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人肝细胞癌相关基因LAPTM4β启动子结构及SP1结合活性分析 被引量:4
1
作者 薛世林 张青云 周柔丽 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期45-50,共6页
研究在溶酶体相关4次跨膜蛋白(lysosomeassociatedproteintransmembrane4beta,LAPTM4β)基因启动子区起重要调控作用的转录因子,为进一步揭示LAPTM4β在肝癌高表达的机制提供理论基础.采用报告基因重组体转染肝癌相关细胞系HepG2细胞和... 研究在溶酶体相关4次跨膜蛋白(lysosomeassociatedproteintransmembrane4beta,LAPTM4β)基因启动子区起重要调控作用的转录因子,为进一步揭示LAPTM4β在肝癌高表达的机制提供理论基础.采用报告基因重组体转染肝癌相关细胞系HepG2细胞和荧光素酶活性测定的方法,确定LAPTM4β的核心启动子区,然后应用凝胶阻滞电泳的方法验证在LAPTM4β核心启动子区起调控作用的转录因子及其特异性.LAPTM4β基因6种不同长度的启动子报告基因重组体,转染肝癌细胞系HepG2.荧光素酶活性比较发现,位于转录起始点上游558bp的一段DNA(PF3)的启动活性最强,表明在这段序列中存在着重要的转录因子结合位点.通过检索Object-orientedTranscriptionFactorsDatabase数据库发现,此段启动子序列中含有多种潜在的转录因子结合位点,其中包括1个SP1结合位点.应用凝胶阻滞电泳(electrophoreticmobilityshiftassay)的方法,证明人肝细胞癌细胞系HepG2及SMMC7721细胞核提取物均能与包含SP1结合位点的寡核苷酸探针结合,并且这种结合可以被相应50倍或者100倍非标记探针竞争抑制.以上结果表明,位于转录起始点上游558bp的一段DNA(PF3)是LAPTM4β基因的核心启动子;而核心启动子序列中的转录因子SP1结合位点具有与肝癌相关细胞系的细胞核蛋白结合的活性. 展开更多
关键词 laptm4β 核心启动子 凝胶阻滞电泳 转录因子SP1
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抗人肝癌相关基因LAPTM4β胞内肽段单克隆抗体的制备与鉴定及其表达的检测
2
作者 张瑞娟 李琦 +3 位作者 张青云 王雅明 徐建军 赵桂梅 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第7期853-857,共5页
目的制备和鉴定鼠抗人肝癌相关基因溶酶体相关四次跨膜蛋白β胞内99个氨基酸残基(LAPTM4β-IC-N1-99)的单克隆抗体,检测LAPTM4β在肝癌中的表达,为深入研究其结构和功能奠定基础。方法利用本实验室构建原核表达质粒pGEX-KG-LAPTM4β-IC-... 目的制备和鉴定鼠抗人肝癌相关基因溶酶体相关四次跨膜蛋白β胞内99个氨基酸残基(LAPTM4β-IC-N1-99)的单克隆抗体,检测LAPTM4β在肝癌中的表达,为深入研究其结构和功能奠定基础。方法利用本实验室构建原核表达质粒pGEX-KG-LAPTM4β-IC-N1-99,在大肠杆菌中表达融合蛋白GST-LAPTM4β-IC-N1-99。用纯化的蛋白LAPTM4β-IC-N1-99免疫雌性BALB/C小鼠,以常规杂交瘤技术制备鼠抗人LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体(LAPTM4β-IC-N1-99McAb)。进行抗体亚类测定和免疫印迹法(WB)分析,然后用免疫化学技术检测LAPTM4β-IC-N1-99在肿瘤中的表达。结果诱导并纯化了重组GST-LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子质量约为32000;纯化得到LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子量约为10000。筛选出6株能稳定分泌抗LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体的杂交瘤细胞株(D7,B12,H2,H8,A9和A10),D7、H8、A10分泌抗体亚类为IgG1,B12、A9、H2为IgG2b。Western blotting鉴定显示,抗LAPTM4β-IC-N1-99单抗可与融合蛋白及细胞内LAPTM4β蛋白特异性结合,具有高度特异性。免疫细胞化学证明,所得抗体能检测到肿瘤细胞中LAPTM4β基因的表达。结论以纯化的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白免疫,获得了效价高、特异性好的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白的单克隆抗体,用其可检测到LAPTM4β肿瘤细胞中的表达,这为LAPTM4β蛋白的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体 laptm4β 肝细胞癌 杂交瘤
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miR-518b靶向调控LAPTM4B在稽留流产发病中的作用
3
作者 张永艳 夏妍芬 +2 位作者 林佳慧 李俏霞 植枝福 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2024年第4期496-501,共6页
