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ENO1过表达对籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡基因Bcl-2表达的影响 被引量：1
1
作者 王江璐 计红 +4 位作者 张伟宏 赫荣贺 郭景茹 郭丽 杨焕民 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期10-13,共4页
本试验将原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞转染ENO1腺病毒过表达载体,应用实时荧光定量PCR方法检测ENO1过表达对颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量的影响。结果发现ENO1过表达使卵泡颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量极显著增加(P<0.01)。提示ENO1可能通过使... 本试验将原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞转染ENO1腺病毒过表达载体,应用实时荧光定量PCR方法检测ENO1过表达对颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量的影响。结果发现ENO1过表达使卵泡颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量极显著增加(P<0.01)。提示ENO1可能通过使Bcl-2基因表达量增加,从而抑制籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡,促进卵泡的发育。 展开更多
关键词 籽鹅 eno1过表达 BCL-2基因 颗粒细胞
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雌雄驯鹿茸皮组织ENO1基因cDNA克隆与表达 被引量：1
2
作者 韩若冰 韩磊 +1 位作者 王强辉 李和平 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期92-95,100,共5页
选用雌、雄驯鹿(Rangifer tarandus)顶端茸皮组织为试验材料,参考Genebank数据库中白尾鹿(Odocoileus virginianus)、牛(Bos taurus)、羊(Ovis aries)等同源物种的ENO1基因序列设计同源引物,采用PCR及T-A克隆技术以雄性驯鹿茸皮组织为... 选用雌、雄驯鹿(Rangifer tarandus)顶端茸皮组织为试验材料,参考Genebank数据库中白尾鹿(Odocoileus virginianus)、牛(Bos taurus)、羊(Ovis aries)等同源物种的ENO1基因序列设计同源引物,采用PCR及T-A克隆技术以雄性驯鹿茸皮组织为材料克隆ENO1基因的c DNA序列,并运用荧光定量PCR技术对ENO1基因在雌、雄驯鹿茸皮组织中的表达量进行对比分析。结果表明:成功克隆获得驯鹿ENO1基因,其编码区片段大小为1 305 bp,共编码434个氨基酸;ENO1基因编码的蛋白的相对分子质量为47 342.09,其二级结构以α-螺旋为主;Blastp比对显示,驯鹿ENO1基因与羊、白尾鹿、牛的同源性最高,均为99%。构建系统进化树发现,驯鹿ENO1基因与白尾鹿的亲缘关系最近,与白头鹰(Haliaeetus leucocephalus)的亲缘关系最远;荧光定量PCR结果显示,ENO1基因在茸皮组织中的表达量在雌、雄之间存在差异,其中在雄性驯鹿茸皮组织中的表达量是雌性驯鹿茸皮组织中的(3.35±0.12)倍。 展开更多
关键词 驯鹿 eno1基因 荧光定量PCR
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人ENO1基因的克隆及其重组逆病毒载体ENO1-pBABE-Puro的构建
3
作者 李海红 王秋香 +4 位作者 王海琳 刘会玲 祝秉东 王千千 朱晓艳 《实用癌症杂志》 2014年第1期4-7,共4页
目的构建含人烯醇化酶1(ENO1)目的基因的重组逆转录病毒载体。方法从人癌细胞中提取总RNA合成cDNA,PCR扩增目的基因ENO1,用sal1和BamH1双酶切ENO1及pbabe质粒,然后用连接酶将ENO1插入pbabe中,最后将重组质粒转化感受态E.coli DH 5α大... 目的构建含人烯醇化酶1(ENO1)目的基因的重组逆转录病毒载体。方法从人癌细胞中提取总RNA合成cDNA,PCR扩增目的基因ENO1,用sal1和BamH1双酶切ENO1及pbabe质粒,然后用连接酶将ENO1插入pbabe中,最后将重组质粒转化感受态E.coli DH 5α大肠杆菌,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序。结果重组逆转录病毒载体ENO1-pBABE-Puro测序结果与GenBank上的序列完全一致,克隆的目的基因已经正确插入到逆转录病毒载体pBABE-Puro中。结论成功构建了含有ENO1目的基因的重组逆转录病毒载体,为进一步观察ENO1在肿瘤发生、发展中的作用及与宫颈癌细胞化疗敏感性的相关性做好准备。 展开更多
关键词 eno1基因 PCR 质粒构建 逆转录病毒载体 宫颈癌
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α-烯醇化酶在肿瘤研究中的进展 被引量：3
4
作者 陈小芸 刘会玲 +2 位作者 张栋栋 范维 郭钰珍 《医学综述》 2015年第13期2376-2379,共4页
