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山药颗粒结合型淀粉合成酶基因DaGBSS的克隆与分析
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作者 王培龙 徐婉 +5 位作者 杨燕萍 付双彬 应震 杨周祥 姚丽娟 周庄 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期79-88,共10页
颗粒结合型淀粉合成酶(granule-bound starch synthase,GBSS)是一种能够决定直链淀粉生物合成的关键性酶。通过对山药转录组分析、分子克隆获得一个具有完整ORF的DaGBSS基因,cDNA片段长度为1845 bp,编码614个氨基酸。生物信息学分析结... 颗粒结合型淀粉合成酶(granule-bound starch synthase,GBSS)是一种能够决定直链淀粉生物合成的关键性酶。通过对山药转录组分析、分子克隆获得一个具有完整ORF的DaGBSS基因,cDNA片段长度为1845 bp,编码614个氨基酸。生物信息学分析结果显示DaGBSS蛋白为一酸性稳定蛋白,含有淀粉合酶催化和糖基转移酶2个功能结构域。多序列比对结果显示:糯米山药DaGBSS蛋白与所选的物种具有较高的同源性,且含有典型的功能结构域;生物进化分析结果显示DaGBSS蛋白与圆形薯蓣亚种进化亲缘关系最近。对采收15 d山药块茎进行处理,qRT-PCR、指标分析结果显示DaGBSS基因在山药块茎的表达存在明显的时空差异性,且在距离地表位置最远的部位DaGBSS基因的表达量、GBSS和直链淀粉的含量均为最高。研究通过对山药块茎淀粉合成的早期阶段进行生理、关键调控因子的克隆分析,为探究山药淀粉合成的调控提供参考,同时对糯米山药的分子育种提供了重要的基因资源。 展开更多
关键词 山药 gbss基因 基因克隆 qRT-PCR分析
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自身启动子调控下小麦Anti-gbssⅠ基因表达载体的构建及转基因植株的培养
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作者 苗红梅 化青报 +3 位作者 李利红 赵永英 易明林 郅玉宝 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期243-248,共6页
利用反义技术,构建了含有gbssⅠ启动子和自身反义基因序列的表达载体pRgbss,通过基因枪法在小麦中转化和PCR检测,共得到阳性转基因植株3株.
关键词 小麦 淀粉 gbssⅠ启动子 gbssⅠ反义基因 转化
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植物颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)基因的表达调控机制研究进展 被引量:12
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作者 苗红霞 孙佩光 +2 位作者 张凯星 金志强 徐碧玉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期18-23,共6页
颗粒结合淀粉合成酶(granule-bound starch synthase,GBSS)是决定直链淀粉合成的关键酶,单子叶植物GBSS包含两种同工酶,分别是GBSSI和GBSSII,双子叶植物只有GBSSII一种同工酶。GBSSI基因的表达主要控制种子、胚、胚乳等贮藏器官中直链... 颗粒结合淀粉合成酶(granule-bound starch synthase,GBSS)是决定直链淀粉合成的关键酶,单子叶植物GBSS包含两种同工酶,分别是GBSSI和GBSSII,双子叶植物只有GBSSII一种同工酶。GBSSI基因的表达主要控制种子、胚、胚乳等贮藏器官中直链淀粉的合成,而GBSSII主要控制根、茎、叶等营养器官中直链淀粉的合成。综述了模式植物及农作物中GBSS基因表达调控机制的最新研究进展,以期为其他植物GBSS基因的研究提供借鉴。 展开更多
关键词 gbss基因 直链淀粉 表达分析 调控机制
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马铃薯GBSS基因5′侧翼区调控作用的研究 被引量:10
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作者 宋东光 孙国枫 +4 位作者 单海燕 彭翔寅 王光清 汪训明 谈家桢 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1998年第9期796-802,共7页
