目的:研究乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用。方法:HBX腺病毒表达载体(Ad-HBX-GFP)感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞...目的:研究乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用。方法:HBX腺病毒表达载体(Ad-HBX-GFP)感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞,Si-HBX分子(Si-HBX oligo)用LipofectamineTM 2000转染入HepG2.2.15细胞,用RT-PCR和Western blot法检测HBX与Gankyrin的表达情况;β-catenin腺病毒载体转染HepG2、SMMC-7721细胞,用Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况;在沉默β-catenin表达的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因,Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况。结果:①HepG2.2.15细胞中Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于HepG2细胞(P<0.05)。②HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad-HBX-GFP组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于绿色荧光蛋白腺病毒表达载体(Ad-GFP)组(P<0.01)。③HepG2.2.15细胞中Si-HBX组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均低于Si-阴性对照(Si-NC)组(P<0.01)。④在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达HBX后,Ad-HBX-GFP组β-catenin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组(P<0.01)。⑤在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后,β-catenin腺病毒表达载体(Ad-β-catenin-GFP)组Gankyrin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组(P<0.01)。⑥在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后,过表达HBX基因,Si-β-catenin腺病毒表达载体(Ad-si-β-catenin-RFP)组与红色荧光蛋白腺病毒表达载体(Ad-RFP)组相比,Gankyrin的蛋白表达水平未见升高(P<0.01)。结论:HBX-Wnt/β-catenin-Gankyrin信号转导通路存在与肝癌细胞中,抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用,本结果将可能为肝癌的治疗提供新的思路。展开更多
目的 :观察小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)沉默Gankyrin基因对喉鳞癌Hep-2细胞的生物学行为影响。方法:用si RNA沉默喉鳞癌Hep-2细胞中的Gankyrin基因,运用实时定量反转录聚合酶链反应(q RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)...目的 :观察小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)沉默Gankyrin基因对喉鳞癌Hep-2细胞的生物学行为影响。方法:用si RNA沉默喉鳞癌Hep-2细胞中的Gankyrin基因,运用实时定量反转录聚合酶链反应(q RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)技术检测转染前后Gankyrin m RNA及蛋白的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测Gankyrin下调后p53蛋白的表达。结果:q RT-PCR和Western blot结果显示,Gankyrin si RNA组Gankyrin m RNA和蛋白的相对表达量均低于对照si RNA组和未处理组(P<0.001)。CCK-8法显示Gankyrin si RNA组细胞增殖速度明显下降(P<0.001)。流式细胞仪检测结果表明,Gankyrin si RNA组细胞凋亡率[(7.70±1.12)%]明显高于对照si RNA组[(2.34±0.32)%]和未处理组[(1.82±0.29)%],差异有统计学意义(P<0.001);与两对照组相比,Gankyrin si RNA组G1期比例增加,S期比例减少,差异有统计学意义(P<0.001)。细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验显示Gankyrin si RNA组的细胞迁移能力明显减弱(P<0.01);Matrigel侵袭实验显示Gankyrin si RNA组细胞侵袭能力与对照si RNA组和未处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Gankyrin表达下调增加了Hep-2细胞中p53蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Gankyrin表达下调能抑制Hep-2细胞的增殖和迁移,可能与细胞凋亡、细胞周期改变及p53的表达密切相关。展开更多
文摘目的 :观察小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)沉默Gankyrin基因对喉鳞癌Hep-2细胞的生物学行为影响。方法:用si RNA沉默喉鳞癌Hep-2细胞中的Gankyrin基因,运用实时定量反转录聚合酶链反应(q RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)技术检测转染前后Gankyrin m RNA及蛋白的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测Gankyrin下调后p53蛋白的表达。结果:q RT-PCR和Western blot结果显示,Gankyrin si RNA组Gankyrin m RNA和蛋白的相对表达量均低于对照si RNA组和未处理组(P<0.001)。CCK-8法显示Gankyrin si RNA组细胞增殖速度明显下降(P<0.001)。流式细胞仪检测结果表明,Gankyrin si RNA组细胞凋亡率[(7.70±1.12)%]明显高于对照si RNA组[(2.34±0.32)%]和未处理组[(1.82±0.29)%],差异有统计学意义(P<0.001);与两对照组相比,Gankyrin si RNA组G1期比例增加,S期比例减少,差异有统计学意义(P<0.001)。细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验显示Gankyrin si RNA组的细胞迁移能力明显减弱(P<0.01);Matrigel侵袭实验显示Gankyrin si RNA组细胞侵袭能力与对照si RNA组和未处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Gankyrin表达下调增加了Hep-2细胞中p53蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Gankyrin表达下调能抑制Hep-2细胞的增殖和迁移,可能与细胞凋亡、细胞周期改变及p53的表达密切相关。
