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利用邻位标记-质谱联用技术发掘冠状病毒HCoV-229E互作宿主因子
1
作者 琚睿霞 汪浩勇 +2 位作者 刘海楠 刘萱 曹诚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第11期3011-3020,共10页
目的通过邻位标记-质谱联用与生物信息学分析结合筛选与人冠状病毒229E(HCoV-229E)核衣壳蛋白(NP)相互作用的潜在宿主因子,并利用免疫共沉淀等技术验证,寻找HCoV-229E NP的相互作用蛋白,为揭示病毒复制增殖的分子机制,及不同人冠状病毒... 目的通过邻位标记-质谱联用与生物信息学分析结合筛选与人冠状病毒229E(HCoV-229E)核衣壳蛋白(NP)相互作用的潜在宿主因子,并利用免疫共沉淀等技术验证,寻找HCoV-229E NP的相互作用蛋白,为揭示病毒复制增殖的分子机制,及不同人冠状病毒致病力差异奠定基础。方法首先构建了表达HCoV-229E NP与生物素连接酶标签融合蛋白(NP-TurboID)的重组腺病毒Ad-V5-NP^(HCoV-229E)-TurboID(Ad-N),感染人非小细胞肺癌细胞A549,48 h后添加外源生物素,通过生物素连接酶标记NP相互作用蛋白,利用链霉亲和素交联的磁珠纯化生物素标记蛋白,而后进行无标记(label-free)蛋白质组学质谱分析,筛选出潜在的与NP互作的蛋白质,并通过免疫沉淀和免疫荧光等实验进行验证。结果无标记蛋白质组学质谱筛选出584个潜在互作蛋白,从中选取糖原合成酶激酶3(GSK3)A和GSK3B进行免疫共沉淀和免疫荧光验证,实验结果表明,二者与NP^(HCoV-229E)存在相互作用。结论邻位标记-质谱联用技术可以用于病毒-宿主相互作用因子的挖掘,为进一步研究冠状病毒复制、增殖及致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 邻位标记 冠状病毒229e 核衣壳蛋白 TurboID 糖原合成酶激酶3
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SARS-CoV N蛋白与人冠状病毒HCoV-OC43和HCoV-229E的交叉反应表位及特异表位的确定 被引量:1
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作者 闫克夏 谭文杰 +5 位作者 张相民 王慧娟 张陵林 周为民 夏宁邵 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期248-255,共8页
为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位,对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒,并制备了相应的小鼠免疫血清。用... 为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位,对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒,并制备了相应的小鼠免疫血清。用间接免疫荧光方法,检测了3种N蛋白的表达及其与3种冠状病毒免疫动物血清和SARS病人恢复期血清之间的反应。与此同时,用Western blot方法分析了原核表达的39个不同区段的SARS-CoVN蛋白与3种冠状病毒动物免疫血清和SARS病人恢复期血清之间的交叉反应性。免疫荧光检测结果表明,SARS-CoV、HCov-OC43和HCoV-229E3种病毒的N蛋白在重组痘苗病毒感染的HeLa细胞中均可以特异表达;3种N蛋白之间存在明显交叉免疫反应。Western blot结果显示,SARS-CoV N蛋白的表位主要位于30~60aa、170~184aa、301~320aa和360~422aa;与HCoV-OC43的交叉反应表位主要位于30~60aa、90~120aa、204~214aa和320~360aa;与HCoV-229E的交叉反应表位主要位于30~60aa、150~160aa和301~360aa。含SARS-CoVN蛋白特异表位的重组肽N155b(60~214aa)和N185(30~214aa)只与SARS病人恢复期血清和灭活SARS-CoV免疫小鼠的血清反应,而不与灭活HCoV-OC43和HCoV-229E免疫的山羊血清产生交叉反应。上述结果为使用SARS-CoVN蛋白抗原进行特异诊断试剂的研究,提供了重要的实验依据。 展开更多
关键词 SARS-COV hcov-OCA3 hcov-229e N蛋白 抗原表位
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豨莶草水洗脱部位对人冠状病毒hCoV-229E致染小鼠的药效作用
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作者 樊凯芳 王欢 +2 位作者 王腾岳 赵铭岳 陈媛 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2879-2882,共4页
