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敲低lncRNA LINC01296调节PD-L1抑制鼻咽癌细胞免疫逃逸的机制研究
1
作者 李君 叶方 韩富光 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期847-856,共10页
目的研究敲低长链非编码RNA(lncRNA)LINC01296调节程序性死亡配体-1(PD-L1)抑制鼻咽癌细胞免疫逃逸的机制。方法分离培养人外周血淋巴细胞后与人鼻咽癌细胞CNE-2Z共培养,同时取C57BL/6小鼠皮下注射CNE-2Z细胞构建鼻咽癌移植瘤模型24只,... 目的研究敲低长链非编码RNA(lncRNA)LINC01296调节程序性死亡配体-1(PD-L1)抑制鼻咽癌细胞免疫逃逸的机制。方法分离培养人外周血淋巴细胞后与人鼻咽癌细胞CNE-2Z共培养,同时取C57BL/6小鼠皮下注射CNE-2Z细胞构建鼻咽癌移植瘤模型24只,均随机分为对照组、lncRNA LINC01296敲低组[转染lncRNA LINC01296小干扰RNA(siRNA)]、阴性对照组(转染lncRNA LINC01296 siRNA阴性对照和空载质粒)、lncRNA LINC01296敲低+PD-L1过表达组(转染lncRNA LINC01296 siRNA和PD-L1过表达质粒),分组转染后,流式细胞术检测人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例;细胞计数试剂盒-8法检测人外周血淋巴细胞对CNE-2Z细胞杀伤率;测量移植瘤小鼠肿瘤体积;免疫荧光染色检测移植瘤小鼠肿瘤组织CD8和PD-L1阳性表达;实时荧光PCR实验检测CNE-2Z细胞和肿瘤组织lncRNA LINC01296、PD-L1信使RNA(mRNA)表达;蛋白印迹实验检测CNE-2Z细胞和肿瘤组织PD-L1蛋白表达。结果与对照组相比,lncRNA LINC01296敲低组人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及对CNE-2Z细胞杀伤率、肿瘤组织CD8阳性比例升高(P<0.05),肿瘤体积、CNE-2Z细胞和肿瘤组织PD-L1阳性比例、CD8和PD-L1双阳性比例、lncRNA LINC01296、PD-L1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);阴性对照组各指标无明显变化(P>0.05);过表达PD-L1可减弱敲低lncRNA LINC01296对CNE-2Z细胞和小鼠各指标的影响。结论敲低ln⁃cRNA LINC01296可通过下调PD-L1而促进CD8^(+)T细胞活化及浸润,减弱鼻咽癌细胞免疫逃逸,增强CD8^(+)T细胞对其杀伤力。 展开更多
关键词 长链非编码RNA linc01296 程序性死亡配体-1 鼻咽癌CNE-2Z细胞 免疫逃逸
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LINC01296调控Wnt/β-catenin通路对卵巢癌顺铂耐药的影响
2
作者 林芳婷 吴清瑜 +1 位作者 王茹 李波 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第20期3770-3776,共7页
目的:探究长链非编码RNA LINC01296调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:培养人卵巢癌SKOV3细胞及SKOV3顺铂耐药SKOV3/DDP细胞,qRT-PCR检测LINC01296在二者中的表达情况;将SKOV3/DDP细胞分为5组:Control组... 目的:探究长链非编码RNA LINC01296调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:培养人卵巢癌SKOV3细胞及SKOV3顺铂耐药SKOV3/DDP细胞,qRT-PCR检测LINC01296在二者中的表达情况;将SKOV3/DDP细胞分为5组:Control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01296组(转染si-LINC01296)、si-NC+LiCl组(转染si-NC+Wnt/β-catenin通路激动剂LiCl 10 mmol/L处理)、si-LINC01296+LiCl组(转染si-LINC01296+10 mmol/L LiCl处理),qRT-PCR验证转染效果;CCK-8法检测各组SKOV3/DDP细胞顺铂半数抑制浓度(IC_(50))(0、1、2、4、8、16、32μg/mL顺铂处理)及增殖活力;流式细胞术检测各组SKOV3/DDP细胞凋亡;划痕愈合实验检测各组SKOV3/DDP细胞迁移能力;Western Blot检测各组SKOV3/DDP细胞中Wnt/β-catenin通路及增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白[Ki67;B细胞淋巴瘤/白血病基因-2相关X蛋白基因(Bax);基质金属蛋白酶9(MMP9);神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)]表达情况。