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果胶酶对灵武长枣果实发育中阿拉伯半乳糖蛋白分布的影响
1
作者 王静 章英才 +1 位作者 陶珊珊 杨雪 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期62-74,共13页
以3种不同浓度的果胶酶处理灵武长枣(Ziziphus jujuba‘Lingwu Changzao’)4个不同发育时期的果实,采用免疫细胞化学技术,在细胞水平上对果实阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)表位进行原位分析,探讨果胶酶对其不同发育时期的果实中AGPs分布的影响... 以3种不同浓度的果胶酶处理灵武长枣(Ziziphus jujuba‘Lingwu Changzao’)4个不同发育时期的果实,采用免疫细胞化学技术,在细胞水平上对果实阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)表位进行原位分析,探讨果胶酶对其不同发育时期的果实中AGPs分布的影响,为明确果胶酶对果实成熟软化的影响提供解剖学依据。结果表明:JIM13、JIM8和MAC204抗体所标记的抗原荧光强弱在各时期果实的不同组织存在一定的差异。当果肉组织用较低浓度的果胶酶0.028 U·mL^(-1)(E1)处理,果皮组织结构没有明显的变化,果皮及内部薄壁细胞细胞壁表面和细胞间隙中的AGPs抗原表位减少;0.056 U·mL^(-1)(E2)和0.084 U·mL^(-1)(E3)浓度果胶酶处理的果实,果实组织细胞壁解体程度增加,果皮及内部薄壁细胞细胞壁中AGPs抗原表位检测量逐渐降低,果胶酶浓度的增加导致AGPs在果实所有表位排列的更大影响和较低的荧光信号。经果胶酶最高浓度0.084 U·mL^(-1)(E3)处理后,Calcofluor White染色显示细胞壁区域荧光也不同程度减弱或降低,AGPs分布的紊乱和抗原表位的缺失与细胞中纤维素组装的变化有关。比较分析表明,不同发育时期的果实AGPs碳水化合物的分布不同,这与组织结构的变化有关;果胶酶作用下AGPs聚糖链的缺失导致细胞壁组分之间的相关性建立和细胞壁结构的重塑受阻,诱导了整个细胞壁结构的改变,影响了果实的成熟。 展开更多
关键词 果胶酶 灵武长枣 果实 阿拉伯半乳糖蛋白 免疫荧光定位
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不同类型多肉植物的花粉活力检测方法筛选及活力鉴定
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作者 杨澜 曾春雪 +2 位作者 王维泽 韦朝妹 陈之林 《种子》 北大核心 2024年第2期120-126,F0002,共8页
以3个科6个属的13种多肉植物种质资源为材料,对比亚历山大染色法和碘-碘化钾(I2-KI)染色法染色后花粉活力的差异,筛选适宜不同类型多肉植物花粉活力的测定方法。结果表明,两种染色法对不同科属的多肉植物花粉染色结果差异极显著,I2-KI... 以3个科6个属的13种多肉植物种质资源为材料,对比亚历山大染色法和碘-碘化钾(I2-KI)染色法染色后花粉活力的差异,筛选适宜不同类型多肉植物花粉活力的测定方法。结果表明,两种染色法对不同科属的多肉植物花粉染色结果差异极显著,I2-KI染色法检测的花粉活力平均值显著低于亚历山大染色法;种质资源的花粉活力普遍高于杂交组合,聚类分析结合差异显著性分析将26种目标种质资源及杂交组合的花粉活力划分为5个等级;显微镜下花粉形状呈现圆形、方形、椭圆形和不规则形,且同一品种存在一种到多种的花粉萌发孔形态。 展开更多
关键词 多肉植物 花粉活力 染色法对比 活力等级划分
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理气舒心片中染色剂金胺O检测方法研究
3
作者 马晓静 张强 +2 位作者 李本淳 崔业波 马彧 《亚太传统医药》 2024年第2期32-35,共4页
