位作者 何景宏 李冰 刘珊 《中国卫生检验杂志》 CAS 2002年第2期145-146,共2页
〔目的〕介绍测定尿8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)含量的ELISA方法。〔方法〕利用8-OH-dG特异性单克隆抗体试剂盒,结合酶标仪进行定量测定。〔结果〕尿样测定值的批间和批间相对标准偏差分别为5.8l%~9 35%和6.42%~10.11%;同一个体一... 〔目的〕介绍测定尿8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)含量的ELISA方法。〔方法〕利用8-OH-dG特异性单克隆抗体试剂盒,结合酶标仪进行定量测定。〔结果〕尿样测定值的批间和批间相对标准偏差分别为5.8l%~9 35%和6.42%~10.11%;同一个体一天中不同时点尿样的8-OH~dG含量之间没有显著性差异;80例健康志愿者的尿8-OH-dG含量为14,15±9.00ng/mgCr。其中男性为11.85±5.72ng/mgCr,女性为16.24±10.83ng/mgCr,女性的尿8-OH-dG含量明显高于男性;健康男性和女性尿8-OH-dG含量的95%参考值范围分别为0~25.77ng/mgCr和0~44.89ng/mgCr。〔结论〕应用ELISA试剂盒法可以简单灵敏、准确地测定尿8-OH-dG含量。 展开更多
关键词 elisa方法 测定 尿8-羟基脱氧鸟苷 含量 临床意义
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测定RHDV抗体的间接ELISA方法的建立 被引量:4
10
作者 陈兴祥 薛家宾 +2 位作者 徐为中 周永银 诸玉梅 《江苏农业学报》 CSCD 2003年第4期233-236,共4页
 通过氯仿和PEG6000处理,SephadexG 200层析纯化RHDV抗原,建立了检测RHDV抗体的间接ELISA试验方法。该方法的抗原最适包被浓度为10μg/ml,血清样品最佳稀释度为1∶400。与血凝抑制试验方法(HI)等相比,该方法具有快速、简单、特异性和...  通过氯仿和PEG6000处理,SephadexG 200层析纯化RHDV抗原,建立了检测RHDV抗体的间接ELISA试验方法。该方法的抗原最适包被浓度为10μg/ml,血清样品最佳稀释度为1∶400。与血凝抑制试验方法(HI)等相比,该方法具有快速、简单、特异性和重复性好等优点。 展开更多
关键词 RHDV抗体 间接elisa方法 测定技术 抗原 血清样品 出血症病毒
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应用间接ELISA方法检测猪附红细胞体抗体 被引量:9
11
作者 贾立军 张守发 柴方红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期21-22,共2页
关键词 间接elisa方法 猪附红细胞体 检测 抗体 血清学诊断 应用 附红细胞体病 IFAT
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以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究 被引量:5
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作者 何宏轩 张西臣 +2 位作者 尹继刚 李建华 杨举 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第1期3-5,共3页
以在 E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原 CP2 3为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠Ig G为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接 EL ISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为 1μg/孔纯化的 E.coli表达的CP2 3抗原... 以在 E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原 CP2 3为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠Ig G为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接 EL ISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为 1μg/孔纯化的 E.coli表达的CP2 3抗原包被酶标板 ,用 10 %兔血清进行封闭 ,以正常 E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用 CP2 3重组蛋白作为诊断 C.parvum抗原具有特异性高。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 抗体检测 CP23重组蛋白 抗原 间接elisa方法 辣根过氧化物酶 隐孢子虫病
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检测新城疫病毒中和抗体的间接ELISA和竞争ELISA方法的初步建立 被引量:4
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作者 丁炜东 曹丽萍 +3 位作者 张体银 刘秀梵 张如宽 吴艳涛 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第3期13-16,共4页
关键词 间接elisa 鸡新城疫病毒 NDV F基因 HI试验 SPF鸡 禽病 中和抗体 elisa方法 保护效力
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利用Asia 1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法(英文) 被引量:4
14
作者 林彤 邵军军 +4 位作者 丛国正 独军政 高闪电 常惠芸 谢庆阁 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第3期104-107,共4页
Using the purified VP1 protein of Asia 1 type foot-and-mouth disease virus as the antigen, the purified monoclonal antibody was labeled by the sodium periodate method and the monoclonal antibody competitive ELISA was ... Using the purified VP1 protein of Asia 1 type foot-and-mouth disease virus as the antigen, the purified monoclonal antibody was labeled by the sodium periodate method and the monoclonal antibody competitive ELISA was established in this study. Ten positive porcine foot-and-mouth disease serums and more than two hundreds negative serum were tested, and the results were the same as the background of samples. The sensitivity test and replicate test indicated that this method was stable and sensitive, which was suitable for monitoring Asia 1 type porcine foot-and-mouth disease virus antibody. 展开更多
