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灵芝LaeA基因的电子克隆、表达及生物信息学分析
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作者 贺望兴 李文金 +5 位作者 蒋咏梅 童忠飞 陈华玲 李延升 谢小群 李琛 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期47-54,共8页
为通过电子克隆得到灵芝LaeA基因序列,分析其基因序列信息,并初步探究其调控功能。采用电子克隆的方法,以已知桔青霉的LaeA蛋白序列为模板,在灵芝的EST数据库中进行序列相似性搜索比对(Blast),经序列拼接、序列验证和序列延伸等电子克... 为通过电子克隆得到灵芝LaeA基因序列,分析其基因序列信息,并初步探究其调控功能。采用电子克隆的方法,以已知桔青霉的LaeA蛋白序列为模板,在灵芝的EST数据库中进行序列相似性搜索比对(Blast),经序列拼接、序列验证和序列延伸等电子克隆方法获得灵芝LaeA基因的cDNA序列;采用生物信息学软件对LaeA基因编码蛋白质的基本理化性质、疏水性/亲水性、亚细胞定位、信号肽、二级结构、三级结构及进化关系等方面进行了预测和分析。结果表明,LaeA基因全长1 134 bp,编码378个氨基酸,蛋白分子质量为42.895 3 ku,存在于细胞质中,是亲水性蛋白;LaeA蛋白结构主要由47.88%无规则卷曲、33.33%α-螺旋和18.78%延伸链组成,有S-腺苷甲硫氨酸结合位点,属于AdoMet_MTases超家族蛋白;系统进化分析结果显示,LaeA蛋白与云芝、污叉丝孔菌等白腐担子菌类的亲缘关系较为亲近;qRT-PCR结果表明,LaeA基因在灵芝细胞液体静置培养过程中的表达量显著高于振荡培养方式。推测LaeA蛋白作为1种甲基转移酶蛋白,通过参与组蛋白的甲基化修饰,进而影响基因簇的表达水平。 展开更多
关键词 灵芝 laea 电子克隆 生物信息学
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LaeA调控黄曲霉毒素生物合成研究进展 被引量:2
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作者 胡元森 吕昂 +3 位作者 张颐骏 雷阳 王乐 吕扬勇 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第1期127-132,共6页
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类具有较强的毒性和致癌能力的次级代谢产物,在霉变的小麦、玉米、棉花、花生等多种粮食及油料作物中检出率都比较高,给农业生产造成巨大的经济损失,严重威胁着食品安全及人类健康。自20世... 黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类具有较强的毒性和致癌能力的次级代谢产物,在霉变的小麦、玉米、棉花、花生等多种粮食及油料作物中检出率都比较高,给农业生产造成巨大的经济损失,严重威胁着食品安全及人类健康。自20世纪60年代发现黄曲霉毒素以来,人们对该毒素的理化性质、生物毒性、合成途径、产毒条件以及产毒调控机制做了大量的研究。该毒素的生物合成过程十分复杂,参与AF生物合成的基因有30多个,它们集聚在基因组上一个约80 kb称为AF基因簇的区域,该途径中每个基因的表达水平直接影响AF的合成量。研究表明黄曲霉毒素的生物合成受到多方面因素的调控,包括培养基成分如碳源、氮源、p H值,培养条件如培养温度、湿度等,途径专一性调控因子afl R及全局性调控因子Lae A等,Lae A能够调控丝状真菌的次级代谢及其生长发育,影响真菌形态分化、毒素合成及沉默基因的表达,相对于其调控因子表现出独特的性质。就Lae A在真菌中的发现、功能及调控机制等方面进行了综述,重点介绍了该调控因子在黄曲霉中调控黄曲霉毒素合成方面的研究进展,初步展示了黄曲霉毒素的生物合成调控模式,为今后进一步开展Lae A调控黄曲霉毒素合成调控机理的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 laea 黄曲霉毒素 黄曲霉 次级代谢
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全局调控因子LaeA对蛹虫草生长发育和次生代谢的作用 被引量:1
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作者 汪滢 杨占山 +3 位作者 鲍大鹏 李燕 吴莹莹 邹根 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2022年第1期20-26,共7页