目的:建立理气舒心片中染色剂金胺O的检测方法。方法:色谱柱为OMNI-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.033 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(30∶70),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为436 nm。结果:金... 目的:建立理气舒心片中染色剂金胺O的检测方法。方法:色谱柱为OMNI-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.033 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(30∶70),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为436 nm。结果:金胺O在0.967~8.703μg·mL^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9995),加样回收率为95.01%(RSD=2.3%,n=6),精密度、重复性和溶液稳定性良好,方法检出限为0.092μg·g^(-1)。6家生产企业共38批样品中发现有1家企业的5批样品中检出金胺O,含量在1.06~4.63μg·g^(-1)。结论:该方法操作简便、灵敏度好、准确度高,可用于理气舒心片中金胺O的检测。 展开更多
关键词 理气舒心片 染色剂 金胺O 液相色谱法
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中药溻渍联合情绪舒缓疗法与视觉艺术疗法对宫颈癌放疗患者心理、生活质量的影响及对放射性阴道炎的防治作用
4
作者 刘琼 吕欢欢 +6 位作者 闫辉 袁香坤 赵笑博 王晴雯 王玺 万红美 马忠金 《河北中医》 2024年第4期623-627,632,共6页
目的观察中药溻渍联合情绪舒缓疗法与视觉艺术疗法对宫颈癌放疗患者心理、生活质量的影响及对放射性阴道炎的防治作用。方法选择2020年2月至2021年10月收治的宫颈癌放疗患者120例为研究对象,按照随机数字表法分为2组,对照组60例予西医... 目的观察中药溻渍联合情绪舒缓疗法与视觉艺术疗法对宫颈癌放疗患者心理、生活质量的影响及对放射性阴道炎的防治作用。方法选择2020年2月至2021年10月收治的宫颈癌放疗患者120例为研究对象,按照随机数字表法分为2组,对照组60例予西医常规干预措施,治疗组60例在对照组的基础上加用中药溻渍联合情绪舒缓疗法与视觉艺术疗法干预。2组均干预治疗6个月。比较2组治疗前后焦虑自评量表(SAS)评分、抑郁自评量表(SDS)评分、心理忍受程度评分、心理痛苦程度评分及简明健康状况量表(SF-36)(包括生理与精神健康2个领域的生理功能、生理职能、躯体疼痛、社会功能、活力、情感职能、精神健康及总体健康)评分变化情况,比较2组治疗期间放射性阴道炎发生率、发生时间及严重程度。结果与本组治疗前比较,2组治疗后SAS评分及SDS评分均降低(P<0.05),且治疗组治疗后SAS评分及SDS评分均低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,2组治疗后心理忍受程度评分及心理痛苦程度评分均降低(P<0.05),且治疗组治疗后心理忍受程度评分及心理痛苦程度评分均低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,2组治疗后SF-36生理功能、生理职能、躯体疼痛、社会功能、活力、情感职能、精神健康及总体健康评分均升高(P<0.05),且治疗组治疗后SF-36各项评分均高于对照组(P<0.05)。治疗组放射性阴道炎发生率低于对照组(P<0.05),发生时间晚于对照组(P<0.05),严重程度轻于对照组(P<0.05)。结论中药溻渍联合情绪舒缓疗法与视觉艺术疗法在宫颈癌放疗患者中具有重要应用价值,可明显改善患者焦虑抑郁状态,改善心理状况,提高生活质量,减少和推迟放射性阴道炎的发生,减轻病情严重程度。 展开更多
关键词 宫颈癌 放射疗法 阴道炎 中药溻渍 情绪释放 视觉艺术
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不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测
5
作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-17,共7页
为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感... 为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 排毒规律 反转录PCR(RT-PCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) 间接免疫荧光试验(IFA)
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气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定
6