目的:观察豨莶草水洗脱部位(SWES)以延迟给药方式经口灌胃给药后的体内抗人冠状病毒hCoV-229E的药效作用。方法:以BALB/c小鼠为研究对象,随机分为空白对照组、模型对照组、连花清瘟胶囊组、阿比多尔片组、SWES组(0.24 g/kg),每组10只。... 目的:观察豨莶草水洗脱部位(SWES)以延迟给药方式经口灌胃给药后的体内抗人冠状病毒hCoV-229E的药效作用。方法:以BALB/c小鼠为研究对象,随机分为空白对照组、模型对照组、连花清瘟胶囊组、阿比多尔片组、SWES组(0.24 g/kg),每组10只。各组经腹腔注射环磷酰胺进行免疫抑制后,空白对照组经鼻滴入0.9%氯化钠注射液,其余各组均经鼻滴入等体积的hCoV-229E冠状病毒液进行呼吸道感染,感染2次后24 h各组连续给予相应药物7 d。检测小鼠体质重,采用ELISA法检测小鼠肺脏中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,采用鸡血凝集抑制试验检测肺组织中病毒滴度,并对肺脏组织进行病理学检查。结果:与模型对照组比较,SWES(0.24 g/kg)能明显抑制hCoV-229E感染小鼠体质量减轻(P<0.01),并能显著降低感染小鼠肺脏中炎性因子的含量(P<0.05),降低感染小鼠肺脏中hCoV-229E病毒的血凝效价,明显减轻小鼠感染冠状病毒后的肺组织病理学改变。结论:采用延迟给药方式经口灌服SWES具有明显抗人冠状病毒hCoV-229E体内药效作用,该作用与连花清瘟胶囊药效作用大致相当。 展开更多
关键词 豨莶草水洗脱部位 抗人冠状病毒 hcov-229e 药效作用 连花清瘟胶囊
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HCoV-229E细胞-细胞融合模型构建
4
作者 杨曼清 单静 +1 位作者 尚方建 刘奇 《生物技术》 CAS 2023年第6期702-707,726,共7页
[目的]构建一种HCoV-229E侵染靶细胞的可视化细胞-细胞融合模型。[方法]构建真核表达质粒pAAV-IRSE-GFP-229E S。转染293T细胞后,该细胞可以模拟病毒与靶细胞Huh-7发生融合。在此基础上使用冠状病毒广谱抑制剂EK1检测抑制效果。[结果]... [目的]构建一种HCoV-229E侵染靶细胞的可视化细胞-细胞融合模型。[方法]构建真核表达质粒pAAV-IRSE-GFP-229E S。转染293T细胞后,该细胞可以模拟病毒与靶细胞Huh-7发生融合。在此基础上使用冠状病毒广谱抑制剂EK1检测抑制效果。[结果]成功构建pAAV-GFP-229E S重组质粒。转染293T后可表达绿色荧光蛋白GFP,与Huh-7混合培养2 h后可在荧光显微镜下观察到融合现象(形态增大、荧光强度减弱、呈现不规则状);48 h后形成更大面积的融合。EK1以浓度依赖的方式抑制HCoV-229E S介导的细胞-细胞融合,IC50为(3265.948±719.116)nmol/L。[结论]成功构建了HCoV-229E侵染靶细胞的细胞-细胞融合模型,用于体外靶向HCoV-229E S蛋白的药物筛选。 展开更多
关键词 中医药 冠状病毒 hcov-229e 细胞-细胞融合 靶向S蛋白 进入抑制剂 抗病毒药物 药物筛选
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散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E和OC43感染致小鼠肺炎的作用机制研究
5
作者 张敬升 高双荣 +7 位作者 庞博 刘莉娜 徐英莉 曹姗 陈梦苹 张宇 赵荣华 崔晓兰 《中国药物警戒》 2024年第1期51-54,88,共5页
目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂... 目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂量组,高剂量为11 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药52.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量为5.5 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药26.4 g·kg^(-1)·d^(-1))、低剂量为2.75 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药13.2 g·kg^(-1)·d^(-1))。使用人冠状病毒229E和OC43感染小鼠,建立肺炎模型。通过检测肺指数和肺部病理变化等指标评价散寒化湿颗粒对冠状病毒肺炎小鼠的药理作用。结果散寒化湿颗粒在高、中、低3个剂量组均能有效降低小鼠的肺指数,并减轻肺组织的病理损伤。结论散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43感染致小鼠肺炎均具有治疗作用。 展开更多
关键词 散寒化湿颗粒 人冠状病毒229e 人冠状病毒OC43 小鼠 肺炎 肺指数 病理变化
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SARS-CoV、HCoV-229E和OC43核衣壳蛋白的克隆表达及抗原相关性分析 被引量:4
6
作者 车小燕 廖志勇 +7 位作者 王压娣 丘立文 温坤 潘玉先 徐华 梅亚波 郝卫 丁彦青 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期711-715,共5页
