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scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用
1
作者 温迪 吉盈肖 +2 位作者 李秋生 陈相 刘亚坤 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2024年第2期106-110,共5页
目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠... 目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化 SOD1-G93A转基因小鼠 腺相关病毒9 人胰岛素样生长因子-1 抗凋亡通路
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胰岛素样生长因子-1对甲状旁腺激素介导成骨细胞增殖及成骨活性的影响 被引量：7
2
作者 刘冰 卢蕾阳 +1 位作者 高飞 杨静 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1298-1301,共4页
目的通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)及IGF-1联合重组人甲状旁腺激素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)对成骨细胞增殖及I型胶... 目的通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)及IGF-1联合重组人甲状旁腺激素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)对成骨细胞增殖及I型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法培养乳鼠成骨细胞,并观察其形态及功能,以原代培养乳鼠成骨细胞为实验模型,分空白组、PTH组、IGF-1组及不同浓度IGF-1作用的PTH介导的成骨细胞组(0、10、50、100 ng/L)。通过不同剂量的胰岛素样生长因子-1(0、10、50、100 ng/L)联合10-9mol/L重组人甲状旁腺素刺激体外培养的成骨细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,RT-PCR法检测成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达。结果 PTH和IGF-1均可促进成骨细胞增殖;IGF-1联合PTH可以促进成骨细胞增殖,且具有剂量依赖性。PTH联合IGF-1使成骨细胞增殖能力增强、I型胶原蛋白mRNA表达增强。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。结论 PTH与IGF-1均可刺激成骨细胞增殖和分化,IGF-1可促进PTH对成骨细胞的分化、增殖。两者合用其作用增强,有协同促进作用。 展开更多
关键词 重组人甲状旁腺激素1-34 胰岛素样生长因子-1 成骨细胞 增殖 I型胶原蛋白mRNA
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新型携载人胰岛素样生长因子-1纤维屏障膜的制备及其理化和生物性能 被引量：1
3
作者 杨少华 常语宸 +3 位作者 何苗苗 孙睿 吕晓琴 余占海 《合成化学》 CAS CSCD 2017年第6期487-492,502,共7页
通过同轴静电纺丝技术制备携载人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的纤维屏障膜(IGF-1/SF/PLLACL),其结构和性能经SEM,TEM和XRD表征。与非载药同轴静电纺丝纤维膜在表观形貌、理化性能、生物学性能和膜屏障功能等方面进行对比,研究了其在引导... 通过同轴静电纺丝技术制备携载人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的纤维屏障膜(IGF-1/SF/PLLACL),其结构和性能经SEM,TEM和XRD表征。与非载药同轴静电纺丝纤维膜在表观形貌、理化性能、生物学性能和膜屏障功能等方面进行对比,研究了其在引导性骨组织再生中的可应用性。结果显示:纤维膜呈网状结构,IGF-1/SF/PLLACL形成芯壳双层结构;非载药纤维膜的接触角和机械强度均略高于载药组纤维,差异具有统计学意义(P<0.05);载药组与非载药组纤维膜的衍射趋势与聚左旋乳酸聚己内酯晶体相似,丝素蛋白和胰岛素样生长因子-1的加入并未改变其相组成。3 d内IGF-1突释现象严重,之后曲线逐渐平缓,呈缓释状态;载药组细胞活性和碱性磷酸酶活性较非载药组高,略低于IGF-1对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而且两组纤维膜均具有阻挡成纤维细胞长入的屏障功能。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子 同轴静电纺丝 屏障膜 引导性骨组织再生 制备 性能
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重组人生长激素体外干预人肝癌细胞生长及受体表达 被引量：8
4
作者 陆颖芝 李苏宜 +3 位作者 林岩 杨芳 谈华阳 何向明 《中华临床营养杂志》 CAS 2009年第4期224-230,共7页