通过克隆蛹虫草(Cordyceps militaris)野生型菌株Cm01的laeA基因(CmLaeA)、合成构巢曲霉(Aspergillus nidulans)的laeA基因(AsLaeA),构建不同过表达载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化野生型蛹虫草菌株LN9、Cm01,获得... 通过克隆蛹虫草(Cordyceps militaris)野生型菌株Cm01的laeA基因(CmLaeA)、合成构巢曲霉(Aspergillus nidulans)的laeA基因(AsLaeA),构建不同过表达载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化野生型蛹虫草菌株LN9、Cm01,获得4个过表达菌株,分别命名为CmLaeALN9(CmLaeA基因转化菌株LN9)、AsLaeALN9(AsLaeA基因转化菌株LN9)、CmLaeACm01(CmLaeA基因转化菌株Cm01)、AsLaeACm01(AsLaeA基因转化菌株Cm01),结果表明:与野生型菌株相比,过表达菌株CmLaeACm01、AsLaeALN9、AsLaeACm01的虫草素含量提高(2.5倍),CmLaeACm01的分生孢子产量提高(1.5倍)、出草时间提前5~7 d。LaeA的调控作用因不同来源的LaeA和不同的宿主菌而异。 展开更多
关键词 蛹虫草 laea 子实体发育 虫草素
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蛹虫草(Cordyceps militaris)LaeA蛋白的生物信息学分析 被引量:1
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作者 张剑 付亚娟 《廊坊师范学院学报(自然科学版)》 2017年第3期57-60,共4页
采用Prot Param、Prot Scale、Signal P 4.1、SOPMA、SWISS-MODEL等在线生物学软件对LaeA蛋白质的理化性质、信号肽、跨膜结构域、蛋白质二级和三级结构进行预测分析。结果表明,蛹虫草LaeA蛋白质是由20种295个氨基酸组成,不含信号肽、... 采用Prot Param、Prot Scale、Signal P 4.1、SOPMA、SWISS-MODEL等在线生物学软件对LaeA蛋白质的理化性质、信号肽、跨膜结构域、蛋白质二级和三级结构进行预测分析。结果表明,蛹虫草LaeA蛋白质是由20种295个氨基酸组成,不含信号肽、无跨膜结构域、稳定的亲水蛋白;LaeA蛋白二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、伸展链和β-转角组成,其中α-螺旋和无规则卷曲是LaeA蛋白的主要二级结构。通过生物信息学预测分析首次获得了蛹虫草LaeA蛋白的理化性质及各级结构信息,为将来深入研究蛹虫草LaeA蛋白的生物学功能奠定了理论基础。 展开更多
关键词 蛹虫草 laea 生物信息学 结构
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黄曲霉野生型及LaeA缺陷型菌株胞外差异蛋白鉴定 被引量:2
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作者 雷阳 吕扬勇 +3 位作者 张帅兵 陈菲 吕昂 胡元森 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1827-1831,共5页
【目的】分析黄曲霉野生型产毒株及LaeA缺陷型无毒株在以小麦、玉米为培养基质中生长时的胞外差异蛋白,为进一步明确LaeA因子在黄曲霉产毒调控中的作用提供基础数据。【方法】将小麦及玉米籽粒粉碎后灭菌并加水配制成培养黄曲霉菌的基质... 【目的】分析黄曲霉野生型产毒株及LaeA缺陷型无毒株在以小麦、玉米为培养基质中生长时的胞外差异蛋白,为进一步明确LaeA因子在黄曲霉产毒调控中的作用提供基础数据。【方法】将小麦及玉米籽粒粉碎后灭菌并加水配制成培养黄曲霉菌的基质,在产毒株(黄曲霉CA14野生型)及无毒株(LaeA缺陷型)培养0、48和72 h时取样,采用SDS-PAGE分别分析黄曲霉毒素B1(AFB1)及胞外差异蛋白,并采用液质联用四极杆飞行时间质谱技术[LC-MS-MS(Q-TOF)]对获得的胞外差异蛋白进行鉴定。【结果】黄曲霉野生型及LaeA缺陷型菌株均能将小麦和玉米基质中的小分子蛋白迅速转化,随着培养时间延长,LaeA缺陷型菌株的胞外蛋白较野生型菌株略少,不产生黄曲霉毒素。产毒株及无毒株胞外差异蛋白条带共有7个,主要为淀粉酶A、碱性蛋白酶、木聚糖酶F3和亮氨酸氨基肽酶A等生理酶类。【结论】黄曲霉产毒株与无毒株的胞外差异蛋白为生理酶类蛋白,该类酶蛋白主要与营养摄入有关,且影响黄曲霉菌丝的生长。 展开更多
