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罗哌卡因抑制膀胱癌J82细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究
1
作者 杨欣宇 杨阳 王立娟 《检验医学与临床》 CAS 2024年第21期3195-3200,共6页
目的探讨罗哌卡因对人膀胱癌J82细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的调控作用。方法体外培养人膀胱癌J82细胞,该研究分为预实验和正式实验两个部分。预实验分组:对照组(不进行干预),低、中、高浓度罗哌卡因... 目的探讨罗哌卡因对人膀胱癌J82细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的调控作用。方法体外培养人膀胱癌J82细胞,该研究分为预实验和正式实验两个部分。预实验分组:对照组(不进行干预),低、中、高浓度罗哌卡因组(200、400、800μmol/L罗哌卡因);正式实验分组:对照组、罗哌卡因组(有显著作用浓度的罗哌卡因)、阳性药物组(100 nmol/L紫杉醇)、抑制剂组(罗哌卡因+20μmol/L JNK信号通路抑制剂SP600125)和激活剂组(罗哌卡因+1μg/mL JNK信号通路激活剂茴香霉素),干预24 h。分别采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、划痕法、Transwell小室法、蛋白免疫印迹法检测细胞活力、增殖率、迁移率、侵袭细胞数、上皮间质转化(EMT)及JNK通路相关蛋白水平。结果预实验中,与对照组比较,高浓度罗哌卡因组细胞活力明显降低(P<0.05),以高浓度罗哌卡因(800μmol/L)进行正式实验。正式实验中,罗哌卡因组和阳性药物组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数,以及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)和磷酸化(p)-JNK表达水平较对照组降低(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平较对照组升高(P<0.05)。与罗哌卡因组相比,抑制剂组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数,以及N-cadherin、Vimentin、FN和p-JNK表达水平降低(P<0.05),E-cadherin表达水平升高(P<0.05),而激活剂组上述指标趋势则正好相反(P<0.05)。结论罗哌卡因可能通过阻断JNK信号通路活化抑制人膀胱癌J82细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程。 展开更多
关键词 膀胱癌 罗哌卡因 人膀胱癌j82细胞 c-Jun氨基末端激酶信号通路 增殖 迁移 侵袭 上皮间质转化
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丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响 被引量：4
2
作者 吴云涛 唐晨野 +1 位作者 郭晓 王骁 《浙江医学》 CAS 2019年第13期1358-1362,I0006,共6页
目的探讨丹参酮ⅡA在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA处理J82细胞,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双标记流式检测法、Transw... 目的探讨丹参酮ⅡA在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA处理J82细胞,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双标记流式检测法、Transwell侵袭实验及划痕实验检测J82细胞的增殖、凋亡、侵袭及迁移情况。结果丹参酮ⅡA可抑制J82细胞增殖,且呈浓度与时间依赖性(均P<0.05)。1、3、5μmol/L丹参酮ⅡA处理组总凋亡率分别为12.23%、14.74%、18.40%,均高于对照组的3.36%(P<0.05),且呈浓度依赖性(P<0.05)。对照组、1μmol/L组、3μmol/L组、5μmol/L组细胞侵袭数比较,差异有统计学意义(P<0.05),且呈浓度与时间依赖性(均P<0.05)。对照组、1μmol/L组、3μmol/L组、5μmol/L组划痕后12、24、36h划痕愈合率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),呈浓度依赖性(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA在体外可抑制膀胱癌J82细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA 膀胱癌 j82细胞 增殖 凋亡 侵袭 迁移
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CYP2U1基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响
3
作者 赵小磊 赵振华 +1 位作者 常俊锴 李松 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第13期1750-1753,共4页
目的观察细胞色素P4502U1(CYP2U1)基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法脂质体转染法转染至J82细胞,qRT-PCR、Western-blot检测CYP2U1、p53、caspase-3、Bcl-2的表达。MTT、划痕试验、流氏细胞技术分别检测各组... 目的观察细胞色素P4502U1(CYP2U1)基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法脂质体转染法转染至J82细胞,qRT-PCR、Western-blot检测CYP2U1、p53、caspase-3、Bcl-2的表达。MTT、划痕试验、流氏细胞技术分别检测各组细胞增殖、迁移、凋亡情况。结果 CYP2U1基因沉默后CYP2U1在人膀胱癌J82细胞中表达减少(P <0.05)。沉默CYP2U1基因可提高人膀胱癌J82细胞的增殖和迁移,抑制凋亡,促进Bcl-2的表达,抑制p53、caspase-3的表达(P <0.05)。结论 CYP2U1基因沉默能促进人膀胱癌J82细胞的增殖和迁移,抑制其凋亡,可能与下调p53、caspase-3、上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 细胞色素P4502U1 人膀胱癌j82细胞 增殖 凋亡 迁移