将0.4、0.8、1.6、2.9kbGBSS基因的5′侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体。0.8kbGBSSGUS通过基因枪介导在块茎切片中获得了瞬间表达。以上建构物通过农杆菌介导转入了马铃薯(Solanu... 将0.4、0.8、1.6、2.9kbGBSS基因的5′侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体。0.8kbGBSSGUS通过基因枪介导在块茎切片中获得了瞬间表达。以上建构物通过农杆菌介导转入了马铃薯(SolanumtuberosumL.cv.Desiree)。XGluc染色及PCR结果证实已获得转基因植株。利用离体块茎诱导系统,GUS表达用荧光进行定量检测,结果显示,2.9、1.6、0.4kbGBSSGUS的表达均以块茎明显高于茎段,达2~10倍。0.8、1.6、2.9kbGBSSGUS表达高于0.4kbGBSSGUS。蔗糖浓度的升高可诱导GBSSGUS的表达,而光照抑制了GBSSGUS的表达。 展开更多
关键词 马铃薯 基因调控 gbss基因 块茎专一表达 诱导
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禾本科淀粉合成酶基因GBSS的分子进化 被引量:1
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作者 吴莉莉 黎应丽 韦若勋 《产业与科技论坛》 2020年第18期54-55,共2页
GBSS基因编码植物的淀粉合成酶,是植物淀粉合成途径中的关键酶。研究禾本科植物GBSS基因的分子进化有助于提高对禾本科植物淀粉合成的认识。因此,对禾本科47条GBSS基因的分子进化进行了分析。系统发育分析显示,禾本科GBSS基因分为GBSS1... GBSS基因编码植物的淀粉合成酶,是植物淀粉合成途径中的关键酶。研究禾本科植物GBSS基因的分子进化有助于提高对禾本科植物淀粉合成的认识。因此,对禾本科47条GBSS基因的分子进化进行了分析。系统发育分析显示,禾本科GBSS基因分为GBSS1和GBSS2两支,说明该基因在禾本科早期经历过基因重复事件。分子进化分析显示,GBSS基因的选择压d N/d S显著小于1,表明该基因受到强烈负选择作用;且GBSS1和GBSS22所受选择压不同,分别为0. 078、0. 154,说明GBSS1受到更强的负选择,这应该与该重复基因的功能分化相关。 展开更多
关键词 禾本科 gbss基因 系统发育 分子进化
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百合GBSS基因RNAi载体构建
6
作者 张进忠 《农学学报》 2022年第7期69-73,共5页
为研究GBSS基因在百合鳞茎形成及发育过程中影响鳞茎淀粉合成代谢的作用机理,构建干扰GBSS基因的RNAi载体为其在转录水平沉默表达提供材料。从百合鳞片克隆GBSS基因300 bp的保守序列,通过BP与LR反应将该序列正反向连接到干扰载体pJawohl... 为研究GBSS基因在百合鳞茎形成及发育过程中影响鳞茎淀粉合成代谢的作用机理,构建干扰GBSS基因的RNAi载体为其在转录水平沉默表达提供材料。从百合鳞片克隆GBSS基因300 bp的保守序列,通过BP与LR反应将该序列正反向连接到干扰载体pJawohl8-RNAi中,经过酶切反应鉴定所构建RNAi表达载体的正确性。实验成功构建pDONR221-GBSS入门克隆与pJawohl8-RNAi-GBSS表达载体,为在百合鳞茎淀粉合成代谢途径中研究GBSS基因功能及对鳞茎发育的影响提供了材料与思路。 展开更多
关键词 百合 gbss基因 鳞茎淀粉 代谢 机理 颗粒结合淀粉合酶 RNAI 表达载体 鳞茎发育
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中国春小麦GBSS与淀粉颗粒结合特性的研究 被引量:4
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作者 郭华 王宪泽 +2 位作者 李海雷 高艾英 田纪春 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期322-326,共5页
