目的筛选鉴定胶质瘤干细胞新标志物CD98轻链蛋白L型氨基酸转运体1(LAT1).方法采用流式单色标记法检测U87及U251胶质瘤细胞中CD98重链蛋白CD98hc、CD98轻链蛋白LAT1以及CD133的表达,以选取胶质瘤细胞中可能的、潜在的干细胞标志物.采用...目的筛选鉴定胶质瘤干细胞新标志物CD98轻链蛋白L型氨基酸转运体1(LAT1).方法采用流式单色标记法检测U87及U251胶质瘤细胞中CD98重链蛋白CD98hc、CD98轻链蛋白LAT1以及CD133的表达,以选取胶质瘤细胞中可能的、潜在的干细胞标志物.采用流式细胞学技术分选LAT1阳性(LAT1^(+))和LAT1阴性(LAT1^(-))胶质瘤细胞,采用细胞免疫荧光检测、成球实验、体外极限稀释实验鉴定细胞干性.诱导分化培养胶质瘤干细胞,采用蛋白质免疫印迹法检测LAT1、分化细胞标志物β-tubulinⅢ和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.通过构建裸鼠皮下荷瘤模型,观察LAT1^(+)和LAT1^(-)胶质瘤细胞在裸鼠皮下的成瘤情况(分别为LAT1^(+)组、LAT1^(-)组).结果流式细胞学结果显示,U87细胞LAT1(SLC7A5)阳性表达率为(1.99±0.18)%,CD133阳性表达率为(2.18±0.29)%;U251细胞LAT1(SLC7A5)阳性表达率为(6.24±0.69)%,CD133阳性表达率为(4.79±0.64)%.免疫荧光检测结果显示,LAT1^(+)-U251和LAT1^(+)-U87细胞的Sox2、Olig2和CD133阳性表达率均较高;LAT1^(-)-U251和LAT1^(-)-U87细胞的Sox2、Olig2和CD133阳性表达率均较低.成球实验和极限稀释实验显示,LAT1^(+)-U251细胞成球率优于LAT1^(+)-U87细胞(P=0.005);LAT1^(-)-U251和LAT1^(-)-U87细胞均未成球.蛋白质免疫印迹检测结果显示,LAT1^(-)-U251细胞未分化和诱导分化培养时,均较低表达β-tubulinⅢ、GFAP;LAT1^(+)-U251细胞分化前低表达β-tubulinⅢ、GFAP,而诱导分化后β-tubulinⅢ、GFAP表达显著增加(均P<0.05),LAT1表达显著降低(P=0.007).裸鼠成瘤模型结果显示,21 d和28 d LAT1^(+)组肿瘤体积均大于LAT1^(-)组,差异均具有统计学意义(均P<0.05);28 d时,LAT1^(+)组肿瘤重量大于LAT1^(-)组肿瘤重量,差异具有统计学意义(P=0.007).结论CD98轻链蛋白LAT1是潜在的胶质瘤干细胞标志物.展开更多
文摘目的筛选鉴定胶质瘤干细胞新标志物CD98轻链蛋白L型氨基酸转运体1(LAT1).方法采用流式单色标记法检测U87及U251胶质瘤细胞中CD98重链蛋白CD98hc、CD98轻链蛋白LAT1以及CD133的表达,以选取胶质瘤细胞中可能的、潜在的干细胞标志物.采用流式细胞学技术分选LAT1阳性(LAT1^(+))和LAT1阴性(LAT1^(-))胶质瘤细胞,采用细胞免疫荧光检测、成球实验、体外极限稀释实验鉴定细胞干性.诱导分化培养胶质瘤干细胞,采用蛋白质免疫印迹法检测LAT1、分化细胞标志物β-tubulinⅢ和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.通过构建裸鼠皮下荷瘤模型,观察LAT1^(+)和LAT1^(-)胶质瘤细胞在裸鼠皮下的成瘤情况(分别为LAT1^(+)组、LAT1^(-)组).结果流式细胞学结果显示,U87细胞LAT1(SLC7A5)阳性表达率为(1.99±0.18)%,CD133阳性表达率为(2.18±0.29)%;U251细胞LAT1(SLC7A5)阳性表达率为(6.24±0.69)%,CD133阳性表达率为(4.79±0.64)%.免疫荧光检测结果显示,LAT1^(+)-U251和LAT1^(+)-U87细胞的Sox2、Olig2和CD133阳性表达率均较高;LAT1^(-)-U251和LAT1^(-)-U87细胞的Sox2、Olig2和CD133阳性表达率均较低.成球实验和极限稀释实验显示,LAT1^(+)-U251细胞成球率优于LAT1^(+)-U87细胞(P=0.005);LAT1^(-)-U251和LAT1^(-)-U87细胞均未成球.蛋白质免疫印迹检测结果显示,LAT1^(-)-U251细胞未分化和诱导分化培养时,均较低表达β-tubulinⅢ、GFAP;LAT1^(+)-U251细胞分化前低表达β-tubulinⅢ、GFAP,而诱导分化后β-tubulinⅢ、GFAP表达显著增加(均P<0.05),LAT1表达显著降低(P=0.007).裸鼠成瘤模型结果显示,21 d和28 d LAT1^(+)组肿瘤体积均大于LAT1^(-)组,差异均具有统计学意义(均P<0.05);28 d时,LAT1^(+)组肿瘤重量大于LAT1^(-)组肿瘤重量,差异具有统计学意义(P=0.007).结论CD98轻链蛋白LAT1是潜在的胶质瘤干细胞标志物.