目的克隆表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)和人冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43)核衣壳(N)蛋白,并对其重组蛋白的抗原相关性进行探讨。方法RT-PCR扩增SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的N基因全长序列,克隆到原核表达载体pQE30,IPTG诱导表达重... 目的克隆表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)和人冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43)核衣壳(N)蛋白,并对其重组蛋白的抗原相关性进行探讨。方法RT-PCR扩增SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的N基因全长序列,克隆到原核表达载体pQE30,IPTG诱导表达重组蛋白,用Westernblot和免疫荧光鉴定。结果获得SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43His-N融合蛋白的相对分子质量(Mr)分别约为47×103、44×103、50×103,与相应预测值相符,Westernblot和免疫荧光证实,3种融合蛋白仅与相应的免疫血清特异性结合,3种蛋白的抗原性相互间无交叉反应。结论获得具有免疫原性的SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的核衣壳融合蛋白,其3种N蛋白抗原性在免疫动物血清中不存在交叉反应。 展开更多
关键词 冠状病毒 核衣壳蛋白 抗原性 冠状病毒(SARS-CoV) hcov-229e 核衣壳蛋白 抗原相关性 克隆表达 相关性分析 OC43 Western RT-PCR扩增
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人冠状病毒HCoV-229E的研究进展 被引量:13
7
作者 董晓春 《职业与健康》 CAS 2014年第24期3625-3627,3631,共4页
人冠状病毒NL63(human coronavirus 229E,HCoV-229E)属α群正链RNA病毒冠状病毒,是引起人类上呼吸道感染的病原,常引起人的普通感冒。在临床上除引起呼吸道感染外还会引起胃肠道疾病及神经系统症状。目前HCoV-229E感染的检测方法多用普... 人冠状病毒NL63(human coronavirus 229E,HCoV-229E)属α群正链RNA病毒冠状病毒,是引起人类上呼吸道感染的病原,常引起人的普通感冒。在临床上除引起呼吸道感染外还会引起胃肠道疾病及神经系统症状。目前HCoV-229E感染的检测方法多用普通聚合酶链反应、荧光定量聚合酶链反应等。Ⅰ型干扰素α(IFN-α)对HCoV-229E有一定的治疗作用。 展开更多
关键词 呼吸道感染 人冠状病毒hcov-229e 进展
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冠状病毒HCoV-229E S1蛋白片段的免疫原性分析
8
作者 黄列 徐锡 +1 位作者 马淑霞 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2009年第7期598-600,共3页
目的表达和纯化HCoV-229E的S1蛋白片段(S1 417-547),分析其诱导的免疫应答。方法将纯化蛋白免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及血清IL-4和IFN-γ含量,流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布,观察其诱导的免疫应答。结果表达... 目的表达和纯化HCoV-229E的S1蛋白片段(S1 417-547),分析其诱导的免疫应答。方法将纯化蛋白免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及血清IL-4和IFN-γ含量,流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布,观察其诱导的免疫应答。结果表达蛋白经金属螯合获得纯化,并诱导小鼠产生了高滴度的抗体。脾脏CD4+和CD8+比例均升高,CD4+/CD8+比值下降;免疫鼠血清IFN-γ和IL-4水平显著升高。结论成功构建了HCoV-229E S1蛋白的表达载体,并在BL21(DE3)中得到了高效表达,表达蛋白免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答。 展开更多
关键词 冠状病毒hcov-229e S1蛋白 免疫应答
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伏湿小鼠模型构建及其对人冠状病毒HCoV-229E易感性研究 被引量:1
9
作者 秦聖乐 杨子峰 +4 位作者 赵瑾 黄婉怡 邓玲珠 王玉涛 王新华 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1348-1355,共8页
目的构建小鼠伏湿模型,并观察该模型对人冠状病毒HCoV-229E的易感性。方法将30只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,每组10只。模型组和中药组采用高脂饮食+湿度(95±5)%环境21 d建立伏湿模型小鼠,中药组15 d起给予给予五... 目的构建小鼠伏湿模型,并观察该模型对人冠状病毒HCoV-229E的易感性。方法将30只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,每组10只。模型组和中药组采用高脂饮食+湿度(95±5)%环境21 d建立伏湿模型小鼠,中药组15 d起给予给予五指防冠方(11.44 g/kg)灌胃。另取64只小鼠随机分为正常组、正常低滴度[10^(-3)HCoV-229E半数组织培养感染剂量(TCID_(50))]感染组、正常中滴度(10^(-4)TCID_(50))感染组、正常高滴度(10^(-5)TCID_(50))感染组、模型组、伏湿低滴度(10^(-3)TCID_(50))感染组、伏湿中滴度(10^(-4)TCID_(50))感染组、伏湿高滴度(10^(-5)TCID_(50))感染组,每组8只,各组给予相应滴度的HCoV-229E滴鼻,正常组和模型组不予干预。