目的:探讨miR-518b在稽留流产发病中的作用。方法:①利用双荧光素酶报告实验验证miR-518b与LAPTM4B的靶向关系。②HTR8/SVneo细胞分别转染miR-518b mimic及其阴性对照(NC)质粒,24 h后实时荧光定量PCR法及Western blot法检测细胞中miR-5... 目的:探讨miR-518b在稽留流产发病中的作用。方法:①利用双荧光素酶报告实验验证miR-518b与LAPTM4B的靶向关系。②HTR8/SVneo细胞分别转染miR-518b mimic及其阴性对照(NC)质粒,24 h后实时荧光定量PCR法及Western blot法检测细胞中miR-518b、LAPTM4B mRNA及蛋白的表达。③HTR8/SVneo细胞分别转染miR-518b mimic NC、miR-518b mimic和miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒24 h后,与人脐静脉血管内皮细胞混合,行成管实验。④收集22例稽留流产患者及24例同期正常妊娠并自愿行人工流产者(对照组)的绒毛组织,实时荧光定量PCR法检测miR-518b、LAPTM4B mRNA,免疫组化法检测微血管密度(MVD),Western blot法检测LAPTM4B蛋白的表达。结果:①双荧光素酶报告实验证实miR-518b与LAPTM4B存在靶向关系。②与miR-518b mimic NC组比较,miR-518b mimic组细胞中LAPTM4B蛋白和mRNA表达水平均下降(P<0.05)。③miR-518b mimic NC组、miR-518b mimic组及miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒组新生小管数分别为(31.00±1.00)、(16.33±2.08)、(32.67±2.08),3组比较,差异有统计学意义(P<0.001);miR-518b mimic组小于NC组和miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒组(P<0.05)。④稽留流产组绒毛组织中miR-518b表达高于对照组,LAPTM4B mRNA、蛋白表达水平及MVD均低于对照组(P<0.05)。稽留流产组miR-518b与LAPTM4B mRNA的表达、MVD呈负相关(r=-0.546,-0.439,P<0.001);LAPTM4B蛋白表达与MVD呈正相关(r=0.686,P<0.001)。结论:miR-518b可能通过调控LAPTM4B的表达,抑制绒毛滋养层细胞血管成管能力,参与稽留流产的发病。 展开更多
关键词 稽留流产 绒毛组织 血管形成 miR-518b laptm4B
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LAPTM4β在人结直肠癌耐药细胞株中的表达及意义
4
作者 刘家麒 宁丽 +3 位作者 李云龙 游柳平 王春敬 黄跃南 《中华结直肠疾病电子杂志》 2015年第5期50-54,共5页
目的建立耐奥沙利铂(L-OHP)的人结直肠癌耐药细胞株(HT-29/L-OHP),检测相关耐药基因LAPTM4β的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用机制。方法采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/L-OHP;应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作... 目的建立耐奥沙利铂(L-OHP)的人结直肠癌耐药细胞株(HT-29/L-OHP),检测相关耐药基因LAPTM4β的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用机制。方法采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/L-OHP;应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,流式细胞技术检测细胞凋亡,比较其与HT-29/L-OHP细胞株对于L-OHP的耐药情况;应用RT-PCR检测LAPTM4βmRNA的表达;应用Western blot测定LAPTM4β-35蛋白的表达。结果成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L-OHP,流式细胞技术检测结果表明应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,其对于L-OHP的耐药明显低于HT-29/L-OHP细胞株。HT-29/LOHP细胞株中LAPTM4βmRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为5.613±0.139和1.105±0.187,(P<0.05),LAPTM4β-35蛋白在HT-29/L-OHP细胞和HT-29细胞的相对表达量2.203±0.080和1.033±0.070,(P<0.05)。结论 LAPTM4β在结直肠癌耐药细胞株中过表达,与结直肠癌奥沙利铂耐药密切相关,可以作为结直肠癌耐药的一个敏感的生物学标志物。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 抗药性 肿瘤 奥沙利铂 laptm4β
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人肝癌相关新基因编码产物LAPTM4B的鉴定及其生物学特性 被引量:14
5
作者 刘歆荣 周柔丽 +7 位作者 张青云 张页 邵根泽 金月英 张莎 林明 芮静安 叶大雄 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期340-347,共8页
