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RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究 被引量：5
1
作者 程光 章翔 +5 位作者 鲍炜 张赟 张新海 曹卫东 高大宽 宋蕾 《医学研究生学报》 CAS 2006年第4期292-297,i0011,共7页
目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上... 目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建核糖核酸干扰(RNAi)质粒载体。利RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干效果。结果:重组构建的pSUPERMAGE1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成地插入至预计位点,且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论:载体的成功构建并能对U细胞中的MAGE1分子进行RNAi,为进一步研究MAGE1在肿瘤中的作用,分析基因功能,展开肿瘤基因治疗奠了基础。 展开更多
关键词 PSUPER 短片段双链核糖核酸 核糖核酸干扰 mage—1 胶质瘤
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真核表达载体pcDNA3.1-MAGE-1的构建 被引量：2
2
作者 何炜 张朝 +2 位作者 章茜 赵国强 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第4期586-587,共2页
目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与... 目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与结论:RT-PCR获得长度为927bp的阳性产物,经T载体和pcDNA3.1(+)真核表达载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pcDNA3.1-MAGE-1构建成功。 展开更多
关键词 mage—1 PCDNA3.1(+) 真核表达载体
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MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活检组织中的表达及意义 被引量：13
3
作者 陈雪华 刘炳亚 +4 位作者 张冬青 张奕 张轶 李建芳 朱正纲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期310-313,共4页
目的 :检测黑色素瘤抗原基因 1、 3(MAGE 1和MAGE 3)在胃癌中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法 :采用RT PCR法 ,对 36例胃癌患者的癌组织和相应的癌旁“正常”黏膜 ,以及 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织中 ,MAGE 1和MAG... 目的 :检测黑色素瘤抗原基因 1、 3(MAGE 1和MAGE 3)在胃癌中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法 :采用RT PCR法 ,对 36例胃癌患者的癌组织和相应的癌旁“正常”黏膜 ,以及 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因的表达进行研究 ,并对RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果 :36例胃癌组织中 ,MAGE 1基因的表达阳性率为 72 .2 2 % (2 6 / 36 ) ,MAGE 3基因的表达阳性率为 6 9.4 4 % (2 5 / 36 )。MAGE 1、MAGE 3的表达均为阳性者为 5 2 .78% (19/ 36 )。癌旁“正常”黏膜中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率分别为 4 7.2 2 % (17/ 36 )和4 4 .4 4 % (16 / 36 ) ;MAGE 1、MAGE 3基因表达双阳性者为 30 .5 5 % (11/ 36 )。在 37例胃慢性炎症患者中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率 ,分别为 2 9.73% (11/ 37)和 2 7.0 3% (10 /37) ;MAGE 1、MAGE 3基因的表达双阳性者为 8.1% (3/ 37)。胃癌组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因表达阳性率均高于癌旁和胃慢性炎症患者 ;在肿瘤组织中的表达阳性率与肿瘤浸润的深度和分化程度有关 (P <0 .0 5 ) ;而与临床病理分期及淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论 :基于MAGE 1和MAGE 3基因在胃癌中的高表达率 ,可利用这两种蛋白作为靶? 展开更多
关键词 胃癌 慢性胃炎 mage-1 mage-3 基因表达
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一个新的MAGE-1表位为肝癌细胞表面HLA-B7分子递呈 被引量：9
4
