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小鼠IL-17A-GST融合蛋白的克隆表达 被引量：4
1
作者 张阳 张晋渝 +6 位作者 石云 赵卓 刘晓斐 庄园 张卫军 郭刚 邹全明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期757-759,共3页
目的:构建含有小鼠IL-17A(mIL-17A)基因的重组原核表达载体,获得高效表达mIL-17A的基因工程菌,以及较高产量的mIL-17A蛋白。方法:以PMA活化后小鼠脾脏单个核细胞的总RNA逆转录合成的cDNA为模板,PCR法扩增mIL-17A的编码序列,并分别亚克隆... 目的:构建含有小鼠IL-17A(mIL-17A)基因的重组原核表达载体,获得高效表达mIL-17A的基因工程菌,以及较高产量的mIL-17A蛋白。方法:以PMA活化后小鼠脾脏单个核细胞的总RNA逆转录合成的cDNA为模板,PCR法扩增mIL-17A的编码序列,并分别亚克隆至pMD18-T载体和原核表达载体pGEX-4T-1中,经酶切和DNA测序鉴定后,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE及Westernblot鉴定。结果:PCR产物大小及其双酶切鉴定均证明所克隆的基因是mIL-17A,DNA序列测定进一步证实与GenBank报道的序列完全一致。成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1/mIL-17A,并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约40000的具有可溶性的融合蛋白,且Westernblot证实确为目的蛋白。结论:成功构建了基因重组体pGEX-4T-1/mIL-17A;并制备出可溶性IL-17A-GST融合蛋白。 展开更多
关键词 白细胞介素-17 A RT—PCR gst融合蛋白 可溶性表达
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GST融合蛋白在杆状病毒系统中表达的可溶性研究 被引量：4
2
作者 杨林 李国清 +3 位作者 黄葆英 王全忠 龙綮新 王珣章 《中国病毒学》 CAS CSCD 2000年第2期143-148,共6页
将构建好的可表达GST融合蛋白的重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis Etp2 8感染Sf9细胞 ,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS PAGE分析 ,结果显示 5 3kDa的融合蛋白 (GST 6xHis Etp2 8)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上 ,加... 将构建好的可表达GST融合蛋白的重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis Etp2 8感染Sf9细胞 ,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS PAGE分析 ,结果显示 5 3kDa的融合蛋白 (GST 6xHis Etp2 8)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上 ,加固体十二烷基肌氨酸钠至终浓度 1.5 % ,并将TritonX 10 0的比例由 1%提高到 2 %。SDS PAGE结果显示至少有 1/ 3的GST 6xHis Etp2 8处于溶解状态 ,可溶性GST 6xHis Etp2 8经亲合层析 ,5 展开更多
关键词 gst融合蛋白 杆状病毒表达系统 可溶性分析
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一种制备GST融合蛋白亲和层析胶的方法 被引量：6
3
作者 彭方 杨锐 李文鑫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期362-362,共1页
关键词 制备 gst融合蛋白 亲和层析胶
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结核分枝杆菌RD1区PPE68/GST融合蛋白表达质粒的构建及表达 被引量：3
4
作者 曾林子 陈建平 +3 位作者 刘成君 李红霞 姚卫 杨志荣 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期59-61,共3页
