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利用CRISPR/Cas9基因编辑片段敲除技术创制玉米多样化等位变异
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作者 张茂林 王娟 +9 位作者 严佳丽 何春梅 徐倩 刘铁山 董瑞 刘春晓 关海英 刘强 汪黎明 曾廷儒 《山东农业科学》 北大核心 2024年第9期1-5,共5页
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制等位变异已经成为众多植物中增加种质资源多样性的重要手段。提高玉米等谷物中类胡萝卜素含量是发展中国家解决维生素A缺乏症的一种经济方法。本研究以玉米中调控类胡萝卜素合成的基因crtRB1为研究对象... 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制等位变异已经成为众多植物中增加种质资源多样性的重要手段。提高玉米等谷物中类胡萝卜素含量是发展中国家解决维生素A缺乏症的一种经济方法。本研究以玉米中调控类胡萝卜素合成的基因crtRB1为研究对象,利用双靶标片段缺失性基因编辑技术,在原生质体中对crtRB1的启动子顺式元件进行片段敲除,获得了具有片段缺失和InDel(插入或缺失)的多样化等位变异,这为在玉米中实现稳定的crtRB1启动子元件的缺失突变奠定了基础,对启动子元件的功能研究和玉米的品质改良具有重要意义。 展开更多
关键词 玉米 crtRB1 基因编辑 片段敲除 启动子
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通过CRISPR/Cas9建立豌豆基因组大片段敲除体系
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作者 黄淑贤 刘荣 +4 位作者 李冠 疏琴 徐斐 宗绪晓 杨涛 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1658-1668,共11页
豌豆是世界上主要食用豆类作物之一,因其丰富的营养价值和良好的生态价值而受到越来越多的重视。CRISPR/Cas9作为一种生物育种的新型技术手段,已广泛应用于各种作物的品种改良中,但在豌豆中的应用报道非常少见。本研究以“中豌6号”品... 豌豆是世界上主要食用豆类作物之一,因其丰富的营养价值和良好的生态价值而受到越来越多的重视。CRISPR/Cas9作为一种生物育种的新型技术手段,已广泛应用于各种作物的品种改良中,但在豌豆中的应用报道非常少见。本研究以“中豌6号”品种为试验材料,采用CRISPR/Cas9技术手段成功地实现了豌豆基因组中Psat01G0240600-T1、Psat03G0303300-T1和Psat03G0304700-T1基因的大片段缺失,其大片段敲除效率分别是24.1%、13.0%和3.6%。进一步对结果分析发现,不同靶点的编辑效率相差较大,并且大片段缺失的效率取决于2个靶点中较低编辑效率的靶点。本研究利用发状根体系探索了CRISPR/Cas9在豌豆中的应用,首次在豌豆中实现了大片段敲除,对于豌豆的研究具有重要意义。 展开更多
关键词 豌豆 CRISPR/Cas9 发状根 大片段敲除
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立FcγR基因大片段敲除小鼠模型 被引量:2
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作者 吴曦 霍桂桃 +5 位作者 刘甦苏 谷文达 曹愿 柳全明 吕建军 范昌发 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期583-591,共9页
目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过... 目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA在体外的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9mRNA一并注射受精卵。通过PCR检测及测序,得到1只敲除片段为89711bp的基因修饰小鼠,且同时敲除FcγR2b基因5’端,FcγR3基因3’端及FcγR4基因。而且还利用软件预测了8个脱靶可能性最高的位点,并对首建鼠基因组的上述8个脱靶位点全部测序确认。结果结果显示未在预测脱靶位点附近发现小片段插入或缺失。结论建立了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除基因组超大片段的技术,该技术结合BAC转基因技术,将为建立含有复杂基因族的人源化小鼠提供新的途径。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 FcγR基因 大片段敲除 小鼠
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铜绿假单胞菌中快速基因操作工具的开发和应用
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作者 李飞旋 倪磊 金帆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1789-1803,共15页
针对基因的操作,包括缺失和插入基因、替换基因元件(如启动子)、融合荧光蛋白基因、构建原位的基因报告系统,是大多数生物技术实验室的必备技术。目前广泛使用的基于2次同源重组的基因操作方法,在构建质粒、转化和筛选方面较为繁琐。另... 针对基因的操作,包括缺失和插入基因、替换基因元件(如启动子)、融合荧光蛋白基因、构建原位的基因报告系统,是大多数生物技术实验室的必备技术。目前广泛使用的基于2次同源重组的基因操作方法,在构建质粒、转化和筛选方面较为繁琐。另外使用该方法进行长片段敲除的效率较低。为了简化基因操作的流程,本研究构建了一个最小化的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)整合型质粒pln2,只需将目标基因内部一段序列克隆到pln2质粒并导入细菌,由于质粒不能在细菌内自我复制而只能通过单次等位基因交换整合到基因组上,从而使目的基因断裂为两部分而失去活性。在pln2的基础上开发了一整套工具质粒适用于基因组的不同操作,包括融合荧光蛋白基因、替换基因元件(如启动子)、构建原位的转录型荧光报告系统。此外,本研究借助该系统成功实现超长片段基因簇的敲除,单次可以敲除长达270 kb的片段。 展开更多
关键词 基因操作 单交换同源重组 铜绿假单胞菌 长片段敲除 新技术与新方法
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两步PCR介导的Red重组技术快速敲除鼠疫耶尔森菌sRNA及染色体大片段 被引量:4