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丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖与凋亡效应及作用机制
4
作者 戴顺 沈瑞林 +2 位作者 唐晨野 汪家盛 郭晓 《浙江临床医学》 2022年第3期332-335,339,共5页
目的探讨丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖与凋亡效应及作用机制。方法以不同浓度(1、2、3、5、8μmol/L)的丹参酮ⅡA处理J82细胞48 h,先后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测法检测梯度剂量的丹参酮ⅡA对J82细胞半数抑制率(IC50)的测定及细... 目的探讨丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖与凋亡效应及作用机制。方法以不同浓度(1、2、3、5、8μmol/L)的丹参酮ⅡA处理J82细胞48 h,先后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测法检测梯度剂量的丹参酮ⅡA对J82细胞半数抑制率(IC50)的测定及细胞增殖的影响,流式细胞术及Annex V/PI染色检测法用于检测丹参酮ⅡA对J82细胞凋亡及细胞周期的影响,免疫印迹法(Western-blotting)检测与细胞;周亡相关的蛋白cyclin Dl、Bel-xL、caspase3、caspase8、caspase9、P65表达的差异。结果丹参酮ⅡA能够抑制人膀耽癌J82细胞的活性,且具有浓度依赖性(P<0.05),半数抑制浓度(IC50)为4.16μmol/L。1、3μmol/L丹参酮ⅡA处理组的G1期细胞百分比分别为(47.98%±1.49%)、(54.94%±3.39%),均高于对照组(42.22%±0.48%)(均P<0.05),且3μmol/L组高于1 pmol/L组(P<0.05);3μmol/L组的S期细胞百分比(33.19%±4.17%)低于对照组(46.32%±2.14%)(P<0.05)。1、3、5μmol/L组的总凋亡率分别为11.23%、14.84%、18.42%,均高于对照组的3.26%(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。1、3 pmol/L组的caspase3蛋白相对表达量分别为(0.39±0.02)、(0.52±0.03),均高于对照组的0.26±0.02(P<0.05);caspase9蛋白相对表达量分别为(0.18±0.03)、(0.33±0.12),均高于对照组的0.02±0.02(P<0.05);3μmol/L组两种蛋白的表达量均高于1μmol/L组(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA在体外可抑制J82细胞增殖,G1/S期阻滞可能是其中的机制之一,同时可能通过线粒体途径诱导J82细胞凋亡。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA 膀胱癌 j82细胞 增殖 凋亡 细胞周期阻滞 线粒体途径
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敲减免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌细胞恶性增殖、侵袭和干细胞样特性的影响 被引量：2
5
作者 王晓寒 叶云林 +2 位作者 肖康华 赵志鑫 吴静雅 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1454-1460,共7页
目的·探讨干扰免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌J82细胞的恶性增殖和干细胞样特性的影响。方法·shRNA干扰效率的检测采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)。J82细胞增殖采用克隆... 目的·探讨干扰免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌J82细胞的恶性增殖和干细胞样特性的影响。方法·shRNA干扰效率的检测采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)。J82细胞增殖采用克隆形成实验检测。细胞凋亡采用流式细胞术检测。细胞侵袭采用Transwell检测。肿瘤克隆能力采用肿瘤成球实验观察。细胞凋亡、侵袭和干细胞样相关蛋白表达采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测。结果·B7-H3在膀胱癌组织及膀胱癌细胞系中高表达(P=0.000)。确定shRNA2为设计的3组shRNAs中干扰B7-H3基因效率最高(P=0.000)。B7-H3干扰抑制了J82细胞的增殖、侵袭、肿瘤克隆能力及干细胞样特性(P=0.000)。并且,B7-H3干扰促进了J82细胞的凋亡(P=0.000)。结论·免疫调节蛋白B7-H3基因干扰可对膀胱癌J82细胞的恶性增殖、侵袭及干细胞样特性产生抑制作用。 展开更多
关键词 B7-H3 膀胱癌 j82细胞 干细胞样特性
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改良性柑橘果胶通过下调Galectin-3抑制膀胱癌细胞生长 被引量：1
6
