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血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备
1
作者
罗昕雨
赵磊
+5 位作者
陈玉晴
缪欣怡
石家鑫
顾有方
李文超
刘欣超
《安徽科技学院学报》
2024年第2期25-30,共6页
目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,...
目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。
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关键词
血清4型禽腺病毒
fiber-1基因
重组蛋白
多克隆抗体
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题名
血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备
1
作者
罗昕雨
赵磊
陈玉晴
缪欣怡
石家鑫
顾有方
李文超
刘欣超
机构
安徽科技学院动物科学学院
动物营养调控与健康安徽省重点实验室
出处
《安徽科技学院学报》
2024年第2期25-30,共6页
基金
农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室开放课题(YDWS202104)
安徽省高校自然科学研究项目(2022AH051641)
+1 种基金
安徽省自然科学基金(1908085QC116)
安徽科技学院人才引进项目(DKYJ201902)。
文摘
目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。
关键词
血清4型禽腺病毒
fiber-1基因
重组蛋白
多克隆抗体
Keywords
Fowl adenovirus serotype 4
fiber-
1
Recombinant protein
Polyclonal antibody
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备
罗昕雨
赵磊
陈玉晴
缪欣怡
石家鑫
顾有方
李文超
刘欣超
《安徽科技学院学报》
2024
0
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