作者 任小侠 冯妍 +6 位作者 马欣 刘燕 王团结 杜吉革 潘晨帆 刘世博 张一帜 《中国兽药杂志》 2024年第2期10-17,共8页
为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等... 为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。 展开更多
关键词 气肿疽梭菌C54-1株 CVCC60001 毒力 免疫原性 培养基筛选 强化梭菌培养基(RCM) 苏木精-伊红染色法
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样本直接涂片法与液基夹层杯涂片法查找抗酸杆菌的效果比较
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作者 罗少珍 刘欣 +2 位作者 张志坚 黄业伦 刘志辉 《国际医药卫生导报》 2024年第6期1005-1008,共4页
目的探讨液基夹层杯涂片法查找抗酸杆菌检验方法的临床应用价值。方法从广州市胸科医院医学检验科LIS系统中收集、整理2021年1月至7月痰液与支气管冲洗液主要送检临床样本的涂片染色检查和分枝杆菌培养结果,对同一患者时间间隔不超过1... 目的探讨液基夹层杯涂片法查找抗酸杆菌检验方法的临床应用价值。方法从广州市胸科医院医学检验科LIS系统中收集、整理2021年1月至7月痰液与支气管冲洗液主要送检临床样本的涂片染色检查和分枝杆菌培养结果,对同一患者时间间隔不超过1周的直接涂片与液基夹层杯涂片查找抗酸杆菌检验的结果进行回顾性分析。结果在241份痰液样本、178份支气管冲洗液样本和全部419份样本的检测中,直接涂片法、液基夹层杯涂片法的阳性率分别为15.35%(37/241)和13.69%(33/241)、15.17%(27/178)和12.92%(23/178)、15.27%(64/419)和13.37%(56/419)。在同期分枝杆菌培养结果阳性的65份痰液样本、50份支气管冲洗液样本和115份全部阳性样本中,直接涂片法、液基夹层杯涂片法的阳性率分别为56.52%(65/115)和50.78%(65/128)、54.34%(50/92)和45.88%(50/109)、55.56%(115/207)和48.73%(115/236)。在241份痰液样本、178份支气管冲洗液样本检测中,直接涂片阳性且液基夹层杯涂片阳性、直接涂片阳性且液基夹层杯涂片阴性、直接涂片阴性且液基夹层杯涂片阳性、直接涂片阴性且液基夹层杯涂片阴性的样本占比分别为12.03%(29/241)、3.32%(8/241)、1.66%(4/241)、82.99%(200/241)和8.99%(16/178)、6.18%(11/178)、3.93%(7/178)、80.90%(144/178)。结论液基夹层杯涂片法查找抗酸杆菌检验方法总体阳性检出率略低于直接涂片检测法,但可以发现相当比例的直接涂片法阴性的病原学阳性结核病患者,尤其是在支气管冲洗液检测中,具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 抗酸杆菌 抗酸染色 液基夹层杯涂片法 直接涂片法
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广西南宁圆叶葡萄污果病病原菌分离鉴定
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作者 程雅芳 黄秋凤 +3 位作者 陈国品 曹慕明 黄羽 李玮 《中外葡萄与葡萄酒》 北大核心 2024年第2期16-21,共6页
采用五点采样法连续3年调查广西南宁圆叶葡萄的污果病发病情况,并随机选择具有典型形态特征的单一病斑,刮取病斑组织进行病原菌分离纯化,根据柯赫氏法则验证其污果病致病力,通过形态学及分子生物学手段对病原菌进行鉴定。结果表明,在参... 采用五点采样法连续3年调查广西南宁圆叶葡萄的污果病发病情况,并随机选择具有典型形态特征的单一病斑,刮取病斑组织进行病原菌分离纯化,根据柯赫氏法则验证其污果病致病力,通过形态学及分子生物学手段对病原菌进行鉴定。结果表明,在参试种植园中,2019—2021三年中圆叶葡萄‘Noble’的果穗污果病发病率分别达到92.00%、96.67%和97.33%,病情指数分别为62.13、67.46和66.40。从病斑组织中分离得到多株形态特征相近、具有污果病致病力的优势菌,选取其中代表性菌株GX-2216,经鉴定为蚜虫莫氏黑粉菌Moesziomyces aphidis,其与前期在附近地块‘巨峰’葡萄污果病病果上分离鉴定的病原菌亲缘较近,表明M.aphidis可能是当地污果病的优势病原菌,其能够在不同葡萄品种上引发污果病。 展开更多
关键词 污果病 圆叶葡萄 病原菌鉴定 果实附生微生物 溢糖性霉斑