以小麦品种中国春(Triticum aestivum)为材料,分析了颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)与淀粉颗粒结合的影响因素及作用力。通过SDS-PAGE及测定GBSS溶液浓度,证实小麦GBSS与淀粉粒结合的紧密程度受温度影响,在50-80℃范围内,GBSS从淀粉... 以小麦品种中国春(Triticum aestivum)为材料,分析了颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)与淀粉颗粒结合的影响因素及作用力。通过SDS-PAGE及测定GBSS溶液浓度,证实小麦GBSS与淀粉粒结合的紧密程度受温度影响,在50-80℃范围内,GBSS从淀粉颗粒上的解离量随温度的升高逐渐升高;而在85-95℃之间,解离量随温度的升高而降低;沸水浴处理15min的GBSS解离量较大,但超过35min时GBSS的量反而有所减少。Mg^2+浓度也影响GBSS的解离,低于1.75mmol L^-1时,随Mg^2+浓度降低解离量逐渐升高;高于2.5mmol L^-1时,随Mg^2+浓度的升高解离量逐渐降低。表明GBSS与淀粉粒的结合力是非共价键。 展开更多
关键词 小麦 颗粒结合淀粉合成酶(gbss) 结合特性 温度 Mg^2+浓度
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离体百合鳞茎发育及淀粉合成酶基因LohGBSSI的克隆与表达 被引量:3
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作者 闵芮涵 孙敏译 +2 位作者 吴昀 李世琦 夏宜平 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期201-208,共8页
【目的】淀粉是百合Lilium spp.鳞茎的主要组成成分,淀粉代谢对于百合鳞茎发育至关重要,对其开展深入研究有助于解决鳞茎繁育慢等产业化难题。【方法】以主栽品种东方百合‘索邦’Lilium‘Sorbonne’离体鳞茎为材料,在观测不同发育时期... 【目的】淀粉是百合Lilium spp.鳞茎的主要组成成分,淀粉代谢对于百合鳞茎发育至关重要,对其开展深入研究有助于解决鳞茎繁育慢等产业化难题。【方法】以主栽品种东方百合‘索邦’Lilium‘Sorbonne’离体鳞茎为材料,在观测不同发育时期形态和淀粉积累的基础上,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE),克隆淀粉合成代谢关键酶颗粒结合型淀粉合成酶基因LohGBSSI,并对其开展不同组织及发育期基因表达谱分析。【结果】①根据形态及源-库转换,离体百合鳞茎形成和发育过程可分为小鳞茎膨大初期(0~15 d),小鳞茎快速膨大期(15~55 d)及小鳞茎膨大后期(55~75 d)。②‘索邦’颗粒结合型淀粉合成酶基因LohGBSSI(GenBank登录号:MF101407.1)全长1913 bp,开放阅读框(ORF)长为1665 bp,编码554个氨基酸。氨基酸序列与兰州百合Lilium davidii var.unicolor GBSSI同源性较高(92%),推测该基因可能属于GBSSI基因家族。③LohGBSSI基因在鳞茎和叶中表达显著高于茎段和根,表明直链淀粉合成的最主要部位为源-库关键器官;不同发育时期鳞茎内LohGBSSI的表达在15 d时最高,暗示鳞茎形成初期需淀粉快速合成以便形态建成。【结论】为后续解析淀粉合成关键酶基因GBSS在鳞茎发育中的功能奠定了基础,也为百合进行淀粉相关基因修饰提供了依据。 展开更多
关键词 植物学 东方百合 鳞茎发育 gbss 克隆 表达差异性
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农杆菌介导法将大麦胚乳特异型启动子启动的小麦GBSSⅠ基因转化玉米自交系 被引量:3
9
作者 周融希 吴颖 +5 位作者 邹宏达 苏胜忠 李世鹏 单晓辉 刘宏魁 原亚萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期30-34,共5页
本研究将从大麦中克隆到的大麦胚乳特异型启动子HorD和小麦中克隆到的小麦颗粒结合型淀粉合成酶基因GBSSⅠ(Granule-bound starch synthaseⅠ,GBSSⅠ)通过中间载体pGM-T-HorD和pGM-T-GBSSⅠ,定向连接到表达载体pCAMBIA3301上,构建了植... 本研究将从大麦中克隆到的大麦胚乳特异型启动子HorD和小麦中克隆到的小麦颗粒结合型淀粉合成酶基因GBSSⅠ(Granule-bound starch synthaseⅠ,GBSSⅠ)通过中间载体pGM-T-HorD和pGM-T-GBSSⅠ,定向连接到表达载体pCAMBIA3301上,构建了植物表达载体pHorD-GBSSⅠ并转入农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法转化玉米自交系Y423体细胞胚胎,获得抗性愈伤组织,并得到了再生植株,经PCR分子检测,共有35株呈阳性,阳性率为15%。我们认为本研究可能为进一步改良玉米淀粉品质提供一条分子育种的途径。 展开更多
关键词 玉米(Zea maysL.) 颗粒结合型淀粉合成酶(gbssⅠ) 大麦胚乳特异型启动子(HorD) 农杆菌介导遗传转化