结果:LINC01296在SKOV3/DDP细胞中的表达水平明显高于SKOV3细胞(P<0.05);SKOV3/DDP细胞转染si-LINC01296后,LINC01296表达水平较Control组、si-NC组明显下降(P<0.05),表明转染成功;与Control组比较,si-LINC01296组SKOV3/DDP细胞顺铂IC_(50)、增殖活力、细胞划痕愈合率、侵袭数均下降,凋亡率增高,β-catenin、Ki67、MMP9、N-cadherin蛋白表达均减少,Bax蛋白表达增加(P<0.05);与si-LINC01296组比较,si-LINC01296+LiCl组SKOV3/DDP细胞顺铂IC_(50)、增殖活力、细胞划痕愈合率、侵袭数均增高,凋亡率下降,β-catenin、Ki67、MMP9、N-cadherin蛋白表达均增高,Bax蛋白表达下降(P<0.05)。结论:敲低LINC01296表达可降低SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性,可能通过抑制Wnt/β-catenin通路实现。 展开更多
关键词 长链非编码RNA linc01296 WNT/Β-CATENIN通路 卵巢癌 顺铂耐药
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长链非编码RNA-LINC01296与肺癌细胞上皮间质转化的关系研究 被引量：4
3
作者 戴月梅 王星圆 加孜那·托哈依 《新疆医科大学学报》 CAS 2022年第9期953-957,共5页
目的研究长链非编码RNA-LINC01296与肺癌患者病理类型和预后关系,以及与肺癌细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法收集2019年10月-2021年2月新疆医科大学第一附属医院呼吸科收治的40例肺癌患者为研究对... 目的研究长链非编码RNA-LINC01296与肺癌患者病理类型和预后关系,以及与肺癌细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法收集2019年10月-2021年2月新疆医科大学第一附属医院呼吸科收治的40例肺癌患者为研究对象,取肺癌组织和癌旁组织均40例。采用实时荧光定量PCR(Quantitative realtime PCR,qRT-PCR)技术检测LINC01296、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肺癌组织和癌旁组织的相对表达量。采用免疫组织化学方法检测上皮间质转化的相关因子E-cadherin、Vimentin和MMP-9的蛋白表达水平。采用pearson相关分析比较肺癌组织LINC01296表达水平与上皮细胞间质转化E-cadherin、Vimentin、MMP-9表达水平的相关性。结果肺癌组织LINC01296表达水平,在腺癌、鳞癌和小细胞肺癌中比较,三组间差异有统计学意义(P<0.05);腺癌组患者TNM分期,Ⅰ-ⅢA组和ⅢB-Ⅳ组比较无显著差异。与癌旁组织比较,肺癌组织中LINC01296表达高,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌组织中Vimentin、MMP-9的mRNA表达高,E-cadherin的mRNA表达低,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌组织中Vimentin蛋白表达高,E-cadherin蛋白表达低,差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织LINC01296与上皮细胞间质转化E-cadherin、Vimentin、MMP-9的表达在转录和翻译水平均具有显著相关性(P<0.05)。结论LINC01296表达水平在肺癌组织中明显升高,且与患者临床病理类型相关,LINC01296的高表达参与调控了肺癌细胞上皮间质转化的进程,促使肿瘤细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 长链非编码RNA linc01296 上皮间质转化 肺癌
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长链非编码RNA LINC01296对胃癌细胞增殖的影响及其机制
4
作者 钊雯婧 杨芬 +2 位作者 夏睿 吴鹏 陈锦飞 《山东医药》 CAS 2020年第11期42-45,共4页
