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IgG型自身抗体Fab段遮断红细胞自身抗原的探索研究
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作者 黄海涛 温学红 《中国输血杂志》 CAS 2024年第9期1077-1080,1090,共5页
目的应用自身抗体的Fab段结合红细胞上的自身抗原,以遮断完整自身抗体与自身抗原的结合。方法含自身抗体的患者血清,通过吸收放散试验获得成分单一的自身抗体,再应用木瓜酶37℃过夜水解自身抗体IgG分子获得Fab段,用Fab段特异性结合相对... 目的应用自身抗体的Fab段结合红细胞上的自身抗原,以遮断完整自身抗体与自身抗原的结合。方法含自身抗体的患者血清,通过吸收放散试验获得成分单一的自身抗体,再应用木瓜酶37℃过夜水解自身抗体IgG分子获得Fab段,用Fab段特异性结合相对应的自身抗原,从而遮断完整自身抗体与自身抗原的结合。结果3例含自身抗体的患者血浆标本,经过吸收放散试验获得的组分单一的自身抗体,均经过木瓜酶水解处理生成Fab段,此Fab段与各自放散液中的完整自身抗体混合后,均能遮断完整自身抗体与红细胞自身抗原的结合。同时3例标本之间,1号标本与2号标本的有相互遮断效应,而2号标本和3号标本之间未见相互遮断效应。结论自身抗体Fab段能消除完整自身抗体与红细胞自身抗原的凝集,此方法可以应用到临床实践中,解决多种临床问题。 展开更多
关键词 自身抗体 fab片段 遮断效应
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LABELING McAb 3H11 AND ITS Fab FRAGMENT WITH ^(211)At AND THEIR IMMUNOREACTIVITIES AND INJURY EFFECTS ON HUMAN GASTRIC CANCER CELLS
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作者 刘宁 金建南 +7 位作者 张叔渊 周懋伦 王娟 罗林 王方元 罗德元 万文徽 董志伟 《Nuclear Science and Techniques》 SCIE CAS CSCD 1995年第3期154-158,共5页
An antigastric cancer monoclonal antibody, 3H11, and its Fab fragment, were labeled using p-(211At)-astatobenzoic acid (pAtBA) intermediate, in the yields of more than 30%. The results of in vitro experiments show tha... An antigastric cancer monoclonal antibody, 3H11, and its Fab fragment, were labeled using p-(211At)-astatobenzoic acid (pAtBA) intermediate, in the yields of more than 30%. The results of in vitro experiments show that 211At-3H11 and 211At-3H11Fab are stable, and have specific immunoreactivities and cytotoxic effects to human gastric cancer cell M85. The cytotoxic effects are dependent on the concentration of 211At-3H11 or 211At-3H11 Fab and obviously stronger than that of Na211At. 展开更多
关键词 At Gastric cancer Monoclonal antibody fab fragment Labelingmethod Immunoreactivity Cytotokic effect In vitro
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^(99m)Tc-labeled HAb18 McAb Fab fragment for radioimmunoimaging in nude mice bearing human hepatocellular carcinoma 被引量:8
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作者 Qiu K Wang BC +4 位作者 Chen ZN Fang P Liu CG Wan WX Liu YF 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 1998年第2期25-28,共4页
AIM To establish a method of labeling anti hepatoma McAb (HAb18) Fab fragment modifier with 99m Tc. METHODS HAb18 Fab was modified with 2 iminotholane and labeled with 99m Tc by transchelation f... AIM To establish a method of labeling anti hepatoma McAb (HAb18) Fab fragment modifier with 99m Tc. METHODS HAb18 Fab was modified with 2 iminotholane and labeled with 99m Tc by transchelation from 99m Tc GH. Labeling yield, radiochemical purity and immunoreactivity were determined by thin layer chromatography (TLC SG), paper chromatography (PC), gel chromatography (GC) and cell binding assay, respectively. The nude mice bearing human hepatoma were used for radioimmunoimaging (RII). RESULTS A radiolabeling yield of 50%-80% was obtained, and immunoreactivity (IR) was 30%-40%. Radioimaging results showed that 99m Tc HAb18 McAb Fab fragment was concentrated in the tumor 4-8 hours after injection, and the maximum concentration was seen in 12-24 hours, and the T/NT value was 5 18 and 7 48 at 6h and 8h after the injection. CONCLUSION 99m Tc HAb18 McAb Fab fragment could be specifically localized in the tumor of nude mice bearing human hepatocellular carcinoma within 24 hours and this method might be effectively used for labeling McAb Fab fragment with 展开更多
关键词 liver neoplasms carcinoma HEPATOCELLULAR HAB18 autibodies monoclonal radioimmunodetection fab fragments 99m Tc NUDE MICE 99m Tc.