观察小鼠一般情况,测量小鼠体重、肺指数及肺、小肠组织脂多糖(LPS)含量,观察舌组织、肺组织、结肠组织病理,并进行肠道微生物16S rRNA基因测序;检测肺组织炎症因子炎症因子干扰素诱导蛋白10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白β(MIP-β)、趋化因子配体5(RANTES)mRNA表达水平。结果正常组小鼠被毛光滑,大便成形;模型组小鼠出现被毛潮湿、大便变软,肛周黄秽、饮水量减少的表现,结肠隐窝内有少量中性粒细胞浸润;中药组上述表现有所缓解。与正常组比较,模型组的Shannon、Chao1、Sob指数及拟杆菌门、变形菌门、Alistipes、Bacteroides、Ruminiclostridium_5、Ruminiclostridium_9属相对丰度降低(P<0.05,P<0.01),舌组织角化及放线菌门、Jeotgalicoccus、Corynebacterium_1属相对丰度升高(P<0.01)。正常组和模型组肠道微生物菌落构成及19类功能基因有差异(P<0.05,P<0.01),功能基因涉及糖、辅酶和维生素、氨基酸代谢等。与模型组比较,中药组的Chao1、Sob指数及拟杆菌门、Alistipes、Bacteroides、Ruminiclostridium_5、Ruminiclostridium_9属相对丰度升高(P<0.05,P<0.01),舌组织角化及Jeotgalicoccus、Corynebacterium_1属相对丰度降低(P<0.05,P<0.01)。与正常中滴度感染组比较,伏湿中滴度感染组小鼠肺指数(P<0.05);与正常组、模型组、正常中滴度感染组比较,伏湿中滴度感染小鼠肺组织中IP-10、MCP-1、MIP-1β、RANTES mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论本研究采用复合因素成功构建伏湿证小鼠模型,伏湿证小鼠可出现肺组织病理改变、肠道微生态改变;其对人冠状病毒HCoV-229E更易感,感染后炎症因子mRNA升高更明显。 展开更多
关键词 伏湿模型 人冠状病毒hcov-229e 肠道微生物 易感性 炎症因子
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蛋白激酶D在人类冠状病毒229E复制中的作用及机制研究
10
作者 韩慧娟 刘欢 赵志军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1044-1052,共9页
目的探究蛋白激酶D(PKD)在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)复制中的作用及潜在分子机制。方法以MRC-5细胞作为模型,采用qPCR和Western blot检测PKD家族基因和蛋白的表达水平;通过siRNA敲除Prkd3及PKD抑制剂(CRT0066101)抑制PKD活性,检测HCo... 目的探究蛋白激酶D(PKD)在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)复制中的作用及潜在分子机制。方法以MRC-5细胞作为模型,采用qPCR和Western blot检测PKD家族基因和蛋白的表达水平;通过siRNA敲除Prkd3及PKD抑制剂(CRT0066101)抑制PKD活性,检测HCoV-229E感染细胞后的复制水平;通过CCK8检测细胞活性,TCID_(50)测定病毒滴度,免疫荧光染色检测HCoV-229E的表达和反式高尔基体网络(TGN)的结构;通过检测磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PI(4,5)P2)的水平反映磷脂酰肌醇4-激酶IIIβ(PI4KIIIβ)活性;采用PI4KIIIβ抑制剂(BQR695)抑制PI4KIIIβ活性,检测HCoV-229E感染细胞后的TGN的结构变化和HCoV-229E复制水平;采用CRT0066101抑制Vero-E6细胞的PKD活性,检测HCoV-229E感染后的的复制水平。结果PKD家族基因和蛋白表达水平在HCoV-229E感染过程中明显增加,包括Prkd1、Prkd2和Prkd3;与对照组相比,敲低PKD3显著抑制HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=8.999,P<0.001;t=6.920,P<0.001),过表达PKD3则增加了HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=6.630,P<0.001;t=5.794,P<0.001);CRT0066101也显著抑制HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=6.931,P<0.001;t=4.055,P<0.01),免疫荧光染色结果表明,CRT0066101抑制HCoV-229E感染导致的TGN裂变;抑制PI4KIIIβ活性显著降低PI(4,5)P2水平,且BQR695挽救了PKD过表达导致的PI(4,5)P2水平升高(t=6.671,P<0.01),BQR695降低了HCoV-229E感染细胞的TGN裂变,HCoV-229E mRNA水平和滴度(t=5.151,P<0.001;t=7.744,P<0.001);CRT0066101抑制HCoV-229E在Vero-E6细胞中的mRNA水平和滴度(t=7.480,P<0.001;t=7.228,P<0.01)。结论本研究揭示了PKD通过调控PI4KIIIβ影响TGN的裂变参与HCoV-229E复制,并证明PKD抑制剂和PI4KIIIβ抑制剂对降低HCoV-229E的复制具有显著作用,这些发现为今后研究冠状病毒感染的治疗提供重要的参考依据。 展开更多
