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人KIR2DL1-Ig融合蛋白在COS-7细胞的表达 被引量:2
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作者 颜卫华 范丽安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期245-247,共3页
目的 :获得人KIR2DL1分子 (killerIg likereceptor 2DL1)胞外区与人IgGFc段的融合蛋白。方法 :从人外周血单个核细胞中提取总RNA ,通过RT PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA ,经NheⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中... 目的 :获得人KIR2DL1分子 (killerIg likereceptor 2DL1)胞外区与人IgGFc段的融合蛋白。方法 :从人外周血单个核细胞中提取总RNA ,通过RT PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA ,经NheⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中。构建的重组真核表达载体CD5lnegl KIR2DL1。经酶切分析和测序鉴定后 ,通过DEAE dextran/chloroquine法转染COS 7细胞。瞬时表达后 ,取培养上清液经亲和层析、ELISA、SDS PAGE及Western印迹 ,鉴定融合蛋白的表达及其免疫学活性。结果 :序列测定证实 ,该重组表达载体含有正确的KIR2DL1胞外区基因序列。重组真核表达载体CD5lnegl KIR2DL1转染COS 7细胞后 ,ELISA法检测细胞培养上清中有融合蛋白的表达。SDS PAGE结果显示 ,该融合蛋白的相对分子质量 (Mr)约为 730 0 0。Western印迹结果证实 ,该蛋白能被特异性单克隆抗体 (mAb)EB6所识别。结论 :KIR2DL1 Ig融合蛋白表达载体成功构建并在COS 7细胞中获得功能性表达 。 展开更多
关键词 kir2dl1 融合蛋白 基因表达
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同种异体NK细胞KIR2DL1表达差异对其杀伤KG1A细胞活性的影响
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作者 何颖芝 薛同圆 +4 位作者 忻勇杰 张佳佳 张轩煜 陆艺 李玉华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期433-436,共4页
目的:研究同种异体自然杀伤(natural killer,NK)细胞对人急性髓系白血病细胞株KG1A的杀伤率,探讨供者NK细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL1(killer immunoglobulin-like receptor 2DL1,KIR2DL1)表达差异对NK细胞杀伤KG1A细胞活性的... 目的:研究同种异体自然杀伤(natural killer,NK)细胞对人急性髓系白血病细胞株KG1A的杀伤率,探讨供者NK细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL1(killer immunoglobulin-like receptor 2DL1,KIR2DL1)表达差异对NK细胞杀伤KG1A细胞活性的影响。方法:自9名健康志愿供者分离外周血NK细胞,流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL1的表达率,LDH释放法测定NK细胞在效靶比为20∶1时对KG1A细胞的杀伤活性。结果:NK细胞表面KIR2DL1的表达率存在个体差异,9名供者的表达范围为(33.20±1.95)%~(92.69±1.47)%;9名健康供者NK细胞对KG1A细胞的杀伤活性不同,杀伤率范围为(44.40±1.97)%~(93.70±1.12)%。不同个体NK细胞KIR2DL1表达率与其对KG1A细胞的杀伤率呈负相关(r=-1.00,P=0.00)。结论:不同个体NK细胞其表面KIR2DL1表达率与NK细胞对KG1A细胞的杀伤率呈负相关。 展开更多
关键词 NK细胞 kir2dl1 KG1A细胞 K562细胞
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KIR2DL1基因多态性及其抗原表达关系的研究
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作者 和艳敏 陶苏丹 +4 位作者 陈男英 应燕玲 何吉 朱发明 吕杭军 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第S1期121-121,共1页
目的本研究拟建立KIR2DL1基因分型和抗原分型技术,了解中国汉族人群KIR2DL1基因分布和抗原表达情况。方法收集166份新鲜外周血标本,分离单个核细胞,利用NK细胞特异性的CD56,和KIR2DL1特异性的CD158a抗体流式检测KIR2DL1抗原表达情况。... 目的本研究拟建立KIR2DL1基因分型和抗原分型技术,了解中国汉族人群KIR2DL1基因分布和抗原表达情况。方法收集166份新鲜外周血标本,分离单个核细胞,利用NK细胞特异性的CD56,和KIR2DL1特异性的CD158a抗体流式检测KIR2DL1抗原表达情况。提取标本的基因组,利用PCR-SSP技术检测KIR2DL1基因的有无,对于KIR2DL1基因阳性标本设计3对引物扩增1~9号外显子,并进行全长测序分析。结果1)166份标本中,164份标本KIR2DL1阳性,其中62份标本KIR2DL1和KIR2DS1双阳性,仅2份标本KIR2DS1单阳性。 展开更多