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ANTITUMOR EFFECTS OF MONOCLONAL ANTIBODY FAB’FRAGMENT—CONTAINING IMMUNOCONJUGATES 被引量:8
4
作者 LiuXiaoyun ZhenYongsu 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2002年第1期1-6,共6页
Objective.Using monoclonal antibody (mAb) Fab′ fragment to develop mAb immunoconjugates for cancer. Methods.Fab′ fragment of mAb 3A5 was prepared by digestion of the antibody with pepsin and then reduced by dithioth... Objective.Using monoclonal antibody (mAb) Fab′ fragment to develop mAb immunoconjugates for cancer. Methods.Fab′ fragment of mAb 3A5 was prepared by digestion of the antibody with pepsin and then reduced by dithiothreitol (DTT),while Fab′ fragment of mAb 3D6 was obtained by digestion of the antibody with ficin and subsequently reduced by β mercaptoethanol.The conjugation between Fab′ fragment and pingyangmycin (PYM),an antitumor antibiotic,was mediated by dextran T 40.Immunoreactivity of Fab′ PYM conjugates with cancer cells was determined by ELISA,and the cytotoxicity of those conjugates to cancer cells was determined by clonogenic assay.Antitumor effects of the Fab′ PYM conjugates were evaluated by subcutaneously transplanted tumors in mice. Results.The molecular weight of Fab′ fragment was approximately 53 kD,while the average molecular weight of Fab′ PYM conjugate was 170 kD.The Fab′ PYM conjugates showed immunoreactivity with antigen relevant cancer cells and selective cytotoxicity against target cells.Administered intravenously,Fab′ PYM conjugates were more effective against the growth of tumors in mice than free PYM and PYM conjugated with intact mAb. Conclusion.Fab′ PYM conjugate may be capable of targeting cancer cells and effectively inhibiting tumor growth,suggesting its therapeutic potential in cancer treatment. 展开更多
关键词 monoclonal antibody therapeutics fab fragment IMMUNOCONJUGATES antineopla stic agent
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^(124)I标记抗体及抗体片段用于胃癌动物模型表皮生长因子受体表达水平
5
作者 柴黎明 姚晓龙 +6 位作者 娜仁花 延巍 蒋明政 孙灿文 戴泽强 朱海旭 杨小丰 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2024年第5期46-53,共8页
