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深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究
1
作者
王长远
全越
+2 位作者
沈冰蕾
姚笛
于长青
《农产品加工(下)》
2016年第7期1-3,8,共4页
引物根据△6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计,并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点,从深黄被孢霉中克隆D6D基因,构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化,...
引物根据△6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计,并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点,从深黄被孢霉中克隆D6D基因,构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化,并将其电转导入到毕赤氏酵母(PichiapastorisSMD1168)中,Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子,对重组菌进行诱导表达。经过Tricine—SDS—PAGE分析和蛋白质免疫印迹(Westernbloting)试验,证明△6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母pGAPZdA—SMD1168,为利用基因工程菌生产y-亚麻酸(GLA)奠定理论基础。
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关键词
深黄被孢霉
△6-脂肪酸脱氢酶
毕赤氏酵母SMD1168
pgapz
ctA表达载体
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职称材料
甜味蛋白Brazzein基因合成及其在酵母中表达的初步研究
2
作者
张丽萍
王长远
刘松财
《农产品加工(下)》
2008年第10期4-7,共4页
采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra...
采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra。将重组质粒线性化,电转导入Pichia.pastoris SMD1168中,用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS-PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌,SDS-PAGE表明,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,诱导72h后的目的蛋白表达量达0.12g/L。
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关键词
BRAZZEIN基因
pGAP
ZαA表达载体
毕赤酵母
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职称材料
题名
深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究
1
作者
王长远
全越
沈冰蕾
姚笛
于长青
机构
黑龙江八一农垦大学食品学院
出处
《农产品加工(下)》
2016年第7期1-3,8,共4页
基金
黑龙江省农垦总局科技攻关项目(HNK125A-04-16)
文摘
引物根据△6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计,并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点,从深黄被孢霉中克隆D6D基因,构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化,并将其电转导入到毕赤氏酵母(PichiapastorisSMD1168)中,Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子,对重组菌进行诱导表达。经过Tricine—SDS—PAGE分析和蛋白质免疫印迹(Westernbloting)试验,证明△6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母pGAPZdA—SMD1168,为利用基因工程菌生产y-亚麻酸(GLA)奠定理论基础。
关键词
深黄被孢霉
△6-脂肪酸脱氢酶
毕赤氏酵母SMD1168
pgapz
ctA表达载体
Keywords
Mortieralla isabellina
△6-fatty acid desaturase
Pichia pastoris SMD1168
expression
vector
pgapz
ct A
分类号
TS201.2 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
甜味蛋白Brazzein基因合成及其在酵母中表达的初步研究
2
作者
张丽萍
王长远
刘松财
机构
黑龙江八一农垦大学
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《农产品加工(下)》
2008年第10期4-7,共4页
基金
黑龙江省自然基金项目(C200618)
黑龙江省农垦总局科技攻关项目(HNKXIY-08-11A)
文摘
采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra。将重组质粒线性化,电转导入Pichia.pastoris SMD1168中,用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS-PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌,SDS-PAGE表明,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,诱导72h后的目的蛋白表达量达0.12g/L。
关键词
BRAZZEIN基因
pGAP
ZαA表达载体
毕赤酵母
Keywords
Brazzein gene
pgapz
αA
express
vector
pichia pastoris yeast
分类号
TQ92 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
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1
深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究
王长远
全越
沈冰蕾
姚笛
于长青
《农产品加工(下)》
2016
0
下载PDF
职称材料
2
甜味蛋白Brazzein基因合成及其在酵母中表达的初步研究
张丽萍
王长远
刘松财
《农产品加工(下)》
2008
0
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职称材料
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参考文献
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