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一个新的马铃薯GBSS基因5'侧翼序列克隆及调控活性研究 被引量:3
10
作者 李淑洁 张金文 +2 位作者 王煜 郭志鸿 陈正华 《中国马铃薯》 2005年第3期129-133,共5页
采用PCR技术,从马铃薯叶片基因组DNA中扩增到了约0.6kb的马铃薯GBSS基因的5'侧翼序列,经序列同源性分析所克隆的序列与已知序列同源性为97.41%,含有启动基因表达所需的主要调控元件CAAT盒和TATA盒。构建该序列与GFP的融合基因植物... 采用PCR技术,从马铃薯叶片基因组DNA中扩增到了约0.6kb的马铃薯GBSS基因的5'侧翼序列,经序列同源性分析所克隆的序列与已知序列同源性为97.41%,含有启动基因表达所需的主要调控元件CAAT盒和TATA盒。构建该序列与GFP的融合基因植物表达载体pBIGGFP,并用基因枪转化法将pBIGGFP导入马铃薯无菌苗茎段、叶片和微型薯薯片,用荧光显微镜观察转化组织中GFP的瞬时表达,结果表明GFP在上述器官中都得到了表达,说明所克隆的约0.6kbGBSS基因的5'侧翼序列是具有启动基因表达的功能。 展开更多
关键词 马铃薯 gbss基因5’侧翼区 克隆 GFP 调控
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黄芪毛状根GBSSI基因cDNA克隆及其结构分析 被引量:14
11
作者 彭佶松 赵淑娟 +3 位作者 吴晓俊 刘涤 胡之璧 许政暟 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第9期940-945,共6页
根据多种已发表的淀粉粒结合淀粉合成酶 (GBSS)基因序列的对比分析 ,以它们保守区的核酸顺序为基础 ,设计一对简并引物。从膜荚黄芪 (Astragalusmembranaceus (Fisch .)Bunge)毛状根提取mRNA ,用RT_PCR的方法扩增出 5 6 0bp的cDNA片段... 根据多种已发表的淀粉粒结合淀粉合成酶 (GBSS)基因序列的对比分析 ,以它们保守区的核酸顺序为基础 ,设计一对简并引物。从膜荚黄芪 (Astragalusmembranaceus (Fisch .)Bunge)毛状根提取mRNA ,用RT_PCR的方法扩增出 5 6 0bp的cDNA片段。序列测定表明 ,此片段与发表的豌豆和马铃薯GBSSI基因相应序列同源性分别达 89.6 %和 73.0 %。通过 5′/ 3′RACE(rapidamplificationofcDNAends)的方法 ,分别扩增出 5′和 3′端序列 ,从而获得全长的cDNA。序列分析表明此cDNA编码黄芪的GBSSI。根据推导的蛋白质序列 ,这是一个由 6 0 7个氨基酸组成的、pI为7.5 5、相对分子量为 6 6 5 6 0的前体蛋白。根据同类GBSS的氨基酸的序列比较 ,其氨基端转运肽同源性较低 ,而成熟蛋白氨基酸序列同源性较高。结合已知GBSSI的转运肽切割位点和 11种植物氨基端对准分析的结果 ,确立了此类GBSS的转运肽切割位点识别模式。对黄芪GBSSI转运肽切割位点进行了预测 ,它含有 77个氨基酸的转运肽 ,成熟蛋白pI为 5 .78,相对分子量为 5 82 70。Northernblot分析表明 。 展开更多
关键词 黄芪 gbss 基因克隆 毛状根 遗传转化 中药材
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莲藕GBSS基因cDNA全长的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 陆叶 李良俊 +1 位作者 梁国华 陈学好 《长江蔬菜》 2010年第14期19-23,共5页
采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到全长为2265bp的莲藕"美人红"品种的GBSS基因的cDNA序列(GenBank登录号EU938541),其中开放阅读框(ORF)长为1848bp,共编码615个氨基酸。用DNAman软件比对,莲藕GBSS基因cDNA与金鱼草(AJ006293)... 采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到全长为2265bp的莲藕"美人红"品种的GBSS基因的cDNA序列(GenBank登录号EU938541),其中开放阅读框(ORF)长为1848bp,共编码615个氨基酸。用DNAman软件比对,莲藕GBSS基因cDNA与金鱼草(AJ006293)、马铃薯(EU403426)、大豆(EF153101)、水稻(EU735072)Wx基因cDNA序列的同源性分别达61.2%、59.6%、64.2%、50.6%。对该基因编码的氨基酸序列进行Blastp分析发现,该序列与金鱼草的序列同源性最高,达到77%,与马铃薯、甘薯的同源性达到75%,与豆科植物的同源性在70%~75%,与禾本科植物的同源性在65%~70%。 展开更多