关键词 抗原表达 kir2dl1 细胞特异性 基因分布 基因分型 分型技术 双阳性 单阳性 中国汉族人群 引物扩增
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具核梭杆菌诱导CD8^(+)T淋巴细胞表面抑制性受体KIR2DL1高表达在食管鳞癌中的临床意义
4
作者 王小朋 刘怡文 +3 位作者 原翔 邢瑶平 王晓军 周福有 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期335-340,共6页
目的分析食管鳞癌患者癌组织中具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)对CD8^(+)T细胞表面抑制性受体KIR2DL1的诱导效应与临床病理特征及5年生存率的相关性,并探讨其临床意义及预后价值。方法选择2014年1月到2014年12月安阳肿瘤医院手... 目的分析食管鳞癌患者癌组织中具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)对CD8^(+)T细胞表面抑制性受体KIR2DL1的诱导效应与临床病理特征及5年生存率的相关性,并探讨其临床意义及预后价值。方法选择2014年1月到2014年12月安阳肿瘤医院手术切除的食管鳞癌患者癌组织及相应癌旁组织石蜡包埋标本为研究对象,采用RNAscope及免疫组织化学方法分别检测癌组织及相应癌旁组织中Fn感染及CD8^(+)T细胞表面KIR2DL1的表达情况,并分析Fn对CD8^(+)T细胞表面KIR2DL1的诱导效应,及其与临床病理特征相关性;采用Kaplan-Meier生存分析法绘制生存曲线并利用Log-rank检验方法分析Fn对CD8^(+)T细胞表面KIR2DL1的诱导效应与生存时间之间相关性。结果食管鳞癌中可见癌细胞胞质出现红色颗粒,为Fn感染阳性,连续切片淋巴细胞胞膜出现棕黄色颗粒,为CD8^(+)T细胞表面KIR2DL1表达阳性,而癌旁组织中二者多为阴性表达;且癌组织中Fn感染与CD8^(+)T细胞表面KIR2DL1表达具有显著一致性(P<0.05)。Fn诱导CD8^(+)T细胞表面KIR2DL1表达阳性与患者性别、吸烟、饮酒、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期及化疗敏感度均相关(均P<0.05),且阳性组5年生存率及中位生存时间均明显低于阴性组(均P<0.05)。结论长期吸烟、饮酒会导致恶劣的口腔环境,Fn更容易在这种环境下感染并定植,从而诱导CD8^(+)T细胞表面KIR2DL1高表达,削弱机体抗肿瘤免疫反应,促进食管鳞癌恶性进展。 展开更多
关键词 食管鳞癌 具核梭杆菌 CD8^(+)T淋巴细胞 kir2dl1 预后
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中国汉族人群KIR2DL1高分辨等位基因分布频率及识别HLA—C配体的特点 被引量:4
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作者 王苗 何军 +5 位作者 鲍晓晶 邱桥成 李杨 徐超 袁晓妮 李翎婕 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1038-1043,共6页
目的研究中国汉族人群KIR2DL1高分辨等位基因频率及识别HLA-C配体的分布特点。方法采用基因测序和序列特异性引物聚合酶链反应(PCR—SSP)方法,对中华骨髓库登记的111例患者和116名无关供者,共计227份样本进行KIR2DL1高分辨等位基因... 目的研究中国汉族人群KIR2DL1高分辨等位基因频率及识别HLA-C配体的分布特点。方法采用基因测序和序列特异性引物聚合酶链反应(PCR—SSP)方法,对中华骨髓库登记的111例患者和116名无关供者,共计227份样本进行KIR2DL1高分辨等位基因分型和KIR基因分型,有105例患者接受异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)。结果227份样本中有224份(98.68%)样本存在KIR2DL1基因,在448个等位基因中共发现3种KIR2DL1*00302、*00201、*00401等位基因多态性,基因表型频率分别为84.82%(380/448)、12.05%(54/448)和3.13%(14/448),等位基因频率分别为61.04%、6.22%、1.58%,并与欧美人种基因频率分布差异有统计学意义。在6种KIR2DL1高分辨等位基因组合中KIR2DL1*00302、00302(74.55%)纯合组合为最常见的基因型,且KIR2DL1*00302、00401组合频率在A/A和B/x中的分布差异有统计学意义(P=0.001),含KIR2DLI*00401的等位基因组合在A/A中无基因频率分布。KIR2DL1*00302和KIR2DL1*00201分别均与KIR2DS1、KIR2DL3、KIR2DS4和KIR3DL1/S1有连锁关系(P〈0.001)。在allo—HSCT的KIR/HLA受配体模式中KIR2DL1*00302与HLA—C2组位点存在相关性,且与HLA—C*06:02是最常见的识别受配体组合,而与HLA-C*01:02受配体模式是最常见的产生异源反应活性的组合,二者在受配体模式中的分布差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论KIR2DLI*00302是中国汉族人群中最常见的等位基因,KIR2DLl高分辨基因分型可预测移植后供者NK细胞的异源反应活性并有利于供者的筛选。 展开更多
关键词 自然杀伤T细胞 受体 KIR kir2dl1 HLA抗原 基因连锁