关键词 ASIA1型口蹄疫病毒 VP1蛋白 单克隆抗体 elisa方法
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HA/HI和ELISA方法检测金钱豹血中猫瘟热抗体的比较 被引量:3
15
作者 熊焰 刘中奇 +2 位作者 赵波 王强 牛李丽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2006年第9期71-73,共3页
关键词 检测诊断 elisa方法 猫瘟热 金钱豹 抗体 HI HA elisa
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应用间接ELISA方法定量检测转基因抗虫玉米 被引量:15
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作者 刘光明 苏文金 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2003年第1期49-52,60,共5页
应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白质作为标准蛋白和免疫抗原 ,通过抗体 抗原 酶标抗体反应 ,建立了间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以快速检测转基因抗虫玉米中的Bt1表达蛋白 .用建立的ELISA法对 4种进口玉米实物样品进行了测定 ,实验结... 应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白质作为标准蛋白和免疫抗原 ,通过抗体 抗原 酶标抗体反应 ,建立了间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以快速检测转基因抗虫玉米中的Bt1表达蛋白 .用建立的ELISA法对 4种进口玉米实物样品进行了测定 ,实验结果得到了免疫印迹分析的验证 。 展开更多
关键词 间接elisa方法 检测 转基因玉米 杀虫蛋白 转基因食品
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检测禽流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立 被引量:7
17
作者 张立怀 张国中 +1 位作者 霍蕾 侯艳梅 《中国医药生物技术》 CSCD 2009年第1期62-64,共3页
禽流行性感冒(avian influenza,AI)简称禽流感,是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类传染病。高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza,HPAI)被世界动物卫生组织(world organization for animal health,OI... 禽流行性感冒(avian influenza,AI)简称禽流感,是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类传染病。高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza,HPAI)被世界动物卫生组织(world organization for animal health,OIE)列为A类传染病。我国也把禽流感列为一类动物疫病。禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)可感染几乎所有野生禽及家禽, 展开更多
关键词 禽流行性感冒 流感病毒抗原 夹心elisa方法 INFLUENZA 高致病性禽流感 双抗体 世界动物卫生组织 禽类传染病
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联合检测兔巴氏杆菌和波氏杆菌病血清抗体的Dot-ELISA方法研究 被引量:6
18
作者 黄艳艳 胡北侠 +4 位作者 张秀美 郭立辉 刘玉庆 黄庆华 李俊 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2006年第12期80-81,共2页
关键词 支气管败血波氏杆菌病 多杀性巴氏杆菌病 联合检测 elisa方法 家兔 血清抗体 细菌性传染病 兔波氏杆菌病
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卵转铁蛋白双抗夹心ELISA方法的建立 被引量:2
19
作者 李晶 王薇 +2 位作者 张燕 陆旸 王硕 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2015年第17期15-18,共4页
卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了双抗夹心ELISA方法,该方法检出限为(15.37±1.20)ng/m L。除白蛋白外,该方法对粘蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白... 卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了双抗夹心ELISA方法,该方法检出限为(15.37±1.20)ng/m L。除白蛋白外,该方法对粘蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白、大豆、杏仁和绿豆等致敏蛋白几乎没有交叉反应。板内重复性和板间重复性较好,因此所建立的方法可用于对卵转铁蛋白的检测。 展开更多
关键词 卵转铁蛋白 双抗夹心elisa方法 过敏原
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牛结核ELISA方法的改进和优化研究 被引量:2
20
作者 张喜悦 吴延功 +5 位作者 王志亮 徐培莲 赵云玲 徐天刚 王君玮 宋翠平 《中国动物检疫》 CAS 2004年第7期21-22,共2页
在传统ELISA基础上 ,对ELISA板的稳定系统、血清稀释液的显色系统、ELISA底物等流程进行了改进 ,建立了牛结核ELISA方法。阻断试验和交叉反应结果表明该ELISA方法具有较好的特异性 ;不同人多次重复试验 。
关键词 结核病 诊断 elisa方法 改进 优化
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