目的 :鉴定由肝细胞癌 (HCC)相关新基因LAPTM 4B编码的蛋白质并研究其生物学特性。方法 :以Westernblot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物 ;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用。结果 :LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为 ... 目的 :鉴定由肝细胞癌 (HCC)相关新基因LAPTM 4B编码的蛋白质并研究其生物学特性。方法 :以Westernblot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物 ;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用。结果 :LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为 35× 10 3 和 2 4× 10 3 、等电点分别为 9.0 7和 4 .6 5的两种异型分子。它们在肝癌组织及肝癌细胞系的表达显著上调 ,而相对分子质量为 35× 10 3 者尤为明显 ,并与细胞分化程度相关。LAPTM4B蛋白可与整合素α 6亚单位及表皮生长因子 (EGF)受体形成信号复合物。结论 :LAPTM4B 35蛋白在人肝癌组织及细胞系过表达 ,并可能通过与细胞表面的整合素受体及EGF受体形成复合物而参与细胞外基质成分所启动的信号转导。 展开更多
关键词 肝癌 基因编码产物 laptm4B 鉴定 生物学特性 信号复合物
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肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响 被引量:13
6
作者 何静 邵根泽 周柔丽 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期348-352,共5页
目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Wester... 目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株 ,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果 :与转染空载体的对照组相比 ,转染了LAPTM4BcDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化 ,微绒毛的数量和长度增加 ,多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附 /铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多 ,而G0 ~G1期细胞数减少。Western杂交显示CyclinE蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论 :LAPTM 4B基因能影响细胞增殖的调节 ,促进NIH3T3细胞的增殖 ,并使NIH3T3细胞具有成瘤性 ,在肿瘤发生过程中具有重要的作用。 展开更多
关键词 肝癌 表达 基因 laptm4B 细胞增殖 成瘤性
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LAPTM4B在胶质瘤组织中表达及对细胞增殖和侵袭力的影响 被引量:4
7
作者 赵岗 张哲莹 +2 位作者 杜宝顺 王阳 马欢 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期1431-1437,共7页
目的检测胶质瘤组织中溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated protein transmembrane-4 beta,LAPTM4B)蛋白表达,探讨其对细胞增殖和侵袭力的影响以及与患者预后的相关性。方法选取2011年6月至2015年6月在新乡市中心医院行手术切... 目的检测胶质瘤组织中溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated protein transmembrane-4 beta,LAPTM4B)蛋白表达,探讨其对细胞增殖和侵袭力的影响以及与患者预后的相关性。方法选取2011年6月至2015年6月在新乡市中心医院行手术切除的胶质瘤患者86例,术后随访,随访截止时间2018年6月30日。选取同期正常脑组织25例,免疫组化(SP法)检测胶质瘤和正常脑组织中LAPTM4B蛋白表达,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验,影响患者预后的风险因素分析采用Cox比例风险模型分析,培养U251细胞并分为siRNA-LAPTM4B组、siRNA-NC组和空白组,实时荧光定量PCR技术检测细胞中LAPTM4B表达,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭力,Western blot检测细胞中LAPTM4B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果LAPTM4B蛋白在胶质瘤组织中的阳性表达率为77.91%,高于正常脑组织中的28.00%(P<0.001);LAPTM4B蛋白阳性表达率在不同WHO分级差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,LAPTM4B蛋白阳性表达组患者中位生存时间和累积生存率低于LAPTM4B蛋白阴性表达组(P=0.002);Cox比例风险模型分析结果显示,WHO分级和LAPTM4B蛋白表达是影响胶质瘤患者预后的风险因素(P<0.05);与siRNA-NC组和空白组比较,siRNA-LAPTM4B组细胞中LAPTM4B mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),24、48、72、96 h时光密度值及细胞克隆数、迁移细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量均降低,而E-cadherin蛋白表达量升高(P<0.05)。