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弓形虫MIC1蛋白在杆状病毒系统中的表达及活性分析
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作者 李响 张小涵 +5 位作者 李美琪 陈冉 冯颖 李林 桑晓宇 杨娜 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期210-218,共9页
为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养... 为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养3代获得重组杆状病毒株。结果显示,Sf9细胞在感染后的第3天出现典型的细胞病变;间接免疫荧光和Western blot试验结果表明MIC1重组蛋白质在感染的Sf9细胞中成功可溶性表达;纯化的MIC1重组蛋白质不仅具有结合唾液酸乳糖的能力,同时能够刺激Balb/c小鼠产生较高水平的特异性抗体(>1∶25600)。以上结果表明,通过杆状病毒表达系统可获得具有生物学活性的弓形虫MIC1重组蛋白质。 展开更多
关键词 弓形虫 MiC1蛋白 杆状病毒系统 活性分析
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IL-33缺陷调节小鼠抗弓形虫感染的CD8^(+)T细胞应答
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作者 何小丽 陈杏婷 +5 位作者 吴林青 潘垚 陈舒玲 韩艳非 陈义忠 章涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期550-555,共6页
目的探讨IL-33缺陷(IL-33^(-/-))对弓形虫感染小鼠的炎症反应和CD8^(+)T细胞功能的影响。方法C57BL/6野生型(Wild-type,WT)和IL-33^(-/-)小鼠分别设感染组和对照组,建立弓形虫感染模型,记录小鼠死亡时间,绘制生存曲线;分别取感染后48 h... 目的探讨IL-33缺陷(IL-33^(-/-))对弓形虫感染小鼠的炎症反应和CD8^(+)T细胞功能的影响。方法C57BL/6野生型(Wild-type,WT)和IL-33^(-/-)小鼠分别设感染组和对照组,建立弓形虫感染模型,记录小鼠死亡时间,绘制生存曲线;分别取感染后48 h、96 h各组小鼠外周血及肝、脾组织,HE染色观察组织病理变化;微量样本多指标流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)及ELISA检测血浆炎症因子(IL-12P70、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、IL-6及IL-4)水平;qPCR检测小鼠脾细胞中弓形虫速殖子表面抗原-1(SAG-1)的mRNA水平;流式细胞术分析脾脏CD8^(+)T细胞穿孔素、颗粒酶和IFN-γ水平。结果与WT感染组小鼠比较,96 h时IL-33^(-/-)感染组小鼠脾脏SAG-1 mRNA表达降低(F=13.96,P<0.05),肝、脾组织的炎症改变较轻,生存时间延长(χ^(2)=6.87,P<0.01);与WT感染组小鼠比较,感染96 h时IL-33^(-/-)感染组血浆IL-4浓度升高较高(F=328.32,P<0.01),而TNF-α、IFN-γ、MCP-1均明显较低(F TNF-α=32.66、F IFN-γ=59.32、F MCP-1=43.78,均P<0.01);感染96 h,IL-33^(-/-)感染组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞穿孔素(F=574.20,P<0.01)、颗粒酶(F=14.68,P<0.05)和IFN-γ(F=15.22,P<0.05)表达均高于WT感染组。结论在小鼠急性弓形虫感染中,IL-33抑制脾脏CD8^(+)T细胞应答,促进全身炎症反应。 展开更多
关键词 iL-33 弓形虫 感染 T细胞 炎症反应 小鼠
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弓形虫TR与ROP18双基因缺失及对NF-κB-IL-12-ROS信号通路相关因子的影响
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作者 耿小玲 陈芸 +4 位作者 刘旗 张曼玉 蒋蔚 段倩玉 王权 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期1-12,共12页
为探究弓形虫的TR与ROP18基因对NF-κB-IL-12-ROS信号通路的影响和抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TR与ROP18双基因敲除株(TR-ROP18-KO)。通过检测TR/ROP18单、双基因缺失株氧化应激水平以及对小鼠巨... 为探究弓形虫的TR与ROP18基因对NF-κB-IL-12-ROS信号通路的影响和抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TR与ROP18双基因敲除株(TR-ROP18-KO)。通过检测TR/ROP18单、双基因缺失株氧化应激水平以及对小鼠巨噬细胞活性氧(ROS)水平影响的研究发现,TR-ROP18-KO株引发的氧化应激水平极显著高于RH株(P<0.01),但与TR单基因缺失株无显著差异(P>0.05);利用RT-PCR检测TR/ROP18单、双基因缺失株感染小鼠巨噬细胞产生的NF-κB、IL-12 mRNA水平和ELISA检测小鼠血清中IL-12的水平发现,TR-ROP18-KO株感染组虽然极显著高于RH株感染组(P<0.01),但TR-ROP18-KO株感染组却未显著高于TR-KO株感染组(P>0.05),表明弓形虫TR与ROP18基因在抗宿主ROS损伤中不存在协同作用。本研究利用TR与ROP18双基因缺失株能够明确解析这两个基因在抗宿主ROS损伤中有无协同作用,为深入研究这两个基因在I型弓形虫免疫逃避途径中的协同作用奠定基础,这也为后续弓形虫双基因功能协同作用的研究提供了一个新思路。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 CRiSPR/Cas9 TR ROP18 免疫逃避
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AIDS合并弓形虫脑炎患者MRI影像特征的临床观察
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作者 郭家辰 任美吉 +1 位作者 李莉 李宏军 《北京医学》 CAS 2023年第12期1049-1052,1057,共5页
