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系统性红斑狼疮患者血清中IFN-λ3的表达及临床意义
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作者 范俊 郭洪佩 +1 位作者 路臻豪 乔鑫 《浙江临床医学》 2023年第4期554-556,共3页
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中IFN-λ3的表达及临床意义。方法前瞻性选取2021年3月至12月入同济大学附属杨浦医院接受治疗的SLE患者150例作为观察对象。按照SLE活动度评分表(SLEDAI)对SLE患者进行活动性评估,SLEDAI值≥9分为SL... 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中IFN-λ3的表达及临床意义。方法前瞻性选取2021年3月至12月入同济大学附属杨浦医院接受治疗的SLE患者150例作为观察对象。按照SLE活动度评分表(SLEDAI)对SLE患者进行活动性评估,SLEDAI值≥9分为SLE活动组(n=63例),SLEDAI值<9分为SLE非活动组(n=87例)。另选取同期在本院体检中心体检健康者90例为对照组。收集患者的临床资料,检测实验室相关指标,并使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IFN-λ3水平,采用受试者工作特性(ROC)曲线分析IFN-λ3对SLE临床诊断价值,Pearson相关分析法分析IFN-λ3与实验室指标的相关性。结果SLE活动组和SLE非活动组的SLEDAI评分、关节炎、红斑和发热占比对比,差异具有统计学意义(P<0.05);SLE活动组和SLE非活动组中IFN-λ3、AntidsDNA抗体和IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.001),且SLE活动组中IFN-λ3、AntidsDNA抗体和IFN-γ水平显著高于SLE非活动组(P<0.001);SLE活动组和SLE非活动组中补体C3、补体C4水平明显低于对照组(P<0.001),且SLE活动组中补体C3、补体C4水平显著高于SLE非活动组(P<0.001);血清中IFN-λ3作为诊断SLE患者血清标志物的ROC曲线面积为0.891(95%CI:0.818~0.964,P<0.001),当截断值为6.12时,灵敏度为86.67%,特异度为76.59%;SLE患者血清中IFN-λ3水平与SLEDAI评分、AntidsDNA抗体、IFN-γ水平呈正相关性(P<0.05),与补体C3水平呈负相关性(P<0.05)。结论SLE患者血清中IFN-λ3水平明显升高,并与SLE病情活动度相关,具有一定的诊断价值,可能成为检测SLE疾病活动和预测疾病严重程度的一种新的生物标志物。 展开更多
关键词 ifn3 系统性红斑狼疮 临床意义
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流体力学注射介导的重组pcDNA-IFN-λ3-EGFP质粒在小鼠体内的表达 被引量:2
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作者 郑坚 郑晓璇 +2 位作者 李明才 柳晓金 武燕 《海南医学》 CAS 2009年第11期17-19,共3页
目的研究流体力学尾静脉注射对目的基因器官靶向性的影响。方法将BALB/c小鼠按随机数字表分组法分为流体力学注射组和空质粒对照组。流体力学注射组将100μg/只带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达质粒pcDNA-IFN-λ3-EGFP溶液2ml在5... 目的研究流体力学尾静脉注射对目的基因器官靶向性的影响。方法将BALB/c小鼠按随机数字表分组法分为流体力学注射组和空质粒对照组。流体力学注射组将100μg/只带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达质粒pcDNA-IFN-λ3-EGFP溶液2ml在5s内快速注入尾静脉,对照组在5s内注入空质粒pcDNA3.1的生理盐水2ml。注射后在不同时间内用过量麻醉剂处死小鼠,取肝、肺、肾、心、脑等组织作冰冻切片,于荧光显微镜下观察。结果流体力学注射pcDNA-IFN-λ3-EGFP质粒在肝组织中表达IFN-λ3-EGFP融合蛋白,注射8h后即有较强的表达,24h后表达最强,2d后明显减弱,1周后消失。其他组织及对照组未检测到绿色荧光蛋白表达。结论流体力学注射方法是肝靶向性的活体基因转移方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。 展开更多
关键词 干扰素3 绿色荧光蛋白 流体力学尾静脉注射 质粒
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猪源IFN-λ3的克隆、表达及抗病毒活性分析 被引量:2
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作者 陈竞 许汪 +6 位作者 宋利娜 郝鹏飞 姜宇航 付婷婷 金鑫 金宁一 李昌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期32-37,共6页