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内镜下碘染色在早期食管癌及癌前病变诊断中的应用效果
9
作者 许莹 高成城 《中外医药研究》 2024年第5期150-152,共3页
目的:探讨内镜下碘染色在早期食管癌及癌前病变诊断中的应用效果。方法:选取2022年1月—2023年3月南京医科大学附属淮安第一医院收治的疑似早期食管癌或癌前病变患者40例作为研究对象,患者均采用电子上消化道内镜完成食管内镜检查及取样... 目的:探讨内镜下碘染色在早期食管癌及癌前病变诊断中的应用效果。方法:选取2022年1月—2023年3月南京医科大学附属淮安第一医院收治的疑似早期食管癌或癌前病变患者40例作为研究对象,患者均采用电子上消化道内镜完成食管内镜检查及取样,观察碘染色效果。统计患者术后病理诊断结果,以术后病理诊断结果为“金标准”,统计碘染色诊断早期食管癌及癌前病变的灵敏度、特异度、准确度。结果:术后病理组织学检查确诊早期食管癌患者16例,慢性炎性反应患者5例,低级别上皮内瘤变(lowgradeintraepithelialneoplasia,LGIN)患者14例,高级别上皮内瘤变(highgradeintraepithelialneoplasia,HGIN)患者5例。碘染色诊断早期食管癌的灵敏度为87.50%,特异度为95.83%,准确度为92.50%。碘染色诊断食管LGIN的灵敏度为92.86%,特异度为92.31%,准确度为92.50%。碘染色诊断食管HGIN的灵敏度为80.00%,特异度为94.29%,准确度为92.50%。结论:内镜下碘染色在早期食管癌及癌前病变中诊断效能较好,可有效发现病变,为临床诊疗提供可靠资料。 展开更多
关键词 内镜 碘染色 早期食管癌 癌前病变
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湿润烧伤膏在儿童大面积鲜红斑痣激光治疗创面修复中的应用
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作者 刘小加 吴记红 +3 位作者 罗滔 罗明灿 李高峰 谭军 《国际医药卫生导报》 2024年第4期553-558,共6页
目的观察湿润烧伤膏联合脉冲染料激光对提升儿童大面积鲜红斑痣整体治疗效果的影响,以期指导临床相关疾病治疗。方法本文为随机对照试验,研究对象选自2022年1月至2022年9月湖南省人民医院收治60例大面积鲜红斑痣患儿,采用随机数字表法... 目的观察湿润烧伤膏联合脉冲染料激光对提升儿童大面积鲜红斑痣整体治疗效果的影响,以期指导临床相关疾病治疗。方法本文为随机对照试验,研究对象选自2022年1月至2022年9月湖南省人民医院收治60例大面积鲜红斑痣患儿,采用随机数字表法将其分为两组,各30例。对照组男童12例,女童18例,年龄(6.25±1.02)岁;试验组男童10例,女童20例,年龄(6.35±1.05)岁。对照组采取595 nm脉冲染料激光治疗联合常规抗炎软膏护理创面,试验组采取595 nm脉冲染料激光联合湿润烧伤膏护理创面。对比两组治疗效果、红痣瘢痕消退程度[采用温哥华瘢痕量表(VSS)评估]、疼痛程度(采用国际数字疼痛分级标准评估)、不良反应。采用t检验、χ^(2)检验、秩和检验。结果试验组治疗总有效率高于对照组[96.67%(29/30)比70.00%(21/30)],差异有统计学意义(χ^(2)=7.680,P<0.05)。治疗结束时,试验组红痣瘢痕消退程度(VSS评分)低于对照组[(1.25±0.85)分比(4.02±1.12)分],差异有统计学意义(t=10.791,P<0.05);治疗结束时,试验组疼痛程度低于对照组[(1.02±0.25)比(3.02±0.52)],差异有统计学意义(t=18.986,P<0.05)。试验组不良反应总发生率低于对照组[10.00%(3/30)比43.33%(13/30)],差异有统计学意义(χ^(2)=8.523,P<0.05)。结论595 nm脉冲染料激光联合湿润烧伤膏可显著提高儿童大面积鲜红斑痣的治疗效果,利于红痣瘢痕消退,改善疼痛程度,提升患儿治疗过程中的舒适度,且安全可靠。 展开更多
关键词 大面积鲜红斑痣 595 nm脉冲染料激光 湿润烧伤膏 创面修复 儿童
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免疫荧光技术在近视相关生物标志物检测中的应用进展
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作者 赵宇辉 毕宏生 +3 位作者 孙华跃 李文慧 田庆梅 卢秀珍 《中国医药导报》 CAS 2024年第8期36-39,共4页
