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肿瘤相关抗原基因HCA520重组蛋白的表达纯化及其肝癌患者血清中相应抗体的分析 被引量:7
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作者 韩克军 杨美香 +2 位作者 王歈 李燕 陈慰峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期31-35,共5页
HCA5 2 0是用SEREX(serologicalidentificationofrecombinantcDNAexpressingcloning)方法 ,即用肝癌病人血清从肝癌组织cDNA表达文库中筛选得到的肝癌相关性抗原编码基因 .利用RT PCR技术检测了HCA5 2 0mRNA在各种组织中的分布情况 ,构... HCA5 2 0是用SEREX(serologicalidentificationofrecombinantcDNAexpressingcloning)方法 ,即用肝癌病人血清从肝癌组织cDNA表达文库中筛选得到的肝癌相关性抗原编码基因 .利用RT PCR技术检测了HCA5 2 0mRNA在各种组织中的分布情况 ,构建了GST融合表达载体并且用亲和层析的方法纯化表达的融合蛋白 .最后用Western印迹检测了重组蛋白的免疫反应性 ,用斑点印迹检测了肝癌病人血清中HCA5 2 0的天然抗体的存在情况 .结果表明 ,HCA5 2 0在各种组织中呈丰度差异分布 ,构建好的pGEX 4T 3重组载体经IPTG诱导后高效表达GST HCA5 2 0融合蛋白 ,其分子量约 4 9kD .经GST Agarose亲和层析 ,重组蛋白得到高度纯化 .Western印迹证实 ,纯化蛋白为目的重组蛋白 ,重组蛋白具有与天然蛋白相同或相似的免疫反应性 .斑点印迹分析表明 ,2 0份肝癌病人血清中有 1份HCA5 2 0抗体阳性 ,而 4份正常人均为阴性 .HCA5 2 0的足量提供 ,可用以研究其在致癌中的作用 ,并可以免疫动物制备抗体 .它作为抗原 ,分析其抗体在不同肿瘤病人中的表达情况 。 展开更多
关键词 hca520 肿瘤相关性抗原 重组融合蛋白 免疫反应性
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肝细胞癌相关抗原编码基因HCA520与钙离子的结合分析 被引量:2
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作者 杨美香 韩克军 +2 位作者 曲迅 马道新 陈慰峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期145-147,共3页
目的 :分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA52 0与钙离子的关系。方法 :通过PCR获得目的基因 ,构建至原核表达载体pGEX 4T 3中。在大肠杆菌中诱导表达后 ,用亲和层析法进行纯化。Westernblot对所获蛋白进行鉴定 ,Dotblot分析GST HCA52 0融... 目的 :分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA52 0与钙离子的关系。方法 :通过PCR获得目的基因 ,构建至原核表达载体pGEX 4T 3中。在大肠杆菌中诱导表达后 ,用亲和层析法进行纯化。Westernblot对所获蛋白进行鉴定 ,Dotblot分析GST HCA52 0融合蛋白与钙离子的关系。结果 :琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定表明 ,重组原核表达载体pGEX 4T 3中 ,HCA52 0基因的插入方向及序列完全正确。Westernblot分析显示 ,纯化的蛋白均含有GST部分 ,是所需的目的蛋白。HCA52 0融合蛋白能够以剂量依赖的方式与钙离子结合。结论 :HCA52 0基因原核表达的蛋白能够与钙离子结合 。 展开更多
关键词 hca520 原核表达载体 钙离子结合蛋白
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生物信息学在新基因HCA520研究中的作用 被引量:2
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作者 杨美香 曲迅 +2 位作者 韩克军 冯进波 陈慰峰 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第4期216-220,共5页
利用生物信息学对新基因HCA5 2 0的基因和蛋白序列进行分析 ,探讨生物信息学在新基因研究中的作用。以人类基因组数据库为基础 ,利用电子PCR和SAGE对HCA5 2 0进行染色体定位和组织表达分布分析 ;BLAST程序进行HCA5 2 0的基因结构分析和... 利用生物信息学对新基因HCA5 2 0的基因和蛋白序列进行分析 ,探讨生物信息学在新基因研究中的作用。以人类基因组数据库为基础 ,利用电子PCR和SAGE对HCA5 2 0进行染色体定位和组织表达分布分析 ;BLAST程序进行HCA5 2 0的基因结构分析和相似序列搜索 ;ORFfinder和GeneRunner3.0 5程序对HCA5 2 0编码蛋白进行序列预测和功能分析。RT PCR检测HCA5 2 0的组织表达谱。通过以上分析得出HCA5 2 0的全长cDNA为 2 396bp ,定位于染色体 16 p12 .2 ,其最长的开放读码框架为 5 91bp ,编码 196个氨基酸。编码氨基酸含有典型的EF hand保守序列 ,与CHP具有很高的同源性 ,为一胞内蛋白。在多种组织中有表达。提示HCA5 2 0可能是新的钙离子结合蛋白家族成员 ,可能通过调节Na+ /H+ 交换子的活性影响细胞的生物学功能。 展开更多
关键词 生物信息学 功能研究 hca520
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肿瘤相关抗原HCA520真核表达载体的构建及细胞内表达的定位分析 被引量:2
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作者 杨美香 曲迅 +2 位作者 韩克军 马道新 陈慰峰 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期193-196,共4页