作者 方天 吴迪 +4 位作者 梁磊 胡文娟 董敏 许龙翔 恽时锋 《实验动物科学》 2018年第3期41-45,共5页
目的检测改良性柑橘(MCP)对人膀胱癌增殖和生长的抑制作用。方法 MTT检测膀胱癌细胞T24和J82细胞的活性。Western blot检测T24和J82细胞中凋亡蛋白cv Caspase-3和cv PARP以及Galectin-3蛋白的表达水平。建立膀胱癌T24细胞皮下移植瘤裸... 目的检测改良性柑橘(MCP)对人膀胱癌增殖和生长的抑制作用。方法 MTT检测膀胱癌细胞T24和J82细胞的活性。Western blot检测T24和J82细胞中凋亡蛋白cv Caspase-3和cv PARP以及Galectin-3蛋白的表达水平。建立膀胱癌T24细胞皮下移植瘤裸鼠模型,灌胃MCP后,比较各组肿瘤重量和体积大小,免疫组化的方法检测各组别的增殖蛋白Ki67和凋亡蛋白cv Caspase-3以及Galectin-3蛋白表达水平的差异性。显微镜观察分析结果。结果 MTT结果证实MCP对人膀胱癌细胞T24和J82细胞活力有抑制作用(P<0.05)。Western blot证实浓度为2.0%的MCP组别中膀胱癌细胞凋亡蛋白表达明显增高。灌胃MCP对T24移植瘤荷瘤裸鼠的肿瘤体积和重量均有明显的抑制(P<0.05),免疫组织化学染色定量分析表示700mg/kg组荷瘤鼠组织内Ki67和Caspase-3证实增殖指数降低(P<0.05),其潜在靶点Galectin-3表达降低。结论本课题研究显示MCP对膀胱癌细胞的增殖和存活的显著抑制作用,且Galectin-3表达降低。故MCP作为一种天然的膳食纤维,同样可以作为药物预防和治疗膀胱癌。 展开更多
关键词 改良性柑橘果胶 膀胱癌 T24 j82 细胞存活
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澳洲茄碱通过mTOR信号通路抑制膀胱癌细胞增殖 被引量：4
7
作者 刘容 方潇 +5 位作者 高宇文 林飞飞 林志杰 陈榕彬 翁铭芳 吴卫真 《东南国防医药》 2020年第6期572-577,共6页
目的研究澳洲茄碱对膀胱癌细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其作用机制。方法0、5、10、20、40μmol/L澳洲茄碱处理膀胱癌J82和T24细胞24 h、48 h、72 h后,应用CCK-8检测细胞生存率。0、10、30μmol/L澳洲茄碱处理J82细胞24 h后,... 目的研究澳洲茄碱对膀胱癌细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其作用机制。方法0、5、10、20、40μmol/L澳洲茄碱处理膀胱癌J82和T24细胞24 h、48 h、72 h后,应用CCK-8检测细胞生存率。0、10、30μmol/L澳洲茄碱处理J82细胞24 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。0、10、30μmol/L澳洲茄碱处理J82细胞24 h后,应用Western blot法检测mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白的表达。0、10、20、30μmol/L澳洲茄碱处理J82细胞24 h后,RT-qPCR法检测mTOR、p70S6K mRNA表达情况。结果澳洲茄碱显著抑制膀胱癌J82细胞、T24细胞增殖,相同作用时间、不同浓度组细胞生存率总体差异均有统计学意义(P<0.01)。澳洲茄碱诱导J82细胞凋亡,0、10、30μmol/L澳洲茄碱组凋亡率分别为(0.93±0.26)%、(8.33±2.16)%、(29.53±7.63)%。澳洲茄碱引起J82细胞发生S期阻滞,0、10、30μmol/L澳洲茄碱组S期细胞占比分别是(34.51±3.61)%、(39.34±3.21)%、(44.50±4.29)%。澳洲茄碱下调J82细胞p-mTOR蛋白表达(F=85.18,P<0.01)和p-p70S6K蛋白表达(F=74.96,P<0.01)。澳洲茄碱下调J82细胞mTOR mRNA表达(F=31.49,P<0.01)和p70S6K mRNA表达(F=47.08,P<0.01)。结论澳洲茄碱通过mTOR信号通路抑制膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期。 展开更多
关键词 澳洲茄碱 膀胱癌 j82细胞 T24细胞 细胞凋亡 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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隐丹参酮对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡的影响及其机制 被引量：1
8
作者 唐晨野 王骁 +2 位作者 吴云涛 金轶刚 郭晓 《中国基层医药》 CAS 2020年第11期1281-1285,共5页
目的探讨隐丹参酮在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以浓度为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0μmol/L的隐丹参酮处理J82细胞48 h后,采用CCK-8法检测其对J82细胞增殖的影响。Annexin V-FITC/PI双标记流式细... 目的探讨隐丹参酮在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以浓度为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0μmol/L的隐丹参酮处理J82细胞48 h后,采用CCK-8法检测其对J82细胞增殖的影响。Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测J82细胞凋亡情况。免疫印迹法(Western blotting)检测细胞增殖及凋亡相关蛋白p65、caspase 3、caspase 8、caspase 9表达的差异。