目的:构建结核分枝杆菌PPE68/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌JM109中诱导表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Rv3873基因,并将其定向克隆pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并转化E.coliJM109,异丙基-β-D-硫代... 目的:构建结核分枝杆菌PPE68/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌JM109中诱导表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Rv3873基因,并将其定向克隆pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并转化E.coliJM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.采用GST蛋白纯化试剂盒进行重组融合蛋白纯化,SDS-PAGE和WesternBlot鉴定重组表达产物.结果:成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并表达出约Mr63000大小的PPE68/GST融合蛋白,占总菌体的40%.WesternBlot检测该融合蛋白能和结核患者多价抗血清发生反应.结论:成功地构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873,并在大肠杆菌得到表达. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 RD1区 PPE68/gst融合蛋白 表达
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牛FcγRⅠ(CD64)GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达 被引量：2
5
作者 张改平 乔松林 +5 位作者 李青梅 王丽 张红 郭军庆 王选年 夏春 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第6期79-82,共4页
采用PCR技术从牛巨噬细胞cDNA文库中扩增了牛的高亲和力IgGFc受体FcγRⅠ,测序结果显示与已报道的牛FcγRⅠ序列一致。在牛FcγRⅠ成熟蛋白胞外环区两端分别合成带有BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到GST融合蛋白表... 采用PCR技术从牛巨噬细胞cDNA文库中扩增了牛的高亲和力IgGFc受体FcγRⅠ,测序结果显示与已报道的牛FcγRⅠ序列一致。在牛FcγRⅠ成熟蛋白胞外环区两端分别合成带有BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX - 6P- 1,转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导,SDS -PAGE分析表达了N端带有GST的融合蛋白,Western -blotting试验表明融合蛋白在变性条件下能和牛IgG结合。GST -FcγRⅠ融合蛋白的成功表达为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。 展开更多
关键词 牛FcγRⅠ(CD64) gst融合蛋白 表达
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GST融合蛋白制备表皮生长因子受体抗体 被引量：1
6
作者 阎志勇 吴爱群 +2 位作者 由振东 路长林 何成 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第2期252-254,共3页
目的:探讨制备大量表皮生长因子受体(EGFR)特异性抗体的方法。方法:将编码EGFR的N端肽段的cDNA克隆入表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,经亲和层析柱纯化,用该GST融合蛋白免疫BALB/C小鼠,获得免疫血清,以ELISA和... 目的:探讨制备大量表皮生长因子受体(EGFR)特异性抗体的方法。方法:将编码EGFR的N端肽段的cDNA克隆入表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,经亲和层析柱纯化,用该GST融合蛋白免疫BALB/C小鼠,获得免疫血清,以ELISA和Western Blot检测抗体滴度。结果:获得GST-PTB融合蛋白纯度大于95％;经免疫小鼠抗血清滴度1∶38 827-1∶190 602,得到大量高滴度的EGFR特异性抗体。结论:用原核系统表达GST融合蛋白直接免疫小鼠可以快速、大量地制备EGFR特异性抗体。 展开更多
关键词 gst融合蛋白 表皮生长因子受体 抗体 EGFR 癌细胞
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以GST融合蛋白为靶从噬菌体肽库中筛选结合肽 被引量：2
7
作者 薛沿宁 段凌浔 R.J.POMERANTZ 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第4期381-384,共4页
以重组的谷胱甘肽 Ｓ转移酶 （ Ｇ Ｓ Ｔ） 和目标蛋白的融合蛋白为靶， 通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上， 可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽． 用此方法筛选到含 Ｗ Ｗ Ｘ Ｆ 结构的 Ｈ Ｉ Ｖ１ 病毒蛋白 ... 以重组的谷胱甘肽 Ｓ转移酶 （ Ｇ Ｓ Ｔ） 和目标蛋白的融合蛋白为靶， 通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上， 可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽． 用此方法筛选到含 Ｗ Ｗ Ｘ Ｆ 结构的 Ｈ Ｉ Ｖ１ 病毒蛋白 Ｒ（ Ｖｐｒ） 的结合肽， 与经典的将 Ｖｐｒ 包被于培养板上的筛选方法相比， 此方法具有简便。 展开更多