关键词 人类冠状病毒229e(hcov-229e) 冠状病毒 蛋白激酶D 反式高尔基体网络 CRT0066101
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云南松松塔抗HIV活性提取物对人冠状病毒229E抑制活性的研究 被引量:1
11
作者 李亚飞 尚方建 +2 位作者 罗春雨 石哲芳 刘奇 《大理大学学报》 2023年第10期21-26,共6页
目的:评价云南松松塔抗HIV活性提取物(以下简称“松塔提取物”)对人冠状病毒(HCoV)-229E的抑制活性,初步明确其作用靶点。方法:构建HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合模型及假病毒模型,检测松塔提取物对HCoV-229E的抑制活性;利用时间... 目的:评价云南松松塔抗HIV活性提取物(以下简称“松塔提取物”)对人冠状病毒(HCoV)-229E的抑制活性,初步明确其作用靶点。方法:构建HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合模型及假病毒模型,检测松塔提取物对HCoV-229E的抑制活性;利用时间-移除实验明确作用靶点,时间-添加实验确定其作用时间。结果:松塔提取物能够抑制HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合现象发生,半抑制浓度(IC50)为(0.136±0.010)mg/mL;能有效抑制HCoV-229E假病毒感染,IC50为(0.069±0.015)mg/mL;时间-移除实验以及时间-添加实验显示松塔提取物靶向于HCoV-229E S蛋白,作用在感染早期(1 h前);不同浓度松塔提取物对293T及Huh-7细胞无明显毒性作用。结论:松塔提取物能靶向HCoV-229E S蛋白,在感染早期抑制HCoV-229E的感染,是一种安全性高的候选药物。 展开更多
关键词 云南松 松塔提取物 hcov-229e 抑制活性
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Prevalence and Seroprevalence of Non-SARS Human Coronaviruses 229E and OC43 in East Tyrol/Austria
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作者 Sonnleitner Stefanie Sonnleitner Sissy +1 位作者 Eva Hinterbichler Gernot Walder 《Journal of Biosciences and Medicines》 2023年第7期125-139,共15页
The recent SARS-CoV-2 pandemic renewed interest in other previously discovered human coronaviruses—the non-severe acute respiratory syndrome human coronavirus (non-SARS hCoVs) and this study is a starting point for a... The recent SARS-CoV-2 pandemic renewed interest in other previously discovered human coronaviruses—the non-severe acute respiratory syndrome human coronavirus (non-SARS hCoVs) and this study is a starting point for a closer investigation of those. With the pandemic behind us we believe it to be important to also examine the current and past respiratory pathogen landscape in the patient population in our care. Therefore, 954 nasopharyngeal swabs of patients with respiratory diseases collected between October 2018 and March 2020 were tested against the pathogens Mycoplasma pneumoniae, Bordetella pertussis, Influenza A and virus, Human metapneumovirus, respiratory syncytial virus, Parainfluenza virus, human Adenovirus and Polyoma virus BK/JC. Swabs negative against these pathogens were further tested for OC43 and 229E by RT-qPCR. Human coronaviruses 229E and OC43 were proven as the causative agents in a considerable number of cases, confirmed by PCR. Overall, our results show that those two non-SARS hCoVs were responsible for 13.9% (11 of 79) of infections with flu-like symptoms of unknown etiology in the study area. In the subsequent seroprevalence study, it was shown that the seroprevalence rate of IgG antibodies against 229E and OC43 was over 50%, indicating that a big part of the population in our study area has been in contact with these non-SARS-CoVs and has built the specific humoral immune response accordingly. 展开更多
