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可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定
被引量:
1
1
作者
孙万军
徐东刚
+6 位作者
胡海兰
邹民吉
杜建芳
王金凤
蔡欣
王嘉玺
艾辉胜
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2007年第2期352-356,共5页
为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复...
为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的生成率。利用HLA-A2构象特异性抗体(BB7.2)及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物进行鉴定。结果表明:在折叠体系中,主要含有HLA-A*0201-BSP聚合体、HLA-A*0201-PR1复合物及β2m,其中可溶性复合物生成率约18%。获得的HLA-A*0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化。结论:成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A*0201-PR1四聚体创立了基础。
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关键词
HLA.抗原肽
复合物
hla-a*0201-prl复合物
hla-a*
0201
-prl
四聚体
下载PDF
职称材料
sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测
被引量:
1
2
作者
翁秀芳
吴雄文
+4 位作者
梁智辉
蔡蕾
费世江
陈国安
龚非力
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期244-247,251,共5页
目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4...
目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4∶1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。
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关键词
hla-a*
0201
-抗原肽
复合物
生物素化
BirA
hla-a*
0201
-抗原肽四聚体
抗原特异性CTL
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职称材料
题名
可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定
被引量:
1
1
作者
孙万军
徐东刚
胡海兰
邹民吉
杜建芳
王金凤
蔡欣
王嘉玺
艾辉胜
机构
军事医学科学院附属医院血液科
军事医学科学院基础医学研究所
第二炮兵总医院血液科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2007年第2期352-356,共5页
基金
军队"十一五"医药卫生科研基金资助项目
编号06MA316
文摘
为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的生成率。利用HLA-A2构象特异性抗体(BB7.2)及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物进行鉴定。结果表明:在折叠体系中,主要含有HLA-A*0201-BSP聚合体、HLA-A*0201-PR1复合物及β2m,其中可溶性复合物生成率约18%。获得的HLA-A*0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化。结论:成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A*0201-PR1四聚体创立了基础。
关键词
HLA.抗原肽
复合物
hla-a*0201-prl复合物
hla-a*
0201
-prl
四聚体
Keywords
hla-a
ntigenic oeptide complex:
hla-a
*
0201
-PR1 complex
hla-a
*
0201
-PR1 tetramer
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测
被引量:
1
2
作者
翁秀芳
吴雄文
梁智辉
蔡蕾
费世江
陈国安
龚非力
机构
华中科技大学同济医学院免疫学系
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期244-247,251,共5页
基金
国家自然科学基金(30271201)
科技部973计划(2001CB510008)资助
文摘
目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4∶1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。
关键词
hla-a*
0201
-抗原肽
复合物
生物素化
BirA
hla-a*
0201
-抗原肽四聚体
抗原特异性CTL
Keywords
hla-a*
0201
-peptide complex
Biotinylate
BirA enzyme
hla-a*
0201
-peptide tetramer
Peptide-specifie CTL
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定
孙万军
徐东刚
胡海兰
邹民吉
杜建芳
王金凤
蔡欣
王嘉玺
艾辉胜
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2007
1
下载PDF
职称材料
2
sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测
翁秀芳
吴雄文
梁智辉
蔡蕾
费世江
陈国安
龚非力
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
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