目的 探讨AIDS合并弓形虫脑炎患者的MRI表现及影像特征。方法 选取2016—2022年首都医科大学附属北京佑安医院AIDS合并弓形虫脑炎患者11例。根据经抗弓形虫治疗后神经系统症状是否好转分为预后良好组(9例)和预后不良组(2例),比较两组患... 目的 探讨AIDS合并弓形虫脑炎患者的MRI表现及影像特征。方法 选取2016—2022年首都医科大学附属北京佑安医院AIDS合并弓形虫脑炎患者11例。根据经抗弓形虫治疗后神经系统症状是否好转分为预后良好组(9例)和预后不良组(2例),比较两组患者的MRI影像特征。结果 11例AIDS合并弓形虫脑炎患者中男10例,女1例,年龄25~64岁,平均(44.3±14.7)岁。弓形虫脑炎病灶为多发、广泛分布,典型病灶为结节状,周围常伴有水肿,病灶表现为T1加权像(T1 weighted image, T1WI)低信号,T2加权像(T2 weighted image, T2WI)高信号,增强呈环状强化和(或)“偏心性靶征”。预后不良组T1WI病灶内出现高信号比例及病灶直径>2 cm比例高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AIDS合并弓形虫脑炎患者MRI影像表现具有一定特点,病灶直径>2 cm和病灶内出血征象可提示预后不良。 展开更多
关键词 AiDS 弓形虫脑炎 MRi影像特征
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Association of Host Interferon-γ Gene Polymorphism with Toxoplasma gondii Infection in Pregnant Women of Bangladesh
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作者 Nasrin Akter Sonia Tamanna +3 位作者 Molie Rahman Atiqur Rahman Akm Mahbub Hasan Taibur Rahman 《American Journal of Molecular Biology》 2023年第3期156-169,共14页
Human toxoplasmosis is caused by the intracellular protozoan parasite Toxoplasma gondii. Although T. gondii infection is generally asymptomatic for most of the immunocompetent adults, severe complications may occur pa... Human toxoplasmosis is caused by the intracellular protozoan parasite Toxoplasma gondii. Although T. gondii infection is generally asymptomatic for most of the immunocompetent adults, severe complications may occur particularly in pregnant women and immunocompromised individual. Host cell immunity plays a critical role in parasite differentiation and persistence in the host. Therefore, genetic polymorphism in the host immune genes, for instance interferon-γ gene could be linked with possibility of T. gondii infection. The objective of the study was to verify the link between the single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the IFN-γ gene of pregnant women and T. gondii infection through correlating with anthropometric and sociodemographic parameters. In this study, ninety-two (N = 92) pregnant women (16 - 40 years) and healthy controls (N = 95) with similar age ranges were included. Among them, 25% (n = 23) pregnant women were seropositive for T. gondii IgG antibodies by Rapid Test Assay. Allelic and genotypic frequencies of IFN-γ +874T/A (rs2430561) SNPs were evaluated by using ARMS-PCR. The distribution of the A and T alleles in the specific position of the IFN-γ gene in the T. gondii-infected pregnant women and the control groups did not differ significantly, according to the data. However, we found a higher frequency (13.04%) of A/A genotype in T. gondii infected pregnant women as compared to non-infected individuals (8.70%), demonstrating that T. gondii infection susceptibility may be increased by homozygosity for the A allele. Further studies are to be needed to find out the link between host gene polymorphism and T. gondii infection in Bangladesh. 展开更多
关键词 T. gondii Pregnant Women SEROPREVALENCE iFN-γ Gene Polymorphism
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Predicting ADME/Tox properties of hydroxytyrosol in the leaves of Olea europaea L.