关键词 黄曲霉 胞外蛋白 小麦和玉米 调控因子laea
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LaeA调控黑曲霉形态发展、赭曲霉毒素合成和氧化耐受 被引量:1
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作者 徐瑞涛 陈浩宇 +2 位作者 陈美榕 张梦薇 张健 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第6期179-185,共7页
探究LaeA蛋白对黑曲霉形态发展,赭曲霉毒素合成和氧化耐受的影响,为控制黑曲霉侵染和赭曲霉毒素合成提供理论基础。利用农杆菌介导的同源重组方法,构建黑曲霉laeA基因敲除菌株,比较野生株和敲除菌株在形态发展、赭曲霉毒素合成和氧化耐... 探究LaeA蛋白对黑曲霉形态发展,赭曲霉毒素合成和氧化耐受的影响,为控制黑曲霉侵染和赭曲霉毒素合成提供理论基础。利用农杆菌介导的同源重组方法,构建黑曲霉laeA基因敲除菌株,比较野生株和敲除菌株在形态发展、赭曲霉毒素合成和氧化耐受性的差异。结果表明相比野生型菌株,△laeA菌株生长速度减慢,产孢减少,菌丝长且松散,枝节相对较少;赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)合成量大幅减少,光照培养7 d,OTA减少92.45%,黑暗培养7 d,OTA减少99.03%;对氧的敏感性增加,10 mmol/L H_2O_2可完全抑制△laeA菌株生长,5 mmol/L H_2O_2胁迫条件下,△laeA菌株相比于野生菌株,细胞内抗氧化酶活性显著降低。LaeA蛋白正调控黑曲霉产孢、OTA合成及氧化耐受性。 展开更多
关键词 黑曲霉 laea 基因敲除 赭曲霉毒素A 氧化胁迫
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过表达LaeA激活海洋土曲霉中isoflavipucine类化合物的合成及其抗弧菌活性研究
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作者 章冰心 温帅 +2 位作者 秦雪怡 王宗华 姚光山 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期562-569,共8页
丝状真菌土曲霉因产生结构独特且药理活性强烈的次级代谢产物而受到真菌学家和药学家的广泛关注。然而,在丝状真菌中,大部分次级代谢基因在常规实验室培养条件下表达量较低甚至沉默。本研究通过过表达全局性调控因子LaeA试图激活一株海... 丝状真菌土曲霉因产生结构独特且药理活性强烈的次级代谢产物而受到真菌学家和药学家的广泛关注。然而,在丝状真菌中,大部分次级代谢基因在常规实验室培养条件下表达量较低甚至沉默。本研究通过过表达全局性调控因子LaeA试图激活一株海洋来源土曲霉中的沉默基因簇以发现新次级代谢产物。结果表明,laeA基因过表达突变中未知产物基因簇被激活,指纹图谱分析发现了2个在野生菌株不存在的化合物吸收峰。质谱和核磁共振波谱分析确证了这2个化合物为dihydroisoflavipucine类小分子,特别是化合物1的产量在突变体中高达183 mg/L。此外,抗菌活性测试发现,这2个化合物对4种病原弧菌显示了强烈的活性,特别是化合物1抗弧菌活性更强,MIC低至16μg/mL。本研究提供了一条大量合成dihydroisoflavipucine类抗生素的新路线,并证明了次级代谢调控因子LaeA在丝状真菌中的功能是高度保守的,过表达LaeA是激活丝状真菌中沉默基因簇的有效手段。 展开更多
关键词 海洋真菌 土曲霉 次级代谢 调控因子laea dihydroisoflavipucine 抗弧菌活性
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过表达全局调控因子LaeA对橘青霉美伐他汀的合成及产孢的影响 被引量:7
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作者 郑跃亮 曹双 +2 位作者 黄宇琪 廖国建 胡昌华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1438-1445,共8页