关键词 NonSARS Human Coronavirus hCoV hCoV OC43 hCoV 229e Respiratory Pathogens
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银翘解毒软胶囊体外抑制人冠状病毒229E及其介导的炎症的研究 被引量:3
13
作者 刘振海 杨春光 +4 位作者 雷标 王周琅 谢玉琪 杨子峰 谢斌 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期64-68,共5页
目的探究银翘解毒软胶囊(YQ)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)的体外抑制作用。方法通过经典的体外细胞模型分析银翘解毒软胶囊的体外毒性及对HCoV-229E的抑制作用;通过空斑实验验证银翘解毒软胶囊对HCoV-229E的抑制作用;应用实时定量PCR法... 目的探究银翘解毒软胶囊(YQ)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)的体外抑制作用。方法通过经典的体外细胞模型分析银翘解毒软胶囊的体外毒性及对HCoV-229E的抑制作用;通过空斑实验验证银翘解毒软胶囊对HCoV-229E的抑制作用;应用实时定量PCR法分析银翘解毒软胶囊对HCoV-229E介异的炎症因子表达水平的影响。结果银翘解毒软胶囊对人肝癌细胞的50%毒性浓度为(3 315±131)μg·mL^(-1),对HCoV-229E的50%抑制浓度为(361.9±36)μg·mL^(-1),选择指数为9.16。空斑实验表明银翘解毒软胶囊2 mg·mL^(-1)几乎可完全抑制病毒复制(P<0.001)。银翘解毒软胶囊在2 mg·mL^(-1)浓度作用下,可明显抑制由冠状病毒HCoV-229E感染介导的炎症因子如趋化因子(C-C基元)配体5(CCL-5,P<0.001)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1,P<0.001)、白细胞介素6(IL-6,P<0.001)、白细胞介素8(IL-8,P<0.001)和肿瘤坏死因子α(TNF-α,P<0.001)核酸的升高。结论体外实验显示银翘解毒软胶囊可抑制人冠状病毒HCoV-229E的复制及其介导的炎症反应,具有作为抗冠状病毒药物的开发价值。 展开更多
关键词 银翘解毒软胶囊 人冠状病毒229e(hcov-229e) 炎症因子 人肝癌细胞Huh7
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普通冠状病毒229E株的分子流行病学分析 被引量:2
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作者 马淑霞 李金梁 +1 位作者 谷鸿喜 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期29-31,共3页
目的明确哈尔滨地区普通冠状病毒229E(HumanCoronavirus229E,HcoV229E)株的流行和变异情况及其与SARSCoV的异同,为进一步掌握该地区常见上呼吸道病毒的流行规律及预防,乃至疫苗的制备打下基础。方法利用RTPCR法对2003年上半年采集的部... 目的明确哈尔滨地区普通冠状病毒229E(HumanCoronavirus229E,HcoV229E)株的流行和变异情况及其与SARSCoV的异同,为进一步掌握该地区常见上呼吸道病毒的流行规律及预防,乃至疫苗的制备打下基础。方法利用RTPCR法对2003年上半年采集的部分发热病人血清及血细胞进行筛选,同时采用基因测序、序列分析等手段对扩增的HcoV229ENgene片断进行蛋白和基因分析。结果55例标本中HcoV229ERNA阳性病例5例,占909%;测序结果看出哈尔滨地区检出229E株N基因的序列与已公布的HcoV229ENgene(295802)序列完全相同,所测片断为HcoV229ENgene的部分序列。该基因与猪流行性腹泻病毒、犬冠状病毒、TGEV及猫感染性腹膜炎病毒有一定同源性;但与已公布的SARSCoVNgene序列比较,相似性小于1%。结论(1)该地区发热病人普通冠状病毒229E株阳性率为909%;(2)哈尔滨地区流行的HcoVN基因无变异发生;(3)HcoV229E与猪流行性腹泻病毒、犬冠状病毒、TGEV和猫感染性腹膜炎病毒有一定的同源性;(4)哈尔滨地区HcoV229ENgene与SARSCoVNgene相似性小于1%。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 SARS-CoV 发热病人 腹膜炎 分子流行病学 哈尔滨地区 N基因 TGeV 猪流行性腹泻病毒 同源性
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用RT-PCR法鉴定人冠状病毒SARS、229E和OC43