免疫荧光(IF)技术亦称荧光抗体技术,是通过结合荧光团标记的特定抗原或抗体在紫外线发出荧光来实现的一种示踪技术。IF具有极高的灵敏度和信号放大能力,被广泛应用于细菌病毒和寄生虫的鉴别诊断、部分疾病免疫学机制的研究、器官移植的... 免疫荧光(IF)技术亦称荧光抗体技术,是通过结合荧光团标记的特定抗原或抗体在紫外线发出荧光来实现的一种示踪技术。IF具有极高的灵敏度和信号放大能力,被广泛应用于细菌病毒和寄生虫的鉴别诊断、部分疾病免疫学机制的研究、器官移植的鉴定、抗原组织定位等方面。近视作为一种屈光不正性疾病,严重影响着人们的视力健康,IF在近视机制及治疗措施的研究中发挥了重要作用。本文就近年来IF在近视相关生物标志物检测中的应用进展进行综述。 展开更多
关键词 免疫荧光 免疫荧光染色 荧光抗体 近视 眼科学 免疫学
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毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析
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作者 彭月梅 叶状 +7 位作者 汪飞燕 王礼跃 冯永翠 王乐乐 候照峰 许金俊 陶建平 刘丹丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期846-853,共8页
旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,... 旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 EnGPX 克隆表达 反应原性 免疫荧光定位
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细粒棘球绦虫MDH基因的克隆表达结构功能预测及蛋白定位
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作者 普娜 赵文卿 +5 位作者 张玉霞 陈旭珂 张艳艳 孙艳 薄新文 王正荣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期393-402,共10页
为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦... 为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴的cDNA为模板,用PCR扩增MDH基因全长序列;采用生物信息学软件对MDH蛋白的理化性质、结构特点等进行分析;构建重组质粒pET28a-MDH并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,随后纯化、复性蛋白,并通过Western-blot对蛋白进行抗原性分析;利用间接免疫荧光试验检测原头蚴中目的蛋白的定位;应用实时荧光定量PCR分析Eg MDH基因m RNA在原头蚴及成虫中的相对转录水平。生物信息学分析结果显示,Eg MDH基因长999 bp,编码332个氨基酸,蛋白分子式为C1639H2599N445O475S16,相对分子质量为36 651.32,理论等电点为8.11,且编码蛋白没有信号肽和跨膜区,含有40个磷酸化位点,3个N连接型糖基化位点,9个优势B细胞抗原表位。二级结构由α-螺旋(46.69%)、无规则卷曲(31.93%)、延伸链结构(16.87%)和β-转角(4.52%)构成。克隆的基因长975 bp,预测分子质量为35.7 ku;Western-blotting显示,重组蛋白可以被抗His标签的家兔多克隆抗体和原头蚴可溶性全蛋白小鼠多克隆抗体识别;间接免疫荧光试验显示,Eg MDH蛋白定位在原头蚴的囊壁;实时荧光定量PCR显示,Eg MDH基因在成虫及原头蚴中均有表达,且原头蚴阶段的转录水平显著高于成虫(P<0.05)。本研究结果初步表明Eg MDH具有作为疫苗候选抗原的潜力,以期为后续细粒棘球绦虫疫苗研发提供候选抗原;同时也为后续细粒棘球绦虫MDH基因的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 苹果酸脱氢酶 生物信息学 原核表达 间接免疫荧光
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非洲马瘟病毒VP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体制备
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作者 范亚亚 王轩莹 +6 位作者 户鑫兵 田占成 关贵全 罗建勋 殷宏 郑玉姝 独军政 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期357-363,共7页
