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鸡源IL-21基因的密码子优化、表达及生物活性分析初探
1
作者 朱爱臣 朱凯晴 +3 位作者 孙鹏 张建楼 李妍 霍书英 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期89-95,共7页
本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/... 本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/MH,根据人偏爱密码子对鸡IL-21基因进行密码子优化,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-opt/MH。测序正确后转染HEK293T细胞进行表达,经His标签纯化后,通过脾脏淋巴细胞增殖实验鉴定纯化后的IL-21蛋白生物活性。结果显示,扩增的鸡IL-21序列与Genbank中的IL-21序列相对比有2个碱基发生突变(141C→141T,312C→312T),但不影响氨基酸序列;生物信息学分析表明,鸡IL-21基因含有信号肽序列可介导其分泌表达,同时含有1个潜在的N-糖基化位点;Western blot在培养基和细胞内均检测到鸡IL-21蛋白的表达;密码子优化后IL-21表达水平与野生型相比显著升高(P<0.0001);MTT法检测发现,纯化后的IL-21具有增强淋巴细胞增殖的功能。综上所述,本试验成功构建了鸡IL-21的真核表达载体,通过密码子优化提高了IL-21在真核细胞中的表达且表达的蛋白具有良好的生物活性,为进一步探索IL-21蛋白功能奠定一定的基础。 展开更多
关键词 il-21基因 鸡 真核表达 密码子优化 生物活性分析
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IL-21基因对肝癌细胞抑瘤效应的辐射增敏作用 被引量：2
2
作者 王芹 孙元明 +8 位作者 王彦 孙志娟 宋力 刘晓秋 徐畅 杜利清 樊赛军 樊飞跃 刘强 《广西医科大学学报》 CAS 2013年第6期844-846,共3页
目的:探讨外源性IL-21基因联合放射对肝癌HepG2细胞抑瘤效应的辐射增敏作用。方法:将Ad-IL-21腺病毒颗粒转染HepG2细胞系,进行6Gy 137 Csγ射线照射,将细胞分为4组,包括空白对照组、Ad-IL-21组、照射组以及联合组,观察HepG2细胞的生长... 目的:探讨外源性IL-21基因联合放射对肝癌HepG2细胞抑瘤效应的辐射增敏作用。方法:将Ad-IL-21腺病毒颗粒转染HepG2细胞系,进行6Gy 137 Csγ射线照射,将细胞分为4组,包括空白对照组、Ad-IL-21组、照射组以及联合组,观察HepG2细胞的生长、细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:与Ad-IL-21组和照射组比较,联合组HepG2细胞的抑制效应最显著,转染48h的抑制率明显高于转染24h和72h的抑制率。联合组HepG2细胞阻滞在G2期最多,凋亡细胞所占比例最高,转染24h和48h的凋亡率分别达到29.1%和33.1%。结论:IL-21基因联合放射对肝癌细胞的抑瘤效应具有辐射增敏作用,明显地抑制肝癌细胞的生长。 展开更多
关键词 il-21基因 肝癌 腺病毒 照射
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人IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的影响 被引量：3
3
作者 邵盈 曹永珍 +5 位作者 王芹 李进 赵欣然 陈凤华 宋力 张鸿艳 《中国辐射卫生》 2011年第1期15-16,共2页
目的研究含人IL-21基因的重组腺病毒(Ad-IL-21)联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。方法重组腺病毒Ad-IL-21于体外转染子宫颈癌Hela细胞,转染后6 h进行6Gy 137Csγ射线照射,用MTT方法和流式细胞仪测定Hela细胞的生长曲线... 目的研究含人IL-21基因的重组腺病毒(Ad-IL-21)联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。方法重组腺病毒Ad-IL-21于体外转染子宫颈癌Hela细胞,转染后6 h进行6Gy 137Csγ射线照射,用MTT方法和流式细胞仪测定Hela细胞的生长曲线、抑制率及细胞周期。结果 Ad-IL-21基因组、照射组和基因联合照射组对Hela细胞生长均具有抑制作用,联合照射组的抑制效应最强(44%),明显高于Ad-IL-21组和照射组。联合照射组Hela细胞出现明显的G1期阻滞,G1期细胞所占比例最高,达到88.9%,S期细胞最少(1%)。结论 IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌的抑瘤作用具有协同效应,有效地抑制肿瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 il-21基因 子宫颈癌 腺病毒 照射