作者 郭爱林 隋延仿 +5 位作者 叶菁 曲萍 张晓楠 张立红 张敏 卢兴森 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期252-255,共4页
目的 :肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础 ,机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主 ,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽 ,为肝癌免疫治疗奠定基础。方法 :对于肝癌细胞系HHCC(HLA A2 ,A2 9,B7,B5 1) ,应用细胞膜酸洗技术... 目的 :肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础 ,机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主 ,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽 ,为肝癌免疫治疗奠定基础。方法 :对于肝癌细胞系HHCC(HLA A2 ,A2 9,B7,B5 1) ,应用细胞膜酸洗技术使抗原肽从细胞膜表面脱落 ,经过凝胶层析 ,反相高效液相色谱层析得到不同组份多肽 ,高效液相色谱 质谱仪联用技术获得抗原肽的一级结构 ,通过氨基酸锚定位点分析 ,预测其HLA配体类型 ;互联网上氨基酸同源性分析确定其同源性序列 ;人工合成抗原肽 ,HLA同型树突状细胞递呈合成抗原肽刺激特异性CTL反应 ,51Cr杀伤实验检测CTL对肿瘤细胞系的杀伤作用。结果 :经过反相高效液相色谱层析后可以获得 10多个组份 ,其中一个组份经过液质联用鉴定和氨基酸同源性分析确定其序列为EPVTKAEML ,是黑色素瘤抗原 1,MAGE 1(12 1 12 9)表位 ,由HLA B7分子递呈 ,体外诱导实验表明其可以诱导出较强的CTL反应。结论 :液质联用技术是寻找抗原肽的有效方法 ,MAGE 1抗原肽EPVTKAEML对于HLA B7阳性及MAGE 展开更多
关键词 肝癌 HLA-B7 液质联用技术 黑色素瘤特异性抗原1 抗原肽 mage-1
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MAGE-1基因在人食管癌中的表达及基因克隆 被引量：6
5
作者 彭良平 王贵齐 +4 位作者 冉宇靓 刘海燕 孙立新 遇珑 杨治华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期97-99,共3页
目的研究 MAGE- 1基因在人食管癌中的表达 ,分析 MAGE- 1抗原能否作为食管癌的治疗性候选疫苗。方法采用 RT- PCR方法检测了 MAGE- 1基因在 30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达 ;并从食管癌组织中扩增了 MAGE-1c DNA全长序列 ,... 目的研究 MAGE- 1基因在人食管癌中的表达 ,分析 MAGE- 1抗原能否作为食管癌的治疗性候选疫苗。方法采用 RT- PCR方法检测了 MAGE- 1基因在 30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达 ;并从食管癌组织中扩增了 MAGE-1c DNA全长序列 ,经酶切后与 p ET- 30 a(+ )质粒载体连接 ,经初步酶切鉴定后 ,进行 DNA序列分析 ,获得克隆基因的核苷酸序列。结果 MAGE- 1基因在食管癌组织中的表达率为 43% (13/30 ) ,在 30例相应癌旁正常组织中未见表达 ;成功地克隆了MAGE- 1c DNA全长序列。结论由于 MAGE- 1基因在食管癌中高频率表达以及 MAGE- 1抗原具有 HL A- I类分子限制性CTL 识别表位 ,因此 ,MAGE- 展开更多
关键词 食管肿瘤 mage-1 反转录聚合酶链反应 基因克隆 基因疫苗治疗
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黑色素瘤抗原基因MAGE-1、MAGE-3和抑癌基因p53在肺癌中表达的研究 被引量：8
6
作者 李秋泽 董子明 +2 位作者 赵国强 彭培立 赵洁 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第8期1106-1108,共3页
目的:分析肺癌组织MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因表达及其相互关系。方法:取肺癌组织标本30例,另取癌周组织作为对照。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因的表达。结果:MAGE-1,MAGE-3在肺癌中有较... 目的:分析肺癌组织MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因表达及其相互关系。方法:取肺癌组织标本30例,另取癌周组织作为对照。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因的表达。结果:MAGE-1,MAGE-3在肺癌中有较高表达,MAGE-3的表达高于MAGE-1的表达。p53在肺癌中表达较低,在正常组织中表达较高;MAGE-1在肺腺癌中表达较鳞癌高,MAGE-3在肺鳞癌中表达较高;MAGE-1,MAGE-3的表达可能与肿瘤分化程度无关;p53在小细胞肺癌中的表达有待进一步研究;p53与MAGE在体内表达成负相关。结论:MAGE-1、MAGE-3和p53在肺癌组织与正常组织中有不同的表达,MAGE-1、MAGE-3的表达与病理类型有关,与肿瘤分化无关。 展开更多
关键词 肺癌 mage-1 mage-3 p53 逆转录聚合酶链反应