关键词 莲藕 gbss基因 CDNA 克隆
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马铃薯块茎GBSS Ⅰ基因的cDNA克隆及其序列特征分析 被引量:9
13
作者 沈宝云 刘玉汇 +1 位作者 张俊莲 王蒂 《草业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期1-8,共8页
以马铃薯普通栽培种"甘农薯2号"块茎为材料,利用RNA提取试剂盒提取总RNA,通过RT-PCR技术和DNA序列测定分析,证实获得了马铃薯颗粒结合淀粉合成酶(GBSS I)基因的cDNA序列。该cDNA全长1824bp,包括607个氨基酸和1个终止密码子序... 以马铃薯普通栽培种"甘农薯2号"块茎为材料,利用RNA提取试剂盒提取总RNA,通过RT-PCR技术和DNA序列测定分析,证实获得了马铃薯颗粒结合淀粉合成酶(GBSS I)基因的cDNA序列。该cDNA全长1824bp,包括607个氨基酸和1个终止密码子序列,且与原序列(accession number X58453)同源性为99.78%,但与其他科植物GBSS基因的同源性较低,注册该基因到GenBank中,注册号为EU403426。利用生物信息学相关软件分析预测GBSS I基因cDNA序列编码的蛋白质功能和结构,结果发现,该蛋白与其他15种植物GBSS蛋白一样,具有3个完全保守区域,并具许多重要功能位点,且与农杆菌淀粉合成酶具有相似三级结构模型,表明该蛋白具淀粉合成功能。 展开更多
关键词 马铃薯 颗粒结合淀粉合成酶基因 RT-PCR技术 DNA序列分析 蛋白质功能预测
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黄芪毛状根淀粉粒结合淀粉合成酶(GBSS)基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量:2
14
作者 赵淑娟 李学清 +1 位作者 刘涤 胡之璧 《上海中医药大学学报》 CAS 2001年第4期36-38,共3页
以膜荚黄芪毛状根中克隆得到的GBSS基因序列设计一对特殊引物 ,得到了包含GBSS基因全部表达序列的1.9kb的cDNA片段。该片段正向连接于切除了GUS基因的pBI12 1上 ,构建成表达载体pBI-gbss。SDS -PAGE实验证实了GBSS基因在含有该表达载体... 以膜荚黄芪毛状根中克隆得到的GBSS基因序列设计一对特殊引物 ,得到了包含GBSS基因全部表达序列的1.9kb的cDNA片段。该片段正向连接于切除了GUS基因的pBI12 1上 ,构建成表达载体pBI-gbss。SDS -PAGE实验证实了GBSS基因在含有该表达载体的DH5α的大肠杆菌中得到表达。酶活性测定表明转化菌株比未转化菌株高出 2 0 %。 展开更多
关键词 淀粉粒结合淀粉合成酶 膜荚黄芪 基因表达 中药材生产
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LBRSS算法和GBSS算法的关系
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作者 张蕾 祝跃飞 《信息工程大学学报》 2006年第2期108-112,共5页
文章研究了域上的单序列综合问题的LBRSS(格基约化单序列综合)算法和GBSS(Gr bner基单序列综合)算法之间的联系,证明了LBRSS算法可以推出GBSS算法,从而使得LBRSS算法成为解决单序列综合问题的统一方法。
关键词 单序列综合 LBRSS算法 gbss算法
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4种薯蓣属植物GBSS基因的电子克隆与生物信息学分析 被引量:4
16
作者 陈知龙 郑佳豪 +1 位作者 吴坤龙 张壹 《浙江农业科学》 2022年第8期1850-1854,共5页
多种薯蓣属植物全基因组测序工作的完成,为利用生物信息学手段对薯蓣属植物的基因进行电子克隆、结构与功能分析以及分子进化分析提供了便利。淀粉是薯蓣属植物地下块茎的重要组成成分,颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)是淀粉合成过程中控制直... 多种薯蓣属植物全基因组测序工作的完成,为利用生物信息学手段对薯蓣属植物的基因进行电子克隆、结构与功能分析以及分子进化分析提供了便利。淀粉是薯蓣属植物地下块茎的重要组成成分,颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)是淀粉合成过程中控制直链淀粉合成的关键酶。本研究以文成糯米山药GBSS基因序列为探针,电子克隆方法获得参薯、几内亚白山药、灌丛薯蓣和盾叶薯蓣4种薯蓣属植物的GBSS基因序列。通过生物信息学分析方法,比较分析4种薯蓣属植物GBSS基因结构、蛋白质结构及系统发育特点。结果可为进一步研究薯蓣属植物GBSS基因及其编码蛋白调控淀粉合成的分子机制提供科学依据。 展开更多