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作者 Suzhen Jiang Xinghua Liu +3 位作者 Hongjian Yu Shihong Li Jingming Jia Anhua Wang 《Asian Journal of Traditional Medicines》 CAS 2023年第2期45-53,共9页
In order to study the possibility of hydroxytyrosol(HT)as a drug,we used SwissADME system to predict ADME of HT and pkCSM system to predict Tox of HT.The results show that hydroxytyrosol meets the Lipinski’s five pri... In order to study the possibility of hydroxytyrosol(HT)as a drug,we used SwissADME system to predict ADME of HT and pkCSM system to predict Tox of HT.The results show that hydroxytyrosol meets the Lipinski’s five principles of drug-like properties.With strong efficacy and pharmacological activity,HT has high drug-likeness degree.With good bioavailability,it can be easily absorbed by the gastrointestinal tract,though not absorbed by skin.Hydroxytyrosol has not only a strong potency and pharmacological activity,but also no liver toxicity and skin allergy.Tox data predicts that it has mutagenic potential,which may be the result of overreduction. 展开更多
关键词 Olea europaea L. hydroxytyrosol(HT) ADEM/Tox pharmacological activity
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弓形虫TgERP基因的原核表达及间接ELISA方法的建立
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作者 苗书魁 王陆宝 +5 位作者 陆桂丽 汪萍 魏玉荣 夏俊 魏婕 米晓云 《中国动物检疫》 CAS 2023年第8期89-93,共5页
为原核表达弓形虫的TgERP基因,参照GenBank中弓形虫GTl株的TgERP基因序列设计引物,通过PCR扩增分离的一株猫源弓形虫(TC株)的TgERP基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中,通过IPTG诱导表达蛋白,应用带His标签的重力柱纯化蛋白,采用BCA... 为原核表达弓形虫的TgERP基因,参照GenBank中弓形虫GTl株的TgERP基因序列设计引物,通过PCR扩增分离的一株猫源弓形虫(TC株)的TgERP基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中,通过IPTG诱导表达蛋白,应用带His标签的重力柱纯化蛋白,采用BCA方法测定蛋白浓度,利用重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果成功表达了TgERP蛋白,且蛋白以上清形式表达,相对分子质量约16 ku。将纯化的重组蛋白pET-28-TgERP作为诊断抗原,初步建立了间接ELISA方法;利用间接ELISA、改良凝集试验(MAT)和间接血凝试验(IHA)3种方法分别检测472份羊、犬、猫血清样品,发现阳性率分别为1.0%、3.8%、3.4%,验证了建立的间接ELISA方法可区分动物感染弓形虫的途径。本研究为弓形虫病快速诊断方法的建立和疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 TgERP基因 原核表达 反应活性
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不同厂家试剂盒检测高致畸病原体弓形体IgM、巨细胞病毒IgM以及风疹病毒IgM的效果分析
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作者 杨小兵 李玉叶 +3 位作者 曾勇 刘明凤 聂俊瑜 张雪玲 《中国社区医师》 2023年第14期76-78,共3页
