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敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V的化学合成与氧化复性及其钠通道活性鉴定
被引量：
3
1
作者
全妙华
曾雄智
+2 位作者
皮建辉
邓梅春
梁宋平
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期501-504,共4页
应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1mol/L Tris-HCl缓冲液、...
应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1mol/L Tris-HCl缓冲液、pH7.50、1mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、样品浓度为0.05mg/L、复性温度为4℃。膜片钳电生理实验结果显示敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V对大鼠背根神经节(DRG)细胞上表达的河豚毒素不敏感型(TTX-R)与河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(160±2.5)nmol/L和(39.6±3.2)nmol/L。与天然的敬钊毒素-V相比,该剪切体对大鼠DRG细胞上的TTX-S钠电流的抑制作用基本一致,但对TTX-R钠电流的抑制作用却大大降低,表明敬钊毒素-V分子N-端的酪氨酸残基是一个与TTX-R钠通道结合活性相关的氨基酸残基。
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关键词
化学合成
敬钊毒素-V剪切体
复性
钠离子通道
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职称材料
敬钊毒素-Ⅴ的合成、复性及其钾通道活性鉴定
被引量：
1
2
作者
曾雄智
邓梅春
+2 位作者
孙正华
王贤纯
梁宋平
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期463-468,共6页
敬钊毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化得到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的功能,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了JZTX-Ⅴ,合成多肽经谷胱甘肽法氧化复性后,利用反相高...
敬钊毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化得到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的功能,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了JZTX-Ⅴ,合成多肽经谷胱甘肽法氧化复性后,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化.复性产物的相对分子质量经质谱测定为3605.51,而与天然毒素混合进行HPLC共洗脱实验时也只得到单一峰.全细胞膜片钳实验显示,JZTX-Ⅴ能够抑制大鼠背根神经节细胞上的A型钾电流,却对外向延迟整流钾电流没有影响,对处于静息关闭状态的A-型钾通道也表现出较高的亲和性.JZTX-Ⅴ对A型钾通道的这种抑制作用具有浓度依从性,其半数有效抑制浓度(IC50)为52.3nmol/L·JZTX-Ⅴ通过引起A型钾通道的活化曲线往去极化方向漂移,和失活曲线往超极化方向漂移来改变通道的门控特征.目前的研究结果为深入开展JZTX-Ⅴ的功能研究及分子改造奠定了基础.
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关键词
敬钊毒素-Ⅴ(JZTX-Ⅴ)
固相多肽合成
氧化复性
全细胞记录
钾电流
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职称材料
题名
敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V的化学合成与氧化复性及其钠通道活性鉴定
被引量：
3
1
作者
全妙华
曾雄智
皮建辉
邓梅春
梁宋平
机构
湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期501-504,共4页
基金
国家自然科学基金重点项目(No.30430170)
文摘
应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1mol/L Tris-HCl缓冲液、pH7.50、1mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、样品浓度为0.05mg/L、复性温度为4℃。膜片钳电生理实验结果显示敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V对大鼠背根神经节(DRG)细胞上表达的河豚毒素不敏感型(TTX-R)与河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(160±2.5)nmol/L和(39.6±3.2)nmol/L。与天然的敬钊毒素-V相比,该剪切体对大鼠DRG细胞上的TTX-S钠电流的抑制作用基本一致,但对TTX-R钠电流的抑制作用却大大降低,表明敬钊毒素-V分子N-端的酪氨酸残基是一个与TTX-R钠通道结合活性相关的氨基酸残基。
关键词
化学合成
敬钊毒素-V剪切体
复性
钠离子通道
Keywords
chemical synthesis
N-terminal tyrosine residue truncate of
jingzhaotoxin-v
（Y1-
jztx-v）
renaturation
sodium channels
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
敬钊毒素-Ⅴ的合成、复性及其钾通道活性鉴定
被引量：
1
2
作者
曾雄智
邓梅春
孙正华
王贤纯
梁宋平
机构
湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期463-468,共6页
基金
国家自然科学基金重点项目与面上项目(No.30430170
30670640
+6 种基金
30500146)
国家重点基础研究发展规划(973计划
No.2006CB708508)
国家高技术研究发展计划资助项目(863计划
No.2006AA02Z141)
湖南省自然科学基金项目(No.07JJ3072
06C503)~~
文摘
敬钊毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化得到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的功能,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了JZTX-Ⅴ,合成多肽经谷胱甘肽法氧化复性后,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化.复性产物的相对分子质量经质谱测定为3605.51,而与天然毒素混合进行HPLC共洗脱实验时也只得到单一峰.全细胞膜片钳实验显示,JZTX-Ⅴ能够抑制大鼠背根神经节细胞上的A型钾电流,却对外向延迟整流钾电流没有影响,对处于静息关闭状态的A-型钾通道也表现出较高的亲和性.JZTX-Ⅴ对A型钾通道的这种抑制作用具有浓度依从性,其半数有效抑制浓度(IC50)为52.3nmol/L·JZTX-Ⅴ通过引起A型钾通道的活化曲线往去极化方向漂移,和失活曲线往超极化方向漂移来改变通道的门控特征.目前的研究结果为深入开展JZTX-Ⅴ的功能研究及分子改造奠定了基础.
关键词
敬钊毒素-Ⅴ(JZTX-Ⅴ)
固相多肽合成
氧化复性
全细胞记录
钾电流
Keywords
jingzhaotoxin-v （jztx-v）
solid-phase chemical synthesis
oxidative refolding
whole-cellrecording
potassium currents
分类号
Q25 [生物学—细胞生物学]
Q343 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V的化学合成与氧化复性及其钠通道活性鉴定
全妙华
曾雄智
皮建辉
邓梅春
梁宋平
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2007
3
下载PDF
职称材料
2
敬钊毒素-Ⅴ的合成、复性及其钾通道活性鉴定
曾雄智
邓梅春
孙正华
王贤纯
梁宋平
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
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职称材料
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