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MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗的构建与体外表达 被引量：6
7
作者 时阳 杨广民 +2 位作者 李首庆 马寅芙 谭岩 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第19期1865-1868,共4页
目的构建MAGE-1与IL-18共表达质粒pcIL-18-MAGE并进行体外验证表达。方法设计合成MAGE-1与IL-18引物,PCR扩增其基因片段,分别构建以pcDNA3为载体的小鼠IL-18重组质粒和人MAGE-1重组质粒,pcCMV-IL-18与MAGE-1的PCR产物酶切连接构建共表... 目的构建MAGE-1与IL-18共表达质粒pcIL-18-MAGE并进行体外验证表达。方法设计合成MAGE-1与IL-18引物,PCR扩增其基因片段,分别构建以pcDNA3为载体的小鼠IL-18重组质粒和人MAGE-1重组质粒,pcCMV-IL-18与MAGE-1的PCR产物酶切连接构建共表达质粒pcIL-18-MAGE。脂质体法将构建的重组质粒转染293细胞,RT-PCR和Western印迹法验证MAGE-1和IL-18在转化细胞中的表达。结果成功获得共表达质粒pcIL-18-MAGE,RT-PCR可见目的条带,Western印迹显示转染MAGE-1与IL-18的细胞在蛋白质水平上均有表达。结论成功地构建出既表达mIL-18又表达MAGE-1的共表达质粒pcIL-18-MAGE。 展开更多
关键词 共表达DNA疫苗 mage-1 IL-18
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重组质粒pchIL-18-MAGE转染树突状细胞疫苗体外杀伤肝癌细胞的研究 被引量：5
8
作者 刁斌斌 李首庆 +1 位作者 马寅芙 杨广民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1606-1610,共5页
目的:探讨重组质粒pch IL-18-MAGE转染DC细胞在体外对肝癌细胞的杀伤作用。方法:构建共表达质粒pchIL-18-MAGE,体外培养树突状细胞,将以上重组质粒转染树突状细胞。RT-PCR和Western blot方法验证IL-18和MAGE-1基因在转染DC中的表达。应... 目的:探讨重组质粒pch IL-18-MAGE转染DC细胞在体外对肝癌细胞的杀伤作用。方法:构建共表达质粒pchIL-18-MAGE,体外培养树突状细胞,将以上重组质粒转染树突状细胞。RT-PCR和Western blot方法验证IL-18和MAGE-1基因在转染DC中的表达。应用流式细胞术检测转染后DC细胞的表型变化。以转染重组质粒DC刺激的淋巴细胞作为效应细胞,单纯淋巴细胞和未经转染DC刺激的淋巴细胞为对照,检测其对肝癌靶细胞的体外杀伤作用。ELISA法检测INF-γ的分泌。结果:pchIL-18-MAGE转染后DC细胞高表达CD83、CD1a、CD86、CD80、HLA-DR等抗原,表现为成熟DC表型特征。共表达质粒转染的DC细胞诱导的CTL对肝癌细胞杀伤作用最强(P<0.05)。结论:pchIL-18-MAGE转染DC细胞对MAGE+肝癌细胞杀伤作用明显。 展开更多
关键词 疫苗 肝癌 树突状细胞 mage-1 IL-18
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MAGE-1与结核杆菌HSP70融合基因的构建及原核表达 被引量：4
9
作者 陈广生 隋延仿 +2 位作者 叶菁 张秀敏 宋宏萍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期342-344,共3页
目的 构建结核杆菌HSP70与肿瘤抗原MAGE-1的融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并通过GST纯化系统进行分离纯化。方法 利用PCR方法扩增TBHSP70基因,经测序后连入原核表达载体pGEX-4T-1,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因片段(289～927 bp),测序... 目的 构建结核杆菌HSP70与肿瘤抗原MAGE-1的融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并通过GST纯化系统进行分离纯化。方法 利用PCR方法扩增TBHSP70基因,经测序后连入原核表达载体pGEX-4T-1,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因片段(289～927 bp),测序后插入TBHSP70基因的5’端,构建NAGE-1与TBHSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-MACE-1-TBHSP70,含有该质粒的大肠杆菌DH5α进行诱导表达和分离纯化。结果 成功地扩增了TBHSP70基因与MAGE-1基因片段,测序结果表明与GenBank公布的序列一致;成功地构建了pGEX-MAGE-1-TBHSP70原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌DH5α经IPTC诱导后表达一M_r约为125000的蛋白,经GST融合蛋白表达系统纯化,得到了MAGE-1与TBHSP70的融合蛋白。结论 成功地获得了MAGE-1与TBHSP70的融合蛋白,为研究MACE-1-TBHSP70融合蛋白在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 热休克蛋白70 黑色素相关抗原-1 融合基因 原核表达