结论LAPTM4B蛋白在胶质瘤组织中高表达,促进细胞增殖和侵袭,其机制可能与上皮-间质转化有关。LAPTM4B蛋白表达高低与胶质瘤患者生存有关。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 laptm4B 增殖 迁移 侵袭
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基于高分辨率CT图像特征及纹理参数分析肺腺癌TRIM28、LAPTM4B表达的危险因素 被引量:8
8
作者 王慧 闫圆圆 +1 位作者 巩贯忠 李娜 《放射学实践》 CSCD 北大核心 2021年第9期1101-1105,共5页
目的:探讨肺腺癌高分辨率CT图像特征及纹理参数与三结构域蛋白28(TRIM28)、溶酶体相关4次跨膜蛋白B(LAPTM4B)表达的相关性。方法:纳入行手术治疗的182例肺腺癌患者作为研究对象,术中取患者的肺腺癌组织和癌旁正常组织。患者行胸部CT检查... 目的:探讨肺腺癌高分辨率CT图像特征及纹理参数与三结构域蛋白28(TRIM28)、溶酶体相关4次跨膜蛋白B(LAPTM4B)表达的相关性。方法:纳入行手术治疗的182例肺腺癌患者作为研究对象,术中取患者的肺腺癌组织和癌旁正常组织。患者行胸部CT检查,记录肿瘤大小、肿瘤边界、有无分叶征、毛刺征、血管集束征、胸膜牵拉征、空气支气管征及空泡征和CT纹理参数,包括偏度、平均值、熵值、能量、峰度、均质性和自相关。肺腺癌组织和癌旁正常组织中的TRIM28和LAPTM4B表达水平应用免疫组织化学法进行检测。结果:TRIM28高表达者中出现肿瘤边界不规整、分叶征、毛刺征和胸膜牵拉征的比例(分别为67.0%、62.5%、70.5%、69.3%)显著高于低表达者(分别为50.0%、44.7%、53.2%、44.7%),差异均有统计学意义(P值均<0.05);TRIM28高表达者CT纹理参数中的峰度(17.52±2.56)显著高于低表达者(8.76±1.74),而均质性(0.14±0.02)显著低于低表达者(0.18±0.03),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。LAPTM4B高表达者中出现分叶征、毛刺征、血管集束征和空气支气管征的比例(分别为66.7%、72.2%、64.4%、63.3%)显著高于低表达者(分别为40.2%、51.1%、45.7%、44.6%),差异均有统计学意义(P值均<0.05);LAPTM4B高表达者CT纹理参数中的的峰度(18.48±2.77)和熵值(3.20±0.37)与低表达者(分别为8.36±1.88、2.61±0.30)相比显著升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。对单因素分析中有统计学意义的因素进行多因素Logistic回归分析,结果显示肿块边界不光整、分叶征、峰度升高及均质性降低是TRIM28高表达的独立危险因素(P值均<0.05),分叶征、血管集束征、峰度和熵值升高是LAPTM4B高表达的独立危险因素(P值均<0.05)。结论:高分辨率CT图像特征及纹理参数与肺腺癌TRIM28和LAPTM4B蛋白表达水平有关,有助于预测疾病预后及制定临床治疗方案。 展开更多
关键词 肺腺癌 体层摄影术 X线计算机 纹理分析 TRIM28 laptm4B
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LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性的关系 被引量:3
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作者 邓丽娟 张青云 +1 位作者 刘波 周柔丽 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期302-305,共4页
目的:探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(lysosome-associated protein transmembrane4 beta,LAPTM4B)基因多态性与肺癌易感性的关系.方法:以病例-对照研究的方法,用基于特异性引物的PCR对134例正常人和162例肺癌患者进行LAPTM4B基因分型,... 目的:探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(lysosome-associated protein transmembrane4 beta,LAPTM4B)基因多态性与肺癌易感性的关系.方法:以病例-对照研究的方法,用基于特异性引物的PCR对134例正常人和162例肺癌患者进行LAPTM4B基因分型,将卡方检验用于检测肺癌组和对照组基因型频率和其它参数的分布.结果:LAPTM4B的*2等位基因频率在肺癌组中为40.1%,较对照组(28.0%)显著增高(P=0.002).基因型分布在肺癌组和对照组间差异有统计学意义.*1/2和*2/2基因携带者患肺癌的危险性分别是*1/1的1.91倍(95%CI:1.178~3.110)与3.26倍(95%CI:1.338~7.929).LAPTM4B基因型分布与患者年龄,肺癌的病理类型,分化程度,临床分期以及HBV感染等无明显关系.结论:LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性相关,* 2等位基因可能是肺癌发生的危险因素. 展开更多