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KIR2DL1框架基因cDNA的分子克隆测序及一个新等位基因的鉴定 被引量:1
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作者 孙革 王畅 +3 位作者 甄建新 张国彬 徐筠娉 邓志辉 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期694-697,共4页
目的建立K工R2DLI框架基因cDNA的分子克隆测序方法,并鉴定南方汉族人群一个新的KIR2DL1等位基因。方法对-K豫2DL1框架基因测序分型结果异常的外周血样,提取mRNA,反转录为cDNA,用1对KIR2DLl框架基因特异性PCR引物进行扩增,特异性扩... 目的建立K工R2DLI框架基因cDNA的分子克隆测序方法,并鉴定南方汉族人群一个新的KIR2DL1等位基因。方法对-K豫2DL1框架基因测序分型结果异常的外周血样,提取mRNA,反转录为cDNA,用1对KIR2DLl框架基因特异性PCR引物进行扩增,特异性扩增产物(1.2kb)经切胶回收纯化后,进行分子克隆和单倍型测序。结果KIR2DL1特异性PCR扩增产物,经分子克隆和单倍型测序,检出1个正常的K/R2DL1*00302等位基因和1个新变异的KIR2DL1等位基因。该新等位基因的序列与KIR2DL1*00302最相近,但存在编码区nt 188A〉G点突变、位于第4外显子的第42密码子由GAG变成GGG,导致第42位氨基酸残基发生GIu42Gly改变;其序列提交GenBank(序列号:KP025960)和IPD-KIR数据库(IWS40001982),已被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名为KIR2DL1*031。结论我们建立了KIR2DL1框架基因cDNA分子克隆测序方法,在等位基因水平的KIR研究中具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 kir2dl1框架基因 测序分型 cDNA 分子克隆 单倍型测序 新等位基因
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急性白血病儿童NK细胞受体NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率
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作者 张俊峰 苏绍红 骆苏彦 《中国卫生工程学》 CAS 2018年第6期910-911,共2页
目的研究急性白血病儿童NK细胞受体NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率。方法选取2016年3月至2017年6月本院收治的急性白血病患儿58例,其中急性淋巴细胞白血病患者45例、急性粒细胞白血病患者13例。按照治疗时间不同将患儿分成新发组及正常组... 目的研究急性白血病儿童NK细胞受体NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率。方法选取2016年3月至2017年6月本院收治的急性白血病患儿58例,其中急性淋巴细胞白血病患者45例、急性粒细胞白血病患者13例。按照治疗时间不同将患儿分成新发组及正常组,每组29例,分析两组患儿NK细胞受体NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率。结果新发组NKG20表达率为(79.56±11.46)%,正常组NKG20表达率为(92.36±3.25)%,组间比较差异无统计学意义(P >0.05)。新发组NKp46表达率为(61.56±11.32)%,正常组NKp46表达率为(79.26±4.52)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。新发组KIR2DL1表达率为(19.85±3.54)%,正常组KIR2DL1表达率为(12.87±1.75)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。新发组与正常组患儿NK细胞数量及活性比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论随着治疗的进行患儿NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率可逐渐恢复,提示机体NK细胞的免疫能力逐渐提升。 展开更多
关键词 急性白血病 NK细胞 NKG2D NKp46 kir2dl1
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体外抗体功能修饰抑制性KIR对人NK细胞的影响 被引量:1
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作者 吴功强 赵妍敏 +1 位作者 黄河 来晓瑜 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期475-481,共7页
