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乳痈方对人乳腺上皮细胞炎症模型的体外抗炎作用及其药效物质含量测定研究
1
作者 陈海锦 丁美红 +2 位作者 史冬玲 李玮 何冰倩 《浙江中医药大学学报》 CAS 2023年第7期712-721,共10页
[目的]以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人乳腺上皮细胞HBL-100建立炎症模型,研究乳痈方的抗炎作用并测定其中的药效成分含量。[方法]以LPS刺激HBL-100细胞,通过检测一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度、白介素-6(interleukin-6,IL-6)... [目的]以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人乳腺上皮细胞HBL-100建立炎症模型,研究乳痈方的抗炎作用并测定其中的药效成分含量。[方法]以LPS刺激HBL-100细胞,通过检测一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度、白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平、细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)细胞活力、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)mRNA的表达,确认炎症模型的建立及抗炎活性。以HBL-100细胞为研究对象,采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法(ultra performance liquid chromatography tandem-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)建立同时测定毛蕊异黄酮等7个成分含量的方法,并对方法的线性、基质效应、回收率、准确度、精密度和稳定性等进行研究。[结果]成功建立HBL-100细胞炎症模型。研究发现,高剂量(1.0 mg·mL-1)乳痈方水提物对HBL-100细胞具有一定杀伤作用,中、低剂量(0.5、0.25 mg·mL-1)乳痈方水提物能够有效降低NO及IL-6水平,对HBL-100细胞炎症模型的抗炎作用显著。高剂量组中能够检测到阿魏酸、柴胡皂苷a、刺芒柄花素、甘草苷、黄芪甲苷、槲皮素及毛蕊异黄酮7个药效成分,而中、低剂量组可检测到除槲皮素及黄芪甲苷以外的5个药效成分。[结论]建立了LPS诱导的HBL-100细胞炎症模型,并初步验证了乳痈方的抗炎活性,建立了测定HBL-100细胞中乳痈方中7个成分含量的LC-MS/MS分析方法,为后续乳痈方提取物的细胞药代动力学、乳痈方中主要抗炎成分及乳腺炎的相关细胞信号通路研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乳痈方 hbl-100 LPS 抗炎作用 LC-MS/MS 含量测定 方法学 细胞样品
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雌二醇促人乳腺细胞株增殖及其ERβ表达 被引量：2
2
作者 刘丽军 杜惠兰 +3 位作者 修贺明 徐铮 靳亚慈 刘京芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期193-194,共2页
目的:观察不同浓度雌二醇(E2)对HBL-100细胞的增殖作用及ERβ的表达。方法:用MTT法观察不同浓度E2处理后细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,免疫组化法检测ERβ表达。结果:E2(0.01-1μmol/L)可增强HBL-100的增殖活性,G1、G2/M期细胞... 目的:观察不同浓度雌二醇(E2)对HBL-100细胞的增殖作用及ERβ的表达。方法:用MTT法观察不同浓度E2处理后细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,免疫组化法检测ERβ表达。结果:E2(0.01-1μmol/L)可增强HBL-100的增殖活性,G1、G2/M期细胞增多,S期细胞减少;ERβ表达从胞质转至胞核。结论:E2具有促进人乳腺细胞增殖的作用,可能与ERβ重新分布有关。 展开更多
关键词 雌二醇 乳房 hbl-100细胞 受体 雌二醇
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人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究 被引量：1
3
作者 王璐璐 刘萃萃 +6 位作者 郭腾 陶然 彭攸 赵卫卫 王玉平 孙振亮 冯景 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第24期3287-3288,3291,共3页
目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含... 目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变。结果过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达。 展开更多
关键词 miR-217 DNMT1 3'UTR hbl-100 MCF-7 MDA-MB-231
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CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌相关因子的研究 被引量：1
4
作者 王白石 李东阳 +1 位作者 崔桂花 罗速 《吉林医药学院学报》 2014年第4期241-246,共6页
目的比较正常乳腺细胞HBL-100与雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中CHD5表达水平。初步探讨CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌发生发展的相互关系及分子机制。方法应用RT-PCR法检测CHD5基因在HBL-100细胞和MDA-MB-231细胞中含量的差异... 目的比较正常乳腺细胞HBL-100与雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中CHD5表达水平。初步探讨CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌发生发展的相互关系及分子机制。方法应用RT-PCR法检测CHD5基因在HBL-100细胞和MDA-MB-231细胞中含量的差异;设计合成靶向CHD5的小干扰序列,构建RNA干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-CHD5,抑制CHD5基因的表达,并检测乳腺癌相关基因HER-2的表达情况。结果CHD5基因在HBL-100中高表达,在MDA-MB-231中低表达。酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰HBL-100细胞CHD5基因的表达。干扰后,HBL-100细胞中CHD5表达被抑制,HER-2表达升高,呈负相关性。结论 CHD5的缺失或低表达可能与雌激素受体阴性乳腺癌的发生发展有关,为CHD5基因可能成为雌激素受体阴性乳腺癌治疗的新靶点提供理论依据。 展开更多