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人IL-21基因对卵巢癌细胞生长的抑制作用 被引量：3
4
作者 王芹 李进 +3 位作者 宋力 刘强 岳井银 樊飞跃 《中国辐射卫生》 2009年第4期396-397,共2页
目的研究含有IL-21基因的重组腺病毒表达载体(Ad-IL-21)抑制人卵巢癌细胞生长的作用。方法Ad-IL-21重组体于体外转染卵巢癌细胞株ES-2,用MTT比色法和流式细胞术观察ES-2细胞的生长曲线和细胞周期的变化。结果Ad-IL-21组ES-2细胞的生长... 目的研究含有IL-21基因的重组腺病毒表达载体(Ad-IL-21)抑制人卵巢癌细胞生长的作用。方法Ad-IL-21重组体于体外转染卵巢癌细胞株ES-2,用MTT比色法和流式细胞术观察ES-2细胞的生长曲线和细胞周期的变化。结果Ad-IL-21组ES-2细胞的生长比空白对照组和对照腺病毒组慢,在转染后第3天开始生长明显缓慢(P<0.05),转染后第5天Ad-IL-21组的细胞生长基本稳定在一定水平(P<0.05)。Ad-IL-21转染后ES-2细胞停留在G1期细胞增加,而G2期和S期细胞减少。结论腺病毒介导的外源性IL-21基因可有效转染人卵巢癌细胞,并对其生长有抑制作用。 展开更多
关键词 il-21基因 卵巢癌 腺病毒载体
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人IL-21cDNA的克隆及重组腺病毒表达载体的构建 被引量：4
5
作者 王芹 李进 +4 位作者 王颖嫒 宋力 岳井银 穆传杰 樊飞跃 《广西医科大学学报》 CAS 2009年第4期516-518,共3页
目的:构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法:从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含... 目的:构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法:从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含IL-21基因的腺病毒载体(Ad-IL-21),并进行测序鉴定和PCR鉴定。结果:Ad-IL-21表达载体测序结果与GenBank中IL-21基因序列一致,Ad-IL-21经PCR扩增出IL-21基因片段。结论:成功构建携带人IL-21基因的重组腺病毒表达载体。 展开更多
关键词 il-21基因 基因克隆 腺病毒表达载体 LR重组反应
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人白细胞介素21基因重组复制缺陷型腺病毒的制备与鉴定 被引量：1
6
作者 王芹 李进 +4 位作者 赵欣然 宋力 刘强 岳井银 樊飞跃 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1005-1008,共4页
目的制备表达绿色荧光蛋白的含人白细胞介素21(IL-21)基因的重组复制缺陷型腺病毒,为IL-21基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,PCR产物和pDC316-mCMV-EGFP载体分别经限制性内切酶N... 目的制备表达绿色荧光蛋白的含人白细胞介素21(IL-21)基因的重组复制缺陷型腺病毒,为IL-21基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,PCR产物和pDC316-mCMV-EGFP载体分别经限制性内切酶NotI与HindIII双酶切,然后将酶切产物连接、转化,构建pDC316-IL21-EGFP重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定后,与腺病毒骨架质粒pBHGlox_E1,3CreF35共转染293细胞,包装产生Ad5F35-IL21-EGFP重组腺病毒,并测定病毒滴度。观察Ad5F35-IL21-EGFP腺病毒转染后食管癌细胞EC-9706的生长曲线和细胞周期的变化。结果 pDC316-IL21-EGFP重组质粒经酶切和测序证实,IL-21基因片段正确插入pDC316-mCMV-EGFP载体中且与GenBank中IL-21基因序列一致。Ad5F35-IL21-EGFP重组腺病毒载体在293细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,经鉴定有IL-21基因和绿色荧光蛋白的表达。测得Ad5F35-IL21-EGFP病毒颗粒滴度为9×1011VP/ml,感染性滴度为5×1010IU/ml。Ad5F35-IL21-EGFP转染后,EC-9706细胞的生长缓慢(P<0.05),G1期细胞增加,而G2期和S期细胞减少。结论成功制备了表达绿色荧光蛋白的人IL-21基因的重组腺病毒,且病毒滴度较高。腺病毒介导的外源性IL-21基因可有效转染EC-9706细胞,并对其生长有抑制作用。 展开更多