关键词 噬菌体展示 gst融合蛋白 多肽库 结合肽
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水通道蛋白1-C末端肽段/GST融合蛋白的原核表达(简报) 被引量：1
8
作者 李晓萌 李江 +4 位作者 杨南扬 关新刚 张淑芝 惠伟丽 麻彤辉 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2008年第1期81-85,共5页
水通道蛋白（Aquaporin，AQP）是一类选择性高效转运水分子的细胞膜通道蛋白，广泛存在于原核和真核生物细胞的细胞膜上．主要介导自由水分子的被动跨膜转运．对保持细胞内外液环境的稳态平衡起着重要的作用。AQP1是第一个被发现鉴定的... 水通道蛋白（Aquaporin，AQP）是一类选择性高效转运水分子的细胞膜通道蛋白，广泛存在于原核和真核生物细胞的细胞膜上．主要介导自由水分子的被动跨膜转运．对保持细胞内外液环境的稳态平衡起着重要的作用。AQP1是第一个被发现鉴定的水通道蛋白．它是1988年Agre等从红细胞膜分离纯化Rh血型多肽时偶然发现的一个分子量为28KD的疏水性跨膜蛋白．称为形成通道整合膜蛋白28（CHIP28）。Agre因此获得了2003年的诺贝尔奖。水通道蛋白AQP1广泛地表达于红细胞、肾、眼、肺，脉络丛和血管内皮，在体液转运中发挥作用。 展开更多
关键词 AQP1 gst融合蛋白 E.COLI
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结核分枝杆菌PPE19的克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定
9
作者 熊志红 朱琰 +2 位作者 李仁德 庄玉辉 程小星 《临床肺科杂志》 2012年第1期77-79,共3页
目的构建结核分枝杆菌PPE19的GST融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落... 目的构建结核分枝杆菌PPE19的GST融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行质粒的酶切和序列分析;将构建正确的克隆进行诱导表达,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析;用western-blot鉴定融合蛋白的表达。结果正确构建了pGEX-PPE19原核表达载体,载体上基因序列正确;载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白;该蛋白能与GST抗体结合。结论成功构建了GST-PPE19融合蛋白的表达载体,为进一步进行PPE19蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 PPE19 gst融合蛋白 表达与鉴定
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一种高亲和结合Ⅰ型胶原蛋白的GST融合蛋白表达分析
10
作者 董育红 李遂焰 陈渝萍 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期21-24,共4页
鉴于纤维化疾病病人组织中I型胶原的异常沉积和人胎盘生长因子2氨基酸123~144肽段(PlGF-2 123-144 )对I型胶原蛋白出众的高亲性,尝试制备PlGF-2 123-144 短肽用于改善抗纤维化药物的组织靶向特异性。首先对该短肽的编码DNA序列进行修改... 鉴于纤维化疾病病人组织中I型胶原的异常沉积和人胎盘生长因子2氨基酸123~144肽段(PlGF-2 123-144 )对I型胶原蛋白出众的高亲性,尝试制备PlGF-2 123-144 短肽用于改善抗纤维化药物的组织靶向特异性。首先对该短肽的编码DNA序列进行修改和扩增,构建了GST- PlGF-2 123-144 融合蛋白的原核表达质粒;进而使用 E.coli BL21诱导表达该融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖纯化后透析;最后采用ELISA检测确定,经原核表达和纯化所获得的GST- PlGF-2 123-14 融合蛋白具备对I型胶原蛋白的高亲性。为研发特异性靶向纤维化组织的抗纤维化药物打下了可靠基础。 展开更多
关键词 Ⅰ型胶原蛋白 PlGF-2 123-144 gst融合蛋白 原核表达
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类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
11
作者 杨南扬 缪璇 +3 位作者 伍贤军 刘金美 辻一郎 李晓萌 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1010-1014,共5页