肿瘤在形成和发展过程中涉及多种与能量代谢有关的蛋白,这些蛋白可能提供促进肿瘤生长的正向环境,也可能参与对肿瘤抵抗和清除的防御反应。α-烯醇化酶(ENO1)作为一种多功能的蛋白,参与多种生理及病理过程,与肿瘤的发生、发展相关。研... 肿瘤在形成和发展过程中涉及多种与能量代谢有关的蛋白,这些蛋白可能提供促进肿瘤生长的正向环境,也可能参与对肿瘤抵抗和清除的防御反应。α-烯醇化酶(ENO1)作为一种多功能的蛋白,参与多种生理及病理过程,与肿瘤的发生、发展相关。研究发现,ENO1在头颈部肿瘤、呼吸系统肿瘤、消化系统肿瘤、妇科肿瘤及其他相关肿瘤中均有不同程度的表达。因此,ENO1可能成为预测某些肿瘤发生、发展、疗效及预后的辅助指标。 展开更多
关键词 肿瘤 α-烯醇化酶 eno1基因
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α-烯醇酶对胃癌细胞株MGC-803上皮间质转化的影响 被引量：2
5
作者 林博德 吴莉莉 +4 位作者 何荣威 陈婷婷 杜进林 潘海燕 黄志刚 《广东医学》 CAS 2018年第10期1460-1465,共6页
目的研究α-烯醇酶(α-enolase,ENO1)对MGC-803胃癌细胞上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的作用。方法扩增ENO1基因编码区序列,构建真核表达载体pc DNA3.1/ENO1并测序;脂质体转染胃癌细胞,以pc DNA3.1/ENO1质粒转染... 目的研究α-烯醇酶(α-enolase,ENO1)对MGC-803胃癌细胞上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的作用。方法扩增ENO1基因编码区序列,构建真核表达载体pc DNA3.1/ENO1并测序;脂质体转染胃癌细胞,以pc DNA3.1/ENO1质粒转染细胞为ENO1组,以空质粒pc DNA3.1转染细胞为对照组,Real-time PCR和Western Blot分别检测各组ENO1的mRNA及蛋白表达情况;在转染24 h收集两组细胞,Real-time PCR检测并比较EMT特异标志基因E-cadherin、Snail及Vimentin表达水平;合成特异干扰ENO1的siRNA片段,脂质体转染癌细胞,在转染24 h收集干扰组和对照组细胞,Real-time PCR检测EMT特异基因表达水平。结果 Real-time PCR结果显示,ENO1组ENO1 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05);Western Blot发现,ENO1组ENO1蛋白相对表达量也高于对照组(P<0.05)。结果发现转染24 h后ENO1组E-cadherin、Snail及Vimentin等基因的表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);转染24 h后干扰组E-cadherin、Snail及Vimentin等基因的表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论在胃癌细胞内过表达及干扰ENO1表达,对细胞EMT并无明显作用,ENO1对胃癌细胞功能的影响可能与EMT无关。 展开更多
关键词 胃癌细胞 eno1基因 上皮间质转化
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皮肤鳞状细胞癌进展的差异蛋白筛选及鉴定
6
作者 杜军波 张大雷 +1 位作者 江佳慧 袁涛 《中国卫生检验杂志》 CAS 2023年第18期2236-2240,共5页
目的探讨皮肤鳞状细胞癌(CSCC)进展的生物学标志物。方法在GEO数据库中筛选CSCC、日光性角化(AK)和正常皮肤组织的基因表达谱芯片数据集,通过GEO2R在线数据库筛选在正常组织、AK和CSCC3组间存在显著表达差异的基因。纳入2022年6月—12... 目的探讨皮肤鳞状细胞癌(CSCC)进展的生物学标志物。方法在GEO数据库中筛选CSCC、日光性角化(AK)和正常皮肤组织的基因表达谱芯片数据集,通过GEO2R在线数据库筛选在正常组织、AK和CSCC3组间存在显著表达差异的基因。纳入2022年6月—12月本院皮肤科65例CSCC患者(CSCC组)、40例AK患者(AK组)和30例正常对照者(对照组)作为研究对象,组织和血清中目的蛋白的表达水平采用免疫组化法和ELISA法检测。血清中目的蛋白表达水平在鉴别AK和CSCC的临床效能采用受试者操作特征曲线(ROC)分析。结果GEO2R在线数据库筛选出5个共同差异表达基因TMSΒ10、PDZD2、ENO1、RRBP1和S100A11。ENO1和S100A11蛋白表达水平在对照组、AK组和CSCC组3组间两两相比差异有统计学意义(P<0.05)。CSCC患者血清中ENO1和S100A11蛋白表达水平与肿瘤细胞分化程度和浸润深度显著相关(P<0.05)。ROC曲线后显示,ENO1和S100A11蛋白表达水平在鉴别AK和CSCC的AUC分别为0.964和0.953,其中ENO1的截断值为35.12 ng/ml,诊断敏感度和特异度分别为95.13%和92.45%,其中S100A11的截断值为23.68 ng/ml,诊断敏感度和特异度分别为94.67%和93.21%。免疫组化结果显示,ENO1在癌组织高度表达18例,中度表达12例,癌旁组织中均无阳性表达;S100A11在癌组织高度表达30例,癌旁组织中均无阳性表达。与癌旁组织相比,CSCC癌组织中ENO1和S100A11阳性表达率显著升高(P<0.05)。结论ENO1和S100A11可能是促进CSCC进展的生物学标志物。 展开更多
关键词 皮肤鳞状细胞癌 日光性角化 差异表达基因 预后 eno1 S100A11 标志物
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慢病毒介导的α-烯醇化酶基因沉默对宫颈癌细胞化疗药物敏感性的影响 被引量：3
7
作者 张栋栋 刘会玲 +3 位作者 范维 王玉凤 陈小芸 郭钰珍 《世界科技研究与发展》 CSCD 2014年第4期398-401,共4页