目的:分析不同厂家试剂盒检测高致畸病原体(TORCH)弓形体IgM(TOX-IgM)、巨细胞病毒IgM(CMV-IgM)、风疹病毒IgM(RV-IgM)的效果。方法:分别采用罗氏、雅培以及亚辉龙厂家生产的化学发光免疫检测试剂盒,完成132例孕前妇女的血清TOX-IgM、CM... 目的:分析不同厂家试剂盒检测高致畸病原体(TORCH)弓形体IgM(TOX-IgM)、巨细胞病毒IgM(CMV-IgM)、风疹病毒IgM(RV-IgM)的效果。方法:分别采用罗氏、雅培以及亚辉龙厂家生产的化学发光免疫检测试剂盒,完成132例孕前妇女的血清TOX-IgM、CMV-IgM和RV-IgM检测。比较3个厂家试剂盒检查结果的阳性率,分析亚辉龙试剂盒与罗氏、雅培试剂盒检测结果的一致性。结果:罗氏、雅培、亚辉龙试剂盒检测TOX-IgM、CMV-IgM、RV-IgM的阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与罗氏生产的试剂盒比较,亚辉龙试剂盒在检测TOX-IgM、CMV-IgM、RV-IgM时的Kappa值分别为0.663、0.796、0.494,具有较高一致性;与雅培生产的试剂盒比较,亚辉龙在检测TOX-IgM和RV-IgM时的Kappa值分别为1.000和0.663,具有高度一致性,而在检测CMV-IgM时,Kappa值为0.385,仅具有一般一致性。结论:国内亚辉龙生产的TORCH IgM检测试剂盒在供应稳定性及性价比上具有较大的优势,与进口试剂盒检测效果的差异甚微,综合考虑,可以将其替代进口试剂盒,在临床广泛应用. 展开更多
关键词 高致畸病原体 弓形体igM 巨细胞病毒igM 风疹病毒igM
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我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对小鼠组织中微量金属元素代谢的影响
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作者 幸忆恩 蔡亦红 《热带病与寄生虫学》 CAS 2023年第4期210-215,共6页
目的观察弓形虫Chinese 1优势基因型(ToxoDB#9)弱毒株TgCtwh6感染小鼠后,其体内微量金属元素的留存情况,探讨TgCtwh6感染对小鼠各组织金属元素代谢的影响。方法建立TgCtwh6感染小鼠急性期模型(急性期组)和慢性期模型(慢性期组),同时设... 目的观察弓形虫Chinese 1优势基因型(ToxoDB#9)弱毒株TgCtwh6感染小鼠后,其体内微量金属元素的留存情况,探讨TgCtwh6感染对小鼠各组织金属元素代谢的影响。方法建立TgCtwh6感染小鼠急性期模型(急性期组)和慢性期模型(慢性期组),同时设置对照组,实验小鼠6只/组。运用电感耦合等离子体质谱仪检测不同组别小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏内的Fe^(2+)、Cu^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Mg^(2+)等金属元素水平,Western blot检测不同组别小鼠肝脏内金属元素转运体ZIP 8(Zrt-and Irt-like protein 8)的蛋白表达,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性检测试剂盒检测SOD活性,对不同组别的检测结果进行统计分析。结果相对于对照组,急性期组和慢性期组小鼠肝脏内Fe^(2+)、Mn^(2+)和Zn^(2+)含量均上调[(76.348±11.613)μg/g和(88.545±10.555)μg/g vs.(52.388±6.165)μg/g;(1.298±0.065)μg/g和(1.405±0.066)μg/g vs.(1.141±0.110)μg/g;(17.506±0.824)μg/g和(17.031±0.907)μg/g vs.(15.650±0.305)μg/g];脾脏内Fe^(2+)、心脏内Cu^(2+)和Zn^(2+)含量均下调[(128.519±13.531)μg/g和(120.309±10.023)μg/g vs.(147.720±15.303)μg/g;(5.189±0.255)μg/g和(5.631±0.485)μg/g vs.(6.440±0.740)μg/g;(17.034±0.974)μg/g和(16.858±0.953)μg/g vs.(19.258±0.965)μg/g]。急性期组小鼠心脏内Mn^(2+)和Mg^(2+)含量均低于对照组[(0.605±0.052)μg/g vs.(0.686±0.051)μg/g;(153.346±3.221)μg/g vs.(163.012±8.204)μg/g]。与对照组相比,急性期组和慢性期组小鼠肝脏ZIP 8蛋白表达均上调,且慢性期组高于急性期组(F=35.240,P<0.05)。对照组、急性期组和慢性期组小鼠肝脏SOD活性分别为(14.041±0.734)U/mL、(16.463±0.616)U/mL和(15.859±0.780)U/mL,组间差异有统计学意义(F=9.370,P<0.05)。结论TgCtwh6急性和慢性感染状态下小鼠不同组织中部分微量金属元素含量会发生上调或者下调,同时出现ZIP 8表达上调激活SOD活性,从而发挥肝脏保护作用。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 小鼠 Chinese 1基因型 微量金属元素 肝脏
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^(125)I-弓形虫感染孕鼠后胎盘示踪研究 被引量:19
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作者 王海琦 邵亚男 +1 位作者 毕玉澄 梅蔚宁 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1996年第1期6-9,共4页