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胃癌MAGE-1基因启动子B′B区去甲基化状态的研究 被引量：3
10
作者 许琳 罗兵 +3 位作者 王青 徐翮飞 黄维青 梁华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第1期39-41,共3页
目的 :探讨胃癌组织中MAGE 1基因启动子B′B区去甲基化状态及其与病理分级及临床分期的关系。方法 :取胃癌组织标本 4 0例 ,另外取同患者相应的癌旁组织 4 0例作为对照。采用分子生物学技术 甲基化敏感性内切酶酶切及PCR扩增技术 ,研究... 目的 :探讨胃癌组织中MAGE 1基因启动子B′B区去甲基化状态及其与病理分级及临床分期的关系。方法 :取胃癌组织标本 4 0例 ,另外取同患者相应的癌旁组织 4 0例作为对照。采用分子生物学技术 甲基化敏感性内切酶酶切及PCR扩增技术 ,研究了胃癌组织中MAGE 1启动子B′B区的去甲基化状态。结果 :在所检测的胃癌组织标本中MAGE 1基因启动子B′B区去甲基化的发生率为 2 5 % (10 /40 )。而在癌旁组织中发生率为 0 ,两者发生率的差别具有显著的统计学意义 (P <0 0 1)。在低分化腺癌中MAGE 1基因的B′B区去甲化发生率为 5 0 % (6 /12 ) ,中分化腺癌中发生率为 18.7% (3/16 ) ,高分化腺癌中发生率为 8.3(1/11)。其发生率的差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。在早期胃癌组织中B′B区的去甲基化的发生率为16 .7% ,在晚期胃癌组织中发生率为 2 8.6 % (P <0 .0 5 ) ,差别有统计学意义。结论 :胃癌组织中MAGE 1基因启动子的B′B区存在去甲基化。 展开更多
关键词 胃癌 mage-1基因启动子 去甲基化
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肝细胞癌患者组织中MAGE-1基因的原核表达及鉴定 被引量：4
11
作者 徐凛峰 朱进 +1 位作者 焦永军 张建平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期534-537,共4页
目的:克隆MAGE-1基因并对其进行原核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-1基因片段,将该片段克隆在原核表达载体PET-32a中,重组克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白以His亲和柱层析纯化... 目的:克隆MAGE-1基因并对其进行原核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-1基因片段,将该片段克隆在原核表达载体PET-32a中,重组克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白以His亲和柱层析纯化,并用Dot-blot和Western-blot对其进行鉴定。结果:经RT-PCR扩增出930bp基因片段,经测序分析后的DNA序列与Genbank中的报道序列同源程度达98%,构建含重组表达载体PET32-M1的工程菌,经IPTG诱导表达、纯化,MAGE-1蛋白浓度为0.48mg/ml,经Dot-blot和Western-blot检测,纯化蛋白可以与商业化的驴抗MAGE-1的多抗结合。结论:成功扩增了肝细胞肝癌中的MAGE-1基因全长cDNA并对其进行了原核表达与鉴定,为进一步研究MAGE-1基因的功能和研制有临床价值的全人抗MAGE-1抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 人肝细胞癌(HCC) mage-1 原核表达
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MAGE-1 MAGE-3及AFP基因在肝癌组织中的表达 被引量：2
12
作者 刘宁 梁寒 +11 位作者 李强 李慧 任秀宝 张毓青 张汝鹏 刘勇 王晓娜 丁学伟 潘源 邓靖宇 詹宏杰 郝希山 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期493-496,共4页
目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3... 目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34.9%(30/86)、60.5%(52/86)和69.8%(60/86);所有患者肝癌组织至少表达其中一种mRNA。结论:MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA在肝癌组织中表达率较高,有可能用于联合检测肝癌血行微小转移。 展开更多
关键词 荧光定量聚合酶链反应 mage-1 mage-3 AFP肝癌 微转移
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pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的稳定表达 被引量：2
13
作者 杨广民 齐亚灵 +3 位作者 李首庆 马寅芙 谭岩 时阳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期49-53,共5页