为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AH... 为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AHSVS6,转染Sf9昆虫细胞;构建了重组质粒pFastBac-AHSVS6,拯救获得含有AHSV S6基因的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,在Sf9昆虫细胞中成功表达分子质量大小为60 ku的AHSV VP5重组蛋白。采用组氨酸标签纯化树脂对重组VP5蛋白进行纯化,将其与弗氏佐剂乳化后3次免疫新西兰大白兔收集血清,获得了针对AHSV VP5蛋白的多克隆抗体,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验验证了该抗体的特异性。本试验利用杆状病毒表达系统成功表达了AHSV全长VP5重组蛋白,成功制备出特异的VP5蛋白多克隆抗体,这为进一步研究AHSV VP5蛋白的功能及研制亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 VP5蛋白 杆状病毒表达系统 多克隆抗体 免疫荧光
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紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响
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作者 彭腾腾 王信 +3 位作者 李海燕 尹盼盼 范彬 石晓峰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期730-739,共10页
目的探究紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆力及氧化应激损伤的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、紫斑牡丹花粉组(750、1500、3000 mg·kg^(-1)),采用颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1... 目的探究紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆力及氧化应激损伤的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、紫斑牡丹花粉组(750、1500、3000 mg·kg^(-1)),采用颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1)),制备亚急性衰老模型。Morris水迷宫评估小鼠学习记忆力;HE、DAPI染色评估肝、脑组织细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清、肝脑组织内MDA、T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT及γ-H2AX、SA-β-Gal水平。结果水迷宫实验结果表明,紫斑牡丹花粉能明显提高衰老小鼠的学习记忆力。组织染色结果表明,紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠肝脑组织细胞损伤具有保护作用,且高剂量组作用最为明显。ELISA结果显示,与模型组比较,紫斑牡丹花粉各剂量组的MDA、γ-H2AX、SA-β-Gal水平降低,T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT水平升高。结论紫斑牡丹花粉能改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习记忆力,提高衰老小鼠体内抗氧化酶活性和清除自由基、脂质过氧化物的能力,保护肝脑脏器组织细胞免受氧化损伤,提示其具有潜在的延缓衰老的作用。 展开更多
关键词 紫斑牡丹花粉 D-半乳糖 氧化应激 抗衰老 MORRIS水迷宫 HE染色 DAPI染色
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广西金花茶根系丛枝菌根真菌染色方法探讨
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作者 许诗萍 高日芳 +5 位作者 张金莲 宋娟 李冬萍 何苑皞 曾诗媛 陈廷速 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期215-224,共10页
