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Some biological characteristics of hybridomas and parental myelomas cultivated in serum-free medium for long-term period
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作者 李纪良 李英杰 +2 位作者 巢穗 欧阳明辉 彭一兵 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1992年第3期246-250,共5页
It has been developed in this laboratory that a serum-free medium, designated asDMI,is adaptive for long-term culture,freezing and resurgence in liquid nitrogen,and cloningof hybridoma and parental myelomas as well as... It has been developed in this laboratory that a serum-free medium, designated asDMI,is adaptive for long-term culture,freezing and resurgence in liquid nitrogen,and cloningof hybridoma and parental myelomas as well as for cell fusions.In this report,it is describedthat the myeloma cells grown in DMI for more than 3 months maintained their biological charac-teristics such as induction of aseites and subcutaneous somatic tumor in BALB/c mice and toler-ance toward 8-azaguanine,ete..However,the ability of the tumor cells to attach to glass wallwas decreased.The selecting assay of these cells in HAT medium(medium containing hypoxan-thine,aminopterin and thymidine)showed that the death time in DMI was similar to that in theconventional 15% newborn calf serum-supplemented medium(RPS15).The hybridoma cellsadapted in DMI secrete monoclonal antibodies in quantities comparable to those produced inRPS15. 展开更多
关键词 MYELOMA hybridoma SERUM-FREE medium monoclonal antibody
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Establishment of anti-thyrotropin monoclonal antibody hybridoma cell lines with extract of human pituitary gland
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作者 姬秋和 罗敏 +2 位作者 谢晓雁 许曼音 陈家伦 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1997年第3期210-213,共4页
To get the hybridoma cell lines secreting anti-thyrotropin monoclonal antibodies with high affinity and specificity. Methods: BALB/c mice were immunized with extract of human pituitaries. The spleen cells of one immun... To get the hybridoma cell lines secreting anti-thyrotropin monoclonal antibodies with high affinity and specificity. Methods: BALB/c mice were immunized with extract of human pituitaries. The spleen cells of one immunized mouse were fused with mouse myeloma cells in polyethylene glycol and the positive clones were subcloned 3 times. Results: Two hybridoma cell lines which secrete anti-thyrotropin monoclonal antibodies with high affinity and specificity have been collected. The antibodies were of the IgG1 subclass and their maximum binding with thyrotropin was 60% and 45. 