关键词 laptm4B 肺癌易感性 基因多态性 protein 病例-对照研究 基因型分布 等位基因频率 跨膜蛋白质 特异性引物 基因型频率 基因携带者 HBV感染 beta 基因分型 肺癌患者 患者年龄 病理类型 分化程度 临床分期 危险因素 对照组
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LAPTM4B新基因在肿瘤细胞中的表达及其免疫学检测技术的建立 被引量:2
10
作者 彭方毅 张青云 +3 位作者 周柔丽 涂植光 王雅明 徐建军 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期408-411,共4页
目的利用制备的鼠抗人肝癌相关LAPTM4B蛋白的单克隆抗体,检测LAPTM4B蛋白在不同肿瘤细胞中的表达。方法重组质粒pGEX-KG-LAPTM4B-N1-99经酶切及测序鉴定正确后,1 mmol/L IPTG 37℃诱导获得融合蛋白。利用亲和层析方法纯化抗人LAPTM4B单... 目的利用制备的鼠抗人肝癌相关LAPTM4B蛋白的单克隆抗体,检测LAPTM4B蛋白在不同肿瘤细胞中的表达。方法重组质粒pGEX-KG-LAPTM4B-N1-99经酶切及测序鉴定正确后,1 mmol/L IPTG 37℃诱导获得融合蛋白。利用亲和层析方法纯化抗人LAPTM4B单抗,免疫印迹法进行单抗鉴定,免疫细胞化学染色法检测5种肿瘤细胞中LAPTM4B的表达。结果经western b lot分析抗LAPTM4B单抗可与LAPTM4B-N1-99编码的融合蛋白以及肿瘤细胞中的天然蛋白特异性结合。免疫细胞化学染色(IHC)检测到肝癌、肺癌等5种肿瘤细胞均表达LAPTM4B蛋白。IHC和免疫印迹分析证明了LAPTM4B蛋白在肿瘤细胞中的表达。结论该单抗能特异识别原核及真核细胞表达的LAPTM4B蛋白,为进一步探讨LAPTM4B蛋白的生物学效应提供了条件。 展开更多
关键词 溶酶体相关4次跨膜蛋白B(laptm4B) 肝癌 单克隆抗体
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人LAPTM4B新基因多态性与淋巴瘤易感性的关系 被引量:1
11
作者 孙丽 张青云 +1 位作者 刘晔 钱娜 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期245-248,共4页
目的探讨人新基因溶酶体相关4次跨膜蛋白质B(lysosome-associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4B)多态性与淋巴瘤易感性的关系。方法以病例-对照研究的方法,基于特异性引物的PCR对350例正常人和166例胃癌患者进行LAPTM4B基因分... 目的探讨人新基因溶酶体相关4次跨膜蛋白质B(lysosome-associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4B)多态性与淋巴瘤易感性的关系。方法以病例-对照研究的方法,基于特异性引物的PCR对350例正常人和166例胃癌患者进行LAPTM4B基因分型,用χ2检验检测淋巴瘤组和对照组基因型频率和其他参数的分布。结果淋巴瘤组中LAPTM4B基因的*2等位基因的频率为34.94%,较对照组(24.14%)显著增高(P<0.001)。基因型分布在淋巴瘤组与对照组间差异有统计学意义。*1/2和*2/2基因携带者患淋巴瘤的危险性分别是*1/1的1.475倍(95%CI:0.994-2.189)与3.532倍(95%CI:1.802-6.923)。*2等位基因携带者患淋巴瘤的危险性是*1等位基因的1.710倍(95%CI:1.287-2.271)。LAPTM4B基因型分布与患者年龄、性别、病理类型、临床分期、HBV感染、乳酸脱氢酶(LDH)、β2-微球蛋白(β2-MG)以及有无全身症状等参数无明显关系。结论LAPTM4B基因多态性与淋巴瘤易感性相关,*2等位基因可能是淋巴瘤发生的危险因素。 展开更多
关键词 淋巴瘤 病例对照研究 laptm4B 癌基因蛋白质类 多态现象(遗传学) 易感性
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LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建 被引量:1
12
作者 彭方毅 张青云 +2 位作者 周柔丽 邵根泽 涂植光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第3期337-339,共3页
目的:LAPTM4B基因是肝癌中高度表达的新基因。为下一步LAPTM4B启动子的活性分性,本文构建了LAPTM4B基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。方法:以LAPTM4B基因组cDNA为模板扩增翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶... 目的:LAPTM4B基因是肝癌中高度表达的新基因。为下一步LAPTM4B启动子的活性分性,本文构建了LAPTM4B基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。方法:以LAPTM4B基因组cDNA为模板扩增翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,并经限制性内切酶消化鉴定。结果:通过酶切鉴定和基因测序,证明成功地构建了三种不同长度的pGL3-LAPTM4B-Luc荧光素酶表达质粒,形成了系列的LAPTM4B启动子重组体。结论:充分利用生物信息学资源,利用已知基因的启动子序列,可快速,准确地克隆已知基因启动子序列并构建启动子载体。LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建为LAPTM4B启动子的活性分析奠定了基础。 展开更多
