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人IL-21cDNA的克隆及重组腺病毒表达载体的构建 被引量：4
1
作者 王芹 李进 +4 位作者 王颖嫒 宋力 岳井银 穆传杰 樊飞跃 《广西医科大学学报》 CAS 2009年第4期516-518,共3页
目的:构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法:从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含... 目的:构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法:从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含IL-21基因的腺病毒载体(Ad-IL-21),并进行测序鉴定和PCR鉴定。结果:Ad-IL-21表达载体测序结果与GenBank中IL-21基因序列一致,Ad-IL-21经PCR扩增出IL-21基因片段。结论:成功构建携带人IL-21基因的重组腺病毒表达载体。 展开更多
关键词 IL-21基因 基因克隆 腺病毒表达载体 lr重组反应
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利用一步克隆方法快速高效构建Gateway入门载体
2
作者 张艳军 赵利 +2 位作者 李雨佳 赵江哲 张可伟 《浙江师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第1期72-76,共5页
Gateway技术是一种非常便捷的载体构建方法,但目前构建入门克隆的方法成本较高,且存在一定的局限性.利用限制酶Eco RⅠ对pCR8-AtS5H入门克隆进行单酶切,获得入门载体pCR8片段,然后利用不依赖序列和连接的一步克隆方法(one-step sequence... Gateway技术是一种非常便捷的载体构建方法,但目前构建入门克隆的方法成本较高,且存在一定的局限性.利用限制酶Eco RⅠ对pCR8-AtS5H入门克隆进行单酶切,获得入门载体pCR8片段,然后利用不依赖序列和连接的一步克隆方法(one-step sequence-and ligation-independent cloning,One-SLIC)将纯化后水稻异分支酸合成酶基因的启动子(ICS1 pro)片段连接至pCR8入门载体,并通过菌落PCR和测序方法鉴定得到阳性入门克隆,最后通过LR重组反应将ICS1 pro片段转移至Gateway目的载体pMDC163上.这种利用One-SLIC法快速高效构建入门克隆的方法操作简便,成功率高且成本低,是一种具有广泛应用前景的Gateway入门载体构建方法. 展开更多
关键词 入门克隆 SLIC技术 GATEWAY lr重组反应
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