金花茶(Camellia nitidissima)为山茶科山茶属植物,属于国家一级保护植物,具有很高的观赏价值及药用价值。但目前金花茶野生资源少,因此寻找高效的人工种植方法快速繁殖金花茶优良种苗,进而大幅度提高规模化种植金花茶的产量十分必要。... 金花茶(Camellia nitidissima)为山茶科山茶属植物,属于国家一级保护植物,具有很高的观赏价值及药用价值。但目前金花茶野生资源少,因此寻找高效的人工种植方法快速繁殖金花茶优良种苗,进而大幅度提高规模化种植金花茶的产量十分必要。丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌能显著促进植物生长发育、提高作物产量、增强植物抗逆性和抗病性,金花茶接种AM真菌,对金花茶有积极的影响。由于几乎所有的AM真菌接种试验均涉及菌根发育状况观察与侵染率测定,而目前AM侵染状况的观察测定方法种类繁多,良莠不齐,因此本研究探究一种金花茶根系AM真菌检测的最佳染色方法,以便更好地观察AM真菌对金花茶根系的侵染情况。本研究以金花茶健康植株根系为试验材料,探讨5种染色剂(苏丹红Ⅳ、酸性品红、苯胺蓝、台酚蓝、醋酸墨水)对金花茶根系AM真菌的染色效果。研究表明:5%醋酸墨水染色液的染色效果最佳,根皮层细胞内AM真菌的菌丝、泡囊、孢子等结构清晰可见,且能够明确分辨AM真菌与其他未知真菌,根的染色效果可以长久保存;利用苏丹红Ⅳ和酸性品红染色的AM真菌菌丝、泡囊与背景反差不明显,而且酸性品红的染色效果保存时间短,不利于观察;苯胺蓝和台酚蓝的染色效果略次于醋酸墨水,且价格昂贵,成本高。除醋酸墨水外,其他4种染色剂均是疑似致癌物,长期使用对操作人员的健康产生非常大的安全隐患。醋酸墨水染色操作简便、毒性低、成本低廉、染色效果极佳,适用于金花茶根系AM真菌的染色和制片观察。本研究结果可为今后金花茶菌根种苗的应用提供新的思路。 展开更多
关键词 金花茶 根系 丛枝菌根真菌 染色
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用于多重免疫荧光染色的小鼠肺组织冰冻切片制备方法优化研究
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作者 叶倩宸 徐丹 +2 位作者 文富强 陈俊 汪涛 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期96-102,共7页
目的优化小鼠肺组织冰冻切片制作方法,提高肺组织冰冻切片质量,有利于提高免疫荧光染色的特异性,获得更准确可靠的实验结果。方法使用C57BL/6小鼠,分别采用传统冷冻后固定法、冷冻前固定法、改良灌注冷冻前固定法3种方法制作冰冻切片,... 目的优化小鼠肺组织冰冻切片制作方法,提高肺组织冰冻切片质量,有利于提高免疫荧光染色的特异性,获得更准确可靠的实验结果。方法使用C57BL/6小鼠,分别采用传统冷冻后固定法、冷冻前固定法、改良灌注冷冻前固定法3种方法制作冰冻切片,经免疫荧光染色后使用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察肺组织染色情况。使用荧光显微镜对肺组织切片进行全片扫描,计算单位面积内完整气道数量。结果传统冷冻后固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片,肺泡结构破坏,气道壁断裂严重,存在非特异性染色;冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构相对完整,但肺泡塌陷,部分气道结构破坏;改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构形态均完整、清晰,多重免疫荧光染色定位准确。改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片单位面积内完整气道(直径≥100μm)数量高于冷冻前固定法((0.66±0.15)/mm^(2) vs(0.33±0.14)/mm^(2),P<0.05),也显著高于传统冷冻后固定法((0.66±0.15)/mm^(2) vs(0.02±0.04)/mm^(2),P<0.01)。结论使用改良灌注冷冻前固定法制作冰冻切片,利于保持小鼠肺组织形态完整,利于获得高质量的多重免疫荧光染色结果。 展开更多
关键词 小鼠 肺组织 冰冻切片 免疫荧光
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南京地区健康人群血清可溶性程序性死亡蛋白-1参考区间的建立