为了解猪源IFN-λ3的体外抗病毒活性,本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞(CRL2845)中扩增获得猪源IFN-λ3基因(pIFN-λ3),并将pIFN-λ3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pCDNA3.1-pIFN-λ3,利用脂质体转染293细胞。48 h后通... 为了解猪源IFN-λ3的体外抗病毒活性,本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞(CRL2845)中扩增获得猪源IFN-λ3基因(pIFN-λ3),并将pIFN-λ3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pCDNA3.1-pIFN-λ3,利用脂质体转染293细胞。48 h后通过Western blot分析pIFN-λ3瞬时表达情况,取转染后上清分别作用于PK15、MDCK细胞进行pIFN-λ3抗病毒活性分析。结果显示,本研究成功扩增获得pIFN-λ3基因,并在293细胞内成功表达;瞬时表达能够抑制表达绿色荧光蛋白的重组水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus-green fluorescent protein,VSVG)在PK15、MDCK细胞上的增殖。本研究结果为深入研究猪源IFN-λ3在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机理及其应用提供参考和依据。 展开更多
关键词 ifn3 猪肺巨噬细胞 抗病毒活性
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藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定
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作者 李原野 殷玥 +5 位作者 陈瑛琪 张继宗 杨晓宇 王佳煜 朱玲 徐志文 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期62-69,共8页
为探究藏猪Ⅲ型干扰素抗病毒作用,以藏猪肠道和肺脏核酸为模板,采用RT-PCR扩增克隆IFN-λ3基因(ZPoIFN-λ3),经测序鉴定后构建原核表达载体pET-32a(+)-mZPoIFN-λ3,并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过优化诱导时间、IPTG浓度,利用镍柱... 为探究藏猪Ⅲ型干扰素抗病毒作用,以藏猪肠道和肺脏核酸为模板,采用RT-PCR扩增克隆IFN-λ3基因(ZPoIFN-λ3),经测序鉴定后构建原核表达载体pET-32a(+)-mZPoIFN-λ3,并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过优化诱导时间、IPTG浓度,利用镍柱亲和层析纯化表达蛋白,并采用SDS-PAGE验证。纯化蛋白经透析复性浓缩,以此为免疫原制备鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体,采用Western Blot鉴定。通过细胞病变抑制法测定表达蛋白在MDBK/VSV系统的抗病毒活性。结果表明,成功克隆藏猪IFN-λ3成熟肽基因,经分析发现藏猪IFN-λ3核酸序列与野猪核酸同源性为100%。成功构建藏猪IFN-λ3原核重组表达质粒,并成功表达大小为34 ku蛋白,蛋白纯化后SDS-PAGE显示为单一条带,Western Blot鉴定结果显示鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体具有良好免疫原性。p ET-32a(+)-mPoIFN-λ3表达蛋白在MDBK/VSV系统抗病毒效价为10×24.5U·0.1 mL-1,比活力为2×103U·mg-1。研究首次克隆藏猪IFN-λ3基因并原核表达,通过研究其抗病毒作用,为进一步研究藏猪IFN-λ3生物学特性和相关基因重组药物生物学功能奠定基础,为临床新药物研发提供新方向。 展开更多
关键词 藏猪 ifn3 克隆 原核表达 抗病毒
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锚定表达猪IFN-λ3重组植物乳杆菌的构建及其抗PEDV效果的检测 被引量:2
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作者 刘永仕 刘琼 +5 位作者 赵唯 黄海斌 石春卫 姜延龙 杨桂连 王春凤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期345-350,共6页
为构建锚定表达猪IFN-λ3的重组植物乳杆菌(L.plantarum),并验证其抗病毒活性,本研究将猪IFN-λ3基因插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭锚定表达载体pSIP-409-pgsA'中构建重组质粒pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3,将其电转化至植物乳杆菌NC8中获... 为构建锚定表达猪IFN-λ3的重组植物乳杆菌(L.plantarum),并验证其抗病毒活性,本研究将猪IFN-λ3基因插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭锚定表达载体pSIP-409-pgsA'中构建重组质粒pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3,将其电转化至植物乳杆菌NC8中获得重组pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3/L.plantarum。