1% respectively. Using competitive binding assay,the antibodies were found to direct against different epitopes of human thyrotropin. Conclusion: The extract of human pituitaries could be used to produce monoclonal anti-pituitary hormone antibodies. The two anti-thyrotropin monoclonal antibodies produced in this study could be used in the establishment of a sensitive measurement of human thyrotropin. 展开更多
关键词 MONOCLONAL ANTIBODY THYROTROPIN hybridoma cell lines
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Downregulation of NFAT5 by RNA interference reduces monoclonal antibody productivity of hybridoma cells 被引量:4
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作者 Jihang Ju Ke Zou Hong Xie 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2007年第3期264-270,共7页
Hybridoma 房间在抗体生产率追随者暴露显示增加到张力亢进的条件。然而,内在的机制很好没被理解。在现在的学习,我们假设激活的 T 房间的原子因素 5 (NFAT5 )/tonicityenhancer 绑定蛋白质(TonEBP ) 工作增加 hybridomacells 的抗体... Hybridoma 房间在抗体生产率追随者暴露显示增加到张力亢进的条件。然而,内在的机制很好没被理解。在现在的学习,我们假设激活的 T 房间的原子因素 5 (NFAT5 )/tonicityenhancer 绑定蛋白质(TonEBP ) 工作增加 hybridomacells 的抗体生产率。NFAT5 是 osmosensitive 哺乳动物的抄写因素。然而,它在没在张力亢进的周围被洗的各种各样的器官的无所不在的表示建议 NFAT5 可以也在等渗的条件下面调整细胞生长和功能。在这研究,我们由西方的污点分析在 hybridoma 房间检验了表示 ofNFAT5,并且发现它在张力亢进的媒介显著地增加了。为了推进,在 hybridoma 房间定义 NFAT5 的功能, RNA 干扰技术习惯于 down 在 SGB-8 房间(一根 hybridoma 房间线) 调整 NFAT5 的表示。在等渗的媒介, hybridoma 房间的抗体生产率被 NFAT5while 的 down 规定减少细胞增殖没被影响。这里介绍的结果表明那 NFAT5 不仅在 hybridoma 房间在渗透的压力反应小径起一个重要作用而且为最佳的抗体生产率是必要的。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 单克隆抗体产率 RNA干扰 NFAT5转录因子 减量调节
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血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 罗思思 邓显文 +7 位作者 谢芝勋 张艳芳 张民秀 谢志勤 谢丽基 李孟 王盛 李小凤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3092-3099,共8页
【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白... 【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 penton蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞株
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用p[Tj(a-)]外周血淋巴细胞建立抗-PP1P^(k)杂交瘤细胞株
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作者 郭忠慧 朱自严 +2 位作者 向东 赵俸涌 杨颖 《中国输血杂志》 CAS 2023年第4期294-298,共5页
目的建立分泌抗-PP1P^(k)(又称抗-Tj^(a))的淋巴母细胞样细胞系(lymphoblastoid cell line,LCL)和单克隆杂交瘤细胞株。方法无菌条件下常规方法制备p[Tj(a-)]血型献血者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),用E... 目的建立分泌抗-PP1P^(k)(又称抗-Tj^(a))的淋巴母细胞样细胞系(lymphoblastoid cell line,LCL)和单克隆杂交瘤细胞株。方法无菌条件下常规方法制备p[Tj(a-)]血型献血者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),用EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)转化单个核细胞中的B淋巴细胞,使其增殖形成B淋巴母细胞样细胞克隆。用菠萝酶处理的正常AB型和O型红细胞以及p[Tj(a-)]红细胞筛选培养上清,通过显微吸引分离技术获得分泌特异性抗-PP1P^(k)的LCL,与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合。