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作者 王仁霞 刘荣娇 +4 位作者 李子微 王瑞欢 杨瑞馥 韩延平 邓仲良 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1126-1137,共12页
【目的】利用Red同源重组系统,通过二步PCR法建立一种适合鼠疫耶尔森菌s RNA和大片段染色体基因敲除的方法。【方法】第一步PCR先扩增出目的基因的上、下游同源臂(600–1000 bp)及卡那抗性盒,再以上、下游同源臂及卡那抗性盒等摩尔混合... 【目的】利用Red同源重组系统,通过二步PCR法建立一种适合鼠疫耶尔森菌s RNA和大片段染色体基因敲除的方法。【方法】第一步PCR先扩增出目的基因的上、下游同源臂(600–1000 bp)及卡那抗性盒,再以上、下游同源臂及卡那抗性盒等摩尔混合物为模板,通过融合PCR获得含上下游同源臂及卡那抗性盒的线性突变盒,再将此突变盒的PCR产物电转到含有pKD46质粒的鼠疫201菌株,在阿拉伯糖的诱导下,p KD46质粒表达Red重组酶,促使卡那抗性盒替换目的基因,最后对获得的重组克隆进行PCR鉴定。【结果】本研究通过两步PCR法构建600–1000 bp的同源臂,提高了同源重组效率,并将鼠疫菌sRNA RyhB1(108 bp)和RyhB2(106 bp)和染色体大片段47-2(10.4 kb)、47-3(21.6 kb)、47-3a(9.2 kb)及47-3b(6.1 kb)成功敲除。【结论】基于Red重组系统构建的二步法突变技术,是一种简单、高效的精确修饰鼠疫菌s RNA及大片段染色体的方法,适合于鼠疫菌全基因组的基因敲除,为鼠疫菌基因表达与调控、致病和毒力等研究提供有力的工具。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 RED重组系统 SRNA 大片段染色体 基因敲除
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Nuclear Physics Programs for the Future RIBs Facility in Korea
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作者 Moon Chang-Bum 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期131-140,共10页
We present nuclear physics programs based on the planned experiments using rare isotope beams(RIBs) for the future Korean Rare Isotope Beams Accelerator facility(KRIA). This ambitious facility has both an Isotope Sepa... We present nuclear physics programs based on the planned experiments using rare isotope beams(RIBs) for the future Korean Rare Isotope Beams Accelerator facility(KRIA). This ambitious facility has both an Isotope Separation On Line(ISOL) and fragmentation capability for producing RIBs and accelerating beams of wide range mass of nuclides with energies of a few to hundreds Me V per nucleon. Low energy RIBs at Elab = 5 to 20 Me V per nucleon are for the study of nuclear structure and nuclear astrophysics toward and beyond the drip lines while higher energy RIBs produced by inflight fragmentation with the reaccelerated ions from the ISOL enable to explore the neutron drip lines in intermediate mass regions. The planned programs have goals for investigating internal structures of the exotic nuclei toward and beyond the nucleon drip lines by addressing the following issues: how the shell structure evolves in areas of extreme proton to neutron imbalance; whether the isospin symmetry maintains in isobaric mirror nuclei at and beyond the drip lines; how two-proton radioactivity affects abundances of the elements; what the role of the continuum states including resonant states above protondecay threshold in exotic nuclei is in astrophysical nuclear reaction processes, and how the nuclear reaction rates triggered by unbound proton-rich nuclei make an effect on rapid proton capture processes in a very hot stellar plasma. 展开更多
关键词 Rare Isotope Beam NUCLEOSYNTHESIS mirror nuclei In-Flight fragmentation two proton radioactivity transfer reaction one and two nucleon removal(knockout) reaction
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