经清酒乳杆菌素(SPPIP)诱导后用His标签单克隆抗体经westernblot、间接免疫荧光检测目的蛋白的锚定表达情况。结果显示,猪IFN-λ3在重组植物乳杆菌表面锚定表达。利用重组菌刺激细胞后通过荧光定量PCR测定IPEC-J2/PEDV系统中猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,并检测该重组菌刺激细胞后干扰素刺激基因(ISGs)的相对转录水平。结果显示,该重组菌能够显著抑制PEDV在IPEC-J2中的复制,并能诱导细胞中ISGs(OASL、IFITMs)的高转录水平,具有抗病毒作用。本研究为PEDV的预防和治疗提供可行方案。 展开更多
关键词 ifn3 重组植物乳杆菌 锚定表达 抗病毒
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干扰素-λ3水平及白细胞介素28B基因多态性与乙型肝炎病毒相关慢加急性(亚急性)肝衰竭预后的关系
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作者 张冬青 林升龙 +6 位作者 马华皙 王香梅 廖资渊 吴雯军 陈梦云 王剑宇 高海兵 《新发传染病电子杂志》 2023年第6期42-46,共5页
目的探讨外周血干扰素-λ3(interferon-λ3,IFN-λ3)水平及白细胞介素28B(interleukin-28B,IL-28B)基因多态性与HBV相关慢加急性(亚急性)肝衰竭预后的关系,并联合其他影响因素以期建立一个早期、敏感、特异性强的HBV相关慢加急性(亚急性... 目的探讨外周血干扰素-λ3(interferon-λ3,IFN-λ3)水平及白细胞介素28B(interleukin-28B,IL-28B)基因多态性与HBV相关慢加急性(亚急性)肝衰竭预后的关系,并联合其他影响因素以期建立一个早期、敏感、特异性强的HBV相关慢加急性(亚急性)肝衰竭预后模型。方法回顾性队列研究2019年10月至2020年3月在福建医科大学孟超肝胆医院住院诊断为慢加急性(亚急性)肝衰竭乙型病毒性肝炎的患者97例,所有入组患者随访半年,随访终点事件为死亡,根据随访终点患者的生存状态分为死亡组和生存组。检测IFN-λ3水平及IL-28B rs 12979860多态性测序分型。收集患者治疗基线时的血常规、生化、凝血功能等实验室指标,计算治疗基线时的终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)评分,对以上指标进行单因素及多因素分析,建立HBV相关慢加急性(亚急性)肝衰竭预后评估模型。结果随访半年后,死亡组15例,存活组82例,死亡率15.5%。两组年龄、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆固醇、凝血酶原活动度、凝血酶原国际标准化比值、纤维蛋白原、IFN-λ3水平、MELD评分差异有统计学意义(P<0.05)。采用多因素Logistic回归分析及逐步回归法,建立模型。结果显示凝血酶原活动度、IFN-λ3水平为生存预后的独立危险因素。与存活组相比,死亡组凝血酶原活动度及IFN-λ3水平更低。建立新的预后模型方程:Y=0.144+0.054×年龄(岁)+0.005×总胆红素水平(μmol/L)-0.07×凝血酶原活动度(%)-0.002×IFN-λ3(pg/ml)。ROC曲线比较新建立模型、MELD评分和IFN-λ3的诊断价值。结果显示:新的预测模型ROC曲线下面积大于常用的终末期肝病的预测模型MELD评分及IFN-λ3水平。IL-28B rs 12979860多态性测序显示仅1例死亡患者基因型为CT型,其余病例均为CC型,两组基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血IFN-λ3水平可以作为判断HBV相关慢加急性(亚急性)肝衰竭患者预后的指标。IFN-λ3水平联合凝血酶原活动度、总胆红素水平及年龄建立的新模型可以更好地预测肝衰竭患者的预后。 展开更多
关键词 白细胞介素28B 单核苷酸多态性 干扰素3 肝衰竭
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IL-28B基因多态性与慢性乙型肝炎病程进展的相关性 被引量:4
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作者 哈明昊 佘会元 +5 位作者 沈文娟 黄钟鸣 陈晓兰 吴建秋 单文艳 何慧芳 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第20期2928-2932,共5页