异源杂交瘤细胞经次黄嘌呤(H)-氨基蝶呤(A)-胸腺嘧啶(T)-脱氧胞嘧啶核苷(D)-毒毛旋花苷(O)即HOTD培养基选择性培养、抗体筛选以及有限稀释亚克隆,建立分泌特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株。结果从O型p[Tj(a-)]献血者外周血B淋巴细胞EBV转化细胞培养上清中,初筛得到与正常红细胞全部凝集,与p[Tj(a-)]红细胞不凝集的单个淋巴母细胞样克隆5E1-E5,初步鉴定培养上清具有抗-PP1P^(k)特异性。随后利用杂交瘤技术,将5E1-E5细胞与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合,建立了持续稳定分泌IgM抗-PP1P^(k)的单克隆杂交瘤细胞株。结论本研究通过EBV转化和杂交瘤技术建立了分泌抗-PP1P^(k)的人单克隆细胞株,这项工作使大规模筛选稀有p[Tj(a-)]血型成为可能,对我国稀有血型库的建设具有重要意义。 展开更多
关键词 p[Tj(a-)] 抗-PP1P^(k) 抗-Tj^(a) 杂交瘤技术 人单克隆抗体
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Big-BALB/c小鼠亚系选育前后的抗体制备效率比较研究
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作者 王丹 张晓璐 +10 位作者 王妍 傅博 王文栋 刘京 张甦寅 武怡荷 吴德国 杜小燕 战大伟 章秀林 李长龙 《实验动物与比较医学》 CAS 2023年第6期612-618,共7页
目的比较利用BALB/c和Big-BALB/c(简称B-BALB/c)两种亚系小鼠制备鼠痘及鼠肝炎单克隆抗体的效率,为今后通过杂交瘤进行体内诱导单克隆抗体制备时实验动物的选择提供参考。方法从常规繁育的BALB/c小鼠群体中选择4周龄体重超过正常动物5%... 目的比较利用BALB/c和Big-BALB/c(简称B-BALB/c)两种亚系小鼠制备鼠痘及鼠肝炎单克隆抗体的效率,为今后通过杂交瘤进行体内诱导单克隆抗体制备时实验动物的选择提供参考。方法从常规繁育的BALB/c小鼠群体中选择4周龄体重超过正常动物5%(后期选种标准为超过10%)的个体进行选种并单独繁育,经10代选育制备B-BALB/c小鼠亚系。选择10~11周龄、雌雄各半的BALB/c小鼠和B-BALB/c小鼠各40只,分别接种用液体石蜡预处理后的鼠痘单克隆抗体杂交瘤细胞株G23或鼠肝炎单克隆抗体杂交瘤细胞株Y15,然后通过体内诱生法获取含单克隆抗体的小鼠腹水,利用间接ELISA法检验抗体效价,按照品系、性别和接种杂交瘤类型对小鼠进行分组,分析腹水产量、抗体效价和抗体产量以评估两种亚系小鼠的抗体制备效率。结果经10代选育后获得的10周龄雄性和雌性B-BALB/c小鼠体重分别比同周龄BALB/c小鼠增加了22.3%和12.8%。抗体制备过程中,B-BALB/c小鼠的耐受力比BALB/c小鼠更好,能够适应二次腹水采集;与BALB/c小鼠相比,B-BALB/c小鼠腹水产量和抗体效价均显著提高,尤以杂交瘤细胞株G23接种组更明显(均P<0.0001)。接种杂交瘤细胞株G23或Y15后,B-BALB/c小鼠的平均抗体产量(14.99×10^(4)U和33.22×10^(4)U)高于BALB/c小鼠(5.33×10^(4)U和19.31×10^(4)U)(均P<0.01)。接种杂交瘤细胞株G23后,B-BALB/c小鼠的平均单位体重的抗体产量(0.55×10^(4)U/g)高于BALB/c小鼠(0.23×10^(4)U/g)(P<0.0001)。接种杂交瘤细胞株Y15后,雌性B-BALB/c和BALB/c小鼠的单位体重抗体产量高于同亚系的雄性B-BALB/c小鼠(均P<0.01)。结论B-BALB/c小鼠在单克隆抗体体内诱导制备中可作为BALB/c小鼠的替代选择,能够达到减少实验动物使用数量、降低人力成本并提高抗体制备效率的目的。 展开更多
关键词 单克隆抗体 制备效率 杂交瘤 BALB/C小鼠 Big-BALB/c小鼠
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抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤增殖的抗TMD5单克隆抗体的筛选和效果评价
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作者 涂小云 熊玉红 +3 位作者 邓爱花 孙春枝 刘阳 陈宇 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第9期1480-1486,共7页
目的:筛选抗爱泼斯坦—巴尔病毒(EBV)潜伏期膜蛋白-1中跨膜结构域5(TMD5)单克隆抗体并评价其抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的效果。方法:人工合成TMD5肽段,用此TMD5肽段免疫BALB/c小鼠;PEG法制备杂交瘤;ELISA法筛选阳性杂... 目的:筛选抗爱泼斯坦—巴尔病毒(EBV)潜伏期膜蛋白-1中跨膜结构域5(TMD5)单克隆抗体并评价其抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的效果。方法:人工合成TMD5肽段,用此TMD5肽段免疫BALB/c小鼠;PEG法制备杂交瘤;ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞;有限稀释法制备单克隆;使用阳性孔单克隆细胞免疫小鼠制备腹水;western blotting法和ELISA法分别对腹水中的单克隆抗体进行鉴定和效价测定;体外CCK-8法测定腹水对Sp2/0细胞存活能力的影响;Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术测定腹水对Sp2/0细胞凋亡率的影响;在体内裸鼠荷瘤实验测定腹水对裸鼠荷瘤生长的影响。结果:成功备制13个杂交瘤,其中3个为阳性杂交瘤,分别为2B11、5D07和6F04,阳性率为23%。以5D07孔单克隆细胞制备的腹水以1∶105稀释后,阳性/阴性腹水单克隆抗体抗TMD5效价比为6.763,阳性/Sp2/0的效价比为5.952,效价最高。与PBS组相比,2B11组和5D07组DB细胞48 h和72 h增殖能力降低,凋亡率升高,裸鼠荷瘤较小(P<0.05),6F04组上述测定指标无明显差异(P>0.05)。与2B11组相比,5D07组DB细胞48 h和72 h增殖能力降低,凋亡率升高,裸鼠荷瘤较小(P<0.05)。结论:通过杂交瘤法筛选出的5D07单克隆抗体抗TMD5效价高,在体外和在体裸鼠荷瘤实验抗EBV+DLBCL淋巴瘤活性良好。 展开更多