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作者 潘婕 徐琴 +4 位作者 张俊 欧明蓉 陈琳 沈瀚 陈雨欣 《临床检验杂志》 CAS 2024年第3期186-192,共7页
目的探讨健康人群血清可溶性程序性死亡蛋白-1(soluble programmed cell death protein-1,sPD-1)水平及其影响因素,初步建立南京地区健康人群血清sPD-1水平的参考区间。方法本研究纳入2023年5月至9月在南京鼓楼医院及句容人民医院进行... 目的探讨健康人群血清可溶性程序性死亡蛋白-1(soluble programmed cell death protein-1,sPD-1)水平及其影响因素,初步建立南京地区健康人群血清sPD-1水平的参考区间。方法本研究纳入2023年5月至9月在南京鼓楼医院及句容人民医院进行体检的健康人群375例,其中男性194例,女性181例。留取健康人群的血清标本,采用基于新型探针生物传感器的全自动荧光免疫分析法(tests-on-probes,TOP法)检测血清sPD-1水平,并分析性别、年龄及其他实验室指标对sPD-1的影响;采用非参数法计算总体及不同年龄段健康人群血清sPD-1水平的参考区间。结果健康人群血清sPD-1水平为108.82(92.80,134.95)pg/mL,男性和女性健康人群血清sPD-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。进一步将健康人群按照年龄分为<65岁和≥65岁2组,其血清sPD-1水平分别为106.65(90.35,130.60)pg/mL,113.20(95.60,144.83)pg/mL,组间差异有统计学意义(P=0.014);而将健康人群根据年龄分成3组(<40岁,40~64岁,≥65岁)时,其血清sPD-1水平分别为112.00(98.68,137.23)pg/mL,99.07(82.38,119.60)pg/mL,113.20(95.60,144.83)pg/mL,3组间差异亦有统计学意义(P<0.001)。多因素线性回归分析显示,γ-谷氨酰基转移酶(γ-glutamyl transpeptidase,GGT)是健康人群血清sPD-1水平的影响因素。根据临床与实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institutes,CLSI)C28-A3文件推荐的非参数法计算sPD-1参考区间,健康人群总体血清sPD-1水平的参考区间(第2.5%~97.5%百分位的浓度范围)为66.7~214.7 pg/mL;将健康人群分为<40岁、40~64岁、≥65岁3个年龄段,其对应的血清sPD-1在第2.5%~97.5%百分位的浓度范围分别为71.9~202.7 pg/mL、59.4~220.0 pg/mL、69.6~229.0 pg/mL。结论本研究初步建立了南京地区血清sPD-1健康人群以及分为3个年龄段的参考区间。 展开更多
关键词 可溶性程序性死亡蛋白-1 参考区间 荧光免疫分析法
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益生菌对发酵乳品质影响的研究进展
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作者 戴一佳 赵亮 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第8期388-396,共9页
发酵乳营养丰富、风味独特,市场发展迅速,是益生菌在食品领域的重要产品应用形式。与嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种等发酵菌株相比,益生菌在主发酵过程中参与度较低,但通过协同发酵对发酵乳的质构、风味、后酸化程度等产生一定作... 发酵乳营养丰富、风味独特,市场发展迅速,是益生菌在食品领域的重要产品应用形式。与嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种等发酵菌株相比,益生菌在主发酵过程中参与度较低,但通过协同发酵对发酵乳的质构、风味、后酸化程度等产生一定作用,影响发酵乳品质。本文综述了益生菌对发酵乳质构、风味品质、后酸化进程的影响;分析了益生菌利用代谢及产EPS维持发酵乳的质构,通过产生风味化合物改善发酵乳的风味品质,以及通过影响商业发酵剂的生长而影响发酵乳后酸化进程的相关机理;总结提出了提高益生菌在发酵乳中稳定性的相关技术,以期为功能性发酵乳的研发和品质提升提供参考。 展开更多
关键词 益生菌 发酵乳 风味 质构 菌株活性
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