关键词 il-21基因 绿色荧光蛋白 腺病毒 基因治疗
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白介素21基因联合放射对子宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用
7
作者 王芹 王颖嫒 +6 位作者 宋力 张恒 刘强 付岳 陈凤华 樊飞跃 李进 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期350-353,共4页
目的探讨外源性IL-21基因表达联合放射对子宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用。方法将构建好的重组腺病毒Ad-IL-21转染人胚肾293A细胞，进行病毒扩增，采用TCID50方法测定腺病毒的滴度。将扩增的Ad-IL-21腺病毒于体外转染HeLa细胞，转染后进... 目的探讨外源性IL-21基因表达联合放射对子宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用。方法将构建好的重组腺病毒Ad-IL-21转染人胚肾293A细胞，进行病毒扩增，采用TCID50方法测定腺病毒的滴度。将扩增的Ad-IL-21腺病毒于体外转染HeLa细胞，转染后进行6Gy137Cs1射线照射，利用随机数字表法分为5组，空白对照组不加任何处理，含LacZ基因、但不含IL-21基因的对照腺病毒为Ad-LacZ对照组，Ad-IL-21组，单纯照射组以及联合处理组，观察HeLa细胞的细胞生长曲线、细胞周期、细胞凋亡、IL-21基因和蛋白表达的变化。结果Ad-IL-21重组腺病毒在293A细胞中扩增成功，获得了高滴度的病毒颗粒，滴度为9×10^10pfu／ml。Ad-IL-21组、单纯照射组和联合处理组中，HeLa细胞的生长均明显受到抑制，其中转染后96h，与Ad-IL-21组和单纯照射组比，联合处理组HeLa细胞的抑制效应最显著（F=85．26、72．98，P〈0．05）。联合处理组HeLa细胞发生G．期阻滞，s期细胞数量减少（F=36．69、34．83，P〈0．05），凋亡细胞数量增加（F=28．23、25．57，P〈0．05）。联合处理组HeLa细胞中IL-21基因表达量分别是Ad-IL-21组和空白对照组的1．54倍和2．43倍（F=22．31、36．65，P〈0．05）；蛋白表达量分别是Ad-IL-21组和空白对照组的1．62倍和2．31倍（F=27．36、35．86，P〈0．05）。结论IL-21基因联合放射对子宫颈癌细胞的抑瘤作用具有协同效应，有效地抑制肿瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 il-21基因 电离辐射 子宫颈癌细胞 增殖抑制
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人白介素21基因联合γ射线照射对食管癌EC109细胞周期的影响
8
作者 张鸿艳 赵欣然 +5 位作者 曹永珍 李进 王芹 陈凤华 宋力 邵盈 《中国辐射卫生》 2011年第1期37-39,共3页
目的研究含有IL-21基因的重组腺病毒表达载体(Ad-IL-21)联合γ射线照射对食管癌细胞EC109生长的抑制作用,为肿瘤的基因-放射治疗提供实验依据。方法将Ad-IL-21于体外转染食管癌细胞株EC109,用MTT比色法和流式细胞术观察基因联合照射后EC... 目的研究含有IL-21基因的重组腺病毒表达载体(Ad-IL-21)联合γ射线照射对食管癌细胞EC109生长的抑制作用,为肿瘤的基因-放射治疗提供实验依据。方法将Ad-IL-21于体外转染食管癌细胞株EC109,用MTT比色法和流式细胞术观察基因联合照射后EC109细胞的生长曲线和细胞周期的变化。结果 Ad-IL-21基因组、单纯照射组和Ad-IL-21基因联合照射组EC109细胞生长均明显受到抑制,与Ad-lacZ组和空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。其中联合照射组EC109细胞生长最为缓慢,与Ad-IL-21基因组和单纯照射组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Ad-IL-21基因组、单纯照射组和联合治疗组大量的EC109细胞停留在G1期,而G2期和S期细胞明显减少,联合治疗组细胞停留在G1期最多。结论腺病毒介导的白介素21基因转移能显著抑制食管癌EC109细胞的生长,使细胞产生G1期阻滞,与放射治疗联合应用具有相加和协同效应。 展开更多
关键词 il-21基因 放射 食管癌 腺病毒载体
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