西妥昔单抗(Cetuximab)常用于晚期胃癌肿瘤患者的治疗,获得患者肿瘤表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的整体表达水平对于预测西妥昔单抗的疗效尤为重要。本研究拟通过对比研究的方式筛选最符合临床需求的靶向E... 西妥昔单抗(Cetuximab)常用于晚期胃癌肿瘤患者的治疗,获得患者肿瘤表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的整体表达水平对于预测西妥昔单抗的疗效尤为重要。本研究拟通过对比研究的方式筛选最符合临床需求的靶向EGFR的探针。本研究基于西妥昔单抗通过酶切法制备了Cet-F(ab')_(2)和Cet-Fab,并偶联CY3-NHS酯(Cyanine 3 NHS ester)得CY3-Cetuximab、CY3-Cet-F(ab')_(2)和CY3-Cet-Fab进行细胞荧光实验以验证亲和力。通过Iodogen(1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯基甘脲)法制备得到3种^(124)I标记的分子探针:^(124)I-Cetuximab、^(124)I-Cet-F(ab')_(2)和^(124)I-Cet-Fab,使用micro-PET/CT分别在探针注射后1 h、3 h、6 h、12 h显像进行对比研究。最后,通过生物学分布实验探究3种探针在各时间点在体内的分布情况,采用两独立样本t检验进行组间比较。西妥昔单抗经过片段化后,亲和力无显著降低。Cetuximab、Cet-F(ab')_(2)和Cet-Fab分子量分别约为150 kDa、100 kDa和50 kDa。经^(124)I标记并纯化后,^(124)I-Cetuximab、^(124)I-Cet-F(ab')_(2)和^(124)I-Cet-Fab放射化学纯度均大于94%,比活度均约为2×10^(4) MBq/μmol。^(124)I-Cetuximab、^(124)I-Cet-F(ab')_(2)和^(124)I-Cet-Fab在生理盐水和胎牛血清(FBS)中稳定性好,体外放置24 h放射化学纯度仍高于90%。Micro-PET/CT显像显示在^(124)I-Cet-Fab尾静脉注射后3 h肿瘤部位明显浓聚,^(124)I-Cet-F(ab')_(2)尾静脉注射后12 h肿瘤部位明显浓聚,而^(124)I-Cetuximab尾静脉注射后12 h肿瘤部位仍无明显显像剂分布。生物学分布结果与micro-PET/CT结果一致。3种正电子探针中,^(124)I-Cet-Fab代谢速度最快,肿瘤最早显象的同时有最少的累积辐射剂量,有一定的临床转化潜力。 展开更多
关键词 ^(124)I Cet-F(ab')_(2) Cet-fab 抗体片段 放射免疫显像
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抗HBsAg抗体Fab段在大肠肝菌中的高效表达与复性 被引量:8
6
作者 毛春生 宋宏彬 +2 位作者 李季枝 于长明 王海涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期229-231,共3页
将抗HBsAg 抗体的轻链(L)和重链Fd 段基因,分别克隆于pET20b 质粒中并分别转化到大肠肝菌BL21(DE3),LPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在27KD(L)和25KD(Fd)处有外源蛋白表达,表达... 将抗HBsAg 抗体的轻链(L)和重链Fd 段基因,分别克隆于pET20b 质粒中并分别转化到大肠肝菌BL21(DE3),LPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在27KD(L)和25KD(Fd)处有外源蛋白表达,表达蛋白含量分别为53% 和48% 。L链和Fd 包涵体蛋白经盐酸胍变性后,等量混合于折叠液中,L和Fd 可复性形成了约50KD的蛋白。ELISA结果表明,复性蛋白具有与HBsAg 结合的能力。抗HBsAg 抗体Fab 段在大肠杆菌中的表达与复性的成功,表明包涵体表达基因工程抗体在技术是可行的。 展开更多
关键词 抗HBSAG fab 表达 复性 抗体
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人源中和性抗汉滩病毒单克隆抗体Fab段基因的获得和表达 被引量:14
7
作者 梁米芳 李德新 +5 位作者 杭长寿 吴兴安 朱公文 薛颍 李川 宋干 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期297-308,共12页
运用噬菌体表面表达(Phagedisplay)技术,获得人源中和性抗汉滩病毒汉滩型G1基因工程单克隆抗体(单抗)Fab段基因及其表达,并同时获得抗汉滩病毒核蛋白(NP)的Fab抗体。从肾综合征出血热疫区恢复期病人抗凝... 运用噬菌体表面表达(Phagedisplay)技术,获得人源中和性抗汉滩病毒汉滩型G1基因工程单克隆抗体(单抗)Fab段基因及其表达,并同时获得抗汉滩病毒核蛋白(NP)的Fab抗体。从肾综合征出血热疫区恢复期病人抗凝血中分离到的外周淋巴细胞中,提取了总细胞RNA。通过RT-PCR方法,用一组人IgGFab基因特异性引物,从合成的cDNA中经PCR扩增了一组轻链和重链Fab段基因,将轻链和重链先后插入噬菌体载体pComb3,成功地建立了抗汉滩病毒抗体基因库,并用纯化的汉滩病毒颗粒及抗汉滩病毒糖蛋白鼠单抗捕捉糖蛋白抗体原的方法,对此抗体库进行了富集筛选,在短期内成功地获得了抗汉滩病毒核蛋白和糖蛋白G1的人源单抗Fab段基因,并在大肠杆菌中获得有效表达。核苷酸序列分析证实,所获得的基因为人源IgGFab基因。用特异性放射免疫沉淀(IP)、IFAT和ELISA以及空斑减少中和试验鉴定表明,表达的人Fab抗体能识别汉滩病毒结构蛋白,其中抗G1人Fab抗体具有体外中和活性。人源抗汉滩病毒基因工程抗体的获得,为今后可能的临床应用提供了良好前景。 展开更多
关键词 汉滩病毒 单克隆抗体 fab 基因表达
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平阳霉素与单克隆抗体Fab′片段偶联物的抗肿瘤作用 被引量:6
8