关键词 弥漫性大B细胞淋巴瘤 EB病毒 跨膜结构域5 杂交瘤 单克隆抗体
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无血清培养杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺研究
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作者 王蓓 姚慧丽 +5 位作者 庞晓晨 李宜波 周珊 屈浩 刘红芹 廖晓龙 《中国医学装备》 2023年第6期166-171,共6页
目的:在WAVE-25生物反应器上,探讨抗人CD52杂交瘤细胞无血清流加培养方式的工艺条件,通过多种抗体质量检测加以验证,建立规模化的生产工艺,为后期的工艺放大提供参考。方法:探索无血清培养CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺参数... 目的:在WAVE-25生物反应器上,探讨抗人CD52杂交瘤细胞无血清流加培养方式的工艺条件,通过多种抗体质量检测加以验证,建立规模化的生产工艺,为后期的工艺放大提供参考。方法:探索无血清培养CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺参数,在反应过程中依据活细胞密度、活率、pH值、溶氧以及免疫球蛋白G(IgG)含量、葡萄糖(Gluc)、谷氨酰胺(L-Gln)、乳酸(Lac)、铵根离子(NH_(4)^(+))等生长代谢参数进行过程监测和调控;通过蛋白纯化,利用流式细胞术,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)对CD52单克隆抗体纯品(简称CD52纯抗)进行特异性和纯度的检测和鉴定。结果:无血清培养CD52杂交瘤细胞通过流加培养方式在WAVE-252L生物反应器可稳定大规模培养,蛋白纯化后获得的CD52纯抗产率和质量得到显著提高,产率从100 mg/L提高至350 mg/L,提高了3.5倍;纯度从92%提高至100%;相同浓度下荧光强度提高了69%。结论:CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器可大规模培养,通过工艺参数和反应过程中生化指标的调控获得的CD52纯抗产率和质量都有显著的提高,可为后续的大规模化生产提供参考。 展开更多
关键词 无血清培养杂交瘤细胞 WAVE-25生物反应器 工艺探索
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鼠抗人CD28分子单克隆抗体的研制及生物学特性研究 被引量:22
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作者 邱玉华 张学光 +2 位作者 季玉红 居颂光 王廷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期368-370,共3页
目的制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体(mAb),研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株(CD28-T)为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。以体内诱生法... 目的制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体(mAb),研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株(CD28-T)为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。以体内诱生法生产腹水,并以免疫亲和层析法对其纯化。以快速定性试纸法鉴定mAb的Ig亚类,竞争抑制法分析mAb识别的抗原表位,3H-TdR掺入法研究mAb对T细胞的刺激效应。结果成功地获得了5株分泌特异性抗人CD28 mAb的杂交瘤细胞株,鉴定的1株(克隆18G8)属IgG2a,腹水效价(流式细胞仪分析)达1:2 400以上。该mAb能60%阻断标准鼠抗人CD28抗体与相应抗原的结合,提示其识别的抗原表位与标准mAb不完全相同。mAb 18G8可取代B7-1分子介导的协同刺激信号,促进人外周血T细胞增殖(SI=7)。结论18G8是1株功能性mAb,具有重要的研究和应用价值。 展开更多
关键词 CD28分子 协同刺激信号 杂交瘤 单克隆抗体 增殖效应
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双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6种血清型沙门氏菌 被引量:25
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作者 张帅 齐颖颖 +3 位作者 张红星 王怡雯 谢远红 刘慧 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期211-215,共5页