目的观察长链非编码RNA LINC01296对胃癌细胞增殖的影响及其机制。方法收集人胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823及人正常胃黏膜上皮细胞GES1,采用实时荧光定量PCR法检测细胞LINC01296表达。将SGC-7901、BGC-823细胞各分为两部分,分别加入小干... 目的观察长链非编码RNA LINC01296对胃癌细胞增殖的影响及其机制。方法收集人胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823及人正常胃黏膜上皮细胞GES1,采用实时荧光定量PCR法检测细胞LINC01296表达。将SGC-7901、BGC-823细胞各分为两部分,分别加入小干扰RNA(siRNA)、阴性对照RNA(siNC)进行转染,转染24 h。收集细胞,采用CCK-8法检测波长450 nm处的光密度(OD)值,克隆形成实验计数克隆形成数,胞质胞核分离实验观察LINC01296在胃癌细胞中的分布,RNA结合蛋白免疫共沉淀实验观察LINC01296与EZH2、SUZ12的相互作用。结果SGC-7901、BGC-823及GES1细胞LINC01296相对表达量分别为4.04±1.64、5.33±1.32、1.41±0.01,SGC-7901、BGC-823细胞LINC01296相对表达量均高于GES1细胞(P均<0.05)。转染siRNA、siNC的SGC-7901细胞OD值分别为1.20±0.03、1.38±0.02,克隆形成数分别为(112.56±5.22)、(256.14±6.42)个,二者比较P均<0.05;转染siRNA、siNC的BGC-823细胞OD值分别为1.50±0.04、1.73±0.22,克隆形成个数分别为(98.21±5.56)、(203.76±5.31)个,二者比较P均<0.05。LINC01296在SGC-7901、BGC-823细胞核中的相对表达比例均高于细胞质(P均<0.05)。RNA结合蛋白免疫共沉淀实验结果显示,LINC01296可以与EZH2、SUZ12结合。结论LINC01296可能通过与EZH2、SUZ12结合而促进胃癌细胞增殖。 展开更多
关键词 胃癌 长链非编码RNA linc01296 细胞增殖 EZH2 SUZ12
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lncRNA Linc01296对卵巢癌细胞OVCAR-3顺铂耐药的影响及其与临床病理特征的关系 被引量：4
5
作者 黄宇 谢尧 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期323-327,共5页
目的:探究lncRNA Linc01296对卵巢癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)抵抗的影响及其作用机制。方法:收集2017年10月至2018年10月四川省人民医院妇科卵巢癌组织样本53例、交界性卵巢肿瘤样本22例及良性卵巢肿块组织样本17例,qPCR检测3种样本Linc... 目的:探究lncRNA Linc01296对卵巢癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)抵抗的影响及其作用机制。方法:收集2017年10月至2018年10月四川省人民医院妇科卵巢癌组织样本53例、交界性卵巢肿瘤样本22例及良性卵巢肿块组织样本17例,qPCR检测3种样本Linc01296 mRNA表达的差异,并分析其与患者临床病理特征的关系。培养人卵巢癌细胞系OVCAR-3(OVCAR-3Control)及其DDP耐药细胞系(OVCAR-3 DR),慢病毒转染表达靶向Linc01296 siRNA的载体及对照随机靶向序列载体于OVCAR-3 DR细胞中,作为siLinc01296和siControl组,CCK-8实验检测各组细胞系DDP半抑制浓度(IC50)及耐药指数,qPCR检测OVCAR-3 Control、DR、DR siControl及siLinc01296组细胞系中Linc01296及肿瘤干细胞相关基因Oct-4及Sox-2的mRNA表达水平,WB检测各组细胞系Oct-4及Sox-2的蛋白表达水平。结果:OVCAR-3 DR组细胞DDP IC50及耐药指数显著高于OVCAR-3Control组(均P<0.01),siLinc01296组细胞DDP IC50及耐药指数显著低于DR siControl组(P<0.01),且显著高于OVCAR-3 Control组(P<0.01);DR组细胞Linc01296、Oct-4及Sox-2 m RNA及蛋白表达均高于OVCAR-3 Control组(均P<0.01),siLinc01296组Linc01296、Oct-4及Sox-2 mRNA及蛋白表达显著低于DR siControl组(均P<0.01),而Oct-4及Sox-2 mRNA及蛋白均高于OVCAR-3 Control组(均P<0.01);Linc01296在卵巢癌组织中的表达显著高于交界性卵巢肿瘤及良性卵巢组织(均P<0.01),且与患者淋巴结转移及临床分期呈正相关(均P<0.05)。结论:Linc01296可通过提高卵巢癌肿瘤干细胞标志物的表达促进细胞DDP抵抗的发生,且高表达于卵巢癌组织中,与患者病情进展密切相关。 展开更多
关键词 长链非编码RNA linc01296 卵巢癌 OVCAR-3细胞 顺铂 化疗抵抗 肿瘤干细胞
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乳腺癌组织的长链非编码RNA LINC01296水平及临床意义 被引量：1
6
作者 李信 易军 +3 位作者 贠军 徐昕 李一可 魏洪亮 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期1032-1035,共4页