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白... 目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白。结果:通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312bp的小片段,并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致;在终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG诱导时,GST-SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化。结论:成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白,为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础,同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证。 展开更多
关键词 类泛素化蛋白3 gst融合蛋白 蛋白纯化
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GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化
12
作者 黄瑾 郑玉建 +1 位作者 鲁重元 万梅 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第5期585-588,共4页
目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,... 目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,用GST琼脂糖珠对上述表达产物进行纯化,SDS-PAGE、Western Blot分析和鉴定诱导表达和纯化的GST-Jab1蛋白质。结果成功构建了pGEX-5X-1-Jab1重组表达载体,SDS-PAGE分析结果显示表达和纯化的蛋白质与融合蛋白GST-Jab1预期分子量一致,Western Blot鉴定结果证实纯化的蛋白质为GST-Jab1。结论成功地表达、纯化了GST-Jab1融合蛋白。 展开更多
关键词 JAB1 gst融合蛋白原核表达 蛋白质纯化
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基于谷胱甘肽-磁性微粒的GST融合蛋白纯化体系的建立 被引量：4
13
作者 朱晶晶 杨柳 +2 位作者 杨磊 陈超 崔亚丽 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1254-1260,共7页
本研究将还原型谷胱甘肽(GSH)共价结合在异硫氰酸根末端磁性微粒表面,制备了具有超顺磁性的谷胱甘肽-磁性微粒亲和介质,以表面修饰有谷胱甘肽的磁性微粒为载体,建立了谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白的纯化体系。对100μL细胞裂解液纯... 本研究将还原型谷胱甘肽(GSH)共价结合在异硫氰酸根末端磁性微粒表面,制备了具有超顺磁性的谷胱甘肽-磁性微粒亲和介质,以表面修饰有谷胱甘肽的磁性微粒为载体,建立了谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白的纯化体系。对100μL细胞裂解液纯化体系所需磁性微粒用量、谷胱甘肽-磁性微粒与细胞裂解液的孵育时间、清洗条件等进行了优化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白的纯度进行了检测,Bradford方法对融合蛋白进行了定量测定,对纯化得到的目的蛋白进行了Western blotting分析。结果表明,每毫克异硫氰酸根末端磁性微粒对GSH的固定化容量为150μg,10 mg谷胱甘肽-磁性微粒可满足100μL细胞裂解体系中目的蛋白的纯化,最佳孵育时间为40 min,对GST融合蛋白的平均纯化量为516μg。本方法快速、简便,基于磁性微粒的分离还可实现自动化,对GST融合蛋白的纯化具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 磁性微粒 还原型谷胱甘肽 gst融合蛋白 亲和纯化
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细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(一)──应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a) 被引量：2
14
作者 孙阿萍 吕晓平 +1 位作者 张秋迟 吕学诜 《黑龙江医药科学》 2001年第3期1-2,4,共3页
目的：应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a)。方法：将S3a cDNA序列插入到pGEX-4T-2质粒中，制备GST/S3a融合蛋白及其抗体。结果：S3a cDNA序列在Xho I位点上插入到pGEX-4T-2质粒中，形成重组的pGEX-4T-2/S3a质粒。结论... 目的：应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a)。方法：将S3a cDNA序列插入到pGEX-4T-2质粒中，制备GST/S3a融合蛋白及其抗体。结果：S3a cDNA序列在Xho I位点上插入到pGEX-4T-2质粒中，形成重组的pGEX-4T-2/S3a质粒。结论：pGEX-4T-2质粒编码GST蛋白基因，在IPTG的诱导下可以表达GST/S3a融合蛋白。为下一步实验奠定了基础。 展开更多