为快速检测冷鲜肉中的沙门氏菌,筛选出1株产抗6种沙门氏菌单克隆抗体的细胞株,运用产生的抗体建立酶联免疫吸附检测方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。实验采用6种血清型致病沙门氏菌制备出混合抗原,对BALB/c小鼠及新西... 为快速检测冷鲜肉中的沙门氏菌,筛选出1株产抗6种沙门氏菌单克隆抗体的细胞株,运用产生的抗体建立酶联免疫吸附检测方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。实验采用6种血清型致病沙门氏菌制备出混合抗原,对BALB/c小鼠及新西兰大白兔进行免疫,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备出抗沙门氏菌单克隆抗体以及多克隆抗体,并建立双抗夹心ELISA体系检测冷鲜肉中沙门氏菌。结果表明,成功筛选出1株能稳定分泌抗沙门氏菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株6E7,保藏编号为CGMCC 10313以及多克隆抗体,效价分别为1∶1.28×106和1∶8.0×105;将多抗作为包被抗体吸附于96孔酶标板上,并用辣根过氧化物酶标记单抗,建立双抗夹心ELISA体系;检测模拟污染肉样中沙门氏菌,其检测限为800 CFU/g;并与其他血清型沙门氏菌、志贺氏菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌均无交叉反应,特异性良好。 展开更多
关键词 沙门氏菌 杂交瘤技术 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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抗人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体的制备 被引量:14
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作者 李容 熊冬生 +4 位作者 邵晓枫 李长辉 许元富 刘嘉 杨纯正 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期193-197,共5页
目的 制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ (Kinaseinsertdomaintontainingreceptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体 (McAb) ,探讨其抑制VEGF诱导的体外活性。方法 在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。融合蛋白经抗E tag柱分离纯化后... 目的 制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ (Kinaseinsertdomaintontainingreceptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体 (McAb) ,探讨其抑制VEGF诱导的体外活性。方法 在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。融合蛋白经抗E tag柱分离纯化后免疫Balb/c小鼠 ,采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区McAb ,采用ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性 ,并测定单克隆抗体对VEGF1 65刺激脐静脉内皮细胞株ECV30 4增殖的中和活性。结果 成功筛选出一株能稳定分泌抗KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (1D3) ,其分泌抗体亚类为IgG1。该McAb可明显阻断VEGF1 65对脐静脉内皮细胞株ECV30 4的刺激增生作用。结论 抗人血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外Ⅲ区McAb可通过封闭KDR而抑制VEGF活性 ,McAb 展开更多
关键词 单克隆抗体 制备 血管内皮细胞生长因子受体 杂交瘤
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5株鼠抗人CD28单克隆抗体的研制及生物学特性的研究 被引量:11
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作者 孙中文 陶然 +4 位作者 陆艳红 石云杰 於葛华 邱玉华 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期406-410,共5页
目的:制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体,研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法:以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株,采用B... 目的:制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体,研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法:以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行单抗的研制;以快速定性试纸法鉴定单抗亚类;腹水诱生法和免疫亲和层析法进行单抗的制备和纯化;经间接免疫荧光法分析单抗对不同细胞膜表面CD28分子的识别;采用竞争抑制法分析单抗识别的抗原位点;利用3H-TdR掺入法分析单抗对PBTC的刺激效应和免疫荧光法分析PBTC活化前后的表型变化。