目的探讨沉默α-烯醇化酶(ENO1)基因对宫颈癌SiHa细胞化疗药物敏感性的影响。方法采用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立ENO1基因稳定沉默SiHa细胞系;通过western blot方法验证ENO1的表达水平;ENO1基因沉默后运用细胞增殖实验检测其对细胞... 目的探讨沉默α-烯醇化酶(ENO1)基因对宫颈癌SiHa细胞化疗药物敏感性的影响。方法采用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立ENO1基因稳定沉默SiHa细胞系;通过western blot方法验证ENO1的表达水平;ENO1基因沉默后运用细胞增殖实验检测其对细胞增殖能力的影响;采用MTT的方法评价沉默ENO1基因的SiHa细胞对紫杉醇和顺铂的敏感性。结果成功建立ENO1基因沉默的SiHa细胞系;沉默ENO1基因表达后,SiHa细胞增殖能力下降;沉默ENO1基因能够增强SiHa细胞的药物敏感性。结论:ENO1能够影响宫颈癌细胞的增殖及其对化疗药物的敏感性。 展开更多
关键词 eno1 基因沉默 紫杉醇 顺铂 药物敏感性
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冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中α-烯醇化酶基因mRNA的转录水平 被引量：1
8
作者 马莉 计红 +5 位作者 甄莉 郭景茹 刘艳芝 彭梦玲 孔凡志 杨焕民 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第9期929-933,共5页
目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶（α-enolase,ENO1）基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组（24℃,正常饲喂7 d）和冷应激组（置4℃,应激12 h）,提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c D... 目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶（α-enolase,ENO1）基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组（24℃,正常饲喂7 d）和冷应激组（置4℃,应激12 h）,提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c DNA,以其为模板,PCR扩增ENO1基因,应用生物信息学软件DNAstar进行同源性分析,实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏、肝脏、脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平。结果冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳可见28S、18S和5S 3条带,A260/A280值为1.8～2.0;ENO1基因经2%琼脂糖凝胶电泳分析可见107 bp的目的基因条带;ENO1基因序列与NCBI上公布序列的同源性为100%;冷应激组大鼠肝脏、脾脏组织中ENO1基因m RNA的转录水平明显高于正常对照组（P〈0.01）,正常对照组大鼠心脏组织中ENO1基因m RNA转录水平明显高于冷应激组（P〈0.05）。结论冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平均发生显著改变,本实验为动物应激状态评估及应激发生机制的研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 冷应激 α-烯醇化酶 基因转录 实时荧光定量PCR
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人α-磷酸丙酮酸水合酶原核表达载体的构建及蛋白纯化 被引量：1
9
作者 宋烨琼 董倩 +6 位作者 梁迎春 李玲 洪甜 晋帅 徐小洁 叶棋浓 吕朝晖 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期384-386,391,共4页
目的构建带PET-28a标签的人ENO1基因原核表达产物,观察其表达并纯化出带PET-28a标签的ENO1融合蛋白,为研究肿瘤糖酵解的相关机制奠定实验基础。方法以人乳腺文库为模板,利用PCR技术扩增出ENO1基因编码片段,将其插入到PET-28a载体中,鉴... 目的构建带PET-28a标签的人ENO1基因原核表达产物,观察其表达并纯化出带PET-28a标签的ENO1融合蛋白,为研究肿瘤糖酵解的相关机制奠定实验基础。方法以人乳腺文库为模板,利用PCR技术扩增出ENO1基因编码片段,将其插入到PET-28a载体中,鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rossate,小量诱导表达后,利用PET-28a-琼脂糖凝胶4B亲和珠纯化PET-28a-ENO1融合蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western印迹检测,获得纯度较好的PET-28a-ENO1蛋白。结果利用PCR技术从乳腺文库中扩增得到大小约1300 bp的目的基因片段,插入PET-28a载体中,经双酶切鉴定及测序,结果表明PET-28a-ENO1质粒构建成功;转化Rossate菌并小量诱导,表达鉴定成功后纯化得到相对分子质量(Mr)约为57×103的目的蛋白。结论成功获得了人糖酵解相关基因ENO1的原核表达产物,为进一步研究ENO1在糖酵解过程中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 人eno1基因 磷酸丙酮酸水合酶 原核表达 纯化 糖酵解
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