本文应用同位素125I-Iodogen标记法,将125I标记在弓形虫速殖子细胞膜上,125I-弓形虫经鼠尾静脉再感染孕鼠,分别在不同时间动态观察胎盘及胎鼠体内受染组织的放射量,并应用放射自显影示组织细胞的病理改变,示... 本文应用同位素125I-Iodogen标记法,将125I标记在弓形虫速殖子细胞膜上,125I-弓形虫经鼠尾静脉再感染孕鼠,分别在不同时间动态观察胎盘及胎鼠体内受染组织的放射量,并应用放射自显影示组织细胞的病理改变,示踪125I-弓形虫定位侵袭的状态。结果表明:125I-弓形虫对胎盘及胎鼠的感染率分别为85.8%和76.8%,胎盘感染率明显高于胎鼠(P<0.01),125I-弓形虫在胎盘组织内呈簇状或点状分布,见受侵细胞崩解、留下细胞残迹或呈絮状物,导致局灶性组织缺损,周围炎性细胞的增殖等征象,为弓形虫孕妇感染易致早产、流产、死胎和先天性畸形等提供病理基础。 展开更多
关键词 弓形体 胎盘 放射自显影 碘^125
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弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达 被引量:16
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作者 江涛 周艳琴 +3 位作者 刘琴 聂浩 姚宝安 赵俊龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期587-591,共5页
根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coliDH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序... 根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coliDH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。然后阳性重组质粒转化入E.coliBL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AJ132530)的同源性达99.6%,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别。说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 龚地弓形虫 MiC3 基因克隆 表达
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刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆表达与免疫原性分析 被引量:14
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作者 刘转转 王海龙 +3 位作者 殷国荣 马广源 张建中 凡振伟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期334-337,共4页
目的对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PC... 目的对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,重组蛋白用Western blotting分析其免疫原性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出591bp的TgPrx基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPrx;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达。重组蛋白的相对分子量约32kDa,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别。结论RH株刚地弓形虫peroxiredoxin可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 PEROXiREDOXiN 克隆 原核表达 免疫原性
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检测弓形虫IgM抗体的3种试剂盒的比较分析 被引量:15
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作者 张述义 何艳燕 +3 位作者 曹琳 潘彩娥 蒋守富 魏梅雄 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期72-74,共3页
目的 评价用于检测弓形虫IgM抗体的 3种市售的试剂盒。 方法 用 3种试剂盒检测 12 5份孕妇的血清 ,比较各试剂盒的阳性检出率、敏感性、特异性和试验效率等。结果  12 5份血清经Bi、Di和So试剂盒检测 ,分别有 12 .8%、15 .2 %和 12 .... 目的 评价用于检测弓形虫IgM抗体的 3种市售的试剂盒。 方法 用 3种试剂盒检测 12 5份孕妇的血清 ,比较各试剂盒的阳性检出率、敏感性、特异性和试验效率等。结果  12 5份血清经Bi、Di和So试剂盒检测 ,分别有 12 .8%、15 .2 %和 12 .0 %阳性 ,3种试剂盒检测血清的阳性率之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Bi、Di和So试剂盒的敏感性和特异性分别为88.9%与 10 0 %、10 0 %与 99.1%和 83.3%与 10 0 % ,试验效率分别为 98.4%、99.2 %和 97.6 %。用WHO国际生物标准化实验室的抗弓形虫血清标准品定量测得 3种试剂盒的灵敏度都是 0 .31IU/ml。Bi试剂盒与Di试剂盒的总符合率为 97.6 % ;Di试剂盒与So试剂盒的总符合率为 96 .8% ;Bi试剂盒与So试剂盒的总符合率为 97.6 %。结论 这 3种试剂盒都能用于弓形虫IgM抗体的常规普筛和血清学诊断。 展开更多