关键词 laptm4B 基因表达 启动子
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人肝癌相关新基因LAPTM4B研究进展 被引量:1
13
作者 孙丽 张青云 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第18期1805-1809,共5页
LAPTM4B是北京大学基础医学院细胞生物学教研室新近克隆的一个在肝细胞癌中高表达的新基因,具有癌基因特性.本文将对其发现过程、结构、理化性质、功能研究及其多态性与肿瘤的关系等方面进行初步总结.
关键词 laptm4B 肝细胞癌 癌基因 多态性
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LAPTM4B-35蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义
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作者 范建林 杨建新 +1 位作者 乔卫平 刘蔚 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期390-395,共6页
目的:检测溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated protein transmembrane-4 beta,LAPTM4B)-35蛋白在正常涎腺及涎腺腺样囊性癌中的表达水平,探讨其与肿瘤患者临床病理特征的相关性。方法:收集95例涎腺腺样囊性癌和20例正常涎腺组... 目的:检测溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated protein transmembrane-4 beta,LAPTM4B)-35蛋白在正常涎腺及涎腺腺样囊性癌中的表达水平,探讨其与肿瘤患者临床病理特征的相关性。方法:收集95例涎腺腺样囊性癌和20例正常涎腺组织,以及相关临床病理资料,应用免疫组织化学法检测LAPTM4B-35在正常涎腺组织、涎腺腺样囊性癌的表达水平,卡方检验或Fisher精确检验及多因素Logistic回归分析探讨LAPTM4B-35表达水平与涎腺腺样囊性癌临床病理特征的关系。结果:LAPTM4B-35蛋白在正常涎腺组织不同细胞中呈差异性表达:在腺泡细胞中表达为阴性,在导管和闰管细胞中表达很弱,在纹状管细胞中表达中等。在涎腺腺样囊性癌组织中,48.00%的高级别涎腺腺样囊性癌LAPTM4B-35表达增高,显著高于低级别涎腺腺样囊性癌。此外,LAPTM4B-35高表达与临床分期晚亦呈显著相关。结论:LAPTM4B-35蛋白在正常涎腺组织细胞中呈差异性表达,与涎腺腺样囊性癌的组织学分级和临床分期显著相关。 展开更多
关键词 laptm4B 涎腺腺样囊性癌 组织学分级 临床分期
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质粒介导LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株PANC-1的构建及鉴定
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作者 张光涛 梁悦 李明华 《岭南现代临床外科》 2019年第1期44-47,共4页
目的筛选低表达LAPTM4B-35细胞株并构建质粒介导的LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株并进行鉴定。方法通过RT-PCR及Western-Blot方法检测3种胰腺癌细胞LAPTM4B的表达,筛选出现低表达LAPTM4B细胞株。通过质粒稳定转染胰腺癌细胞PANC-1,pcDNA3.0... 目的筛选低表达LAPTM4B-35细胞株并构建质粒介导的LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株并进行鉴定。方法通过RT-PCR及Western-Blot方法检测3种胰腺癌细胞LAPTM4B的表达,筛选出现低表达LAPTM4B细胞株。通过质粒稳定转染胰腺癌细胞PANC-1,pcDNA3.0-AE过表达LAPTM4B基因,应用RT-PCR,Western-blot进行鉴定。结果成功扩增提取pcDNA3.0-AE质粒,转染并筛选稳定细胞株。RT-PCR及Western-Blot显示相对空白对照,稳定株的过表达LAPTM4B-35明显。结论成功构建筛选低表达细胞株,并建立稳定过表达LAPTM4B的胰腺癌细胞株。 展开更多
关键词 laptm4B PANC-1 质粒 稳定株 胰腺癌
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胃窦黏膜肠上皮化生腺体中LAPTM4B蛋白的表达及其意义
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作者 马广贞 陈会 +1 位作者 滕玲玲 刘鲁英 《科技视界》 2016年第9期143-143,198,共2页