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作者 邹丽容 李晖 +1 位作者 柯昌文 黄平 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第5期513-515,553,共4页
目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物... 目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物,然后通过对扩增片断测序、限制性酶切方法和根据扩增片断的长度进行鉴定。结果:两种方法均能扩增到与预期目标一致的片断,特异性和灵敏度高,能快速区分3种病毒。结论:这些方法将为了解冠状病毒在呼吸道感染中的作用提供一个有利的工具。 展开更多
关键词 SAILS冠状病毒 冠状病毒229e 冠状病毒OCA3 逆转录聚合酶链式反应
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橘红痰咳颗粒体外抗人冠状病毒研究
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作者 孙维广 黄志云 +5 位作者 毛鑫 时宇静 杜曼玲 苏草茵 钟小天 高建胜 《广东药科大学学报》 CAS 2023年第2期82-85,共4页
目的研究橘红痰咳颗粒对于人冠状病毒HCoV-229E的抑制作用。方法采用噻唑蓝MTT法检测橘红痰咳颗粒对Huh-7细胞的安全剂量,采用MTT法检测橘红痰咳颗粒对人冠状病毒HCoV-229E引起细胞病变的影响,采用反转录聚合酶链式反应RT-PCR法检测橘... 目的研究橘红痰咳颗粒对于人冠状病毒HCoV-229E的抑制作用。方法采用噻唑蓝MTT法检测橘红痰咳颗粒对Huh-7细胞的安全剂量,采用MTT法检测橘红痰咳颗粒对人冠状病毒HCoV-229E引起细胞病变的影响,采用反转录聚合酶链式反应RT-PCR法检测橘红痰咳颗粒对人冠状病毒HCoV-229E感染致细胞因子表达的影响。结果橘红痰咳颗粒对于HCoV-229E感染Huh-7细胞引起细胞活性降低的半数抑制浓度为1.567 mg/mL,选择指数为10.5,橘红痰咳颗粒能够不同程度地抑制HCoV-229E诱导细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8和IFN-αmRNA的过度表达。结论橘红痰咳颗粒具有明显的抗人冠状病毒HCoV-229E体外感染作用。 展开更多
关键词 橘红痰咳颗粒 冠状病毒 hcov-229e 细胞因子
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基于网络药理学及实验验证探究清开灵软胶囊治疗冠状病毒肺炎的作用机制 被引量:1
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作者 陈梦苹 王雅欣 +8 位作者 姚荣妹 包蕾 赵荣华 孙静 耿子涵 鲍岩岩 戴敏 郭姗姗 崔晓兰 《中国药物警戒》 2023年第3期253-257,共5页
目的通过网络药理学分析和基于湿热疫毒袭肺病证结合小鼠模型的实验验证,对清开灵软胶囊治疗冠状病毒肺炎的作用机制进行初步探索。方法从建库开始截至2022年6月28日,通过TCMSP数据库和文献挖掘获得清开灵软胶囊主要活性成分,利用Swiss ... 目的通过网络药理学分析和基于湿热疫毒袭肺病证结合小鼠模型的实验验证,对清开灵软胶囊治疗冠状病毒肺炎的作用机制进行初步探索。方法从建库开始截至2022年6月28日,通过TCMSP数据库和文献挖掘获得清开灵软胶囊主要活性成分,利用Swiss Target Prediction、GeneCards数据库获得清开灵软胶囊治疗冠状病毒肺炎的潜在靶点,构建PPI互作网络和“药物-成分-靶点”网络,对潜在靶点进行KEGG Pathway富集分析。基于湿热疫毒袭肺小鼠病证结合模型,检测清开灵软胶囊对肺指数的影响,Elisa法检测用药后肺组织中IL-6、SOD和下丘脑中PGE2、CAMP含量的变化。结果筛选出清开灵软胶囊活性成分78个,潜在靶点112个。“药物-成分-靶点”网络中包含296条边,7个药物节点,槲皮素等33个化合物节点,表皮生长因子受体等112个靶点节点,涉及卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染通路、PI3K-AKT等信号通路。与模型组相比,清开灵软胶囊组肺指数明显降低(P<0.01),肺组织中IL-6、下丘脑中PGE2的含量也显著降低(P<0.01)。结论清开灵软胶囊可能通过调节炎症介质和发热介质,对冠状病毒肺炎发挥治疗作用。 展开更多
关键词 清开灵 软胶囊 网络药理学 人冠状病毒229e 湿热疫毒袭肺
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新冠状病毒与SARS 被引量:4
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作者 周密 李凡 《国外医学(病毒学分册)》 2003年第4期114-118,共5页
冠状病毒可引起人和动物的多种疾病 ,人类冠状病毒 HCo V- OC4 3和 HCo V- 2 2 9E主要引起人类的普通感冒。但是最近新分离出的冠状病毒可引起严重急性呼吸综合征 (severe acute respiratory syndrome,SARS) ,本文将就冠状病毒的生物学... 冠状病毒可引起人和动物的多种疾病 ,人类冠状病毒 HCo V- OC4 3和 HCo V- 2 2 9E主要引起人类的普通感冒。但是最近新分离出的冠状病毒可引起严重急性呼吸综合征 (severe acute respiratory syndrome,SARS) ,本文将就冠状病毒的生物学特性与致病性 ,新冠状病毒与 SARS的关系 ,SARS冠状病毒的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 新冠状病毒 SARS hcov-0C43 hcov-229e 严重急性呼吸综合征