结果:成功获得5株鼠抗人CD28功能性单克隆抗体,分别命名为2D5、2F5、3B6、3F8和8G8,其中2D5为IgG2a亚类,其余均为IgG1亚类;流式细胞仪分析结果显示,5株单抗均能良好识别CD28-T、U266、XG1和Jurkat细胞表面的CD28分子;竞争抑制试验表明,2D5和8G8能完全阻断标准抗人CD28单抗与U266膜CD28分子的结合,其余3株为部分阻断;3H-TdR掺入法实验结果表明,单抗8G8联合激发型CD3单抗能明显促进PBTC的增殖,刺激指数为7.4,活化细胞CD4、CD25、ICOS、41BB及OX40分子的表达上调。结论:5株单抗均为抗人CD28单克隆抗体,具有重要的基础研究及潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 CD28 杂交瘤 单克隆抗体 增殖效应 协同刺激分子
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两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究 被引量:8
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作者 樊一笋 张学光 +2 位作者 邱玉华 朱华亭 於葛华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期388-391,共4页
目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能... 目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能。结果 :经表型分析、Westernblot和竞争抑制试验 ,证实mAbB1、mAb4F1是识别人CD4 0L分子的特异性单抗 ,且识别的位点不同 ;mAbB1、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD4 0L TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应。结论 :成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD4 0L单克隆抗体的杂交瘤 (1B1、4F1) ,这两株单抗对CD4 0L的生物学功能具有明显的阻断作用 。 展开更多
关键词 生物学特性 CD40L 杂交瘤 单克隆抗体 DAUDI细胞 混合淋巴细胞反应
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氟喹诺酮类药物多残留酶联免疫检测方法的建立 被引量:22
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作者 李新朋 姜金庆 +5 位作者 钱爱东 王自良 范国英 单晓峰 康元环 李艺 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期4726-4735,共10页
【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物... 【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物性食品中FQs多残留检测奠定基础。【方法】环丙沙星(CPFX)羧基上引入氨基丁酸后为半抗原(CPFX-A),质谱鉴定;分别用碳二亚胺法(DDC)和混合酸干法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原(CPFX-A-BSA)和包被原(CPFX-A-OVA),紫外和红外光谱鉴定是否偶联成功;CPFX-A-BSA免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和ic ELISA方法测定多抗血清效价和敏感性,选取抗血清效价高和敏感性好的鼠用于细胞融合;NS0细胞和脾细胞按1﹕5比例在PEG-1500作用下融合,筛选抗FQs杂交瘤细胞株,并进行效价、亚型、敏感性和交叉反应率鉴定;体内诱生腹水法制备m Ab,液体石蜡作为诱导剂,每只鼠注射108个杂交瘤细胞;选敏感性和广谱特异性好的腹水m Ab,建立ic ELISA标准曲线,对ic ELISA检测方法优化,在鸡肉中添加10种FQs进行测定,将测定结果与HPLC法比较,用SPSS 17.0软件进行显著差异性分析。【结果】半抗原改造和人工抗原合成成功;3只鼠血清效价均达到1﹕1.28×104以上,2号鼠血清效价最高(1﹕2.56×104),且IC50值最低(12.92 ng·m L-1),选择2号鼠作为细胞融合用鼠;4次亚克隆筛选并鉴定后获得3株敏感广谱特异的杂交瘤细胞,分别命名为2H5、3D11、4F4,细胞上清效价分别为1﹕1 600、1﹕1 600和1﹕800,腹水效价分别为1﹕1.6×106、1﹕8.2×105和1﹕8.2×105;ic ELISA方法的包被原浓度为1μg·m L-1,5%猪阴性血清4℃包被过夜,单抗1﹕40 000稀释,山羊抗鼠酶标二抗(Ga MIg G-HRP)1﹕8 000稀释;反应温度均为37℃,标准品与单抗同时加入反应15 min,洗板后加二抗反应25 min;显色10 min,2H5细胞株腹水敏感性和广谱特异性最好,2H5的线性回归方程为y=-28.022x+56.219,R2=0.9 782,对10种FQs的IC50值分别为环丙沙星(CPFX)1.67ng·m L-1、诺氟沙星(NOR)1.82 ng·m L-1、培氟沙星(PEF)1.97 ng·m L-1、恩诺沙星(ENR)1.54 ng·m L-1、单诺沙星(DAN)2.79 ng·m L-1、洛美沙星(LOM)3.38 ng·m L-1、氧氟沙星(OFL)5.50 ng·m L-1、麻保沙星(MAR)4.40 ng·m L-1、沙拉沙星(SAR)11.76 ng·m L-1、二氟沙星(DIF)13.60 ng·m L-1,与10种FQs的交叉反应率为12.3%—108.4%,与非FQs交叉反应率均低于0.01%,对10种FQs的检测限(LODs)为0.09 ng·m L-1—0.64 ng·m L-1。ic ELISA法鸡肉中10种FQs的回收率为80.5%—91.8%,HPLC法的回收率为85.1%—95.7%,二者变异系数均低于10.0%;两种检测方法差异不显著(P>0.05)。【结论】该试验获得了高效价、敏感、广谱特异性的m Abs,建立的ic ELISA方法可用于同时检测鸡肉中10种FQs。 展开更多