目的:构建真核表达载体,并在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中稳定表达,观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力。方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列,连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1,脂质体法转染小鼠Hepa... 目的:构建真核表达载体,并在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中稳定表达,观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力。方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列,连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1,脂质体法转染小鼠Hepa1-6细胞。G418筛选阳性克隆(Hepa1-6-MAGE-1),用RT-PCR和Western blotting检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达;MTT法检测Hepa1-6细胞和Hepa1-6-MAGE-1细胞生长和增殖的变化;分别以Hepa1-6细胞和Hepa1-6-MAGE-1细胞接种于C57BL/6j小鼠右侧背部皮下,观察Hepa1-6-MAGE-1细胞的致瘤能力。结果:构建MAGE-1的真核表达载体转染Hepa1-6细胞,PT-PCR与Western boltting检测分别在Hepa1-6-MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组细胞增殖无统计学差异;两组各10只小鼠均皮下成瘤,且肿瘤大小没有明显差异。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3-MAGE-1,获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠肝癌Hepa1-6细胞株,并具有很好的增殖和致瘤能力。 展开更多
关键词 mage-1 真核表达载体 基因转染 免疫疗法
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MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗在小鼠体内诱导特异性免疫应答能力的研究 被引量：2
14
作者 杨广民 时阳 +2 位作者 谭岩 李首庆 马寅芙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期583-587,共5页
目的:观察已构建的pcIL-18-MAGE共表达质粒疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况。方法:质粒大量制备肌注小鼠,每隔10天加强免疫1次,共免疫3次。末次免疫后7天,收集血清及脾细胞,流式细胞术检测小鼠T细胞亚群情况及血清中抗MAGE-1多抗的产... 目的:观察已构建的pcIL-18-MAGE共表达质粒疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况。方法:质粒大量制备肌注小鼠,每隔10天加强免疫1次,共免疫3次。末次免疫后7天,收集血清及脾细胞,流式细胞术检测小鼠T细胞亚群情况及血清中抗MAGE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性。结果:pcIL-18、pcMAGE-1、pcIL-18+pcMAGE-1及pcIL-18-MAGE免疫组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及MAGE-1抗体的产生均高于pcDNA3免疫组(P<0.05),且pcIL-18-MAGE共表达免疫组高于pcIL-18+pcMAGE-1共同注射组(P<0.05)。pcIL-18-MAGE免疫组对SMMC-7721的杀伤活性最高。结论:pcIL-18-MAGE共表达基因疫苗接种小鼠与其它实验小鼠相比,可以有效产生更好的特异性免疫应答。 展开更多
关键词 mage-1 IL-18 共表达DNA疫苗 免疫应答
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携带人MAGE-1基因重组腺病毒的构建及其在肝癌细胞中的表达 被引量：2
15
作者 张利军 张惠忠 +2 位作者 陈广生 叶菁 师建国 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期300-303,307,共5页
目的构建人黑色素瘤相关抗原-1(MAGE-1)基因的腺病毒,并研究其感染肝癌细胞系HepG2细胞的效率。方法采用基因克隆技术,将人MAGE-1基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-IRES-hrGFP中,构建pShuttle-MAGE-1-IRES-hrGFP质粒,利用细菌BJ5183将... 目的构建人黑色素瘤相关抗原-1(MAGE-1)基因的腺病毒,并研究其感染肝癌细胞系HepG2细胞的效率。方法采用基因克隆技术,将人MAGE-1基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-IRES-hrGFP中,构建pShuttle-MAGE-1-IRES-hrGFP质粒,利用细菌BJ5183将穿梭质粒与pAdEasy-1进行重组,获得重组的腺病毒质粒。线性化的腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增。采用CsCl密度梯度离心进行病毒浓缩和纯化。获得的腺病毒感染肝癌细胞HepG2,观察其感染效率和MAGE-1表达水平。结果通过酶切鉴定证明腺病毒载体构建成功,包装出携带人MAGE-1基因的腺病毒,滴度达2.1×1010pfu/mL,获得的腺病毒对HepG2细胞的感染效率高于98%以上。结论成功地利用细菌内同源重组方法构建了携带人MAGE-1基因的腺病毒,并能够在肝癌细胞中高效地表达,为利用MAGE-1进行免疫治疗提供了材料。 展开更多