目的:探讨白介素-28B(interleukin-28B,IL-28B)基因多态性与慢性乙型肝炎(c h r o n i c hepatitis B,CHB)病程进展的相关性.方法:本院门诊就诊患者分为如下组:无症状携带者组41例,进展性肝病组共65例;其中CHB组46例、肝硬化组19例.提... 目的:探讨白介素-28B(interleukin-28B,IL-28B)基因多态性与慢性乙型肝炎(c h r o n i c hepatitis B,CHB)病程进展的相关性.方法:本院门诊就诊患者分为如下组:无症状携带者组41例,进展性肝病组共65例;其中CHB组46例、肝硬化组19例.提取全基因组DNA,并扩增IL-28B基因.单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)rs8099917及SNP rs12979860用限制性片段长度多态性法分型;对分型结果进行统计学分析.结果:SNP rs12979860位点CC、CT、TT 3个基因型,组成C、T两个等位基因.等位基因T的比例在无症状携带组、CHB组和肝硬化组中的比例分别为2.4%、8.7%和13.2%;差异有显著性意义(χ2=5.47,P<0.05).SNP rs8099917位点TT、TG、GG 3个基因型,组成T、G两个等位基因.等位基因G的比例在无症状携带组、CHB组和肝硬化组中的比例分别为8.5%、7.6%和7.9%;差异无统计学意义.结论:IL-28B基因多态性可能与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染后不同免疫状态相关并影响患者病情进展加重.SNP rs12979860的等位基因T可能是预示HBV感染后病情进展的影响因素. 展开更多
关键词 白介素-28B基因 干扰素3 乙型肝炎病毒 单核苷酸多态性
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猪源IFN-λ3在CHO-S细胞中的表达及其抗口蹄疫病毒活性分析
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作者 袁红 白兴文 +8 位作者 李坤 李平花 孙普 宋雅丽 焦云娟 刘在新 卢曾军 李冬 包慧芳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期190-196,共7页
为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组... 为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白。将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试验分析纯化蛋白是否具有细胞毒性,用实时荧光定量PCR、Western-blot和空斑试验三种方法研究纯化蛋白的抗FMDV活性。结果显示,重组质粒pcDNA3.4-IFNλ3-His在CHO-K1细胞中瞬时表达IFN-λ3,在CHO-S细胞中以分泌形式表达IFN-λ3;用AKTA系统能够纯化出纯度较高的IFN-λ3蛋白;纯化出的IFN-λ3对PK-15细胞无明显毒性,能够抑制FMDV RNA的复制、减弱病毒蛋白翻译活动以及降低子代病毒的生成。本研究为发展新型FMDV防控策略提供了新方向。 展开更多
关键词 猪源ifn3 表达 CHO-S细胞 口蹄疫病毒 抗病毒活性
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PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞后对Ⅲ型干扰素应答的调控 被引量:2
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作者 刘伟 张婧 +4 位作者 甘利鹏 孙普 刘在新 卢曾军 刘霞 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期1-8,共8页
Ⅲ型干扰素(IFN-λ)是一种新发现的抗病毒因子,在天然免疫和获得性免疫应答方面具有多重功能;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后造成猪的免疫抑制状态,Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的应答受到抑制,IFN-λ的应答情况还不清楚。为揭示PRRSV感染猪... Ⅲ型干扰素(IFN-λ)是一种新发现的抗病毒因子,在天然免疫和获得性免疫应答方面具有多重功能;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后造成猪的免疫抑制状态,Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的应答受到抑制,IFN-λ的应答情况还不清楚。为揭示PRRSV感染猪后IFN-λ的应答情况与调控机制,以期进一步揭示PRRSV抑制宿主抗病毒免疫应答的分子机理。利用PRRSV强毒与弱毒株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM),通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot检测IFN-λ在mRNA与蛋白水平的差异,并检测了不同非结构蛋白(NSP)对IFN-λ的调控作用。结果发现PRRSV感染PAM细胞后均在mRNA水平上诱导IFN-λ1和IFN-λ3表达上调,且IFN-λ3比IFN-λ1上调更明显;然而在蛋白水平上二者均为表达下调。人源IFN-λ3比IFN-λ1显示出更强的抑制PRRSV复制的作用,且对强毒株GSWW/15的抑制效果更明显。PRRSV NSP7b和NSP9转染PK-15细胞后能使IFN-λ3的mRNA上调表达,但蛋白水平无变化;而NSP7a对IFN-λ3的mRNA和蛋白水平均无影响,提示NSP7b和NSP9可能通过某种机制抑制IFN-λ3的应答。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Ⅲ型干扰素 λ3干扰素
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