本研究通过免疫组织化学染色方法检测了80例胃窦黏膜中LAPTM4B蛋白表达情况,并结合形态学观察判断肠上皮化生的类型及程度。80例标本中28例检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达(35%),52例未检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达(6... 本研究通过免疫组织化学染色方法检测了80例胃窦黏膜中LAPTM4B蛋白表达情况,并结合形态学观察判断肠上皮化生的类型及程度。80例标本中28例检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达(35%),52例未检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达(65%)。LAPTM4B蛋白在不同类型、不同程度肠上皮化生中的表达有显著性差异(P<0.01)。LAPTM4B基因的异常表达可能在胃癌发生的早期阶段发挥重要作用。 展开更多
关键词 胃黏膜 肠上皮化生 laptm4B
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建立数字PCR检测非小细胞肺癌溶酶体相关的4次跨膜蛋白B基因拷贝数变异方法
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作者 王鲁 徐国兵 张青云 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1356-1364,共9页
建立芯片式数字PCR(dPCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)LAPTM4B基因拷贝数变异方法,并初步评估其基本性能和临床应用的可行性。设计LAPTM4B基因引物及特异性探针,建立dPCR反应体系,根据制备的不同浓度目的DNA样品验证该检测方法的最低检测限... 建立芯片式数字PCR(dPCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)LAPTM4B基因拷贝数变异方法,并初步评估其基本性能和临床应用的可行性。设计LAPTM4B基因引物及特异性探针,建立dPCR反应体系,根据制备的不同浓度目的DNA样品验证该检测方法的最低检测限、精密度和线性范围。本研究首次建立并优化dPCR检测LAPTM4B基因拷贝数的反应体系,分析数据显示,该方法最低检测到12.5%的LAPTM4B基因拷贝数缺失,批间精密度变异系数CV<10%,且缺失比例在12.5%~100%范围内线性良好(R^(2)>0.99)。此外,收集2021年3月至7月于北京大学肿瘤医院就诊的6例NSCLC患者,采用自建方法检测其冰冻组织标本,探究其临床应用可行性。dPCR结果显示,其中5例患者的组织样本存在LAPTM4B基因拷贝数缺失,1例出现拷贝数增加,推测可能与其术前化疗有关。综上所述,本研究成功应用芯片式dPCR方法,建立非小细胞肺癌LAPTM4B基因拷贝数变异的检测体系,并在组织标本中初步证实其临床应用的价值。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 laptm4B 拷贝数变异 芯片式数字PCR
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LAPTM4B-35和MMP-9在胃癌中表达及临床意义 被引量:13
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作者 张静怡 单丽珠 +1 位作者 张洁 张仑 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2017年第24期1226-1231,共6页
目的:本研究分析溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated transmembrane protein 4β,LAPTM4B)-35和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9在胃癌中的表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法:采用q RT-PCR法检测胃癌... 目的:本研究分析溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated transmembrane protein 4β,LAPTM4B)-35和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9在胃癌中的表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法:采用q RT-PCR法检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞株中LAPTM4B-35和MMP-9 m RNA的表达,免疫组织化学分析胃癌石蜡标本LAPTM4B-35和MMP-9蛋白的表达,运用相关手段分析蛋白表达与临床相关性,Log-rank单因素分析和Cox多因素分析对预后进行研究。结果:LAPTM4B-35和MMP-9 m RNA在HGC-27、SGC7901和MGC803胃癌细胞株相对表达量明显高于GES-1胃黏膜细胞株;免疫组织化学结果显示LAPTM4B-35和MMP-9均在细胞质中表达,LAPTM4B-35阳性表达率为50.7%,MMP-9阳性表达率为36.8%;LAPTM4B-35的表达与MMP-9的表达呈正相关;相关分析显示Lauren's分型和肿瘤浸润T分期与LAPTM4B-35表达相关,肿瘤大小和淋巴结转移N分期与MMP-9表达密切相关,预后生存Cox多因素分析结果显示分化程度、淋巴结转移N分期、LAPTM4B-35表达与MMP-9表达是胃癌患者独立预后因素。结论:LAPTM4B-35和MMP-9在胃癌的侵袭和迁移中起着重要作用,其表达为胃癌预后独立因素,可作为胃癌预后指标。 展开更多