关键词 弓形虫 iGM ELiSA 试剂盒 抗体
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PCR-ELISA检测弓形虫实验研究 被引量:15
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作者 李健 杨秀珍 +1 位作者 梁东春 刘佩梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期356-359,355,共5页
目的建立快速、敏感、特异、稳定的PCR-ELISA方法,并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交,再通过酶免显色反应测出OD值,以判断弓形虫感染情况。测定该方法的敏感性、特异性及稳定性... 目的建立快速、敏感、特异、稳定的PCR-ELISA方法,并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交,再通过酶免显色反应测出OD值,以判断弓形虫感染情况。测定该方法的敏感性、特异性及稳定性。再分别以104、103弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠,取全血、肝组织用PCR-ELISA检测小鼠感染情况。结果本实验中,PCR-ELISA方法的检测阈值为20fg弓形虫DNA,其灵敏度是电泳法的10倍,并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。同一样本重复测试5次,结果经统计学检验,一致性良好(Alpha=0.72)。检测感染动物肝组织及全血标本,104、103组分别在感染后第二d、第三d即可测出阳性,两种标本的阳性检出效率无统计学差异(P>0.05)。结论PCR-ELISA是一种快速、敏感、特异、稳定的检测方法,可试用于临床弓形虫病的诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 PCR—ELiSA 弓形虫
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人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原纯化方法的比较 被引量:2
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作者 江涛 刘锦宏 赵俊龙 《长江大学学报(自科版)(下旬)》 CAS 2007年第3期217-219,共3页
目的:探讨人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原的纯化。方法:采用SDS-PAGE和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GST亲和层析法与复性透析法对rMIC3纯化的影响。结果:2种方法纯化的rMIC3的SDS-PAGE分析显示,目的蛋白带明显,杂蛋白带少;2种方法纯化... 目的:探讨人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原的纯化。方法:采用SDS-PAGE和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GST亲和层析法与复性透析法对rMIC3纯化的影响。结果:2种方法纯化的rMIC3的SDS-PAGE分析显示,目的蛋白带明显,杂蛋白带少;2种方法纯化的rMIC3的ELISA检测结果差异无显著性(P>0·05)。结论:大量纯化的弓形虫rMIC3为人弓形虫病诊断试剂的研制和推广应用奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii) MiC3 纯化方法
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弓形虫ITS及5.8S序列的PCR扩增、克隆及分析 被引量:16
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作者 翁亚彪 谢德华 +4 位作者 林瑞庆 李华文 张德林 吴绍强 朱兴全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期70-73,共4页
通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)及5 8SDNA序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,旨在对国内不同宿主间弓形虫虫株的遗传变异情况进... 通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)及5 8SDNA序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,旨在对国内不同宿主间弓形虫虫株的遗传变异情况进行分析和验证,为分子遗传学和分子诊断学研究提供资料。结果显示:QH绵羊株、ZS人株、SH人株、CN猪株的ITS及5 8S序列完全一致,且与GenBank上注册RH株的ITS及5 8S序列也一致;仅实验室传代保存的RH株的ITS2序列与其它4株的ITS2有2个碱基的差异。结果表明ITS可作为分子标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定,但不适合用于弓形虫种内遗传变异的研究。 展开更多