结果CCK-8法结果显示各组的450 nm吸光度(A)值:对照组(1.77±0.06),0.5μmol/L组(1.78±0.08),1.0μmol/L组(1.64±0.05),2.0μmol/L组(1.48±0.12),3.0μmol/L组(1.20±0.07),4.0μmol/L组(0.93±0.10),5.0μmol/L组(0.76±0.02),8.0μmol/L组(0.05±0.01),各组的450 nm A值差异有统计学意义(F=329.83,P=0.00),除0.5μmol/L组外其余各两组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示三组的早期凋亡率和总凋亡率在总体上差异均有统计学意义(F=32.49,P=0.00;F=6.39,P=0.03);两个实验组的早期凋亡率均高于对照组(均P<0.05),且3.0μmol/L组比1.0μmol/L组更高[(11.83±1.12)%比(7.01±1.84)%,t=3.73,P<0.05]。Western blotting结果显示隐丹参酮处理后p65蛋白表达减少,caspase 3、caspase 9蛋白表达增加。结论隐丹参酮在体外可能通过抑制NF-κB信号转导通路来抑制人膀胱癌J82细胞增殖,并通过线粒体途径诱导其凋亡。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 隐丹参酮 j82细胞 细胞增殖 细胞凋亡 核因子ΚB 线粒体
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PKCα和PLK1在膀胱癌中的表达与相关性 被引量：3
9
作者 张昊 孔垂泽 +1 位作者 辛鹏 董潇 《解剖科学进展》 2019年第6期622-625,共4页
目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)与Polo样激酶1(PLK1)在膀胱癌细胞中的表达及其相关性。方法利用PKCα的siRNA转染膀胱肿瘤J82细胞系后,基因芯片筛选出下游靶点PLK1,RT-PCR及Western-blot方法对其表达水平进行验证,分析两者的相关性。结果... 目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)与Polo样激酶1(PLK1)在膀胱癌细胞中的表达及其相关性。方法利用PKCα的siRNA转染膀胱肿瘤J82细胞系后,基因芯片筛选出下游靶点PLK1,RT-PCR及Western-blot方法对其表达水平进行验证,分析两者的相关性。结果在膀胱癌细胞中利用siRNA抑制PKCα的表达会导致膀胱癌细胞中PLK1的表达量的下降(P<0.05)。同时在膀胱肿瘤标本中二者呈正相关(P<0.01)。结论 PKCα和PLK1是膀胱癌治疗的可能新靶点。 展开更多
关键词 膀胱癌 PKCΑ PLK1
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抑制miR-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量：1
10
作者 王义兵 傅斌 +6 位作者 王共先 张霞丽 黄亮 郎斌 许晓源 刘仁升 郝超 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期879-887,共9页
目的 :探讨抑制微RNA(microRNA,miRNA,miR)-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 :将化学合成的miR-221抑制片段has-miR-221 inhibitor和miR-221抑制阴性无意义片段(阴性对照组)(has-miR-221inhibitor negative control)转染至... 目的 :探讨抑制微RNA(microRNA,miRNA,miR)-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 :将化学合成的miR-221抑制片段has-miR-221 inhibitor和miR-221抑制阴性无意义片段(阴性对照组)(has-miR-221inhibitor negative control)转染至膀胱癌T24和J82细胞中,转染5 h后,在荧光显微镜下观察转染效率;实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24和J82细胞中miR-221的表达情况;MTT法检测转染24、48和72 h后,T24和J82细胞的增殖情况;RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染48 h后,T24和J82细胞中p53上调凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白的表达;FCM法和吖啶橙(acridine orange,AO)-溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色检测转染48 h后,T24和J82细胞的凋亡情况。结果 :Has-miR-221 inhibitor转染至T24和J82细胞的效率分别为80%和90%。Has-miR-221 inhibitor转染后,T24和J82细胞中miR-221的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(只加入转染试剂)(P<0.05);转染后T24和J82细胞的增殖抑制率高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),且呈时间依赖性;转染组PUMA和Bax mRNA及蛋白的表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);has-miR-221 inhibitor转染组T24和J82细胞的凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 :抑制miR-221的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖,并促进其凋亡。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 微RNAS 细胞增殖 细胞凋亡 MIR-221 细胞 T24 j82
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