关键词 腺病毒 黑色素瘤相关抗原 肝细胞癌
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MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染的树突状细胞诱导体内抗肿瘤作用研究 被引量：2
16
作者 李首庆 马寅芙 杨广民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1151-1154,1160,共5页
目的:研究MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染树突状细胞在体内诱导的抗肿瘤作用。方法:将重组质粒转入DC中构建DC疫苗,免疫肝癌荷瘤小鼠,观察被免疫小鼠的成瘤情况和生存时间。结果:DC疫苗免疫的荷瘤小鼠比对照组肿瘤生长受抑制,生存时间延... 目的:研究MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染树突状细胞在体内诱导的抗肿瘤作用。方法:将重组质粒转入DC中构建DC疫苗,免疫肝癌荷瘤小鼠,观察被免疫小鼠的成瘤情况和生存时间。结果:DC疫苗免疫的荷瘤小鼠比对照组肿瘤生长受抑制,生存时间延长,其中共表达疫苗(pcmIL-18-MAGE)-DC组效果最佳(P<0.05),对MAGE(+)肝癌杀伤作用明显。结论:MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染的树突状细胞疫苗在体内可产生抗肿瘤效果。 展开更多
关键词 疫苗 肝癌 树突状细胞 mage-1 IL-18
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MAGE-1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义 被引量：2
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作者 赵海涛 王少斌 +3 位作者 王瑜 赵屹 王宇 芮静安 《中国微创外科杂志》 CSCD 1999年第4期24-27,共4页
目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应... 目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1基因表达进行检测,随机对6例RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1基因,所有患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。结果:31例HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率64.5％(20/31)明显高于癌旁组织2％(1/31),P<0.01。HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、乙肝标志物、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P>0.05。结论:MAGE-1基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与HCC患者AFP、AFU、AFPmRNA肿瘤转移、复发均无关。 展开更多
关键词 mage-1 肝细胞肝癌 RT-PCR
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NY-ESO-1和MAGE-A3抗原肽诱导肝癌患者的免疫应答研究 被引量：4
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作者 陈红松 张华刚 +5 位作者 梅铭惠 费然 丛旭 覃理灵 魏来 陈慰峰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期659-663,共5页
目的利用合成的HLA-A02限制性NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽,体外通过抗原递呈细胞诱导HCC患者外周血T淋巴细胞,从而成功诱导出特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答。方法通过SSP方法筛选20例HLA-A*02的HCC患者的HLA亚型;通过逆转... 目的利用合成的HLA-A02限制性NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽,体外通过抗原递呈细胞诱导HCC患者外周血T淋巴细胞,从而成功诱导出特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答。方法通过SSP方法筛选20例HLA-A*02的HCC患者的HLA亚型;通过逆转录多聚酶链反应和测序分析NY-ESO-1和MAGE-A3在肝癌组织中的表达以及多肽表位密集区的核苷酸变异状况;体外用细胞因子培养HCC患者外周血来源的树突状细胞(DC);人工合成HLA-A*02限制性NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279多肽,直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外同T淋巴细胞孵育16d后,利用Elispot、细胞内细胞因子染色和四聚体实验检测T细胞免疫应答。