关键词 弓形虫 SH 序列 RH 克隆 宿主 CN 绵羊 PCR扩增 强毒株
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孕期筛查TOX-IgG的临床意义 被引量:15
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作者 白桂芹 岳亚飞 李淑红 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期192-192,155,共2页
关键词 TOX 弓形体感染 临床意义 孕妇 孕期筛查 动物体内 常见原因 寄生虫 隐性感染 胎盘感染
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弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在IBRS-2细胞内的表达 被引量:9
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作者 江涛 张东林 +2 位作者 聂浩 姚宝安 赵俊龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期827-831,共5页
采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质... 采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 MiC3 基因克隆 真核表达
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云南西部两地区HIV阳性者弓形虫感染血清学调查 被引量:10
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作者 尤英霞 李伟 +1 位作者 申丽洁 聂大平 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期418-418,F0003,共2页
采集2010年6月~2011年8月云南西部两个地州(大理、德宏)的HIV阳性者(927份)血清和HIV阴性者(80份)血清,用ELISA法检测血清中弓形虫IgG抗体。结果显示,两地区HIV阳性者和HIV阴性者的弓形虫特异性抗体IgG阳性率分别为35.1%(325/927)和23.... 采集2010年6月~2011年8月云南西部两个地州(大理、德宏)的HIV阳性者(927份)血清和HIV阴性者(80份)血清,用ELISA法检测血清中弓形虫IgG抗体。结果显示,两地区HIV阳性者和HIV阴性者的弓形虫特异性抗体IgG阳性率分别为35.1%(325/927)和23.8%(19/80)。HIV阳性血清的检测结果显示,德宏州和大理州的阳性率分别为30.3%(178/588)和43.4%(147/339);各民族间的弓形虫IgG阳性率之间的差异有统计学意义(χ2=28.433,P<0.05);不同年龄组的阳性率差异无统计学意义(χ2=4.248,P>0.05),41~60岁阳性率最高(36.1%,103/285);但不同性别间[男性(35.6%,203/571)、女性(34.3%,122/356)]的差异无统计学差异(χ2=0.158,P>0.05)。 展开更多
关键词 HiV 弓形虫 iGG抗体 云南
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斑点金免疫渗滤法检测肿瘤患者血清弓形虫IgG抗体的应用研究 被引量:10
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作者 黄菱 李燕兵 +1 位作者 赵瑞 王淑静 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第1期17-19,共3页
为建立简便、快速的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA)检测肿瘤患者血清弓形虫IgG抗体。本文将弓形虫抗原包被于硝酸纤维素薄膜上 ,用来检测肿瘤患者血清中的弓形虫IgG抗体 ,通过胶体金———SPA直接显色 ,阳性者出现红色斑点。用该法对 2 32名... 为建立简便、快速的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA)检测肿瘤患者血清弓形虫IgG抗体。本文将弓形虫抗原包被于硝酸纤维素薄膜上 ,用来检测肿瘤患者血清中的弓形虫IgG抗体 ,通过胶体金———SPA直接显色 ,阳性者出现红色斑点。用该法对 2 32名肿瘤患者血清和 2 6 0名正常体检者血清进行检测 ,阳性率分别为 11. 2 1%和 1. 92 %。与IHA法对比检测 ,其结果具有良好的一致性 ,总符合率为 99. 39%。结果显示 ,斑点金免疫渗滤法检测肿瘤患者血清中弓形虫抗体简便、快速 ,适于向基层推广。 展开更多
关键词 igG 渗滤法 血清 患者 肿瘤 斑点 免疫 应用 纤维素薄膜 弓形虫抗体 对比检测 iHA法 SPA 胶体金 阳性率 一致性 符合率 简便 包被 抗原
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