关键词 胃癌 laptm4B-35 MMP-9 预后
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LAPTM4B-35蛋白作为肝癌血清学诊断新标志物的探讨 被引量:2
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作者 庞泳 张沙 +1 位作者 杨华 周柔丽 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期710-715,共6页
目的:LAPTM4B-35是北京大学基础医学院发现和鉴定的一个肿瘤驱动基因LAPTM4B所编码的蛋白质同型分子(isoform)之一,其在多种恶性肿瘤中[如肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、胆囊癌、胆管癌、乳腺癌... 目的:LAPTM4B-35是北京大学基础医学院发现和鉴定的一个肿瘤驱动基因LAPTM4B所编码的蛋白质同型分子(isoform)之一,其在多种恶性肿瘤中[如肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、胆囊癌、胆管癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌等]均超高表达。实验室和临床资料均证明,LAPTM4B-35蛋白的过表达促进肿瘤生长、转移和多药耐药,LAPTM4B-35的蛋白表达水平与肝癌的复发相关。本文的目的在于鉴定患者体内的肝癌细胞和体外培养的肝癌细胞系是否释放出LAPTM4B-35蛋白到血液和细胞培养液中,以及其可能的存在形式,为建立肝细胞癌等肿瘤的血清学诊断新方法奠定基础。方法:采用免疫印迹分析(Western blot)、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)鉴定LAPTM4B-35蛋白,应用超滤和超离心方法从肝癌细胞培养上清液中分离、纯化外排体(exosome)。结果:特异性抗体的ELISA结果表明,肝细胞癌患者的血液中存在LAPTM4B-35蛋白,体外培养的肝癌细胞以外排体形式释放LAPTM4B-35蛋白到培养基的上清液中。ELISA夹心法检测表明,肝细胞癌患者(n=43)血清中LAPTM4B-35蛋白的平均水平和中位值均显著高于正常人(n=33)。结论:肝癌细胞以外排体形式释放到其外环境中的LAPTM4B-35蛋白有望成为肝细胞癌血清学诊断的新标志物。 展开更多
关键词 肝细胞癌 外排体 laptm4B-35 生物标记 肿瘤
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LAPTM4B在子宫内膜癌组织中表达及临床意义 被引量:3
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作者 丁丽君 田洁 李晓兰 《昆明医科大学学报》 CAS 2019年第3期87-91,共5页
目的探讨LAPTM4B在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法选取2011年3月至2013年3月鄂东医疗集团黄石市妇幼保健院行手术治疗的子宫内膜癌患者76例,同期,选取正常子宫内膜组织40例作为对照组,免疫组化法检测子宫内膜癌和对照组组织中L... 目的探讨LAPTM4B在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法选取2011年3月至2013年3月鄂东医疗集团黄石市妇幼保健院行手术治疗的子宫内膜癌患者76例,同期,选取正常子宫内膜组织40例作为对照组,免疫组化法检测子宫内膜癌和对照组组织中LAPTM4B蛋白表达,所有患者均进行随访,随访截止日期2018年3月31日,随访过程中失访4例,随访率93.42%,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验,影响患者预后的多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果子宫内膜癌组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率为73.68%,高于对照组的27.50%,差异有统计学意义(χ~2=22.911,P <0.001);LAPTM4B蛋白表达在不同FIGO分期、不同分化程度和是否淋巴结转移差异有统计学意义(P <0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,阳性表达组平均生存时间(42.76±4.16)个月,生存率33.96%,阴性表达组则分别为(71.53±4.78)个月和78.95%,Log-Rank检验差异有统计学意义(χ~2=10.458,P=0.001);Cox比例风险回归结果显示,分化程度、淋巴结转移和LAPTM4B蛋白表达是影响患者预后的因素(HR=0.436、5.993和3.052,P <0.05)。结论子宫内膜癌组织中LAPTM4B蛋白表达升高,且与肿瘤恶性进展有关及预后有关,是影响患者预后的危险因素。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 laptm4B 预后 COX比例风险回归模型
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