关键词 核糖体蛋白质S3a 细胞凋亡 gst基因融合蛋白系统 制备
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高致病性猪蓝耳病病毒GST-N融合蛋白的原核表达及纯化
15
作者 李晓辉 何建斌 +1 位作者 刘金玲 罗芳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期30-32,共3页
为了构建高致病性猪蓝耳病病毒(HPPRRSV)GST-N融合蛋白,试验采用RT-PCR技术扩增ORF7基因片段,对其胶回收产物进行测序分析,再将目的片段连接到质粒PGEX-6P-1上,得到重组质粒PGEX-6P-1-N,并转化到E.coliBL21(DE3)感受态细胞中,筛选阳性菌... 为了构建高致病性猪蓝耳病病毒(HPPRRSV)GST-N融合蛋白,试验采用RT-PCR技术扩增ORF7基因片段,对其胶回收产物进行测序分析,再将目的片段连接到质粒PGEX-6P-1上,得到重组质粒PGEX-6P-1-N,并转化到E.coliBL21(DE3)感受态细胞中,筛选阳性菌落,并用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行检测与鉴定。结果表明:该序列与GenBank公布的HN2007的同源性为97%;重组质粒在大肠杆菌中获得了表达,表达产物为42ku的GST-N融合蛋白。 展开更多
关键词 ORF7基因 原核表达 纯化 gst—N融合蛋白
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肿瘤相关抗原RCAS1重组质粒的构建与GST-RCAS1融合蛋白的表达和纯化及鉴定
16
作者 洪学军 沈芬平 王青青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2006年第4期377-383,共7页
目的:构建RCA S1的重组质粒、表达GST-RCA S1融合蛋白并进行纯化和生物学活性鉴定。方法:从M CF-7细胞提取总RNA,通过RT-PCR得到RCA S1的扩增产物,纯化后用E coRⅠ和BamHⅠ双酶切。选择pGEX-2T作为载体,用E coRⅠ和BamHⅠ双酶切后与上... 目的:构建RCA S1的重组质粒、表达GST-RCA S1融合蛋白并进行纯化和生物学活性鉴定。方法:从M CF-7细胞提取总RNA,通过RT-PCR得到RCA S1的扩增产物,纯化后用E coRⅠ和BamHⅠ双酶切。选择pGEX-2T作为载体,用E coRⅠ和BamHⅠ双酶切后与上述酶切后DNA连接,转化感受态JM 109大肠杆菌,挑单个菌落提取质粒进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒重新转化BL 21大肠杆菌,用终浓度0.1 mm o l/L的IPTG诱导表达GST-RCA S1蛋白,用GST亲和层析纯化并通过SDS-PAGE电泳和W estern印迹试验证实。利用特异性抗RCA S1多抗(N-18和C-20)鉴定所表达的融合蛋白,通过流式细胞仪检测GST-RCA S1融合蛋白诱导活化T细胞凋亡的作用。结果:通过RT-PCR得到大小为642bp的产物,重组质粒通过双酶切和测序鉴定正确。通过IPTG诱导在BL 21大肠杆菌中表达并纯化得到GST-RCA S1蛋白,通过SDS-PAGE电泳鉴定分子量为52 kM r,与预测一致,并由W estern印迹试验证明为GST融合蛋白。该融合蛋白能被特异性抗RCA S1(N-18和C-20)多抗识别。GST-RCA S1对诱导活化的T细胞凋亡有一定的作用。结论:成功构建RCA S1的重组质粒,并表达GST-RCA S1融合蛋白,对其生物学活性作了初步研究。 展开更多
关键词 抗原 肿瘤 RCAS1 重组质粒 gst—RCAS1融合蛋白 细胞凋亡
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A组链球菌M蛋白重组多肽原核表达载体构建及融合蛋白的表达 被引量：2
17
作者 丁月霞 倪琼琼 刘金来 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-34,共6页
目的:设计针对A组β溶血性链球菌M1和M12蛋白的复合多肽;构建含M蛋白基因(emm基因)1型和12型特异性抗原决定簇基因及其保守区J14肽基因的GST标签的重组表达载体;并诱导和优化GST融合蛋白的表达。方法:在NCBI Genebank和Oligo 6引物设计... 目的:设计针对A组β溶血性链球菌M1和M12蛋白的复合多肽;构建含M蛋白基因(emm基因)1型和12型特异性抗原决定簇基因及其保守区J14肽基因的GST标签的重组表达载体;并诱导和优化GST融合蛋白的表达。