【目的】研究橘青霉中全局性调控因子Lae A过表达对美伐他汀生物合成过程及产孢的影响。【方法】同源克隆法从橘青霉中克隆获得lae A基因,构建p Gi HTGi-lae A载体,经农杆菌介导转化转入橘青霉,利用hygromycin基因进行阳性克隆子的PCR... 【目的】研究橘青霉中全局性调控因子Lae A过表达对美伐他汀生物合成过程及产孢的影响。【方法】同源克隆法从橘青霉中克隆获得lae A基因,构建p Gi HTGi-lae A载体,经农杆菌介导转化转入橘青霉,利用hygromycin基因进行阳性克隆子的PCR筛选。使用HPLC方法比较PGA发酵液中橘青霉野生型菌株WT和Lae A过表达菌株OE::lae A的美伐他汀产量差异。血球计数法进行孢子产量比较。荧光定量PCR方法分析WT和OE::lae A中美伐他汀合成基因簇表达量。【结果】成功构建p Gi HTGi-lae A载体,并获得Lae A过表达橘青霉菌株(OE::lae A)。OE::lae A中,lae A基因表达量较WT增加29%,mlc B表达量较WT增加72%,mlcR表达量增加153%,孢子产量由(2.38±0.24)×107/cm2减少到(1.40±0.11)×107/cm2,美伐他汀产量从(35.77±4.63)mg/L提高到(201.46±9.98)mg/L。【结论】在橘青霉中过表达Lae A可能通过提高mlcR和mlc B基因的转录来增加美伐他汀的产量,同时过表达lae A基因不利于孢子的形成。这些结果为美伐他汀生物合成的全局性调控和高产菌株的开发提供基础。 展开更多
关键词 全局性调控因子laea 过表达 美伐他汀 途径调控因子mlcR 橘青霉
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丝状真菌新型全局性调控因子LaeA 被引量:7
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作者 冯慧云 邢伟 胡昌华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1141-1145,共5页
全局调控在丝状真菌次级代谢调控及其生长发育过程中有着重要的作用。LaeA是2004年首次在构巢曲霉中被发现的第一个丝状真菌全局性调控因子,继而在烟曲霉、黄曲霉、产黄青霉、橘青霉中相继被报道。LaeA能够全局性调控抗生素和真菌毒素... 全局调控在丝状真菌次级代谢调控及其生长发育过程中有着重要的作用。LaeA是2004年首次在构巢曲霉中被发现的第一个丝状真菌全局性调控因子,继而在烟曲霉、黄曲霉、产黄青霉、橘青霉中相继被报道。LaeA能够全局性调控抗生素和真菌毒素等次级代谢产物的合成,影响真菌形态分化,另外还通过影响沉默基因的表达从而调控未知代谢产物的产生,因而能为真菌中天然产物的开发提供新的重要途径。本文就其在丝状真菌中的发现、功能、作用机制及其应用等方面进行综述。 展开更多
关键词 全局性调控因子 laea 丝状真菌 次级代谢调控
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丝状真菌全局性调控因子LaeA的研究进展 被引量:3
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作者 王亚萍 谭玉梅 +4 位作者 周国庆 兰亚 刘永翔 罗钊 刘作易 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期712-718,共7页
全局调控因子在丝状真菌次级代谢调控及其生长发育过程中有着重要作用。LaeA是2004年首次被发现的丝状真菌全局性调控因子。本综述介绍了LaeA在丝状真菌发育、次级代谢中的功能及其作用机制,总结了丝状真菌中已发现的laeA的同源基因,并... 全局调控因子在丝状真菌次级代谢调控及其生长发育过程中有着重要作用。LaeA是2004年首次被发现的丝状真菌全局性调控因子。本综述介绍了LaeA在丝状真菌发育、次级代谢中的功能及其作用机制,总结了丝状真菌中已发现的laeA的同源基因,并对存在的问题及应用前景进行讨论与展望。 展开更多
关键词 全局性调控因子 laea 次级代谢调控 发育调控
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Velvet和LaeA蛋白调控药用真菌发育及活性成分合成相关的研究进展 被引量:2
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作者 徐志超 孙超 +6 位作者 徐江 张鑫 罗红梅 季爱加 胡鸢雷 宋经元 陈士林 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1520-1527,共8页