应用PCR技术获得肿瘤相关抗原HCA520编码基因,构建至pGEM-T Easy载体,测序正确后,亚克隆至pEGFP-N1载体,1%的琼脂糖电泳得到两条带,与预期结果相同;鉴定正确的基因一过性转染至CHO细胞,共聚焦显微镜观察HCA520基因编码蛋白主要位于胞... 应用PCR技术获得肿瘤相关抗原HCA520编码基因,构建至pGEM-T Easy载体,测序正确后,亚克隆至pEGFP-N1载体,1%的琼脂糖电泳得到两条带,与预期结果相同;鉴定正确的基因一过性转染至CHO细胞,共聚焦显微镜观察HCA520基因编码蛋白主要位于胞浆靠近胞膜处,为HCA520功能的进一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 肿瘤 抗原 hca520 真核表达载体 细胞定位
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白细胞介素-6参与肿瘤相关抗原HCA520对HEK293细胞的促增殖作用 被引量:1
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作者 钱晓萍 李国栋 +1 位作者 韩克军 陈慰峰 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期310-313,共4页
目的:研究肿瘤相关抗原HCA520对HEK293细胞增殖的影响,获得HCA520生物学功能的初步提示。方法:构建pcDNA3 HCA520 flag真核表达载体转染HEK293细胞并建立稳定转染细胞系,利用MTT实验观察HCA520对HEK293细胞增殖速率的调节。通过RT PCR... 目的:研究肿瘤相关抗原HCA520对HEK293细胞增殖的影响,获得HCA520生物学功能的初步提示。方法:构建pcDNA3 HCA520 flag真核表达载体转染HEK293细胞并建立稳定转染细胞系,利用MTT实验观察HCA520对HEK293细胞增殖速率的调节。通过RT PCR检测可能参与HCA520对HEK293细胞增殖促进作用的相关分子,并用3 (4, 5 二甲基2 噻唑) 2, 5 二苯基溴化四唑(MTT)实验进一步验证目标分子对HEK293细胞增殖的作用。结果:MTT实验结果显示HCA520显著提高HEK293细胞的增殖速率,HCA520上调白细胞介素6在HEK293细胞中的表达,后者部分参与HCA520对HEK293细胞的促增殖作用。结论:HCA520对HEK293细胞的增殖具有促进作用,并推测可能通过促进细胞恶性增殖在肿瘤发生中发挥作用。 展开更多
关键词 HEK293细胞 hca520 白细胞介素-6 肿瘤相关抗原 促增殖作用 细胞增殖 真核表达载体 细胞恶性增殖 生物学功能 转染细胞系 PCR检测 MTT实验 实验观察 相关分子 发挥作用 肿瘤发生 二甲基 速率
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HCA520, A NOVEL TUMOR ASSOCIATED ANTIGEN, INVOLVED IN CELL PROLIFERATION AND APOPTOSIS
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作者 杨美香 曲迅 +1 位作者 刘福利 郑广娟 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2003年第4期282-285,共4页
Objective: Tumor associated antigen encoding gene HCA520 (AF146019) was identified by screening a human hepatocellular carcinoma expressing cDNA library using SEREX technique. In this experiment we studied the effect ... Objective: Tumor associated antigen encoding gene HCA520 (AF146019) was identified by screening a human hepatocellular carcinoma expressing cDNA library using SEREX technique. In this experiment we studied the effect of HCA520 on cell proliferation and apoptosis. Methods: Gene HCA520 was gained by PCR and transfected into 293 cells. The stable expression cells were obtained by G418 selection. The cell proliferation was measured by [3H]-TdR uptake and apoptosis assay was measured by FACS. Results: Eukaryotic expression plasmid pcDNA3-HCA520 was constructed and its stable transfectants were obtained. Overexpression of HCA520 inhibited the cell proliferation and enhanced cell apoptosis after serum deprivation. Conclusion: HCA520 is a novel tumor associated antigen that can affect cell proliferation and apoptosis. 展开更多
关键词 Tumor associated antigen hca520 Sable transfected
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妇科
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《中国医学文摘(肿瘤学)》 2007年第4期317-322,共6页
c-myc反义寡核苷酸对卵巢癌细胞COC1/DDP顺铂耐药的逆转作用,11种化疗药物对卵巢癌细胞的抑制作用及其对有核细胞毒性的研究,氨磷汀对卵巢癌化疗患者的保护作用25例分析,肿瘤相关抗原HCA520在卵巢癌组织细胞中的表达及意义,CD82和CD63... c-myc反义寡核苷酸对卵巢癌细胞COC1/DDP顺铂耐药的逆转作用,11种化疗药物对卵巢癌细胞的抑制作用及其对有核细胞毒性的研究,氨磷汀对卵巢癌化疗患者的保护作用25例分析,肿瘤相关抗原HCA520在卵巢癌组织细胞中的表达及意义,CD82和CD63及CD9基因与卵巢癌进展的相关性研究,UPA蛋白表达与上皮性卵巢癌生物学行为的关系, 展开更多
关键词 C-MYC反义寡核苷酸 卵巢癌细胞 COC1/DDP 妇科 hca520 肿瘤相关抗原 癌生物学行为 逆转作用
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