作者 刘小云 刘秀均 +2 位作者 李毅 王维刚 甄永苏 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期649-653,共5页
目的 研制一种以单抗Fab′片段为基础的抗肿瘤导向药物。方法 制备单抗 3A5Fab′片段及其与平阳霉素 (PYM )偶联物Fab′ PYM后 ,测定Fab′ PYM与肿瘤细胞的免疫反应性、偶联物中PYM的抑菌活性、对肿瘤细胞的杀伤作用和体内抑瘤作用。... 目的 研制一种以单抗Fab′片段为基础的抗肿瘤导向药物。方法 制备单抗 3A5Fab′片段及其与平阳霉素 (PYM )偶联物Fab′ PYM后 ,测定Fab′ PYM与肿瘤细胞的免疫反应性、偶联物中PYM的抑菌活性、对肿瘤细胞的杀伤作用和体内抑瘤作用。结果 Fab′及Fab′ PYM保持了与靶细胞C2 6的免疫反应性 ;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的 15 % ;Fab′ PYM对C2 6细胞的杀伤作用强于PYM ;对非靶细胞KB的杀伤作用与PYM相似 ;ip和iv给药 ,Fab′ PYM对小鼠皮下接种的肠癌 2 6生长抑制作用均强于 3A5 PYM和PYM。结论 Fab′ PYM具有比PYM及 3A5 展开更多
关键词 单克隆抗体 平阳霉素 免疫偶联物 抗肿瘤药物
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抗癌抗生素C1027与单克隆抗体Fab片段偶联物的抗肝癌作用 被引量:8
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作者 李军智 江敏 +1 位作者 薛玉川 甄永苏 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期260-265,共6页
抗人肝癌单克隆抗体(单抗)3A_5用木瓜蛋白酶消化得到Fab片段。单抗3A_5和Fab片段分别与抗癌抗生素C1027偶联,偶联物经克隆生成法测定对肝癌细胞有很强的杀伤作用,C1027,Fab-C1027和3;3A_5-C1027的IC_(50)分别为6.5×10^(16),8.6... 抗人肝癌单克隆抗体(单抗)3A_5用木瓜蛋白酶消化得到Fab片段。单抗3A_5和Fab片段分别与抗癌抗生素C1027偶联,偶联物经克隆生成法测定对肝癌细胞有很强的杀伤作用,C1027,Fab-C1027和3;3A_5-C1027的IC_(50)分别为6.5×10^(16),8.6×10^(15)和4.2×10^(15)mol·L^(-1);Fab-C1027偶联物对非靶细胞(KB)的IC_(50)值为1.4×10^(-13)mol·L^(-1),与靶细胞(BEL-7402)的IC_(50)值相比,两者相差160倍。说明Fab-C1027的杀伤活性强于3A_5-C1027,并对靶细胞呈选择性杀伤作用。给皮下移植人肝癌的裸鼠iv剂量0.1 mg·kg^(-1),结果C1027和Fab-C1027的抑瘤率分别为59和85%,说明Fab片段与C1027偶联物比游离C1027的疗效更高。 展开更多
关键词 单克隆抗体 抗癌抗生素 肝肿瘤
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抗CD_(20)嵌合抗体Fab’片段在大肠杆菌中高效表达 被引量:7
10
作者 赖增祖 熊冬生 +5 位作者 许元富 朱祯平 范冬梅 彭晖 邵晓枫 杨纯正 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第4期9-12,共4页
利用PCR方法从抗CD2 0 ScFv表达载体上扩增重链可变区 (VH)、轻链可变区(VL)基因 ,然后将VH、VL 基因重组到Fab’表达载体中 ,构建成抗CD2 0 嵌合抗体Fab’片段表达载体 pYZFcd2 0 ,用pYZFcd2 0转化大肠杆菌 16C9,在 16C9菌中分泌表达... 利用PCR方法从抗CD2 0 ScFv表达载体上扩增重链可变区 (VH)、轻链可变区(VL)基因 ,然后将VH、VL 基因重组到Fab’表达载体中 ,构建成抗CD2 0 嵌合抗体Fab’片段表达载体 pYZFcd2 0 ,用pYZFcd2 0转化大肠杆菌 16C9,在 16C9菌中分泌表达可溶性抗CD2 0 Fab’片段 ,经分离纯化获得具有CD2 0 抗原特异结合活性的Fab’片段 ,竞争性免疫荧光抑制实验表明 ,抗CD2 0 Fab’片段能竞争性抑制亲本鼠源性抗CD2 0 单克隆抗体HI4 7和Daudi细胞CD2 0 展开更多
关键词 单克隆抗体 抗体fab' 大肠杆菌
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人天然Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定 被引量:5
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作者 马小兵 畅继武 +2 位作者 王海涛 王馨 马腾骧 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期206-209,共4页