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葛根汤颗粒对人冠状病毒229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠肺炎模型的治疗作用 被引量:9
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作者 耿子涵 鲍岩岩 +7 位作者 包蕾 赵荣华 孙静 时宇静 郭姗姗 陶夏莉 高英杰 崔晓兰 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第19期34-41,共8页
目的:研究葛根汤颗粒对人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合肺炎小鼠的治疗作用。方法:BALB/c小鼠分为正常组、感染组、寒湿组、模型组、磷酸氯喹组(0.18 g·kg^(-1))、干扰素α2b(IFN-α2b)组(1.83×10^(6)U·... 目的:研究葛根汤颗粒对人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合肺炎小鼠的治疗作用。方法:BALB/c小鼠分为正常组、感染组、寒湿组、模型组、磷酸氯喹组(0.18 g·kg^(-1))、干扰素α2b(IFN-α2b)组(1.83×10^(6)U·kg^(-1))及葛根汤颗粒高、低剂量组(6.6、3.3 g·kg^(-1)),每组10只,采用寒湿环境加hCoV-229E感染进行造模并给药。观察小鼠一般状态及肺指数,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织病毒载量,用苏木素-伊红(HE)染色法评价肺组织病变,运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清胃肠激素、肺组织炎性因子的水平,利用流式细胞术检测外周血淋巴细胞百分比。结果:葛根汤颗粒能够明显缓解模型小鼠精神萎靡、四肢无力、大便黏腻等状态;葛根汤颗粒高剂量组能够明显降低模型小鼠的肺指数、组织病理学评分、血清胃动素水平(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,葛根汤颗粒高、低剂量组均可明显升高血清胃泌素水平(P<0.05,P<0.01),明显升高外周血CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分比(P<0.05,P<0.01),显著降低肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平(P<0.01),并使白细胞介素-6(IL-6)水平呈现降低趋势。结论:葛根汤颗粒能够改善hCoV-229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠的一般体征,调节胃肠激素水平,降低肺指数和肺组织病理学评分,并可能通过抑制肺组织中炎性细胞因子、恢复外周血淋巴细胞百分比发挥免疫调节作用,从而对模型小鼠起到治疗作用。 展开更多
关键词 葛根汤颗粒 寒湿疫毒袭肺证 病毒性肺炎 人冠状病毒229e(hcov-229e) 免疫调节 白细胞介素(IL) 肿瘤坏死因子(TNF)
原文传递
清开灵注射液治疗冠状病毒肺炎的作用机制研究 被引量:4
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作者 郭姗姗 赵荣华 +6 位作者 耿子涵 包蕾 孙静 时宇静 鲍岩岩 高英杰 崔晓兰 《中国药物警戒》 2021年第12期1111-1116,共6页
目的基于湿热疫毒袭肺病证结合小鼠模型,研究清开灵注射液治疗冠状病毒肺炎的作用机制。方法实验设正常组,人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染组,湿热组,病证结合模型组,阳性药组(0.09g/(kg·d))和清开灵注射液高(1.47 mL/(kg·d))... 目的基于湿热疫毒袭肺病证结合小鼠模型,研究清开灵注射液治疗冠状病毒肺炎的作用机制。方法实验设正常组,人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染组,湿热组,病证结合模型组,阳性药组(0.09g/(kg·d))和清开灵注射液高(1.47 mL/(kg·d))、中(0.77 mL/(kg·d))、低(0.37 mL/(kg·d))剂量组,计算各组肺指数、肺指数抑制率,采用RT-PCR检测小鼠肺组织中病毒载量,Elisa法检测下丘脑和肺组织中发热介质、炎症因子和氧化应激因子水平,流式细胞术检测外周血免疫细胞百分比。结果与模型组相比,清开灵注射液中、低剂量组的肺指数(P<0.05,P<0.01)和肺部病毒载量明显降低(P<0.01,P<0.05);3个剂量组肺部CD14、IL-1β和下丘脑PGE2、cAMP含量降低(P<0.01),中、低剂量组肺部MDA含量也降低(P<0.01,P<0.05),高、中剂量组肺部SOD含量升高(P<0.01);3个剂量组外周血中CD4_(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和B细胞占比均显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论清开灵注射液可通过调节免疫功能、抑制细胞因子风暴、减少自由基堆积等对冠状病毒肺炎湿热疫毒袭肺病证结合小鼠模型发挥治疗作用。 展开更多
关键词 清开灵注射液 湿热疫毒袭肺 人冠状病毒229e 细胞因子 免疫调节
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