关键词 薯蓣属 gbss基因 电子克隆 序列分析
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Analysis of Wheat GBSS1 Promoter:Tissue Specificity and DNA Methylation
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作者 Pengfei WANG Fengshan REN Yongmei WANG 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2017年第1期5-10,共6页
The cis-regulatory elements of promoters regulate temporal and spatial expression of genes. DNA inethylation, histone methylation and histone acetylation are the main types of epigenetic modifications, which play impo... The cis-regulatory elements of promoters regulate temporal and spatial expression of genes. DNA inethylation, histone methylation and histone acetylation are the main types of epigenetic modifications, which play important roles in plant growth and development. DNA methylation could seilenco transposons, affect gene imprinting and gene expression. In this study, we found that granule bound starch synthase 1 (GBSSI) gene is expressed specifically in wheat endosperm rath- er than in the embryo. We also analyzed the cis-elements within this promoter region and found some seed-specific elements. In order to confirm the tissue specifici- ty, we cloned 4k bp sequences upstream of GBSS1 gene to link to vector with GUS and this construct was transferred to tobacco by Agrobacterium mediated transfor- marion. The results showed that wheat GBSS1 promoter mediated the seed-specific expression of GUS gene, hut not mediated expression in embryo. In addition, we found that GBSSI promoter is methylated in wheat embryo and de-methylated in wheat endosperm. Our study might provide the molecular basis for specific expres- sion of GBSSI gene. 展开更多
关键词 gbss1 cis-regulatory elements Tissue-specific promoter DNA methylation
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玉米种子特异启动子GBSSⅠ的克隆及其功能分析
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作者 张国珍 范杰英 +4 位作者 韦正乙 坚伟宁 左朋 郑大浩 邢少辰 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期531-538,共8页