目的构建人天然Fab段噬菌体抗体库,建立人源抗体制备技术平台,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法从一个健康献血员取200ml新鲜血液,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA,依次将PCR产物插入载体pCo... 目的构建人天然Fab段噬菌体抗体库,建立人源抗体制备技术平台,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法从一个健康献血员取200ml新鲜血液,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA,依次将PCR产物插入载体pComb3相应位点,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体库,酶切和PCR鉴定有无插入片段,用白蛋白和IL-2作为抗原进行筛选富集。结果部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab表达库容达约1·2×106,酶切和PCR显示有插入片段。用不同蛋白进行几轮筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体,用于免疫治疗打下基础。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 抗体fab 抗体工程
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嵌合抗CD_(20)抗体Fab’片段三维结构的同源模建 被引量:3
12
作者 彭晖 杨纯正 +4 位作者 范冬梅 郑梦杰 赖增祖 熊冬生 朱祯平 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第12期4-8,共5页
分别以抗CD2 0 Fab’轻链和Fd段的氨基酸一级序列为探针 ,在PDB数据库中搜寻与其同源性高的蛋白作为参考蛋白 ,利用InsightII/MSI的同源蛋白质结构模建系统(homology)在SGI计算机图形工作站上模建轻链和Fd段的三维空间结构后 ,搭建成抗C... 分别以抗CD2 0 Fab’轻链和Fd段的氨基酸一级序列为探针 ,在PDB数据库中搜寻与其同源性高的蛋白作为参考蛋白 ,利用InsightII/MSI的同源蛋白质结构模建系统(homology)在SGI计算机图形工作站上模建轻链和Fd段的三维空间结构后 ,搭建成抗CD2 0 嵌合抗体片段Fab’的空间构象 ,并对模建蛋白进行分子力学和分子动力学优化。对优化后的模建蛋白的合理性验证显示 ,模建蛋白的三维结构是合理而可信的。 展开更多
关键词 同源建模在 CD20 抗体fab'片段 三维结构 蛋白 B淋巴细胞瘤 药物治疗 嵌合抗体
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抗甲型肝炎病毒抗体Fab在大肠杆菌中的表达 被引量:3
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作者 于长明 宋宏彬 +3 位作者 杜桂鑫 徐静 徐志凯 王海涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期149-152,共4页
目的在大肠杆菌中高效表达人源抗HAV抗体Fab,为进一步研究该抗体的功能奠定基础。方法依次将抗HAV抗体的Fd及轻链基因克隆到表达载体pASK84的不同信号序列下,构建成Fab表达质粒,在大肠杆菌JM83中进行表达,并对表达产物进行复性。用S... 目的在大肠杆菌中高效表达人源抗HAV抗体Fab,为进一步研究该抗体的功能奠定基础。方法依次将抗HAV抗体的Fd及轻链基因克隆到表达载体pASK84的不同信号序列下,构建成Fab表达质粒,在大肠杆菌JM83中进行表达,并对表达产物进行复性。用SDS-PAGE、western blot和ELISA法检测Fab的表达及其与甲肝病毒抗原的结合活性。结果 构建了抗HAV Fab的重组表达质粒p84Fab,在大肠杆菌JM83中获得表达,表达的Fab占全菌的25%,主要以包涵体形式存在,复性后具有抗原结合活性;培养基、菌体可溶性蛋白部分也能检测到有抗原结合活性的Fab。 结论抗HAV抗体Fab在大肠杆菌中得到了表达,并具有良好的抗原结合活性。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒 fab 基因表达 HAV抗体 大肠杆菌 抗原结合活性
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重组人抗HBs-Fab抗体的纯化及结构分析 被引量:3
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作者 饶桂荣 陈文吟 +3 位作者 粟宽源 任向荣 郑业华 余宙耀 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期54-57,共4页
目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析。方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助... 目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析。方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量和肽质量图谱。结果纯化的重组Fab抗体的纯度可达90%以上,经Sephacryl-100进一步层析后,纯度达99%以上,总收率可达80%以上。Fab抗体具有较好的抗体活性,其pI值为7·6,为一碱性蛋白,相对分子质量为50494,比其理论值约多2579·35,经Endoglycosidase H内切酶消化后的相对分子质量为49609,证明Fab的一级结构中有糖基化现象,且分布于Fab抗体的H链和L链上。胰酶酶解肽段中有21个与理论肽段相符,另检测到1对二硫键正确。结论已建立了重组人抗HBs-Fab抗体的稳定的纯化工艺,且Fab抗体的一级结构正确。 展开更多