关键词 CHD5 人表皮生长因子受体-2 雌激素受体阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231 人正常乳腺细胞系hbl-100 基因沉默
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FOXL2基因对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响 被引量：1
5
作者 曲春安 张伟 +5 位作者 尹迪迪 李东岳 李敏 王晓雨 张欣 唐胜建 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期855-859,共5页
目的检测FOXL2基因的过表达及沉默对乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长状况的影响。方法培养乳腺正常细胞系HBL-100和乳腺癌细胞系MCF-7细胞,Trizol法提取两者总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别检测FOXL2基因在这两种细胞中的表... 目的检测FOXL2基因的过表达及沉默对乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长状况的影响。方法培养乳腺正常细胞系HBL-100和乳腺癌细胞系MCF-7细胞,Trizol法提取两者总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别检测FOXL2基因在这两种细胞中的表达水平。用FOXL2-pEGFP质粒和FOXL2-shRNA质粒转染MCF-7细胞,分别使其过表达或沉默FOXL2,并建立分组为过表达FOXL2(A组)及沉默FOXL2(B组)以及未作转染处理的MCF-7细胞(C组),Western blot检测3组FOXL2蛋白表达量,验证转染是否成功,MTT法测转染后3组细胞的增殖情况。结果 RT-PCR结果显示HBL-100和MCF-7细胞均可转录FOXL2的mRNA,且2^(-ΔΔCt)值> 2,证明FOXL2在MCF-7细胞中表现为上调,且差异有统计学意义(P <0.05)。成功转染MCF-7细胞后,Western blot结果与C组相比,A组细胞中FOXL2蛋白表达量明显增加,B组细胞中FOXL2蛋白表达量明显减少,差异均有统计学意义(P <0.05),可见模型构建成功。MTT法检测3组MCF-7细胞的OD值及细胞增殖率,A组FOXL2基因过表达,MCF-7细胞的增殖能力明显被抑制,而B组的细胞增殖能力增加,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 FOXL2基因在乳腺癌中高表达,且可以抑制乳腺癌细胞的增殖,可能为一个新的肿瘤抑制因子,但仍需要做进一步的研究。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 hbl-100细胞 MCF-7细胞 FOXL2基因 细胞增殖
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东北天南星根提取物细胞毒性部位的筛选 被引量：2
6
作者 孙丽娟 王惠国 +1 位作者 卢轩 冯宝民 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期809-812,共4页
目的观察东北天南星根醇提取物及各萃取部位对人乳腺细胞（HBL-100）的细胞毒性作用,并对其机理进行初步分析。方法采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT法）考察4个萃取部位对人乳腺细胞（HBL-100）体外增殖的影响,使用倒置显微镜观察细胞形态学... 目的观察东北天南星根醇提取物及各萃取部位对人乳腺细胞（HBL-100）的细胞毒性作用,并对其机理进行初步分析。方法采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT法）考察4个萃取部位对人乳腺细胞（HBL-100）体外增殖的影响,使用倒置显微镜观察细胞形态学变化,并利用流式细胞术（FCM）检测不同质量浓度乙酸乙酯萃取物作用24 h后的细胞凋亡率。结果东北天南星根醇提取物中乙酸乙酯层抑制作用最强,其质量浓度在22～176 mg·L^-1内,抑制率差异极其显著（P〈0.001）。流式细胞术显示：各组细胞凋亡率随药物剂量的增大而增大,当药物剂量为30 mg·L^-1时,细胞凋亡以晚期凋亡为主;当药物剂量为60 mg·L^-1时,以早期凋亡为主;当药物剂量为120 mg·L^-1时,早期凋亡率和晚期凋亡率都明显增大。结论东北天南星根醇提物乙酸乙酯层对HBL-100细胞毒性作用显著,并且具有良好的诱导细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 东北天南星提取物 乳腺细胞 MTT法 流式细胞术
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“乳香—没药”药对对雌二醇诱导的人乳腺细胞在细胞增殖、细胞周期及细胞周期相关调控因子表达的影响
7
作者 邓显光 陈睿旖 +3 位作者 赵丹 沈乐乐 刘丽芳 葛安琪 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1318-1321,共4页
目的研究乳香-没药药对对雌二醇诱导人乳腺细胞(HBL-100)增殖的影响及可能的作用机制。方法使用不同浓度的雌二醇诱导HBL-100增殖,使用CCK8法确定雌二醇刺激HBL-100增殖的最佳浓度;经CCK8法确定乳香-没药药对、他莫昔芬含药血清作用于HB... 目的研究乳香-没药药对对雌二醇诱导人乳腺细胞(HBL-100)增殖的影响及可能的作用机制。方法使用不同浓度的雌二醇诱导HBL-100增殖,使用CCK8法确定雌二醇刺激HBL-100增殖的最佳浓度;经CCK8法确定乳香-没药药对、他莫昔芬含药血清作用于HBL-100细胞增殖模型的最佳浓度,采用CCK8法观察乳香-没药药对对雌二醇诱导的HBL-100细胞增殖的影响。使用流式细胞术检测各组的细胞周期分布情况,RT-PCR法检测Cyclin D1、CDK4、CDK6的mRNA表达。结果雌二醇诱导HBL-100细胞增殖的最佳浓度为10-6 mol/L,乳香-没药含药血清、他莫昔芬含药血清抑制细胞增殖最佳浓度均为20%;与生理盐水组相比,乳香-没药药对能显著抑制HBL-100细胞的增殖(P<0.01),与他莫昔芬组相比较,乳香-没药药对更能抑制HBL-100细胞的增殖(P<0.01)。与对照组相比,乳香-没药药对含药血清能使G0/G1期细胞数显著下降(P<0.01),使G2/M期细胞数显著升高(P<0.01),且乳香-没药药对组的Cyclin D1、CDK4、CDK6的mRNA相对表达量均明显下降(P<0.01)。结论乳香-没药药对可抑制雌二醇诱导的HBL-100细胞增殖,并且将HBL-100细胞阻滞在G2/M期,其机制可能与其降低细胞周期相关因子Cyclin D1、CDK4、CDK6 mRNA的表达有关。 展开更多
关键词 乳香-没药药对 细胞增殖 细胞周期 hbl-100细胞
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