结果20例HLA-A*02患者中,NY-ESO-1mRNA阳性患者为11例,MAGE-A3mRNA阳性患者12例。中国HCC患者表达的NY-ESO-1和MAGE-A3序列高度保守。经多肽直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外活化外周血T淋巴细胞,4例(36.4%)NY-ESO-1阳性HCC患者以及4例(33.3%)MAGE-A3患者产生针对多肽特异性的CD8+T细胞免疫应答。不同HLA-A*02亚型HCC患者可产生针对NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽的免疫应答。结论NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽可以诱导出针对抗原肽的特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答。提示HLA-A*02限制性的NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗。 展开更多
关键词 NY—ESO-1 mage-A3 癌 肝细胞 免疫应答
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联合应用MAGE-1与IL-18基因疫苗体外抗肝癌作用的实验研究 被引量：1
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作者 杨广民 段秀梅 +2 位作者 李首庆 马寅芙 谭岩 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第31期3872-3875,3880,共5页
目的该研究构建重组基因疫苗pcDNA-MAGE-1和pcDNA-hIL-18;探讨联合应用基因疫苗体外抗肝癌免疫治疗的作用。方法基因疫苗分组免疫实验小鼠,在体外验证疫苗免疫后的小鼠脾细胞对MAGE-1阳性和阴性肝癌细胞株的杀伤作用;分别以不同剂量的pc... 目的该研究构建重组基因疫苗pcDNA-MAGE-1和pcDNA-hIL-18;探讨联合应用基因疫苗体外抗肝癌免疫治疗的作用。方法基因疫苗分组免疫实验小鼠,在体外验证疫苗免疫后的小鼠脾细胞对MAGE-1阳性和阴性肝癌细胞株的杀伤作用;分别以不同剂量的pcDNA-hIL-18与pcDNA-MAGE-1组合测定免疫鼠脾细胞杀伤率,验证产生高杀伤效应的最佳的pcDNA-hIL-18浓度。结果重组基因疫苗免疫组小鼠脾细胞对两种MAGE-1阳性肿瘤细胞(SMMC-7721、BEL-7402)均有明显的杀伤作用,其杀伤效应与生理盐水组(空白对照),空质粒pcDNA3组(阴性对照)相比差异具有显著性(P<0.01);重组基因疫苗免疫后的小鼠脾细胞对MAGE-1阴性肿瘤细胞(QQY-7701)有一定的杀伤作用,与空白对照及阴性对照免疫组相比差异有显著性(P<0.05);pcDNA-hIL-18+pcDNA-MAGE-1组以(50+100)μg剂量免疫小鼠的脾细胞杀伤效应最高,与pcDNA-MAGE-1和pcDNA-hIL-18组相比差异有显著性(P<0.01)。结论联合应用MAGE-1与IL-18基因疫苗对MAGE-1阳性肿瘤细胞有明显的杀伤作用。 展开更多
关键词 基因疫苗 mage-1 IL-18 肝癌细胞
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食管鳞癌中癌-睾丸抗原NY-ESO-1及MAGE-1的表达 被引量：3
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作者 吴晁 陈同钰 +2 位作者 樊祥山 孟凡青 谈炎 《实用癌症杂志》 2007年第4期341-343,353,共4页
目的研究NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在食管鳞癌中的表达,分析其与肿瘤临床病理参数的关系,为食管癌的免疫治疗提供理论依据。方法构建组织芯片并结合免疫组化的方法,检测NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在113例食管鳞癌及10例正常食管黏膜中的表达。结... 目的研究NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在食管鳞癌中的表达,分析其与肿瘤临床病理参数的关系,为食管癌的免疫治疗提供理论依据。方法构建组织芯片并结合免疫组化的方法,检测NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在113例食管鳞癌及10例正常食管黏膜中的表达。结果10例正常食管黏膜均不表达NY-ESO-1及MAGE-1蛋白,而其在食管鳞癌组织芯片109例有效标本中的阳性率分别为29.4%和37.4%(32/109,41/109),阳性部位均位于细胞质。其中,59例至少表达1种CT抗原,占总数的54.1%(59/109),13例同时表达2种CT抗原,占11.9%(13/109);NY-ESO-1及MAGE-1蛋白的表达主要集中在肿瘤细胞分化较好的I级和II级食管鳞癌,阳性率有显著性差异(P<0.01),与肿瘤的大小,浸润深度及有无淋巴结转移无关(P>0.05)。结论NY-ESO-1及MAGE-1可作为食管癌免疫治疗的靶标之一,含有CT抗原的疫苗可用于食管癌患者的免疫治疗。 展开更多
关键词 NY-ESO-1蛋白 mage-1蛋白 食管鳞癌 组织芯片
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