关键词 抗HBs抗体 fab片段 纯化 结构
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天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建及多样性分析 被引量:4
15
作者 邵红霞 章黎 +4 位作者 杨彬 冯萌 付永峰 Hiroshi Tachibana 程训佳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1007-1010,1015,共5页
目的:构建天然人源IgGFab噬菌体抗体库并分析来源于健康人外周血B淋巴细胞的抗体基因可变区的多样性及优势选择。方法:以DNA重组技术从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入噬菌体载体pFabICN... 目的:构建天然人源IgGFab噬菌体抗体库并分析来源于健康人外周血B淋巴细胞的抗体基因可变区的多样性及优势选择。方法:以DNA重组技术从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入噬菌体载体pFabICN相应位置,构建天然人源免疫球蛋白G基因文库;进一步从抗体库中随机挑选克隆,获得重轻链基因进行核苷酸序列测定并利用IgBLAST数据库分析抗体基因可变区的同源家族。结果:从4×108库容的天然人源IgGFab噬菌体抗体库中随机挑选克隆,对其中32个轻链及重链Fd基因插入正确的克隆进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推算,获得29条彼此完全不同的Fd重链基因及轻链基因。以IgBLAST数据库比对分析显示29条重链基因的V区分别属于VH3(72.4%),VH1(10.3%),VH4(6.9%),VH5(6.9%)和VH7(3.4%)基因家族。29条轻链基因分别属于Vκ1(44.8%),Vκ2(15.4%),Vκ3(11.5%),Vκ4(23.1%)基因家族和Vλ1(11.5%)基因家族。结论:以300份健康人外周血淋巴细胞的抗体基因构建的天然人源IgGFab噬菌体抗体库基因多样性良好,重链VH3基因家族存在优势表达。 展开更多
关键词 噬菌体展示库 免疫球蛋白fab片段 免疫球蛋白重链基因 抗体多样性
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生物工程技术制备人源抗-HBs Fab片段 被引量:4
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作者 安峰 陈玉川 +1 位作者 陆慧琦 韩焕兴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期74-76,共3页
目的:用生物工程技术制备人源性抗-HBs F-ah。方法:将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆人pBAD/gⅢA载体,进而转化Top10大肠杆菌。对重组质粒菌发酵表达后,利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab 蛋白。对所得包... 目的:用生物工程技术制备人源性抗-HBs F-ah。方法:将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆人pBAD/gⅢA载体,进而转化Top10大肠杆菌。对重组质粒菌发酵表达后,利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab 蛋白。对所得包涵体依次变性、溶解、纯化后,利用透析进行复性。用Western blot检测Fab蛋白的特异性,Dot blot测定其生物学活性。结果:经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白,有较好的生物学活性,并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后,也可得到少量有活性的蛋白,但比例很小。结论:用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBs Fab片段,发酵培养后,经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白,为人源抗-HBs Fab片段的大量制备提供了有效手段。 展开更多
关键词 fab片段 六聚组氨酸尾 亲和层析 生物工程技术
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重组毕赤酵母菌高密度表达人源抗-HBs Fab抗体的研究 被引量:3
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作者 陈文吟 饶桂荣 +2 位作者 粟宽源 邓宁 余宙耀 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期810-812,共3页