药用真菌在中国传统医学中占有重要地位,但面临野生资源稀缺和药用活性成分含量低等问题。Velvet和LaeA蛋白在大多数真菌(低等壶菌类到高等担子菌类)中均存在,对真菌发育与活性成分合成调控具有重要作用,本文阐述了这两类蛋白的结构与... 药用真菌在中国传统医学中占有重要地位,但面临野生资源稀缺和药用活性成分含量低等问题。Velvet和LaeA蛋白在大多数真菌(低等壶菌类到高等担子菌类)中均存在,对真菌发育与活性成分合成调控具有重要作用,本文阐述了这两类蛋白的结构与功能。Velvet蛋白家族包括VeA(Velvet)、VelB(Velvet like B)、VosA(viability of spores A)和VelC(Velvet like C)4个成员,均具有真菌特异的Velvet结构域,在真菌有性生殖、无性生殖和次生代谢产物合成等方面发挥调控功能,其作用受到光、温度等环境因素影响。LaeA蛋白具有S腺苷甲硫氨酸(SAM)依赖的甲基转移酶结构域(MTD),通过光受体蛋白介导,调控及修饰Velvet蛋白家族,协同调控真菌的生长发育和次生代谢。因此,阐明药用真菌Velvet和LaeA蛋白作用机制对重要药用真菌资源培育及活性成分合成调控具有指导作用。 展开更多
关键词 药用真菌 活性成分 生长发育 Velvet蛋白 laea全局调控因子
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LaeA在丝状真菌次级代谢、生长发育和其他重要生物过程中的作用 被引量:3
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作者 张梦薇 陈美榕 +2 位作者 刘舒雯 胡江峰 张健 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期548-555,共8页
LaeA是在构巢曲霉中首次鉴定的一种全局调控因子,其同源蛋白在丝状真菌中广泛存在,具有高度的保守性。LaeA及其同源蛋白序列存在S-腺苷甲硫氨酸结合基序,是一种甲基转移酶,可能影响组蛋白修饰,导致染色体结构的改变,进而调控一系列基因... LaeA是在构巢曲霉中首次鉴定的一种全局调控因子,其同源蛋白在丝状真菌中广泛存在,具有高度的保守性。LaeA及其同源蛋白序列存在S-腺苷甲硫氨酸结合基序,是一种甲基转移酶,可能影响组蛋白修饰,导致染色体结构的改变,进而调控一系列基因的表达。大量研究表明,LaeA及其同源蛋白参与调控丝状真菌多种次级代谢产物的生物合成,影响丝状真菌的生长发育和形态分化,甚至在丝状真菌生产有机酸和一些工业酶的过程中也发挥着重要作用。本文综述了LaeA及其同源蛋白的作用机制,以及该蛋白在丝状真菌次级代谢、生长发育和其他重要生物过程中的作用,并对存在的问题及应用前景进行讨论与展望。 展开更多
关键词 全局调控因子 laea 调控机制 次级代谢 丝状真菌
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朝美核框架协议的来龙去脉 被引量:1
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作者 全克林 《国际资料信息》 2003年第5期3-6,共4页
布什政府上台后,将朝鲜列为"邪恶轴心"国加以打压,随之两国关系恶化.近期来,随着朝美关系的紧张不断升级和朝鲜采取一连串激烈行动,如宣布退出不扩散核武器条约、解除核冻结、退出半岛无核协议等,人们对更为重要的朝美核框架... 布什政府上台后,将朝鲜列为"邪恶轴心"国加以打压,随之两国关系恶化.近期来,随着朝美关系的紧张不断升级和朝鲜采取一连串激烈行动,如宣布退出不扩散核武器条约、解除核冻结、退出半岛无核协议等,人们对更为重要的朝美核框架协议最终是何种命运,不由得给予特别关注. 展开更多
关键词 朝美核框架协议 朝鲜 美国 朝美关系 LWR laea NPT KEDO 克林顿 导弹问题 核不扩散条约 核武器 日内瓦核框架协议
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真菌纤维素酶表观遗传修饰的研究进展 被引量:2
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作者 郑春娟 邓婷婷 +2 位作者 来亚鹏 刘刚 王娟 《纤维素科学与技术》 CAS CSCD 2018年第3期71-77,共7页
组蛋白乙酰化酶编码基因gcn5、蛋白甲基转移酶LaeA及其同源物Lae1、VeA等可通过作用于调节纤维素酶基因及其表达调控因子的表达,进而在转录水平上影响纤维素酶基因的表达。简述了真菌纤维素酶的种类与结构和真菌纤维素酶基因的表达调控... 组蛋白乙酰化酶编码基因gcn5、蛋白甲基转移酶LaeA及其同源物Lae1、VeA等可通过作用于调节纤维素酶基因及其表达调控因子的表达,进而在转录水平上影响纤维素酶基因的表达。简述了真菌纤维素酶的种类与结构和真菌纤维素酶基因的表达调控机制,重点从DNA甲基化、蛋白甲基化和乙酰化以及非编码RNA等的角度,综述几种主要表观遗传修饰对真菌纤维素酶基因表达作用的研究进展。 展开更多
关键词 真菌纤维素酶 DNA甲基化 laea 组蛋白乙酰化 SIRNA LncRNA
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