关键词 环丙沙星 氟喹诺酮类药物 杂交瘤细胞株 广谱特异性单克隆抗体 间接竞争ELISA
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抗人载脂蛋白E单克隆抗体制备及免疫学特性的研究 被引量:17
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作者 张东升 夏辉明 +3 位作者 赵明跃 吕新跃 夏福臻 刘守彦 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期229-233,共5页
应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10^(-5)~2×10^(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反... 应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10^(-5)~2×10^(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反应,制备免疫亲和层析柱纯化了ApoE,单抗相加试验和双抗体夹心试验证明,两株MeAb识别ApoE的两个不同抗原决定簇,抗体亚型均为IgG_1型。应用ELISA双抗体夹心法测定了人血清ApoE含量。 展开更多
关键词 单克隆抗体 杂交瘤 载脂蛋白E
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抗庆大霉素单克隆抗体的制备及其初步应用 被引量:9
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作者 职爱民 李青梅 +7 位作者 刘庆堂 刘宣兵 杨继飞 杨苏珍 柴书军 杨艳艳 邓瑞广 张改平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2584-2589,共6页
【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE... 【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定,;应用阻断ELISA试验原理组装GM-Kit,并对鲜奶中添加的GM标准样品进行测定。【结果】SDS-PAGE电泳鉴定表明BSA-GM人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-3;其中2号小鼠血清GM抑制效价较高且IC50最低,达17.28 ng.mL-1,融合后筛选出5E2-D7、1A3-A9、5E2-A12和2A6-B5共6株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1﹕1600、1﹕800、1﹕800和1﹕800,腹水效价分别为1﹕2.05×107、1﹕5.12×106、1﹕2.56×106和1﹕2.56×106,5E2-D7株对GM的IC50为0.30 ng.mL-1,与链霉素、卡那霉素等其他氨基糖苷类抗生素无交叉反应性;检测鲜牛奶样的平均添加回收率分别为96.0%,平均变异系数均低于15%。【结论】本试验获得了高效价、敏感、特异的抗GM mAb,为GM残留检测奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 庆大霉素 单克隆抗体 杂交瘤 初步应用
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单增李斯特菌单克隆抗体的研制及特性分析 被引量:11
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作者 齐颖颖 吴萌 +3 位作者 王怡雯 刘慧 谢远红 张红星 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期151-155,共5页
运用辐照法和热灭菌法自制单增李斯特菌的免疫原、检测原,运用尾静脉免疫方法免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备得到抗单增李斯特菌的单克隆抗体,并对其进行免疫学特性分析。结果表明,成功筛选4株能稳定分泌抗单增李斯特... 运用辐照法和热灭菌法自制单增李斯特菌的免疫原、检测原,运用尾静脉免疫方法免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备得到抗单增李斯特菌的单克隆抗体,并对其进行免疫学特性分析。结果表明,成功筛选4株能稳定分泌抗单增李斯特菌的单克隆杂交瘤细胞株,腹水抗体效价为1∶102 400~1∶409 600,免疫球蛋白亚型为Ig G1、Ig2a、Ig2b,亲和力常数在1×107~1×1010L/mol;经测定分析出最佳配对抗体;并与绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌及大肠杆菌、沙门氏菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等菌属无明显交叉反应;进行双抗体夹心ELISA方法对模拟单增李斯特菌污染肉样检测其灵敏度达1×103 CFU/m L。获得高效价、特异性强、灵敏度高的单克隆抗体,为食品中致病菌单增李斯特菌残留的免疫学检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 杂交瘤 单克隆抗体