方法:在NCBI Genebank和Oligo 6引物设计软件中选择分别编码M蛋白emm基因1型和12型信号肽后35个氨基酸及其相同的保守区14肽基因序列(全长270 bp),通过重叠PCR(Overlap PCR)合成所需的核苷酸序列,经测序确定序列完全和设计的相匹配后,将该重组片段克隆到pGEX-4T-1表达载体中,阳性克隆经双酶切和测序鉴定正确后建立稳定表达该重组质粒的大肠杆菌BL21株系(pE/B);通过聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色和Western blot来检测在不同时间(0、2、6、8、18和24小时)和温度(25℃、30℃和37℃)以及不同浓度(0.01、0.1、1 mmol/L)异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导GST融合蛋白(GST/emm)表达情况,并对诱导表达的GST/emm切胶进行质谱分析鉴定。结果:成功构建含有emm1和emm12抗原决定簇及M蛋白保守区J14肽基因的原核表达载体;并诱导其稳定表达,在1 mol/L IPTG诱导6～8小时达高峰,不同温度下均有过量表达;质谱检测诱导蛋白GST/emm条带结果正确。结论:成功构建A组β溶血性链球菌的emm1型和emm12型原核表达载体,并稳定诱导GST/emm表达,为下一步研究GST/emm的纯化、酶切以及免疫原性的鉴定和疫苗研制打下夯实的基础。 展开更多
关键词 A组β溶血性链球菌 emm基因 M蛋白 gst融合蛋白
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人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达
18
作者 刘彤 李洋 +2 位作者 李丹妮 耿楠希 李丰 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期437-440,共4页
目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经... 目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入E.coli BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。 展开更多
关键词 P21活化激酶 截短区域 原核表达质粒 gst融合蛋白
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肿瘤靶向性RGD-IFN-α2a融合蛋白在原核细胞中的表达与纯化 被引量：1
19
作者 康帅 贾群英 +1 位作者 李祥 吕建新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期934-937,共4页
RGD肽是一类含有精氨酸．甘氨酸-天冬氨酸（Arg—Gly—Asp）的短肽，作为整合素和其配体相互作用的识别位点，能与肿瘤细胞或肿瘤组织新生血管特异性高表达的某些整合素如αV β3结合，从而将治疗效应分子靶向性地导入肿瘤部位，有效减... RGD肽是一类含有精氨酸．甘氨酸-天冬氨酸（Arg—Gly—Asp）的短肽，作为整合素和其配体相互作用的识别位点，能与肿瘤细胞或肿瘤组织新生血管特异性高表达的某些整合素如αV β3结合，从而将治疗效应分子靶向性地导入肿瘤部位，有效减少肿瘤治疗中对正常组织细胞的损害，提高药物本身疗效。干扰素（interferon，IFN）是一类重要的细胞因子，具有抗病毒、抑制某些细胞生长、免疫调节、抑制和杀伤肿瘤细胞等多种作用，在临床上已被广泛用于恶性肿瘤与病毒疾病的治疗。 展开更多
关键词 RGD肽 IFN-Α2A gst融合蛋白 肿瘤
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重组蛋白GST-OsCAT_B的表达特性研究(英文) 被引量：1
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作者 刘大丽 鲁振强 +2 位作者 张革艳 于婷婷 王旭 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期692-695,共4页
为了阐明水稻Catalase(CAT)的酶学功能,首先需要获得出足量的、活性的该酶蛋白。本研究克隆了水稻OsCATB基因(GenBank accession No.D26484),构建到原核表达载体pGEX-6p-3中形成重组蛋白,继而转入E.coli菌株BL21中进行表达特性研究。结... 为了阐明水稻Catalase(CAT)的酶学功能,首先需要获得出足量的、活性的该酶蛋白。本研究克隆了水稻OsCATB基因(GenBank accession No.D26484),构建到原核表达载体pGEX-6p-3中形成重组蛋白,继而转入E.coli菌株BL21中进行表达特性研究。结果表明,GST-OsCATB融合蛋白在E.coli中进行了过量表达,表达受到诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度和诱导体系等多因素影响;通过谷胱甘肽Sepharose-4B亲合层析,纯化出足量、活性的融合蛋白GST-OsCATB,每克表达细胞(干重)中得率为51 mg GST-OsCATB。 展开更多
关键词 过氧化氢酶(CAT) 水稻 谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(gst) 蛋白纯化 E.COLI
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