目的:检测抗体封闭抑制性受体KIR2DL1和KIR2DL2/2DL3对人NK细胞功能的影响。方法:应用Rosettesep人NK分选试剂盒分选外周血NK细胞,观察抗体封闭KIR2DL1和KIR2DL2/2DL3受体后,NK细胞对不同白血病细胞(人肿瘤细胞株NB4、Raji和K-562)及同... 目的:检测抗体封闭抑制性受体KIR2DL1和KIR2DL2/2DL3对人NK细胞功能的影响。方法:应用Rosettesep人NK分选试剂盒分选外周血NK细胞,观察抗体封闭KIR2DL1和KIR2DL2/2DL3受体后,NK细胞对不同白血病细胞(人肿瘤细胞株NB4、Raji和K-562)及同种异体的成熟树突状细胞(DC)的杀伤活性;检测混合淋巴细胞反应中NK细胞对T淋巴细胞增殖的影响;检测细胞因子TGF-β1的表达水平。结果:任何一个抗体封闭KIR后,NK细胞杀伤NB4细胞活性均增强,并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05),2个抗体联用能增强NK细胞的杀伤活性;对Raji细胞的杀伤活性则改变较小;NK细胞对K-562细胞具有很强的杀伤活性,但经抗体封闭后,这种活性并没有提高。经抗体封闭KIR后,NK细胞对成熟DC的杀伤活性明显增强,并与抗体浓度呈现量效关系(2.20%±1.10%vs 37.59%±5.06%),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。经抗体封闭后的NK细胞在混合淋巴细胞反应中能明显提高对T细胞的增殖抑制(77.85%±8.31%vs 43.05%±5.95%,P<0.05),上清液中细胞因子TGF-β1的含量增加。结论:以抗体修饰抑制性KIR受体有助于提高NK细胞杀伤肿瘤及同种异体成熟DC的能力,活化的NK细胞通过分泌TGF-β1,抑制T细胞的增殖、活化。 展开更多
关键词 杀伤细胞 天然 受体 kir2dl1 受体 KIR2DL2 受体 KIR2DL3 抗体 单克隆 淋巴细胞培养试验 混合 树突细胞 T淋巴细胞
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与HCV清除相关的KIR2DL3/HLA-C1基因组合在40例中国汉族健康人群中的分布
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作者 许雪琳 李晖 +4 位作者 赵梓亦 胥展志 陈婧 陈昌金 辜海英 《四川医学》 CAS 2015年第6期802-806,共5页
目的研究KIR2DL3/HLA-C1基因组合与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)清除的相关性。方法本研究对随机抽取的无血缘关系的40个健康成人(中国汉族)外周血样本进行了KIR及HLA-Cw基因分型,并分析了与HCV清除相关的KIR2DL3/HLA-C1基因组... 目的研究KIR2DL3/HLA-C1基因组合与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)清除的相关性。方法本研究对随机抽取的无血缘关系的40个健康成人(中国汉族)外周血样本进行了KIR及HLA-Cw基因分型,并分析了与HCV清除相关的KIR2DL3/HLA-C1基因组合的分布情况。结果 40例样本中HLA-Cw位点HLA-C1基因出现频率较HLA-C2高,且HLA-C1C1出现的频率较HLA-C1C2高;KIR基因型中,以3DL1、2DL1、2DL3、2DL4、3DL2、3DL3、2DP1、3DP1、2DS4出现频率较高,而3DS1、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5、2DL2、2DL5出现频率较低;KIR2DL3+/HLA-C1C1例数较KIR2DL2+/HLA-C1C1多。综合分析发现,KIR2DL3+/HLA-C1基因型组合以KIR2DL3-2DL3/HLA-C1C1者较多,占总样本数52.5%。结论以本研究为基础,可进一步研究KIR2DL3/HLA-C1基因型组合与NK细胞体外抑制HCV活性的相关性,探讨HLA-Cw基因型为C1C1的个体中,KIR 2DL3-2DL3个体的NK细胞是否较2DL2-2DL2个体以及2DL3-2DL2个体的NK细胞具有更强的抑制HCV活性的作用,为丙型肝炎的免疫治疗及疫苗研制提供依据。 展开更多
关键词 KIR2DL3/HLA-C1基因组合 基因分型 丙型肝炎病毒清除
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白血病患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性的Logistic回归分析
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作者 张艳 刘晟 +4 位作者 叶世辉 刘孟黎 党少农 沈春梅 齐君 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期842-844,共3页
自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)是一类主要表达于NK细胞和部分T细胞表面的糖蛋白受体,主要通过与靶细胞表面的HLA—Ⅰ类分子特异性结合传递抑制或激活信号,从而调控NK细胞的功能。它是广泛参与免疫调节及免疫反应的重要基因之... 自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)是一类主要表达于NK细胞和部分T细胞表面的糖蛋白受体,主要通过与靶细胞表面的HLA—Ⅰ类分子特异性结合传递抑制或激活信号,从而调控NK细胞的功能。它是广泛参与免疫调节及免疫反应的重要基因之一。目前共发现17个KIR基因,即KIR2DL1~4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DLS1~5、KIR3DL1~3、KIR3DS1、KIR2DPI和KTR3DP1。我们采用序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测技术对243例白血病患者的KIR基因进行了检测,以初步探讨KIR基因多态性与白血病发生之间的关系。 展开更多
关键词 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 受体基因多态性 LOGISTIC回归分析 白血病患者 KIR基因 kir2dl1 聚合酶链反应 序列特异引物
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