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GPI-B7-1锚定肾癌细胞膜对细胞毒性T淋巴细胞杀伤自身肿瘤的促进作用
1
作者 葛蕙心 张一兵 +1 位作者 李慧忠 畅继武 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第29期7-10,共4页
目的探讨糖基磷脂酰肌醇(GPI)-B7-1锚定肾细胞癌(RCC)细胞膜能否提高细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对自身肿瘤的杀伤能力。方法取出本实验室冻存于液氮罐中的经转基因高表达GPI-B7-1的CHO/DHFR-细胞,再从该CHO/DHFR-细胞上洗脱目的蛋白GPI-B7... 目的探讨糖基磷脂酰肌醇(GPI)-B7-1锚定肾细胞癌(RCC)细胞膜能否提高细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对自身肿瘤的杀伤能力。方法取出本实验室冻存于液氮罐中的经转基因高表达GPI-B7-1的CHO/DHFR-细胞,再从该CHO/DHFR-细胞上洗脱目的蛋白GPI-B7-1,并进行分离纯化,Western blotting法检测活性。建立肾癌细胞系CG-6327。将CTL分别与GPI-B7-1-CG-6327细胞膜、CG-6327细胞膜、GPI-B7-1-CHO/DHFR-细胞膜作用24 h,此时得到被三种不同物质活化的CTL细胞,再设单纯体外培养的CTL作为对照,分别将上述四种CTL细胞加入到已接种有CG-6327细胞的96孔板中,进行24 h杀伤试验,MTT法测定CTL的杀伤活性。结果经GPI-B7-1-CG-6327细胞膜活化的CTL细胞杀伤活性(A值)与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他几种物质活化的CTL细胞杀伤活性与对照组比较,P均>0.05。结论通过基因重组方法表达的GPI-B7-1锚定蛋白可被转移并锚定在RCC细胞膜表面提供第二刺激信号,GPI-B7-1锚定后的具有双刺激信号的RCC细胞膜对于CTL的活化有增强作用。 展开更多
关键词 肾肿瘤 糖基磷脂酰肌醇-B7-1 细胞毒性T淋巴细胞 肿瘤免疫
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用糖基化磷脂酰肌醇B7-1锚定肿瘤细胞膜进行免疫治疗 被引量：4
2
作者 张淑敏 畅继武 +4 位作者 马富玲 隋志方 王馨 张新 刘凤勇 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期323-326,共4页
目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法用蛋白转化法将B7-1锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL-6小鼠后,一组小鼠取脾细胞进行T细胞扩增和细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能检测,另一组小鼠进行肿瘤细胞接种试验。结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免... 目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法用蛋白转化法将B7-1锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL-6小鼠后,一组小鼠取脾细胞进行T细胞扩增和细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能检测,另一组小鼠进行肿瘤细胞接种试验。结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后诱发了肿瘤特异性T细胞扩增和CTL。且该疫苗有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用。结论GPI蛋白转化法为人类抗肿瘤免疫治疗提供了新的、有效的修饰肿瘤细胞膜的方法。 展开更多
关键词 gpi-b7-1 肿瘤细胞膜 免疫治疗
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糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1融合蛋白在CHO/DHFR-细胞的稳定表达 被引量：2
3
作者 张淑敏 畅继武 +3 位作者 随志方 李振莉 马富玲 王馨 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期532-534,539,共4页
目的建立稳定表达糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B71(GPIB71)的CHO/DHFR-细胞表达体系。方法用Lipofectin介导法将真核细胞高效表达载体pCDNA3GPIB71和pSV40DHFR共转染CHO/DHFR-细胞,经免疫荧光流式细胞术检测,并提取膜蛋白进行Westenblot检... 目的建立稳定表达糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B71(GPIB71)的CHO/DHFR-细胞表达体系。方法用Lipofectin介导法将真核细胞高效表达载体pCDNA3GPIB71和pSV40DHFR共转染CHO/DHFR-细胞,经免疫荧光流式细胞术检测,并提取膜蛋白进行Westenblot检测。结果经G418筛选和MTX加压扩增,获得高效表达目的蛋白的细胞株。膜蛋白经WesternBlot检测具有生物活性。结论GPIB71在CHO/DHFR-细胞中高效表达,为临床应用与研究奠定了基础。 展开更多
关键词 gpi-b7-1 CHO/DHFR^-细胞 真核表达
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糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1基因重组蛋白锚定自体肿瘤细胞膜提高抗肿瘤免疫反应的实验研究 被引量：1
4
作者 张淑敏 畅继武 +4 位作者 马富玲 王海涛 王馨 张新 刘凤勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期474-476,482,共4页
目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法用含目的基因的质粒pcDNA3-GPI-B7-1转染CHO/DHFR+细胞,提取膜蛋白GPI-B7-1,经Western blot鉴定后,用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL/6小鼠后,取小鼠脾细胞进行T细胞扩增和CTL功能检测,... 目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法用含目的基因的质粒pcDNA3-GPI-B7-1转染CHO/DHFR+细胞,提取膜蛋白GPI-B7-1,经Western blot鉴定后,用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL/6小鼠后,取小鼠脾细胞进行T细胞扩增和CTL功能检测,并检测细胞培养液和小鼠血清中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平。结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后可诱发肿瘤特异性T细胞扩增和CTL活性增强,细胞培养液中细胞因子检测为阳性。结论该疫苗能激发小鼠的免疫功能,具有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用。 展开更多
关键词 糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1 基因重组蛋白 自体细胞 肿瘤细胞膜 抗肿瘤免疫反应 免疫功能
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重组GPI-B7胞外段在中华仓鼠卵巢癌细胞膜上的表达
5
作者 程绍辉 于继云 +1 位作者 陈兴 许红莲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第S1期1-4,共4页
目的 通过从衰变加速因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列克隆到PCI-dhfr真核表达载体,利用GPI信号序列对B7-1基因胞外段序列进行修饰,实现GPI-B7-1锚定蛋白在中华仓鼠卵巢癌细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)膜表面的表达。方法 应用... 目的 通过从衰变加速因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列克隆到PCI-dhfr真核表达载体,利用GPI信号序列对B7-1基因胞外段序列进行修饰,实现GPI-B7-1锚定蛋白在中华仓鼠卵巢癌细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)膜表面的表达。方法 应用RT-PCR方法从B淋巴细胞瘤细胞系(Raji细胞系)总RNA中钓取B7-1(CD80)全长基因,扩增B7-1胞外段分子并克隆到已含有GPI修饰性信号序列的真核表达载体pCI-dhfr上,应用脂质体方法转染到CHO-dhfr-细胞中,用氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)进行筛选。重组蛋白的表达用细胞免疫荧光进行鉴定。结果 成功地克隆了B7-1全长基因,并扩增了胞外段基因构建到含有GPI修饰性信号序列的真核表达载体pCI-dhfr上,实现了GPI-B7-1锚定蛋白在CHO细胞膜的表达。结论GPI信号序列能够通过其脂质性尾部将GPI-B7-1锚定蛋白整合到细胞膜表面,本研究结果为将来应用GPI-B7-1分子于肿瘤细胞膜表面的修饰做了技术准备,可作为肿瘤免疫治疗的手段。 展开更多
关键词 RT-PCR B7-1 GPI修饰蛋白 膜表达
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