目的探讨乳腺癌组织的长链非编码RNA LINC01296水平及临床意义。方法采用实时定量PCR检测本院2015年1月至2018年12月手术切除的166对癌组织和癌旁组织的LINC01296水平,受试者工作特征曲线评价组织LINC01296水平诊断乳腺癌的效能,分析LIN... 目的探讨乳腺癌组织的长链非编码RNA LINC01296水平及临床意义。方法采用实时定量PCR检测本院2015年1月至2018年12月手术切除的166对癌组织和癌旁组织的LINC01296水平,受试者工作特征曲线评价组织LINC01296水平诊断乳腺癌的效能,分析LINC01296水平与乳腺癌临床病理特征的关系。Kaplan-Meier Plotter数据库分析LINC01296水平与乳腺癌预后指标的关系。结果 166例乳腺癌组织的LINC01296水平为2.810±1.219,高于对应癌旁组织的1.070±0.721(P<0.05);组织LINC01296诊断乳腺癌的曲线下面积为0.886,最佳截断点为2.340时约登指数最大(0.5904),灵敏度和特异度分别为63.86%和95.18%。LINC01296表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、HER-2表达和Nottingham预后指数有关(P<0.05),而与年龄、绝经、组织学分级、ER和PR表达均无关(P>0.05)。LINC01296表达与乳腺癌的总生存期、无病生存期和无远处转移生存期有关,而与进展后生存期无关。结论 LINC01296在乳腺癌中高表达且参与了肿瘤的发生发展,高水平LINC01296与不良预后的关系密切,可作为乳腺癌预后预测和治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 乳腺癌 长链非编码RNA linc01296 临床意义 预后
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LINC01296在肾透明细胞癌中的表达及临床意义 被引量：1
7
作者 董小鑫 杨京可 +1 位作者 温玉婷 赵留存 《海南医学》 CAS 2022年第11期1395-1398,共4页
目的检测肾透明细胞癌患者肾透明细胞癌组织及其癌旁组织中LINC01296的表达水平并探讨其临床意义。方法选取2015年1月至2018年1月西安市第九医院泌尿外科收治且行根治性肾切除术或肾部分切除术的80例肾透明细胞癌患者作为研究对象,收集... 目的检测肾透明细胞癌患者肾透明细胞癌组织及其癌旁组织中LINC01296的表达水平并探讨其临床意义。方法选取2015年1月至2018年1月西安市第九医院泌尿外科收治且行根治性肾切除术或肾部分切除术的80例肾透明细胞癌患者作为研究对象,收集肾透明细胞癌组织标本及其癌旁组织标本,实时荧光定量PCR法检测肾透明细胞癌组织及癌旁组织中LINC01296表达水平,Kaplan-Meier生存曲线分析肾透明细胞癌组织中LINC01296表达水平与肾透明细胞癌患者3年预后的关系。结果肾透明细胞癌组织中LINC01296表达水平为1.86±0.19,明显高于癌旁组织的1.00±0.00,差异有统计学意义(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移以及有远处转移的肾透明细胞癌患者肾透明细胞癌组织中LINC01296表达水平分别为1.93±0.16、1.96±0.14、1.93±0.15、1.98±0.12,明显高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、中-高分化、无淋巴结转移以及无远处转移肾透明细胞癌患者的1.80±0.15、1.80±0.18、1.82±0.17、1.82±0.17,差异均有统计学意义(P<0.05);80例肾透明细胞癌患者术后3年死亡28例,存活52例,3年生存率为65%;以肾透明细胞癌组织中LINC01296表达水平的均值为临界值分为高、低表达组,LINC01296低表达组3年总体生存率为77.78%,明显高于LINC01296高表达组的48.57%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LINC01296在肾透明细胞癌患者癌组织中高表达,与患者临床病理特征关系密切,且其表达水平对患者术后3年生存预后具有一定价值。 展开更多
关键词 linc01296 肾透明细胞癌 TNM分期 分化 淋巴结转移 远处转移 预后
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LINC01296调控Wnt/β-catenin信号通路影响SK-N-SH细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭 被引量：1
8
作者 王青松 夏鹰 陈焕雄 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2020年第12期2116-2125,共10页