玉米子粒被认为是生产外源蛋白的理想载体,而利用种子(胚乳)特异性启动子是提高外源蛋白表达水平最简单的途径。从玉米基因组中克隆获得长为999 bp的GBSSⅠ基因启动子pGBSSⅠ,该序列不但含有CAAT-box等启动子基本元件,而且还包含光响应... 玉米子粒被认为是生产外源蛋白的理想载体,而利用种子(胚乳)特异性启动子是提高外源蛋白表达水平最简单的途径。从玉米基因组中克隆获得长为999 bp的GBSSⅠ基因启动子pGBSSⅠ,该序列不但含有CAAT-box等启动子基本元件,而且还包含光响应、激素调控、胁迫诱导和发育等多个顺式调控元件。利用该启动子构建植物表达载体pCBG-Gus,并经农杆菌介导法转化玉米幼胚,通过筛选和分化获得抗性植株。经Bar蛋白基因金标免疫试纸条和PCR检测确认获得转基因阳性玉米植株。对转基因玉米不同组织中Gus和内源GBSSⅠ的转录情况进行实时定量PCR分析和Gus组织化学染色分析,结果表明:2个基因的表达水平并不一致。在转录水平上,除了叶片(包括叶鞘)之外,其他被检组织中的Gus的表达均低于GBSSⅠ;在蛋白表达水平上,除了茎和根之外,其他组织中均可检测到程度不同的Gus活性表达,其中成熟种子(包括胚和胚乳)中Gus蛋白积累的水平最高。综上,玉米子粒特异启动子pGBSSⅠ是一个具有潜在应用价值的启动子,将为提升玉米胚乳中外源蛋白的表达量提供理论依据。 展开更多
关键词 玉米 gbssⅠ启动子 转录活性 农杆菌介导法 GUS染色
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玉米淀粉合成酶基因GBSS启动子的克隆与鉴定 被引量:7
19
作者 曾礼华 汪瀚宇 +1 位作者 谢程程 曹墨菊 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1433-1439,共7页
以玉米自交系‘18红’的基因组DNA为模板采用PCR技术对玉米淀粉合成酶基因GBSS(ZmGBSS)的启动子进行克隆,获得了1 884 bp的扩增片段(PZmGBSS),应用启动子分析软件Plant CARE进行分析,发现该片段含有多个不同的调控元件。通过半定量RT-PC... 以玉米自交系‘18红’的基因组DNA为模板采用PCR技术对玉米淀粉合成酶基因GBSS(ZmGBSS)的启动子进行克隆,获得了1 884 bp的扩增片段(PZmGBSS),应用启动子分析软件Plant CARE进行分析,发现该片段含有多个不同的调控元件。通过半定量RT-PCR分析表明,在授粉15 d的胚乳中ZmGBSS的表达量最高,其次为胚,在根和叶中的表达量较低。通过不同诱导培养基对胚乳进行培养,发现脱落酸(ABA)诱导后ZmGBSS的表达量明显提高,葡萄糖和赤霉素(GA)诱导后的表达量有所降低。通过构建启动子PZmGBSS瞬时表达载体,并利用基因枪对不同受体进行转化分析,结果发现胚乳中PZmGBSS的启动活性最高,其次为胚,根和叶中最弱。对转化后的胚乳进行诱导培养,发现ABA诱导可使报告基因LUC的表达明显增强。以上结果表明,启动子PZmGBSS为胚乳特异启动子且能够被ABA正向调控。 展开更多
关键词 玉米 gbss基因 启动子 克隆
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不同长度马铃薯GBSS基因启动子的块茎专一性表达的初报 被引量:10
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作者 宋东光 黄大庆 +1 位作者 王光清 汪训明 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期559-563,共5页
将0.4,0.8,1.6,2.9kbGBSS基因的5'侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体.0.8kbGBSS-GUS通过基因枪转化法在块茎切片中获得了瞬间表达.已将上述构建体通过农杆菌转化法导入了马铃薯.X-Gluc染色及PCR结果均证实已获得... 将0.4,0.8,1.6,2.9kbGBSS基因的5'侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体.0.8kbGBSS-GUS通过基因枪转化法在块茎切片中获得了瞬间表达.已将上述构建体通过农杆菌转化法导入了马铃薯.X-Gluc染色及PCR结果均证实已获得转基因再生植株.在离体诱导块茎中,2.9,1.6,0.4kbGBSS启动子驱动的GUS活性均明显高于茎段,高出1~15倍;1.6,2.9kbGBSS启动子驱动的GUS活性则大大高于0.8,0.4kbGBSS启动子驱动的GUS活性;其中2.9kb的GBSS启动子显示最强烈的块茎表达专一性. 展开更多
关键词 马铃薯 gbss GUS 块茎专一表达 基因表达 启动子
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