目的 探讨抗 HBsFab抗体发酵工程菌GS1 1 5 /Fab的高密度发酵及对发酵产物的纯化与活性鉴定方法。方法 采用补料分批培养方法 ,在 5L发酵罐中对发酵工程菌GS1 1 5 /Fab进行高密度发酵 ,发酵温度 2 8~ 30℃ ,pH值范围为 5 0~ 5 5 ... 目的 探讨抗 HBsFab抗体发酵工程菌GS1 1 5 /Fab的高密度发酵及对发酵产物的纯化与活性鉴定方法。方法 采用补料分批培养方法 ,在 5L发酵罐中对发酵工程菌GS1 1 5 /Fab进行高密度发酵 ,发酵温度 2 8~ 30℃ ,pH值范围为 5 0~ 5 5 ,溶氧范围 2 0 %以上 ;3次发酵分别于OD60 0 值达到 4 0 0~4 5 0、2 0 0~ 2 5 0、30 0~35 0时开始诱导 ,甲醇诱导浓度为 0 5 %~1 % ,经 96h左右的诱导后终止发酵 ,对发酵上清进行亲和纯化 ,并通过ELISA法对纯化产物进行活性鉴定。结果 在OD60 0 为 30 0~ 35 0时开始诱导有利于发酵过程条件的控制和目的蛋白的表达 ,目的蛋白表达量为 2 4 5mg/L。发酵上清通过亲和层析纯化 ,获得纯度为 98%的重组Fab抗体 ,该抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力及特异性。结论 Fab酵母菌工程菌在 5L发酵罐高密度发酵成功 ,为抗 展开更多
关键词 抗-HBS fab抗体 高密度发酵 毕赤酵母菌 亲和层析
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抗人层粘连蛋白Fab'的制备 被引量:4
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作者 陈金国 柴明胜 +1 位作者 叶仲贤 朱炳钗 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期53-55,共3页
用DEAE纤维素DE-52反相吸附纯化抗人层粘连蛋白(LN)IgG,IgG回收率达11.6mg/ml血清。胃蛋白酶消化IgG成F(ab')2,再用10mmol/L2-巯基乙醇37℃反应90min还原成Fab',回收率... 用DEAE纤维素DE-52反相吸附纯化抗人层粘连蛋白(LN)IgG,IgG回收率达11.6mg/ml血清。胃蛋白酶消化IgG成F(ab')2,再用10mmol/L2-巯基乙醇37℃反应90min还原成Fab',回收率约81%,放免效价为1:3500.测得纯化的IgG、F(ab')2及Fab'分子量分别为150000、90000、45000,与理论值相近。放免检测中用Fab'取代抗血清可纠正对血清LN测定的误差,从而建立检测LN的准确、灵敏方法。 展开更多
关键词 fab'片段 单价抗体 层粘连蛋白 放射免疫分析
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人源天然Fab噬菌体抗体库的构建及抗c-Met抗体的筛选、鉴定 被引量:3
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作者 万佳艺 孙慧 +4 位作者 焦永军 朱晓娟 朱进 刘政 冯振卿 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期697-701,共5页
目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后... 目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后,随机挑选60个克隆用Phage ELISA、BstOⅠ酶切片断分析进行检测,阳性克隆作可溶性表达和鉴定。结果:构建的Fab噬菌体抗体库的库容为1.2×109,从中筛选到1株与c-Met特异性结合的人源抗体克隆,命名为AM2-26。DNA序列分析证明为人免疫球蛋白可变区基因,Western blot证实为人源抗c-Met Fab抗体片段,ELISA特异性鉴定阳性。结论:构建了大容量人源天然Fab抗体库,从中获得1株抗c-Met人源Fab抗体片段,有望为抗肿瘤药物的研制提供新的候选分子。 展开更多
关键词 C-MET 噬菌体抗体库 fab片段 肿瘤
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人源性抗HBsAg单克隆抗体Fab片段的表达与纯化 被引量:2
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作者 范列英 韩焕兴 +1 位作者 胡东平 孔宪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期169-171,共3页
对已筛选到的人源性抗HBsAg特异性噬菌体抗体基因文库进行表达研究,将特异性噬粒转化大肠杆菌XL1-Blue,反复冻溶法制备可溶性Fab片段。免疫印迹实验表明大肠杆菌质周腔内有可溶性Fab片段的表达。制备羊抗人IgG... 对已筛选到的人源性抗HBsAg特异性噬菌体抗体基因文库进行表达研究,将特异性噬粒转化大肠杆菌XL1-Blue,反复冻溶法制备可溶性Fab片段。免疫印迹实验表明大肠杆菌质周腔内有可溶性Fab片段的表达。制备羊抗人IgGFab抗血清、建立抗人IgGFab抗体-Sepharose4B亲和层析柱,纯化Fab片段。SDS-PAGE显示纯化的Fab达免疫纯。 展开更多
关键词 乙型肝炎 表面抗原 单克隆抗体 fab片段 纯化
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