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敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V的化学合成与氧化复性及其钠通道活性鉴定 被引量：3
1
作者 全妙华 曾雄智 +2 位作者 皮建辉 邓梅春 梁宋平 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期501-504,共4页
应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1mol/L Tris-HCl缓冲液、... 应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1mol/L Tris-HCl缓冲液、pH7.50、1mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、样品浓度为0.05mg/L、复性温度为4℃。膜片钳电生理实验结果显示敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V对大鼠背根神经节(DRG)细胞上表达的河豚毒素不敏感型(TTX-R)与河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(160±2.5)nmol/L和(39.6±3.2)nmol/L。与天然的敬钊毒素-V相比,该剪切体对大鼠DRG细胞上的TTX-S钠电流的抑制作用基本一致,但对TTX-R钠电流的抑制作用却大大降低,表明敬钊毒素-V分子N-端的酪氨酸残基是一个与TTX-R钠通道结合活性相关的氨基酸残基。 展开更多
关键词 化学合成 敬钊毒素-v剪切体 复性 钠离子通道
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敬钊毒素-V突变体K12A-JZTX-V的化学合成与氧化还原复性
2
作者 曾雄智 全妙华 +1 位作者 皮建辉 梁宋平 《怀化学院学报》 2008年第5期41-43,共3页
敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了... 敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第12位赖氨酸残基的突变体K12A-JZTX-V,合成粗品经反相高效液相色谱分离纯化和MALDI-TOF质谱鉴定,证明化学合成是成功的.线性多肽经谷胱甘肽氧化复性后,复性产物经质谱测定其相对分子量为3549.63,比线性分子的理论分子质量低6,说明六个半胱氨酸已经配对形成了三对二硫键. 展开更多
关键词 敬钊缨毛蛛毒素-v 固相多肽合成 突变体 氧化复性 质谱
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Lys4突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响 被引量：1
3
作者 曾雄智 邓梅春 +3 位作者 彭莹 魏文廷 王贤纯 梁宋平 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第1期20-23,共4页
敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖... 敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖氨酸残基的突变体K4A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物分别用MALDI-TOF/TOF质谱进行相对分子质量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析.研究结果表明,Lys4被Ala取代后,K4A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V基本相当,提示Lys4与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性关系不大;而K4A-JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约8.3倍,说明Lys4是JZTX-V与河豚毒素不敏感型钠通道抑制活性相关的氨基酸残基. 展开更多
关键词 敬钊缨毛蛛毒素-v 固相多肽合成 突变体 氧化复性 膜片钳
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Arg20突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响 被引量：1
4
作者 曾雄智 邓梅春 +3 位作者 皮建辉 全妙华 王贤纯 梁宋平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1228-1232,共5页
敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位... 敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位精氨酸残基的突变体R20A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性。复性产物分别用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行分子量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析。研究结果表明,Arg20被Ala取代后,R20A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞(DRG)膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V相当,提示Arg20与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性无关或关系不大;而R20A-JZTX-V对TTX-R钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约18.3倍,说明Arg20是与JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道抑制活性相关的关键活性残基之一,推测R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20后改变了JZTX-V与TTX-R型钠通道的作用位点。 展开更多
关键词 敬钊缨毛蛛毒素-v固相多肽合成 突变体 氧化复性 膜片钳
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敬钊毒素-V对吗啡成瘾小鼠戒断症状的影响
5
作者 徐德宏 陈仁忠 +6 位作者 池宇朋 蔡丽君 文宁 肖玉成 王贤纯 曾雄智 梁宋平 《湖南中医药大学学报》 CAS 2011年第7期11-13,共3页
目的观察Jingzhaotoxin-V敬钊毒素-V(JZTX-V)对纳洛酮催促戒断症状的治疗作用。方法建立吗啡成瘾小鼠模型,分别测定4组不同剂量5,50,500,1000μg/kg JZTX-V对小鼠戒断后跳跃次数的影响。结果 JZTX-V在戒断后的15min内能减少小鼠的跳跃次... 目的观察Jingzhaotoxin-V敬钊毒素-V(JZTX-V)对纳洛酮催促戒断症状的治疗作用。方法建立吗啡成瘾小鼠模型,分别测定4组不同剂量5,50,500,1000μg/kg JZTX-V对小鼠戒断后跳跃次数的影响。结果 JZTX-V在戒断后的15min内能减少小鼠的跳跃次数,而且5、50和500μg/kg JZTX-V对跳跃次数的抑制具有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。结论 JZTX-V在5-500μg/kg范围内能显著抑制小鼠戒断后的跳跃次数,有可能成为一种戒毒先导分子。 展开更多
关键词 敬钊毒素-v 吗啡依赖 戒断症状 纳洛酮 小鼠
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敬钊毒素-V对大鼠术后疼痛模型中机械性异常疼痛的影响 被引量：1
6
作者 孙正华 徐德宏 +4 位作者 陈仁忠 蔡丽君 池宇朋 曾雄智 梁宋平 《湖南中医药大学学报》 CAS 2009年第3期27-29,46,共4页
目的研究敬钊毒素-V对大鼠术后疼痛模型中机械性异常疼痛的影响。方法首先建立大鼠术后疼痛模型,并将造模大鼠随机分为生理盐水组、吗啡组和JZTX-V实验组,每组8只,然后采用von Frey细丝法测量各组大鼠的机械刺激缩爪阈值。结果与生理盐... 目的研究敬钊毒素-V对大鼠术后疼痛模型中机械性异常疼痛的影响。方法首先建立大鼠术后疼痛模型,并将造模大鼠随机分为生理盐水组、吗啡组和JZTX-V实验组,每组8只,然后采用von Frey细丝法测量各组大鼠的机械刺激缩爪阈值。结果与生理盐水组比较,肌肉注射5.4 mg/kg吗啡产生了明显的镇痛效果,作用时间持续2.5 h;实验显示肌肉注射500μg/kg JZTX-V具有明显的镇痛作用(P<0.01),持续时间长达4.5 h,比吗啡作用时间延长至少2 h。结论JZTX-V对大鼠术后疼痛模型中机械性异常疼痛具有显著的镇痛效果。 展开更多
关键词 敬钊毒素-v 吗啡 大鼠 术后疼痛
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敬钊毒素-Ⅴ的合成、复性及其钾通道活性鉴定 被引量：1
7
作者 曾雄智 邓梅春 +2 位作者 孙正华 王贤纯 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期463-468,共6页
敬钊毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化得到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的功能,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了JZTX-Ⅴ,合成多肽经谷胱甘肽法氧化复性后,利用反相高... 敬钊毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化得到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的功能,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了JZTX-Ⅴ,合成多肽经谷胱甘肽法氧化复性后,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化.复性产物的相对分子质量经质谱测定为3605.51,而与天然毒素混合进行HPLC共洗脱实验时也只得到单一峰.全细胞膜片钳实验显示,JZTX-Ⅴ能够抑制大鼠背根神经节细胞上的A型钾电流,却对外向延迟整流钾电流没有影响,对处于静息关闭状态的A-型钾通道也表现出较高的亲和性.JZTX-Ⅴ对A型钾通道的这种抑制作用具有浓度依从性,其半数有效抑制浓度(IC50)为52.3nmol/L·JZTX-Ⅴ通过引起A型钾通道的活化曲线往去极化方向漂移,和失活曲线往超极化方向漂移来改变通道的门控特征.目前的研究结果为深入开展JZTX-Ⅴ的功能研究及分子改造奠定了基础. 展开更多
关键词 敬钊毒素-Ⅴ(jztx-Ⅴ) 固相多肽合成 氧化复性 全细胞记录 钾电流
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