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囊素和法氏囊超滤物对杂交瘤细胞抗体分泌的影响 被引量:12
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作者 缪德年 陈溥言 +4 位作者 缪德年 张秀根 姚惠娟 樊生超 张德明 《上海农业学报》 CSCD 2002年第3期92-95,共4页
以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过间接ELISA法测定抗体的OD490值。结果表明,随着囊素和法氏囊超滤物浓度的增加,细胞抗体分泌逐渐增加,当囊素浓度为50μg/mL、超滤物浓度为2.5mg/mL时,OD490值达到最高,分别比对照组增加8.83%和... 以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过间接ELISA法测定抗体的OD490值。结果表明,随着囊素和法氏囊超滤物浓度的增加,细胞抗体分泌逐渐增加,当囊素浓度为50μg/mL、超滤物浓度为2.5mg/mL时,OD490值达到最高,分别比对照组增加8.83%和5.72%(P<0.01);随着浓度的继续增加,OD490值开始下降。同时观察到,处理48h后,500μg/mL囊素组和5mg/mL法氏囊超滤物组有部分细胞死亡,1000μg/mL囊素组及40,20,10mg/mL法氏囊超滤物组细胞全部死亡,其它组细胞正常。动态试验表明,加入50μg/mL囊素后3h,OD490值增加最高,达24.93%(P<0.01)。因此,囊素和法氏囊超滤物能直接与杂交瘤细胞作用,并提高其抗体分泌水平。 展开更多
关键词 囊素 法氏囊超滤物 杂交瘤细胞 单克隆抗体 分泌
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微孔法分离大鼠骨髓内皮祖细胞 被引量:10
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作者 王佐 童中艺 +4 位作者 周晓峰 姜志胜 唐朝克 宋砚明 田永凤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期754-759,共6页
用一种杂交瘤皿,根据内皮祖细胞集落形成单位(endothelial progenitor cells colony-forming units,EPCs-CFUs)的形态特征和EPCs表面特异性标记物分离EPCs.取大鼠股骨、胫骨骨髓,将全骨髓接种在聚苯乙烯制作的杂交瘤皿上,培养4~7天后出... 用一种杂交瘤皿,根据内皮祖细胞集落形成单位(endothelial progenitor cells colony-forming units,EPCs-CFUs)的形态特征和EPCs表面特异性标记物分离EPCs.取大鼠股骨、胫骨骨髓,将全骨髓接种在聚苯乙烯制作的杂交瘤皿上,培养4~7天后出现CFUs,将这些集落分别挑选出来后,取单个集落的部分细胞免疫荧光鉴定EPCs表面特异性标记物CD133/VEGFR-2.CD133/VEGFR-2双阳性即为EPCs-CFUs.与此对应的余下一部分继续传代增殖,流式细胞术鉴定CD133/VEGFR-2/CD34,并把此方法命名为微孔法.发现接种后第4天,显微镜下可见明显的CFUs.免疫荧光鉴定大约7%的CFUs为CD133+/VEGFR-2+,进一步传代培养,流式细胞术鉴定CD133+/VEGFR-2+/CD34+细胞纯度达70%以上.传代细胞可在体外形成血管样结构,并表达内皮细胞特异性标记物vWF.结果表明通过微孔法能成功地从大鼠骨髓分离到EPCs. 展开更多
关键词 杂交瘤皿 分离 大鼠骨髓 内皮祖细胞 微孔法
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抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:7
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作者 张萃 卢文菊 +3 位作者 梅俪凡 黄超贤 李红枝 刘晓波 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期318-321,共4页
目的制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定。方法采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克... 目的制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定。方法采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;并经有限稀释法克隆化培养获得杂交瘤细胞株;采用秋水仙素阻断法鉴定杂交瘤细胞株染色体。结果获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单克隆抗体,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型,染色体均在89±7条的范围内;相对亲和力结果 F11为6μg/ml,A2、H8为12.5μg/ml。结论抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备,为TRPC6的免疫学检测方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 TRPC6 多肽 单克隆抗体 杂交瘤
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