目的研究体外环境下重组人生长激素（rhGH）对生长激素受体（GHR）不同表达状态的人肝癌细胞株增殖、凋亡及其细胞膜表面GHR密度的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG-2、SMMC7721和QGY-7701，采用免疫细胞化学方法检测这3种肝癌细胞GH... 目的研究体外环境下重组人生长激素（rhGH）对生长激素受体（GHR）不同表达状态的人肝癌细胞株增殖、凋亡及其细胞膜表面GHR密度的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG-2、SMMC7721和QGY-7701，采用免疫细胞化学方法检测这3种肝癌细胞GHR的表达。每种肝癌细胞根据不同处理分为4组：未处理组、50ng／mlrhGH干预组、100ng／mlrhGH干预组、200ng／mlrhGH干预组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染色法、酶联免疫吸附法分析不同浓度rhGH对人肝癌细胞系的细胞生长、增殖、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）分泌等的影响。流式、放射性受体分析方法检测rhGH处理后细胞膜表面GHR表达情况。结果细胞株HepG-2高表达GHR；与未处理组相比，50、100、200ng／mlrhGH干预24h后生长率明显增高为：107．705％、114．181％、107．406％（P〈0．05），48h后生长率明显增高为：109．594％、114．156％、109．292％（P〈0．05）；CFSE荧光强度明显减弱（P〈0．05）；50、100、200ng／mlrhGH干预组24h后下游蛋白IGF-1分别为（236．94±19．07）、（247．16±14．56）、（217．94±33．61）pg／ml，明显高于未处理组的（173．86±27．46）pg/ml（P〈0．05）；50、100、200ng／mlrhGH干预后，流式细胞术检测胞膜表面GHR表达情况，荧光强度较未处理组明显增加（P〈0．05）；放射性受体分析法检测50、100、200ng／mlrhGH干预后胞膜表面GHR位点数（10^3／细胞）分别为：8．44±0．24、9．40±0．51、8．33±0．31，明显多于空白对照组的7．51±0．54（P〈0．05）。细胞株SMMC7721弱表达GHR，细胞株QGY-7701未表达GHR，与未处理组比，rhGH干预组生长率、CFSE荧光强度、下游蛋白IGF-1、GHR表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论体外环境下，rhGH可以促进GHR高表达人肝癌细胞株HepG-2增殖，提高其IGF-1的表达量和增加其胞膜GHR密度；但不促进人肝癌细胞株QGY-7701、SMMC7721增殖，不能使其GHR表达状态发生改变。 展开更多
关键词 重组人生长激素 生长激素受体 胰岛素样生长因子-1 肝癌
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人胰岛素样生长因子-1逆转录病毒载体的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达 被引量：3
5
作者 周海斌 郑祖根 +1 位作者 董启榕 周晓中 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第2期212-215,共4页
目的构建人胰岛素样生长因子-1的逆转录表达载体,建立逆病毒介导的IGF-1基因转移系统。方法用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从人肝细胞克隆IGF-1的基因;经DNA测序分析证实后将目的基因插入逆转录病毒载体LXSN,制备pLXSN-IGF-1表达载体;... 目的构建人胰岛素样生长因子-1的逆转录表达载体,建立逆病毒介导的IGF-1基因转移系统。方法用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从人肝细胞克隆IGF-1的基因;经DNA测序分析证实后将目的基因插入逆转录病毒载体LXSN,制备pLXSN-IGF-1表达载体;借助阳离子脂质体转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆,获取病毒上清;培养人骨髓基质干细胞,用病毒上清感染骨髓基质干细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测目的基因在靶细胞的表达。结果经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了IGF-1逆转录病毒表达载体,转染包装细胞后可以产生IGF-1逆转录病毒,病毒感染人骨髓基质干细胞后能够表达IGF1-1重组蛋白。结论成功建立逆转录病毒载体介导的IGF-1体外表达体系,能够快速、稳定地将IGF-1基因转入骨髓基质干细胞。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 逆转录病毒 骨髓基质干细胞
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OGP和IGF-1对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响 被引量：1
6
作者 姚春宇 孙晓菊 +2 位作者 谢洪 白艳洁 郝冰 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2013年第4期246-249,共4页
目的探讨成骨生长肽（OGP）和胰岛素样生长因子1（IGF-1）对体外培养的人牙周膜细胞（hPDLC）碱性磷酸酶活性的影响。方法不同浓度的OGP和IGF-1与体外培养的人牙周膜细胞单独或联合应用，用碱性磷酸酶活性检测法检测细胞内碱性磷酸酶活... 目的探讨成骨生长肽（OGP）和胰岛素样生长因子1（IGF-1）对体外培养的人牙周膜细胞（hPDLC）碱性磷酸酶活性的影响。方法不同浓度的OGP和IGF-1与体外培养的人牙周膜细胞单独或联合应用，用碱性磷酸酶活性检测法检测细胞内碱性磷酸酶活性。结果OGP可使hPDLC碱性磷酸酶活性明显增强，第3天的最大显效浓度为1×10^-9mol／L，最小显效浓度为1×10^-11mol／L。IGF-1也可增强hPDLC碱性磷酸酶活性，第3天的最大显效浓度为100ng／ml，最小显效浓度为1ng／ml。在第1、3、6天，OGP与IGF1最大显效浓度联合和最小显效浓度联合，对hPDLC碱性磷酸酶活性的增强作用均较对照组增加。结论OGP和IGF．1均可使hPDLC碱性磷酸酶活性提高，在一定范围内呈浓度时间依赖关系，二者联合具有协同效应。 展开更多
关键词 人牙周膜细胞 成骨生长肽 胰岛素样生长因子-1 碱性磷酸酶
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