该研究探讨长链非编码RNA LINC01296(lncRNA LINC01296)是否通过调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路而调节人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖、凋亡、迁移及侵袭。采用qRT-PCR法检测神经母细胞瘤组织与瘤旁组织中LINC01296的表... 该研究探讨长链非编码RNA LINC01296(lncRNA LINC01296)是否通过调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路而调节人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖、凋亡、迁移及侵袭。采用qRT-PCR法检测神经母细胞瘤组织与瘤旁组织中LINC01296的表达水平;体外培养SK-N-SH细胞,随机分为Control组(正常培养SK-N-SH细胞)、si-NC组(si-NC转染至SK-N-SH细胞)、si-LINC01296组(si-LINC01296转染至SK-N-SH细胞)、LiCl组(Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理SK-N-SH细胞)、si-LINC01296+LiCl组(si-LINC01296与LiCl共同处理SK-N-SH细胞);采用甲基噻唑基四唑(MTT)与克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、Wnt1、β-catenin蛋白表达量。结果显示与瘤旁组织比较,神经母细胞瘤组织中LINC01296的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC01296组细胞活力显著降低(P<0.05),克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数显著减少(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Wnt1、β-catenin、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin、cleaved-caspase3蛋白水平显著升高(P<0.05);激活Wnt/β-catenin信号通路可部分逆转干扰LINC01296表达对SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响(P<0.05);与LiCl组比较,si-LINC01296+LiCl组细胞活力显著降低(P<0.05),克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数显著减少(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Wnt1、β-catenin、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin、cleaved-caspase3蛋白水平显著升高(P<0.05)。该研究得出,干扰LINC01296表达可抑制SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭及诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 lncRNA linc01296 WNT/Β-CATENIN信号通路 SK-N-SH细胞 增殖 迁移 侵袭 凋亡
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长链非编码RNA DUXAP9、DUXAP10和LINC01296在膀胱癌细胞系中的特异性高表达研究 被引量：6
9
作者 秦英超 汪磊 +7 位作者 宫雁冰 纪翔 王刚 孟军 杨冰 苑学礼 李宁忱 那彦群 《临床泌尿外科杂志》 2016年第10期921-925,共5页
目的:探寻与膀胱癌相关的长链非编码RNA,并明确它们在膀胱癌细胞系中的表达状况。方法:用lncRNA双通道表达谱芯片分析4对尿路上皮癌组织及癌旁正常尿路上皮的lncRNAs表达差异,筛选出差异表达的候选lncRNAs,并在膀胱癌细胞系(T24,RT4,BIU... 目的:探寻与膀胱癌相关的长链非编码RNA,并明确它们在膀胱癌细胞系中的表达状况。方法:用lncRNA双通道表达谱芯片分析4对尿路上皮癌组织及癌旁正常尿路上皮的lncRNAs表达差异,筛选出差异表达的候选lncRNAs,并在膀胱癌细胞系(T24,RT4,BIU-87,EJ)、正常细胞系和其他肿瘤细胞系中,利用实时荧光定量PCR反应(Real-time PCR)进行验证。结果:根据芯片结果,挑选候选lncRNAs共6条,包括DUXAP9、DUXAP10、LINC01296、UCA1、PVT1、MEG3,进行细胞系表达验证。DUXAP9、DUXAP10和LINC01296在膀胱癌细胞系中显著特异性高表达。UCA1在胰腺癌、膀胱癌和肝癌各细胞系中均高表达,PVT1在膀胱癌细胞系中未见特异性高表达,MEG3在膀胱癌细胞系表达亦不高。结论:我们首次报道了DUXAP9、DUXAP10和LINC01296在膀胱癌细胞系中特异性高表达状况,与已报道的UCA1、MEG3、PVT1相比,这三个lncRNAs可能具有更好的膀胱癌特异性。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 膀胱癌 DUXAP9 DUXAP10 linc01296
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